IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS PRESENTES EN ACEITE ESENCIAL
DE POLEO CHICO MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADO
A ESPECTROMETRÍA DE MASAS
Verónica Ganazhapa, Ulises Guaman, Ariana Jimbo, Ángel Jumbo, Andrea Matailo,
Jimmy Pozo, Pablo Salinas
Análisis Químico e Instrumental, Escuela de Ingeniería Química
Universidad Técnica Particular de Loja.
INFORMACIÓN
Recibido 21 de julio del 2017
RESUMEN
Palabras clave:
ABSTRACT
Key words:
1. INTRODUCCIÓN
Aceites esenciales
Son llamados así los constituyentes odoríferos o esencias de una planta. Pueden estar
ubicados en las diferentes partes de la planta. Algunas plantas tienen un aceite esencial
que difiere en composición a través de la planta. Están formados por la mayoría de los
monoterpenos y algunos sesquiterpenos y compuestos aromáticos. Sus aplicaciones son
muy variadas; son ampliamente utilizados en perfumería, como saborizantes de
alimentos y en la medicina.
Cromatografía de gases
La cromatografía de gases permite separar los componentes de una muestra vaporizada
en virtud de que éstos se distribuyen entre una fase gaseosa móvil y una fase
estacionaria líquida o sólida contenida en una columna. La muestra que se va a analizar
se lleva a la fase gaseosa y se inyecta en una de las cabezas de la columna
cromatográfica. La elusión de los componentes se realiza mediante el flujo de una fase
gaseosa móvil que, a diferencia de la de otros métodos cromatográficos, es inerte y no
interactúa con las moléculas de las especies de la muestra; sólo las transporta a través de
la columna. Existen dos tipos de cromatografía de gases: la de gas-líquido y la de gas-
sólido. La primera, es la que tiene más aplicaciones en todos los campos de la ciencia y
se le conoce comúnmente como cromatografía de gases. La cromatografía de gas-sólido
tiene menos aplicaciones debido a que muchas moléculas reactivas o polares poseen
tiempos de retención muy largos y las colas de los picos de elución no son aceptables.
Descripción de la técnica:
Fase móvil: La fase móvil gaseosa proporciona un rápido equilibrio entre las fases con
mayor eficiencia en la obtención de los análisis. Los gases más utilizados son:
nitrógeno, helio, hidrógeno y argón. La fase móvil no debe interactuar con la fase
estacionaria ni con la muestra, debe tener bajo costo, ser compatible con el detector y
tener alta pureza. Para dar una mayor reproducibilidad al análisis, la saturación del gas
debe ser constante y debe ser controlada a través de válvulas de aguja
Sistemas de inyección: La inyección se realiza generalmente con microjeringas que
contienen la muestra. El volumen inyectado no debe superar la capacidad de la columna
y entre más pequeño sea el volumen usado de la muestra mayor será la eficiencia y la
reproducibilidad del análisis. La temperatura aplicada debe ser suficiente para la
volatilización de la muestra.
Columnas: La columna consiste en un tubo largo que contiene la fase estacionaria. Los
materiales más usados son el cobre, el acero, el aluminio, el vidrio y el teflón. El
material de la columna no debe interaccionar con la fase estacionaria ni con la muestra.
Sistema de detectores: Las sustancias presentes en la muestra pasan a través de la
columna, en donde son separadas y llegan al sistema de detección. Con relación a la
selectividad, los detectores pueden ser clasificados en universales y selectivos o
específicos. La respuesta del detector debe ser lineal dentro de un amplio intervalo de
concentraciones. Este intervalo de concentraciones se conoce como intervalo lineal
dinámico y corresponde a la diferencia entre la concentración máxima del intervalo
lineal dinámico y la mínima concentración del mismo y que debe distinguirse de la
señal de fondo o ruido del detector. El análisis cuantitativo se puede llevar a cabo
gracias a la relación directa que existe entre la respuesta del detector y la concentración
de la muestra, siempre y cuando la respuesta obtenida para la muestra se encuentre
dentro de ese intervalo.
