Cortés Vásquez María Aurora 1705 Enfermedades Bacterianas y Micóticas 20/10/2017

Toxina RTX
Ha quedado claro, desde 1987 que surgió una nueva familia de grandes toxinas citolíticas secretadas de
patógenos Gram-negativos. Resumiendo las similitudes de los primeros cinco determinantes caracterizados en
una MicroRevista seminal en 1991, Rodney A. Welch introdujo por primera vez el concepto de la familia de
proteínas RTX caracterizada por la presencia de matrices de repeticiones de nonapetidos ricas en glicina y
aspartato.

Las proteínas RTX son producidas por una variedad de bacterias Gram-negativas y exhiben dos características
comunes:
 El primero es la presencia de repeticiones de secuencias ricas en glicina y aspartato, típicamente
nonapéptidos, que se localizan en la porción carboxi-terminal de la proteína. Estos forman numerosos
sitios para la unión de iones Ca2 + y están en el origen del nombre histórico de la familia de proteínas,
donde RTX representa repeticiones en toxinas.
 La segunda característica clave es el modo único de secreción de proteínas RTX a través del sistema de
secreción tipo I (TIIS). La translocación de proteínas se produce a través de un canal de secreción
oligomérico que se extiende a través de toda la envoltura de células bacterianas Gram-negativas (es
decir, membrana citoplásmica, espacio periplásmico y membrana externa).
Las proteínas RTX representan una familia de proteínas que exhiben una amplia gama de actividades y masas
moleculares de 40 a> 600 kDa. Los genes rtx y los genes necesarios para la secreción se encuentran
principalmente en un único locus rtx más grande.

Se han detectado más de 1000 miembros de la familia RTX, pero hay un grupo prominente e históricamente
descrito por primera vez de proteínas RTX, que son toxinas que exhiben principalmente una actividad
formadora de poros citotóxicos, que a menudo se detecta primero como un halo hemolítico que rodea las
colonias bacterianas cultivadas en placas de agar con sangre.

Aunque también hay otros grupos en donde estos pueden actuar como factores de virulencia sinérgicos
causando daño tisular y / o provocando la producción de mediadores inflamatorios. Recientemente, se
descubrió un subgrupo de proteínas RTX muy grandes (> 3200 residuos de aminoácidos) con múltiples
actividades [toxinas RTX de autoprocesamiento multifuncional (MARTX)], por ejemplo, el prototipo Vibrio
cholerae MARTXVc causa el redondeo de las células epiteliales catalizando la reticulación covalente de la actina
celular. Las proteínas RTX pueden actuar además como bacteriocinas o contribuir a la defensa contra la
agresión ambiental formando capas protectoras de superficie bacteriana (S). También se descubrió que algunas
proteínas RTX desempeñan un papel en la nodulación de las plantas o en la motilidad de las cianobacterias,
mientras que el papel biológico de la mayoría de las proteínas RTX permanece desconocido.
Por tanto, la explotación bioinformática, indica que las proteínas RTX forman una gran y diversa familia de
proteínas, con un amplio espectro de actividades biológicas y bioquímicas.

Repeticiones de RTX.
El requerimiento de iones de calcio en las actividades de la toxina RTX se documentó primero para Escherichia
coli α-hemolisina y Bordetella pertussis CyaA. La unión de los iones de calcio a las repeticiones de las toxinas
RTX ocurre solo después de la secreción, ya que la concentración de calcio citoplasmático intracelular en las
bacterias es bastante baja (<100 nM). La proteína RTX necesita desplegarse o permanecer en una
conformación de disquete antes de la translocación fuera de la célula a través del TISS. La unión del calcio a las
repeticiones nonapéptidas en las porciones C-terminales de estas toxinas parece promover el plegamiento e
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impone la adopción de una conformación funcional en las proteínas RTX secretadas en el ambiente
extracelular.

Sistema de secreción tipo I (TIIS).

