UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE
CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS
QUÍMICAS, CAMPUS IV
LIC. QUÍMICO FARMACOBÓLOGO
PRÁCTICA #1
CONTEO DE RETICULOCITOS
MTRO. LUIS HUMBERTO ROSALES
FURUKAWA
LABORATORIO DE HEMTOLOGÍA
7°A
EQUIPO #2
INTEGRANTES
FRANCISCO JAVIER DÍAZ GUTIERREZ
SHIRLEY ENRÍQUEZ ALVARADO
LUZ ELENA FUENTES REYES
JORGE JOSUÉ PÉREZ LÓPEZ
REGINA DE LOS ANGÉLES PÉREZ RUÍZ
TAPACHULA, CHIAPAS. FEBRERO 2019
OBJETIVO
Identificar los reticulocitos presentes en una muestra de sangre, reconocer y observar su aspecto.
FUNDAMENTO
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros presentes en sangre periférica, lugar donde terminan su
maduración a hematíes. Contienen restos de ARN y ribosomas que precipitan en presencia de los
colorantes vitales como el azul de metileno o el azul de cresil brillante.
En los reticulocitos incubados con el colorante se ven imágenes gránulo-filamentosas identificables
con el microscopio óptico, que corresponden a los restos de ARN.
INTRODUCCIÓN
El recuento de reticulocitos puede realizarse mediante método manual o por citometría de flujo. En el
caso que nos ocupa realizaremos el recuento manual. Y para ello utilizaremos el colorante azul de
cresil brillante.Los valores normales de reticulocitos se sitúan entre el 0.5% y el 2% del total de
hematíes presentes en la sangre. La cifra obtenida permite catalogar una anemia como regenerativa
o arregenerativa. Se trata de un parámetro útil para comprobar la respuesta del organismo al
tratamiento de algunas anemias.
Un valor superior al 2% implica la existencia de una reticulocitosis. Podemos encontrarnos este valor
en hemorragias, anemias carenciales tratadas y hemólisis. Por el contrario, un valor inferior al 0.5%
implica la existencia de una reticulopenia. Podemos encontrar un valor de estas características en
aplasias medulares y en déficits de factores de maduración de los hematíes (hierro, vitamina B12 y
ácido fólico).
MATERIAL
Sangre anticoagulada con Heparina sódica ó EDTA o, en su defecto, sangre capilar.
Tubo de ensayo
Portaobjetos.
Pipetas pasteur.
Colorante azul de cresil brillante
Aceite de inmersión.
Microscopio.
PROCEDIMIENTO
En un tubo de hemólisis debidamente rotulado, se mezclan tres gotas de sangre con tres
gotas de colorante.
Mezclar suavemente, para evitar la hemólisis de los hematíes.
Incubar a 37°C o a temperatura ambiente durante 30 minutos.
Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar.
Leer al microscopio con objetivo de inmersión.
OBSERVACIONES
Con la pipeta pasteur colocamos 3 gotas
de sangre y tres de colorante
Al momento de mezclar el colorante
azul de metileno, las gotas de sangre que
eran color roja, viró a un color azul
fuerte
Se cubrió el tubo de
ensaye con paraflim y se
homogenizo bien y se
observó la coloración
azul fuerte
La solución se encubo a 37°c
durante 30 minutos. No mostro
vire de color, no hubo cambio
físico.
En la observación del frotis
sanguíneo al microscopio (se
agregó una gota de
inmersión) se leyó a 100x
Se leyeron 10 campos
Enfocamos la muestra con el
objetivo 100x. Los hematíes se
ven teñidos de color verde-
amarillento y los reticulocitos
se distinguirán por los
filamentos azul intenso del
interior.
RESULTADOS
Se cuentan los reticulocitos que hay entre 2000 hematíes. Se contaba contar unos
25 aproximadamente. Si aplicamos la fórmula para calcular el porcentaje de reticulocitos que hay,
obtenemos el siguiente resultado:
% reticulocitos = Nº de reticulocitos contados/ Nº de hematíes contados x 100
% reticulocitos = 25/2000 x 100
% reticulocitos = 1,25%
Valores de referencia:
Adultos: 0.5% - 1.5%
Recién nacidos: 2.5% - 6.5%
DISCUSION
La metodología manual para el recuento de reticulocitos es la de mayor uso en los laboratorios clínicos, sin embargo, es
una técnica que consume gran cantidad de tiempo y sus resultados suelen tener una alta variabilidad intra e inter
observador, que genera una alta imprecisión y por ende resultados poco confiables. La incorporación de metodologías
automatizadas, permiten al laboratorio obtener recuentos de reticulocitos de forma más rápida, con una mayor
precisión debida al mayor número de células contadas (más de 30.000) y también porque se eliminan gran parte de las
fuentes de error que se generan en la técnica manual. Un ejemplo muy claro en nuestra practica fue que se usó un tubo
lila con anticoagulante EDTA cuando en varias bibliografías se recomienda usar tubo verde con anticoagulante Heparina
Sódica para tener resultados más exacto.
De igual manera se usó el colorante nuevo azul de metileno donde sabemos que es un colorante básico y los fragmentos
de ARN se llegan a teñir de verde porque son ácidos
