DETERMINACION DEL pKa DEL AZUL DE BROMOTIMOL
Espectroscopía visible
Laboratorio de Química analítica
Objetivo general
Determinar el pKa del azul de bromotimol por medio de la ecuación que relaciona la absorbancia de la
muestra y su respectivo pH.
Objetivos específicos
Preparar una serie de muestras de variada concentración de base que permita analizar el
comportamiento de la ecuación a diferente pH.
Medir el pH de cada solución preparada anteriormente.
Realizar el barrido espectral para determinar las longitudes de onda a las cuales se medirá la
absorbancia de las muestras.
Marco Teórico
El azul de bromotimol (también conocido como la ftaleína de la sulfona del bromotimol, el azul de Bromthymol,
y BTB) es un indicador químico para los ácidos y las bases débiles. El producto químico también se utiliza para
observar las actividades fotosintéticas.
El azul de bromotimol actúa como ácido débil en la solución. Puede así estar en forma protonated o
deprotonated, apareciendo amarillo y azul respectivamente. Es verde azulado en la solución neutral. Se vende
típicamente en forma sólida como la sal del sodio del indicador ácido.
El azul de bromotimol se utiliza sobre todo en las sustancias de medición que tendrían niveles ácidos o básicos
relativamente bajos (cerca de un pH neutral). Es de uso frecuente en el manejo del pH de piscinas y de los
tanques de pescados, y para medir la presencia de ácido carbónico en un líquido.
(Focus Technology Co., 2011)
Para la Determinación Espectrofotométrica de pKa Mediante medidas espectrofotométricas se determinan las
concentraciones de la forma asociada y de la disociada de una sustancia sobre la base de que: ambas formas
obedecen la ley de Lambert-Beer y que las concentraciones de las mismas son determinables, ya sea porque
absorben a diferentes longitudes de onda o bien porque se cumple la condición de aditividad. La determinación
se realiza a un pH tal que ambas formas se encuentren en concentraciones apreciables, esto es, a un pH
próximo al pKa de la sustancia o, lo que es lo mismo, grado de disociación cercano al 50%.
(SULCA SUCA, 2015)
En una solución acuosa un indicador ácido presenta un equilibrio entre su forma ácida, HIn, y su forma básica,
In-:
𝐻𝐼𝑛 = 𝐻 + + 𝐼𝑛−
Este equilibrio tiene la siguiente constante de equilibrio:
[𝐻+ ][𝐼𝑛− ]
𝐾𝑎 =
[𝐻𝑙𝑛]
Transformando esta expresión se obtiene:
Ecuación 1:
[𝐻𝑙𝑛]
𝑝𝐾𝑎 = 𝑝𝐻 + 𝑙𝑜𝑔
[𝑙𝑛−]
Ambas formas del indicador presentan colores diferentes y, por tanto, sus longitudes de onda
correspondientes al máximo de absorción son diferentes.
Si se prepara una serie de soluciones del indicador en las que se cambia el pH, pero se mantiene constante la
concentración total del indicador, se cumplirá que la relación entre las concentraciones de las formas ácida y
básica está dada por:
Ecuación 2:
[𝐻𝑙𝑛] 𝐴 − 𝐴 𝑠𝑙𝑛 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎
=
[𝑙𝑛−] 𝐴 𝑠𝑜𝑙 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑎 − 𝐴
En esta ecuación A es la absorbancia de cada solución a cierto pH, comprendido dentro del rango de pH en el
cual el indicador cambia de color, medida a cualquiera de las dos λmax anteriormente encontradas.
Por tanto, al reemplazar la ecuación 2 en la 1 se obtiene:
Ecuación 3:
𝐴 − 𝐴 𝑠𝑙𝑛 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎
𝑝𝐾𝑎 = 𝑝𝐻 + 𝑙𝑜𝑔
𝐴 𝑠𝑜𝑙 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑎 − 𝐴
Es decir:
Ecuación 4:
𝐴 − 𝐴 𝑠𝑙𝑛 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎
𝑙𝑜𝑔 = 𝑝𝐾𝑎 − 𝑝𝐻
𝐴 𝑠𝑜𝑙 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑎 − 𝐴
Estas dos últimas ecuaciones permiten calcular el pKa del indicador.
