VALIDACIÓN DE

MÉTODOS DE ENSAYO

Ing. Marcela Cáceres

CONTENIDO:

• Validación
• Verificación
• Importancia de la Validación
• Descripción de Métodos que se validan
• Alcance de la Validación
• Parámetros de Desempeño
• Herramientas Estadísticas
• Evaluación de Resultados
• Revalidación del Método
• Procedimiento de Validación
• Taller
¿QUÉ ES VALIDACIÓN?:

Según Norma NTE INEN ISO/IEC

17025:2006, literal 5.4.5.1, la validación
es la confirmación, a través del examen
y el aporte de evidencias objetivas, de
que se cumplen los requisitos
particulares para un uso específico
previsto.
¿QUÉ ES VALIDACIÓN?:

Está implícito que en los estudios para determinar los

parámetros de desempeño se debe:

Usar equipos dentro de especificaciones; que estén trabajando

correctamente y que estén calibrados adecuadamente.

Garantizar que el personal que realiza los ensayos sea

técnicamente competente en el campo de trabajo bajo
estudio

Demostrar que el personal tiene suficiente conocimiento sobre

el trabajo a realizar con el fin de que sea capaz de tomar
decisiones apropiadas a partir de las observaciones realizadas.
¿QUÉ ES VALIDACIÓN?:

La validación debe ser tan extensa como sea

necesario para cumplir con los requisitos en
relación con el uso y la aplicación que se dé al
método de ensayo, es decir, la validación
dependerá de la aplicación, de la naturaleza de
los cambios realizados y de las circunstancias
en las que el método se va a utilizar.La
validación también es necesaria cuando se va
a demostrar la equivalencia de los resultados
obtenidos por dos métodos, por ejemplo un
método desarrollado por el laboratorio y un
método establecido en la norma vigente.
¿QUÉ ES VERIFICACIÓN?:

• Para los métodos normalizados, tales como los publicados por ISO, ASTM,
INEN ISO, INEN, la validación por parte del laboratorio no es necesaria. Sin
embargo, el laboratorio debe verificar el desempeño del método antes de ser
introducido en el uso rutinario; la verificación tiene generalmente como
objetivo, el comprobar que el laboratorio domina el método de ensayo
normalizado y lo utiliza correctamente

• La norma ISO/IEC 17025:2005 en su requisito 5.4.2 estable lo siguiente: “El

laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los métodos
normalizados antes de utilizarlos para los ensayos o las calibraciones. Si el
método normalizado cambia, se debe repetir la confirmación”.

• La verificación (confirmación) debe llevarse a cabo por ejemplo: cuando se va

a utilizar un instrumento nuevo pero de similares características, cuando se
reubican los equipos, cuando un instrumento se actualiza con nuevo
software, o cuando el control de calidad indica que el rendimiento del
método establecido está cambiando con el tiempo.
¿POR QUÉ ES IMPORTANTE VALIDAR?:

• Porque la validación de métodos

asegura que una metodología es
repetible, reproducible y robusta
bajo los rangos específicos.

• Porque la validación de métodos

permite suministrar resultados
altamente confiables.

• Porque es una parte integral del

Sistema de Control de Calidad.
¿QUÉ METODOS SE VALIDAN?:

Se diferencian tres casos, en los que la dificultad de la

validación aumentan del primero al tercero:

Método de ensayo estandarizado y normalizado

• Se aplica exactamente como está descrito en la norma.

Modificación a un método de ensayo normalizado

• Se hicieron modificaciones a los métodos descritos en la norma
que pueden tener una repercusión sobre la calidad de los
resultados. Ejemplos: un método de extracción diferente, otra
matriz.

Método de ensayo interno

• Elaborado en el laboratorio y que no se encuentra en normas u
otras colecciones de métodos.
CRITERIOS DE ACREDITACIÓN:

5.4.2 Selección de los métodos

C5.4.2. El laboratorio debe establecer una

sistemática que garantice que realiza un
análisis de los cambios introducidos en las
nuevas revisiones de las normas para
determinar sus necesidades de
confirmación del método, equipos,
formación, instalaciones, etc. El laboratorio
deberá confirmar los métodos normalizados
que utiliza de acuerdo a un procedimiento
establecido para verificar que cumple con
los objetivos propuestos. El laboratorio debe
asegurar con datos experimentales que el
método puede ser aplicado correctamente
en las condiciones del laboratorio.
CRITERIOS DE ACREDITACIÓN:

5.4.2 Selección de los métodos

C5.4.2
Dependiendo del tipo de ensayo deberá considerar como mínimo:

- Intervalo de trabajo (métodos cuantitativos)

- Veracidad (métodos cuantitativos)
- Reproducibilidad (métodos cuantitativos)
- Límite de detección (ensayos de trazas o cuando exista límites de
contaminación)
- Límite de cuantificación (ensayos de trazas)
- Recuperación
- Linealidad en equipos instrumentales
- Incertidumbre (métodos cuantitativos)
- Comprobación en métodos cualitativos
- Otro parámetro según criterios específicos de acreditación para técnicas
particulares.
CRITERIOS DE ACREDITACIÓN:

5.4.5 Validación de métodos

C 5.4.5.2: El laboratorio deberá validar los métodos

normalizados modificados, no normalizados y desarrollados por
el laboratorio para verificar si cumple con los objetivos
propuestos.