Las bacterias Gram-negativas han desarrollado varias vías (I-VI) para la secreción de proteínas más allá de la
membrana externa hacia el entorno extracelular. Las proteínas RTX contienen una señal de secreción C-
terminal de ~ 60 residuos de longitud que no se procesa durante la secreción. Esto es reconocido por el TISS
independiente del segmento, que media la translocación de proteínas directamente desde el compartimento
citoplásmico hacia el espacio extracelular a través de un canal que abarca toda la envoltura celular.

La representación esquemática de la operación de ensamblaje de TISS. Tras el reconocimiento de una señal de

secreción C-terminal en un sustrato
de translocación de proteína RTX
dado, el complejo de membrana
interna formado por un
transportador ABC que proporciona
energía y una MFP contacta con la
OMP trimérica. Se forma un
conjunto sellado canal-túnel que
abarca toda la envoltura de células
bacterianas Gram-negativas, a
través del cual la proteína RTX se
exporta en un solo paso desde el
citoplasma bacteriano directamente
a la superficie bacteriana externa,
sin transitar por el espacio
periplásmico.

El operón hlyCABD codifica la proteína de activación de toxina (HlyC), la propia hemolisina (HlyA), el
transportador ABC (HlyB) y la proteína MFP (HlyD). El componente de membrana externa (TolC), una proteína
multifuncional, se codifica fuera del operón hly en el cromosoma de E. coli.

Clases de proteínas RTX

Estas son algunas toxinas, de toda la extensa familia de toxinas RTX…

Citotoxinas RTX
Las proteínas RTX citotóxicas son producidas por una amplia gama de patógenos Gram-negativos (Tabla 1)
que incluyen los géneros Escherichia, Bordetella, Proteus, Morganella, Moraxella, Vibrio y Kingella, y miembros
de la familia Pasteurellaceae (Mannheimia, Pasteurella y Aggregatibacter). Las citotoxinas RTX se pueden dividir
aproximadamente en dos familias:
 las leucotoxinas formadoras de poros convencionales y ampliamente estudiadas.
 (Las recientemente descubiertas) MARTX muy grandes (el prototipo mejor estudiado del grupo MARTX
es VcRtxA (o MARTXVc) de V. cholerae, una proteína de más de 4500 aminoácidos de larga duración
que causa la despolimerización de fibras de estrés de F-actina en una amplia gama de tipos de células).
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Citotoxinas RTX que forman poros.
Las citotoxinas RTX que forman poros
representan una clase única de proteínas
bacterianas que comparten los requisitos
para la activación postraduccional a través
de la acilación grasa unida por amida de
residuos internos de lisina; poseen un
dominio hidrofóbico que se demostró o
se supone que forma poros selectivos de
cationes en membranas celulares diana;
son exportados por TISSs; y tras la
secreción se activan para ejercer actividad
biológica uniendo iones de calcio dentro
de las repeticiones nonapéptidas ricas en
glicina y aspartato.
Las toxinas RTX se dividieron en
hemolisinas y leucotoxinas. Las llamadas
'hemolisinas' de RTX se descubrieron
inicialmente que mostraban una
especificidad limitada de la especie y la
célula diana, mientras que la actividad de
las leucotoxinas se consideraba específica
de las especies y las células. Por ejemplo,
la E. coliα-hemolisina (HlyA) parece ser
bastante promiscua, exhibiendo una
actividad citotóxica bien detectable en un
amplio espectro de células de diversas
especies, incluidos eritrocitos,
granulocitos, monocitos, células
endoteliales o células epiteliales renales
de ratones, rumiantes y primates.
A su vez, las leucotoxinas de A. actinomycetemcomitans (LtxA) y M. haemolytica (LktA) parecen ser bastante
selectivas y citotóxicas solo para un grupo restringido de tipos celulares de una manera específica de especie.
Las leucotoxinas RTX citolíticas (formadoras de poros) se sintetizan como protoxinas inactivas que
experimentan activación postraduccional antes de la exportación de las bacterias productoras de toxinas. Esto
consiste en la modificación postraduccional de grupos ɛ-amino de residuos internos de lisina en sitios de
acilación conservados mediante la unión covalente de residuos de acilo grasos unidos a una amida.