(Journal of Chemical Education Vol. 76, No. 3, March 1999 )
Procedimiento
1. Espectros de absorción de las dos formas coloreadas del indicador
Tabla 1:Preparación soluciones
Solución Indicador HCL 12M NaOH 4M
Fuertemente ácida 1 mL 8 gotas ----
Fuertemente básica 1 mL ---- 24 gotas
2. Preparación de las soluciones buffers del indicador
Tabla 2: Preparación soluciones estándares
Solución Indicador KH2PO4 0,5M NaOH 0,4M
1 1 mL 5 mL 1,0 mL
2 1 mL 5 mL 1,5 mL
3 1 mL 5 mL 2,0 mL
4 1 mL 5 mL 2,8 mL
5 1 mL 5 mL 3,6 mL
6 1 mL 5 mL 4,3 mL
7 1 mL 5 mL 4,9 mL
8 1 mL 5 mL 5,3 mL
Datos experimentales
solución pH
absorbancia 432nm absorbancia 616nm
0.791 A 0.004 A
F. ácida 12.57
0.152 A 1.871 A
F. básica 1.23
0.647 A 0.452 A
1 6.63
0.576 A 0.602 A
2 6.852
0.48 A 0.852 A
3 7.133
0.356 A 1.313 A
4 7.731
0.294 A 1.446 A
5 7.56
0.156 A 1.909 A
6 11.45
0.173 A 2.127 A
7 11.68
0.151 A 1.85 A
8 11.83
Tabla 3. Datos experimentales
Cálculos y resultados
La determinación del pKa del azul de bromotimol se realizará con las siguientes ecuaciones las cuales
conforman el modelo de cálculo en el cual se reemplazarán los datos adquiridos experimentalmente.
Método algebraico
Ecuación 3
𝐴 − 𝐴 𝑠𝑙𝑛 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎
𝑝𝐾𝑎 = 𝑝𝐻 + 𝑙𝑜𝑔
𝐴 𝑠𝑜𝑙 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑎 − 𝐴
La ecuación 3 fue evaluada en cada una de las absorbancias a las dos longitudes de onda
seleccionadas, obteniéndose los siguientes resultados. Ya que dichos resultados arrojaron errores en
el modelo no serán tomados para la obtención del promedio
solución pKa pKa
(432nm) (616nm)
1 7.16624271 7.13070438
2 7.1469274 7.17876044
3 7.15641345 7.21307833
4 7.23114091 7.18969455
5 7.18693196 7.20042367
6 9.24928627 #¡NUM!
7 10.2112308 #¡NUM!
8 #¡NUM! 9.8859876
Promedio 7.177 7.182
Tabla 4. Cálculos de pKa
Método gráfico
Ecuación 4
𝐴 − 𝐴 𝑠𝑙𝑛 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎
𝑙𝑜𝑔 = 𝑝𝐾𝑎 − 𝑝𝐻
𝐴 𝑠𝑜𝑙 𝑓𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑎 − 𝐴
La ecuación 4 fue evaluada en cada una de las absorbancias a las dos longitudes de onda
seleccionadas, obteniéndose los siguientes resultados. Ya que dichos resultados arrojaron errores en
el modelo no serán tomados para la realización de las gráficas
solución pKa-pH pKa-pH
(432nm) (616nm)
1 0.53624271 0.50070438
2 0.2949274 0.32676044
3 0.02311345 0.07977833
4 -0.32885909 -0.37030545
5 -0.54406804 -0.53057633
6 -2.20071373 #¡NUM!
7 -1.46876918 #¡NUM!
8 #¡NUM! -1.9440124
Tabla 5. Cálculos pKa-Ph
Gráficas
Gráfica 1. Absorbancia vs pH
pKa-pH vs pH
0.6
0.4
y = -0.9503x + 6.8204
R² = 0.997
0.2
pKa-pH
0
6.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8
-0.2
-0.4
-0.6
pH
432nm Linear (432nm)
Gráfica 2. pKa-pH vs pH a longitud de onda 432
0.6
pKa-pH vs pH
0.4
y = -0.9525x + 6.8411
0.2 R² = 0.9974
pKa-pH
0
6.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8
-0.2
-0.4
-0.6
616nm pH Linear (616nm)
Gráfica 3. PKa-pH vs pH para longitud de onda 616nm
Utilizando la ecuación de la recta se despeja para hallar el pKa arrojado por el análisis gráfico de la
siguiente forma
para 616nm para 432nm
pKa pH 0.9525 pH 6.8411 pKa pH 0.9503 pH 6.8204
pKa (1 0.9525) pH 6.8411 pKa (1 0.9503) pH 6.8204
pKa 0.0474 pH 6.8411 pKa 0.04970 pH 6.8204
Graficas
Solución pKa pKa
(616nm) (432nm)
1 7.156 7.150
2 7.167 7.161
3 7.180 7.175
4 7.200 7.196
5 7.208 7.205
6 7.385 7.389
7 7.396 7.401
8 7.403 7.408
Promedio 7.182 7.177
Tabla 6. pKa Método gráfico
De igual forma el promedio fue realizado sin tenerse en cuenta las 3 últimas soluciones ya que
aportaban error.
Análisis de Resultados
Sobre los datos experimentales
De acuerdo con los datos obtenidos de pH y absorbancia para las muestras estándares se evidencia
una mala preparación en ellas debido a que en primer lugar los resultados de pH a partir de la muestran
un salto inmoderado en su valor ya que pasa de un pH de 7.7 a 11.4 lo cual no es común ya que los
valores anteriores aumentaban en una forma moderada, por lo cual el pH indica que la preparación de
las soluciones no fue apropiada, adicionalmente la absorbancia de las ultimas muestras no fue correcta
ya que presentaba desviaciones con respecto a la secuencia que seguía en algunos casos aumentando
y en otros disminuyendo, por lo cual en los últimos 3 valores se evidenciaba errores en la secuencia.