El laboratorio debe ejecutar una validación con un número de

datos que sean estadísticamente válidos considerando mínimo
tres niveles en el rango del alcance de acreditación solicitado,
excepto los métodos que por su rango estrecho de aplicación no
lo permita. La variedad de matrices o instrumentos y los
parámetros específicos para cada tipo de ensayo/calibración
particulares.
CRITERIOS DE ACREDITACIÓN:

5.4.5 Validación de métodos

C 5.4.5.2. Para laboratorios de ensayo, dependiendo del caso, debe considerarse:

- Selectividad /Especificidad
- Robustez
- Límite de detección
- Límite de cuantificación
- Intervalo lineal (equipos)
- Intervalo de trabajo
- Reproducibilidad
- Veracidad
- Recuperación
- Comprobación del desempeño en métodos cualitativos acorde a las condiciones
particulares para la confiabilidad de los resultados.
- Incertidumbre
- Otro parámetro según criterios específicos de acreditación para técnicas particulares.

C 5.4.5.3. El laboratorio debe establecer objetivos de validación para garantizar su aplicación

para el uso previsto.
ALCANCE DE LA VALIDACIÓN:

La validación en los casos descritos tiene objetivos

distintos y, por lo tanto, diferentes puntos esenciales:

MÉTODO DE ENSAYO OBJETIVOS DE LA VALIDACIÓN

Caso 1: Comprobación de que el laboratorio domina el ensayo y lo

Método normalizado utiliza correctamente.

Comprobación de que la repetibilidad, la reproducibilidad, la

Caso 2:
precisión intermedia y la veracidad del método original no
Modificación de un
dependen de la modificación introducida y que el laboratorio
método normalizado
domina el ensayo y lo utiliza correctamente

Comprobación de que el método tiene la repetibilidad, la

Caso 3: reproducibilidad, la precisión intermedia y la veracidad
Método interno suficiente para el objetivo de aplicación y que el laboratorio
domina el ensayo y lo realiza correctamente.
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

PARÁMETRO DE ENSAYO COMPONENTE ANÁLISIS DE PROPIEDAD

DESEMPEÑO CUALITATIVO MAYORITARIO TRAZAS FÍSICA
Veracidad No Sí Sí Sí
Precisión No/ Si Sí Sí Sí
Especificidad Sí Sí Sí Sí
Límite de
No No Sí No
cuantificación
Límite de
Sí No Sí No
detección
Linealidad No Sí Sí Sí
Rango No Sí Sí Sí
Robustez Sí Sí Sí Sí
Incertidumbre Sí Sí Sí Sí
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

MÉTODO CUANTITATIVO
PARÁMETRO DE
CARACTERÍSTICAS NORMALIZADO
DESEMPEÑO NORMALIZADO INTERNO
MODIFICADO

 IDENTIFICACIÓN DEL ANALITO

Selectividad No Si Si
 INTERFERENCIA DE MATRIZ

Linealidad  RANGO LINEAL Si Si Si

Sensibilidad  PENDIENTE No/ Si Si Si
 DETECCIÓN
Límites No/ Sí Sí Sí
 CUANTIFICACIÓN
 REPETIBILIDAD
Precisión Si Si Si
 REPRODUCIBILIDAD
 SESGO
Veracidad No/ Si No/ Si Si
 %RECUPERACIÓN
Robustez  TEST DE YOUDEN Y STEINER No No/ Si Si
Incertidumbre  TOTAL EXPANDIDA Si Si Si
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• SELECTIVIDAD/ ESPECIFICIDAD
Tanto para métodos cualitativos como cuantitativos, normalmente, salvo en el caso que se
valide un método desarrollado por el laboratorio, este parámetro de validación se resuelve
bibliográficamente, ya que los métodos seleccionados, de reconocida aplicación, cuentan
con información sobre su selectividad y especificidad y las interferencias que se conocen.

• LINEALIDAD/FUNCIÓN DE RESPUESTA
Existen dos funciones de respuesta:

• Función de Respuesta Instrumental: Corresponde al sistema de lectura; es la que

normalmente se conoce como recta de calibrado.