Estudios de Aceites Esenciales: La cromatografía en fase gaseosa acoplada a la
espectrometría de masas (CG-EM) para la separación y la identificación de la
composición química de aceites esenciales, ha tenido un avance considerable, al punto
de ser utilizada como rutina en varios laboratorios.
2. MUESTRAS Y REACTIVOS
En la práctica de Identificación de Compuestos presentes en Aceite Esencial de Poleo
Chico mediante Cromatografía De Gases acoplado a Espectrometría De Masas, usamos
los siguientes materiales:
Reactivos:
Diclorometano grado HPLC
Muestra:
Aceite Esencial de Poleo Chico
Materiales:
Micropipeta
Vial
Equipos:
Cromatógrafo de gases con una columna DB5MS acoplado a espectrometría de
masas
3. METODOLOGÍA
Para la identificación de los compuestos presentes en el aceite esencial de poleo chico
mediante cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas primero se debe
preparar la muestra para lo cual se colocó 10 µL de aceite esencial y 990 µL de DCM
grado HPLC en un vial previamente etiquetado. Inyectamos la muestra de aceite
esencial siguiendo el método de inyección de hidrocarburos. La prueba se corrió en la
columna DB-5ms acoplado a espectrometría de masas. Al obtener los resultados de cada
corrida cromatográfica, integramos los picos cromatográficos para luego comparar el
Índice de retención calculado con el obtenido en bibliografía para lo cual usamos el
libro Identification of Essential Oil Components by gas chromatography / Mass
Spectrometry, 4t Edition [2]mediante el espectro de masa y mediante el CAAS en
bibliografía Web (NIST), y de esta manera identificar los compuestos presentes en la
muestra.
Descripción del equipo
Modelo: Agilent 6890N
Partes:
- Autoinyector
- Columna capilar de gases de 30 m con un diámetro de 0.25 µm
- Se puede acoplar a tres detectores diferentes:
o FID (Detector de ionización de flama): utilizado para alcoholes, ácidos
grasos (mayormente moléculas lineales)
o ECD (Detector de captura de electrones): usado para pesticidas
o MS (Detector de masas)
Descripción del proceso
El vial de color ámbar con la muestra previamente preparada se coloca en el
muestreador del equipo, el cual consta de 8 compartimentos para muestras. Luego una
jeringa toma 10 µL de la muestra para luego ser inyectado 1µL en un merlín, el cual
pasa a la cámara de vaporización en donde la muestra es evaporada para que luego sea
arrastrada por una fase móvil que es el gas Helio con grado 5 de pureza por medio de la
columna capilar que es la fase estacionaria, la cual se encuentra dentro del horno que
empieza con una temperatura de 60°C hasta 230°C. En la columna se separan los
compuestos en un tiempo de retención determinado por su peso molecular, los de menor
tiempo de retención son los más volátiles y con menor peso molecular, los cuales son
detectados por el detector de masa. El cual muestra los resultados en el computador. La
muestra se corrió por un tiempo de 54 minutos. Los resultados que se pueden obtener en
el computador además de los tiempos de retención son los espectros de masa de cada
compuesto, qual (certeza de que compuesto es), intensidad.