MARTX
La familia de toxinas RTX es un grupo de toxinas muy grandes que difieren de todas las proteínas RTX
conocidas anteriormente por la estructura molecular y la organización de clústeres del gen rtx. Estos MARTX
hasta ahora han sido identificados en varias especies diferentes de Vibrio (Vibrio sp. RC385, V. cholerae, Vibrio
splendidus, Vibrio anguillarum, Vibrio vulnificus) y también están presentes en Aeromonas hydrophila, Yersinia
enterocolitica y Yersinia kristensenii, Proteus mirabilis, Photorhabdus luminescens y Photorhabdus asymbiotica.
El prototipo mejor estudiado de MARTX es el V. cholerae RtxA (VcRtxA), renombrado a MARTXVc.
Todos los genes MARTX tipo rtxA codifican proteínas que varían de 3212 a 5206 residuos de aminoácidos de
longitud.
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Poco se sabe sobre las modificaciones postraduccionales de las proteínas MARTX. Un gen rtxC similar al gen
hlyC aciltransferasa requerido para la maduración de E. coliα-hemolisina se encuentra en el mismo operón con
el gen rtxA. Los datos recientes indican que rtxC no es necesario para la función de la toxina MARTX en V.
cholerae, pero la toxina MARTX sin activación rtxC, mostró una actividad de reticulación de actina reducida,
mientras que una deleción de rtxC no tuvo efecto sobre la virulencia de V. vulnificus.

Proteínas del dominio Cadherin

Una clase particularmente nueva de proteínas RTX de Vibrio está representada por RtxL1 y RtxL2, que se
caracterizan por la presencia de más de un dominio de cadherina y se identificaron por primera vez en V.
cholerae N16961. Los genes rtxL1 y rtxL2 están dispuestos en tándem, que es diferente de la disposición del
grupo de genes RTX de V. cholerae. RtxL1 y RtxL2 pertenecen a la familia RTX de hemolisina / leucotoxinas,
exhibiendo actividad hemolítica en eritrocitos humanos, pero también parecen jugar un papel en la adherencia
y formación de biopelículas por V. cholerae N16961. Ambos genes rtxL1 y rtxL2 se expresan en todos los
aislamientos de V. cholerae pertenecientes a las serovariedades O1 (cepas N16961, O395 y 569B), O139 (cepa
SG24) y no O1-no O139 (cepas VCE232 y VCE309) en condiciones in vitro y parecen desempeñar un papel en la
virulencia en un modelo de ratón .

Proteasas RTX
Las proteasas RTX pertenecen a las metaloproteasas de zinc
microbianas y forman un grupo de enzimas proteolíticas de
aproximadamente 50 kDa secretadas por una variedad de patógenos.
Estas proteasas consisten en un dominio proteolítico N-terminal y un
dominio RTX de unión a calcio C-terminal y se sintetizan como
zimógenos que se activan por procesamiento tras la secreción. Hasta la
fecha, estas proteasas con características de la familia de proteínas RTX
fueron descubiertas e identificadas en seis géneros bacterianos
(Serratia, Erwinia, Pseudomonas, Proteus, Caulobacter
y Photorhabdus.).

Inhibidores de la proteasa RTX

El inhibidor maduro de 10 kDa se encuentra completamente en el periplasma de E. chrysanthemi y su supuesto
papel fisiológico consiste en proteger las proteínas periplásmicas contra las proteasas que potencialmente
podrían escaparse del ensamblaje del canal TISS. Inh forma un complejo 1: 1 con proteasas A, B y C de E.
chrysanthemi, AprA de P. aeruginosa y PrtSM de S. mercascens.