• Función de respuesta del método: Se determina cuando se calcula la recuperación

del método y puede coincidir exactamente con la instrumental cuando la recuperación
es del 100%.

• SENSIBILIDAD
La sensibilidad de una función de respuesta es la pendiente de la recta de calibración en
cada punto (para una función de respuesta lineal la pendiente (m) de la recta).
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• LÍMITE DE DETECCIÓN (DEL MÉTODO) (LD)

El límite de detección (LD) se calcula a partir de los resultados obtenidos del blanco, convertidos
a resultado final sobre muestra, según la ecuación:

Donde:
UB: Incertidumbre expandida (k = 2 o el valor necesario que asegure una probabilidad de
cobertura del 95%) asociada a la medida de B.
B: Media general, en condiciones de reproducibilidad, de los resultados de la submuestras de
blanco convertida a resultado final sobre muestra.

Nota: Este cálculo sustituye al más comúnmente utilizado que aplica la ecuación LD = B + 3 S B
(donde SB es la desviación típica de la serie de resultados del blanco).

• LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN (DEL MÉTODO) (LC)

Es el valor, superior al LD, a partir del cual los resultados que se obtienen cumplen unos
condicionantes de precisión y de veracidad predeterminados por exigencias de norma, cliente,
entre otros.
Si no existen estos condicionantes, el LC coincide con el LD.

Nota: Sustituye al más comúnmente utilizado que utiliza la ecuación LC = B + 10 S B.

PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• PRECISIÓN (REPETIBILIDAD/ REPRODUCIBILIDAD/ PRECISIÓN INTERMEDIA/

COEFICIENTE DE VARIACIÓN)
El estudio de la precisión se puede realizar calculando, a través del análisis simple de
varianza (ANOVA), las desviaciones estándar de repetibilidad (sr) y de
reproducibilidad (sR) para cada uno de los niveles de ensayo.

• Repetibilidad: Precisión en condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones según

las cuales los resultados independientes de una prueba se obtienen con el mismo
método, sobre objetos de prueba idénticos, en el mismo laboratorio, por el mismo
operador, usando el mismo equipo y dentro de intervalos de tiempo cortos. [ISO 3534-
1]
• Reproducibilidad: Precisión bajo condiciones de reproducibilidad, es decir,
condiciones según las cuales los resultados de prueba se obtienen con el mismo
método, sobre objetos de prueba idénticos, en diferentes laboratorios, por diferentes
operadores, usando diferentes equipos. [ISO 3534-1]
• Precisión intermedia: Expresa la variación dentro de un laboratorio en: diferentes
días, diferentes analistas, diferente equipo, etc. (CENAM, 2005)
• Coeficiente de Variación: Desviación estándar dividida por la media. También es
conocida como desviación estándar relativa (RSD).
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• PRECISIÓN (REPETIBILIDAD/ REPRODUCIBILIDAD/ PRECISIÓN INTERMEDIA/

COEFICIENTE DE VARIACIÓN)

DÍA
OBSERVACIONES 1 2 3 4 5
1 L11 L21 L31 L41 L51
2 L12 L22 L32 L42 L52
3 L13 L23 L33 L43 L53
4 L14 L24 L34 L44 L54
5 L15 L25 L35 L45 L55
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• VERACIDAD
La veracidad del método puede establecerse por la comparación de los
resultados, obtenidos en el diseño experimental, de los Materiales de Referencia
(MRi) con los valores teóricos de los mismos, observando el grado de concordia
entre el valor obtenido y el valor esperado. La veracidad se expresa a través del
%Recuperación y/o Bias (no solo en ensayos físicos).
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• EXACTITUD
Dentro de la exactitud se puede evaluar a dos componentes: la “veracidad”, en la
que se expresa como sesgo o recuperación e indica que tan cercana está la
media de un conjunto de valores del valor real y la “precisión”, expresada como
desviación estándar, indica la dispersión de los resultados, o que tan cercanos
están entre ellos.
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• ROBUSTEZ
Este parámetro implica realizar variaciones deliberadas al método
y controlarlas cuando éste se aplica, debido a que constituyen
puntos críticos de control que pueden tomarse en cuenta para
mejoras en el método de ensayo. Este parámetro lo evalúan las
personas responsables de la validación.