4. RESULTADOS
En la siguiente tabla se muestran los compuestos identificados en el aceite esencial de
poleo chico ordenados por su tiempo de retención y además se muestra el índice de
retención calculado, leído y la diferencia de su comparación:
IK
No RT COMPUESTO
K cal K leído K
1 8.51 Pinene <α-> 932 932 -
2 10.19 Sabinene 971 969 -
3 10.41 Pinene <β-> 976 974 2
4 10.92 Myrcene 988 988 -
5 11.71 Phellandrene <α-> 1006 1002 4
6 12.78 Limonene 1028 1024 4
7 13.12 Ocimene <(Z)-β> 1035 1032 3
8 13.62 Ocimene <(E)-β> 1045 1044 1
9 16.30 Linalool 1101 1095 6
10 19.06 Menthone 1158 1148 10
11 19.46 Menthone <iso-> 1166 1158 8
12 19.95 Isopulegol<neoiso-> 1176 1167 -
13 21.10 Methyl chavicol 1200 1195 5
14 23.04 Isopulegone 1242 1233 9
15 23.48 Anethole <(Z)-> 1252 1249 3
16 25.52 Anethole <(E)-> 1296 1282 14
17 27.48 Piperitenone 1340 1340 0
18 28.98 Copaene <α-> 1374 1374 0
19 29.50 Isocomene <α-> 1386 1387 -1
20 30.07 Methyl eugenol 1399 1403 -4
21 30.47 Isocomene <β-> 1408 1407 -
22 30.61 Cymene<2,5-dimethoxy-ρ-> 1411 1424 -13
23 30.87 Caryophyllene <(E)-> 1417 1417 0
24 32.34 Humulele <α-> 1450 1452 -
25 33.40 Germacrene D 1474 1480 -6
26 33.99 Bicyclogermacrene 1488 1500 -12
27 34.50 Bisanolene <β-> 1505 1505 0
28 34.68 Cadinene <γ-> 1510 1513 -3
29 34.90 Cadinene <δ-> 1516 1522 -6
30 39.79 Muurolol <α-> (=Torreyol) 1642 1644 -
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Los resultados obtenidos pudieron ser determinados a partir de la comparación del
índice de retención calculado por el cromatógrafo y la bibliografía. Los compuestos que
se muestran en la tabla están ordenados por su tiempo de retención, los de menor tiempo
de retención son los compuestos más volátiles y con menor peso molecular. Pudimos
identificar 30 compuestos en el intervalo de la integración de picos cromatográficos. La
diferencia entre el índice de retención calculado con el leído en bibliografía en algunos
de los compuestos fue mayor que el permitido (±10) pero esto se puede justificar debido
a que el espectro de masas era el correspondiente a dichos compuestos.
6. CONCLUSIONES
- El método descrito en esta práctica nos permitió identificar los compuestos
presentes en el aceite esencial de poleo chico utilizando el tiempo de retención
de cada uno para calcular su índice de retención y así compararlo con las
referencias bibliográficas buscado por el CAAS proporcionado por el equipo.
- Se pudo concluir que en algunos casos el índice de retención que se encuentra en
bibliografía puede variar en un rango mayor de lo permitido por lo que se debe
considerar que una manera más exacta para identificar los compuestos sería
comparar los espectros de masa de bibliografía con los obtenidos para cada pico
cromatográfico.
- En esta práctica pudimos aplicar experimentalmente los conocimientos teóricos
de cromatografía adquiridos previamente en el componente de Análisis Químico
e Instrumental.
7. RECOMENDACIONES
- Preparar la muestra siguiendo las especificaciones (10 microlitros de muestra y
990 microlitros de solvente).
- Para una lectura más exacta de los compuestos, de deben realizar tres ensayos.
- Para el llenado de la jeringa microlítica, es necesario eliminar todo el aire, esto
se puede realizar absorbiendo y eliminando repetidamente liquido dentro de
ella a manera de un enjuague.
- Tener en cuenta un control de la temperatura
8. REFERENCIAS
- [1]Rivera, D. (2008). Caracterización de aceites esenciales por cromatografía de
gases de tres especies del género piper y evaluación de la actividad citotóxica.
Facultad de ciencias químicas y farmacia. Universidad de San Carlos de
Guatemala, Guatemala.
- [2] Adams, R. (2009) Identification of Essential Oil Components by gas
chromatography / Mass Spectrometry, 4t Edition. México
9. ANEXOS