Por lo cual se deben descartar los valores arrojados por las últimas 3 soluciones.
Aunque el error en las soluciones estándares se atribuye principalmente a los experimentadores,
existen otros factores que pueden influir en los cálculos como el estado de las soluciones e implementos
de laboratorio, aunque se realizó un lavado a los implementos de laboratorio estos presentaban
adheridas partículas de sustancias desconocidas que se deponían al lavado, así como pigmentación
en el material de trabajo, por lo cual estos factores podrían presentar interferencias en el análisis.
Adicionalmente la categoría de los implementos de laboratorio no son las más exactas y precisas por
tratarse de una materia categoría B lo cual le atribuía al análisis cierto carácter de imprecisión al análisis
Sobre los cálculos y gráficas
Al momento de realizarse los cálculos se presentó el mismo fenómeno con las 3 últimas muestras, ya
que no se adaptaban al modelo por lo cual el resultado arrojaba error matemático. Debido a esto se
tomó la decisión de eliminar los últimos 3 datos para que tanto el resultado como las gráficas se
adaptara al modelo. Los resultados del promedio obtenidos utilizando la ecuación de la recta para
determinar el pKa son apropiados ya que se aproximan ligeramente a los valores arrojados por la
literatura (Skoog and Douglas, Pág. 326) pka:7.10
Las gráficas realizadas de pKa-pH vs pH eliminando los últimos 3 datos se ajustan muy bien al modelo,
ya que presentan una tendencia lineal tal como lo indica la literatura. Esto se confirma con la línea de
tendencia y su R2 el cual en ambas longitudes de onda se aproxima mucho a 1 por lo cual se presenta
muy buen ajuste, La grafica de absorbancia vs pH describen muy bien el modelo en la cual puede verse
correctamente la intersección entre la línea de la solución fuertemente básica con la línea de la solución
fuertemente ácida lo cual indica las coordenadas del punto isobéstico.
Conclusiones
La preparación de las soluciones estándares no fue adecuada ya que en algunas de ellas se
presentaron inconsistencias con el modelo para la determinación del pKa.
Para optimizar la precisión del análisis es necesario tener más cuidado para la preparación de las
soluciones, y contar con instrumentación que aporte precisión al análisis (categoría A o AS)
El punto isobéstico para el azul de bromotimol se encontró gráficamente a las coordenadas
aproximadas (0.602 A,68522pH)
El método gráfico presentó muy buen ajuste en ambas longitudes de onda ya que el R2 es muy próximo
a1
En general no se encuentra diferencias entre el método gráfico y el método algebraico ya que si se
disminuyen decimales se encuentra un valor promedio de 7.18 para los dos métodos a las dos
longitudes de onda trabajadas
Al realizarse el análisis con los datos consistentes se obtiene en general un pKa: 7.18 el cual es un
resultado correcto con respecto a la literatura pKa: 7.10
Preguntas
1. ¿Qué es el punto isobéstico de un indicador?
Al trazar el espectro del visible a diferentes valores de pH se encuentra que los diferentes espectros
obtenidos se cruzan en un punto determinando, este punto se conoce como punto isobéstico y se
caracteriza por que la absortividad molar de la forma ácida y alcalina es la misma en ese punto.
2. ¿Qué indica la presencia del punto isobéstico en un indicador?
La existencia del punto isobéstico se debe a que el coeficiente de extinción de una de las formas
crece con la longitud de onda hasta un máximo relativo y, por el contrario, el coeficiente de la otra
especie decrece desde otro máximo relativo. Ambos coeficientes se hacen iguales en el punto
isobéstico.
(Sierra, s.f.)
Cuando se presenta un valor de Longitud de onda para el cual el coeficiente de absortividad molar es
igual tanto para especie disociada como para la no disociada (misma absorbancia para especies
distintas) Este valor de longitud de onda es el llamado punto isobéstico, e indica que solo existen 2
especies en el equilibrio
(Soto., s.f., pág. 6)
3. ¿Cómo se afecta el valor de la constante de disociación de un indicador, si las lecturas de
absorbancia se hacen a una longitud de onda que tiene menor capacidad de absorber
radiación?
es posible determinar la constante cuando el espectro de la sustancia varía con el pH del medio. Para
la constante de disociación del ácido, donde hay máxima absorbancia, el indicador estará en forma
[A-], donde hay mínima absorbancia estará en forma de [HA]. Calculando la media de ambas
absortividades se extrapola de la representación gráfica el pH, que coincide con el pKa, a partir del
cual se calcula el valor de Ka que es la constante de disociación del ácido.
(Sierra, s.f.)
4. ¿Un indicador puede tener dos puntos isobésticos?
Si, en algunos casos se presentan en disolución varios puntos isobésticos por lo que habrían más de
dos especies en el equilibrio y presentan un mismo coeficiente de extinción molar a una misma
longitud de onda y a su vez facilitan el cálculo de la constante de disociación del indicador para la
determinación de su pKa.
(Soto., s.f., pág. 6)
Bibliografía