Para determinar la robustez de un método, se deben identificar las

variables que tengan un efecto significativo en el desempeño del
mismo. Se debe trabajar con materiales de referencia, matrices o
blancos fortificados con patrones de referencia. Se analiza una
vez cada grupo de condiciones de experimentación, determinando
finalmente el efecto de cada cambio sobre la media obtenida. Se
debe ordenar las variables en función de mayor a menor efecto
sobre el resultado.
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

• INCERTIDUMBRE DE MEDIDA
Parámetro, asociado con el resultado de una medición, que caracteriza la
dispersión de los valores que podrían ser razonablemente atribuidos al
mesurando.
La incertidumbre puede evaluarse a partir de la información obtenida en una
validación, en particular a partir de la precisión intermedia y de la veracidad del
método.

• INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO

El intervalo de trabajo validado puede coincidir con el que se utiliza en el
estudio de la función de respuesta, como intervalo de trabajo deseable, pero
puede disminuir como resultado del proceso de validación. Normalmente está
comprendido entre el Límite de Cuantificación y el valor asignado al mayor
patrón o muestra utilizada. En el caso de métodos físicos, el intervalo de
trabajo está dado por el rango de medición del instrumento, pero es necesario
realizar mediciones para verificar diferentes puntos de dicho rango. En el caso
de métodos cualitativos, se podría reportar como Ausencia, Presencia,
Positivo, Negativo, entre otros.
EVALUACIÓN DE LOS RESULTADOS:

Decisión sobre la aptitud para la aplicación del método.

 Se confrontan los parámetros estadísticos del método

obtenidos, o bien las medidas de validación con lo
establecido, en forma de informe final (formato interno).

 Puede ocurrir que uno de los puntos del informe no

concuerde con lo establecido en la instrucción de trabajo
correspondiente a ese método de ensayo (por ejemplo
repetibilidad del 7% en vez del 5% exigido) y que de
todas maneras, se considere el método adecuado.

 Esto debe ser fundamentado en el ámbito de la

validación por el responsable del ensayo.
REVALIDACIÓN DE UN MÉTODO:

Dado que la validación es una actividad

continua que se alimenta,
fundamentalmente, de los datos que se
obtienen de las actividades que se
realizan y del control de la calidad, puede
llegar el caso de que, como resultado de
esta actividad continuada, se requiera
cambiar los límites de aplicación del
método. Cuando se produce esta
situación, se procede a una nueva
declaración de validación, la cual se
apoya en todos los registros que la
soportan.
PROCESO DE VALIDACIÓN:
PROCESO DE VALIDACIÓN:

El esquema que resume un proceso de validación es el siguiente:

1. ESTABLECER LA NECESIDAD
(Se establece, por la autoridad del laboratorio, la necesidad de
satisfacción de una demanda de ensayo).
PROCESO DE VALIDACIÓN:

2. MÉTODO
(Revisión de métodos disponibles y elección del más apropiado).

3. BORRADOR DEL PROCEDIMIENTO

Teniendo en cuenta los aspectos formales de contenido.
PROCESO DE VALIDACIÓN:

4. “PUESTA A PUNTO”
Se ajustan y afinan las distintas variables del método. En este
apartado “se prueba” teniendo en cuenta los diversos parámetros
de validación.

5. ELECCIÓN DE LOS PARAMETROS DE DESEMPEÑO

Teniendo en cuenta las guías aplicables y la experiencia obtenida
en la puesta a punto.
PROCESO DE VALIDACIÓN:

6. FIJACIÓN DE OBJETIVOS PARA LOS PARAMETROS DE

VALIDACIÓN
Teniendo en cuenta bibliografía aplicable y la experiencia obtenida
en la puesta a punto.

7. DISEÑO EXPERIMENTAL Y ESTADISTICO

Para la obtención de los parámetros elegidos, siguiendo el
procedimiento.
PROCESO DE VALIDACIÓN:

8. REALIZACIÓN DE LOS ENSAYOS DISEÑADOS

De acuerdo con el procedimiento (borrador).
Evidencias completas de los registros.
PROCESO DE VALIDACIÓN:

9. TRATAMIENTO ESTADISTICO DE LOS DATOS OBTENIDOS

Se obtienen los valores propios del laboratorio para los parámetros
de validación.

¿Cumplen objetivos predefinidos?

• SI Método validado, pasar a 10.
• NO Analizar incumplimientos y buscar posibles causas.

¿Se han encontrado posibles razones?

 SI Corregir y volver a 7/8
 NO ¿Se pueden cambiar objetivos?
• SI Cambiar y volver a 6
• NO Volver a 4
PROCESO DE VALIDACIÓN:

10.HACER DECLARACION DEL METODO VALIDADO

11.GUARDAR REGISTROS ORDENADAMENTE

Aprobar procedimientos (hasta ahora en borrador) y
difundir/distribuir.
EL DEBER PROFESIONAL:

Si el resultado de un ensayo no es
confiable entonces tiene poco valor
y el ensayo no debió haberse
realizado