Actividad biológica de RTX proteasas

Se demostró que la AprA de Pseudomonas aeruginosa hidroliza la fibrina y el fibrinógeno, con actividades
específicas similares a la plasmina. AprA también exhibe una actividad anticoagulante en el plasma humano,
que se atribuyó a su función fibrinogenolítica directa. Esto puede explicar, al menos en parte, la característica
patológica más característica de la septicemia por P. aeruginosa, que consiste en lesiones hemorrágicas que
carecen de trombos. Caulobacter crescentus sintetiza otro tipo inusual de proteasa RTX, llamada Sap
(proteasa asociada a la capa S). La mitad N-terminal de Sap muestra una similitud significativa con
otras proteasas RTX (por ejemplo, AprA de P. aeruginosa), incluidas las secuencias repetitivas RTX
características, mientras que la mitad C-terminal de Sap exhibe una similitud significativa con la
región N-terminal de la Proteína S-layer RsaA.
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Lipasas bacterianas RTX
Las lipasas extracelulares de bacterias Gram-negativas se han caracterizado extensamente, considerándose
como herramientas valiosas para una variedad de aplicaciones biotecnológicas, biomédicas y de la industria
alimentaria. Hasta ahora, se informó que los géneros Pseudomonas y Serratia producían lipasas RTX de la
subfamilia I.3. Estos no tienen residuos de cisteína, no requieren productos génicos adicionales para la
actividad y se secretan a través de TISS.

Bacteriocinas RTX
Las bacteriocinas son toxinas bacterianas estructural y funcionalmente diversas que inhiben el crecimiento de
otras cepas bacterianas. Los genes transportados por plásmidos para bacteriocinas que pertenecen a la familia
de proteínas RTX (Tabla 3) se encontraron en endosimbiontes y patógenos de plantas Gram-negativas, tales
como Rhizobium leguminosarum, Bradyrhizobium elkanii, Xylella fastidiosa, Xanthomonas oryzae o
Agrobacterium tumefaciens, respectivamente. El mecanismo de acción de estas supuestas toxinas bacterianas
aún no se ha caracterizado. Los experimentos de competición de nodulación con mutantes que carecen de
actividad de bacteriocina RTX.

Proteínas RTX de capa S: Las proteínas de la capa S forman conjuntos cristalinos bidimensionales
organizados regularmente que cubren toda la superficie externa de un amplio espectro de bacterias y arqueas.
Está dotada de la capacidad de ensamblarse en la capa de la envoltura de soporte, lo que representa uno de
los sistemas de autoensamblaje más simples.

Proteínas RTX implicadas en la motilidad de las cianobacterias: Las proteínas RTX parecen ser
abundantes en cianobacterias, se ha demostrado que algunas de las proteínas RTX cianobacterianas descritas
están implicadas en la motilidad celular, incluida SwmA de Synechococcus sp. cepa WH8102, oscilina de
Phormidium uncinatum o proteína de tipo hemolisina Sll1951 de Synechocystis sp. cepa PCC 6803.

Nodulación RTX proteínas: Se identificó una proteína RTX de 30 kDa, NodO, en R. leguminosarum bv. viciae
y se demostró que desempeña un papel en la nodulación de guisantes y veza, aunque aún no se sabe con
exactitud.

Proteínas RTX de función biológica desconocida: Inicialmente, se descubrieron dos proteínas parcialmente
homólogas, FrpA y FrpC, que poseen las características repeticiones carboxi-proximales del motivo
nonapéptido RTX Sin embargo, su secreción bajo condiciones de crecimiento limitadas de hierro, que imitan la
condición en fluidos corporales, y los títulos elevados de anticuerpos contra proteínas Frp.

Identificación de nuevas proteínas RTX

Actualmente, casi 1000 genomas procariotas están completamente secuenciados y> 2000 proyectos de
secuenciación del genoma están en progreso. Se identificaron mediante tres métodos diferentes: búsqueda de
patrones; Búsqueda del Modelo Oculto de Markov (HMM) y rps-blast. Las bacterias que albergan los genes de
la proteína RTX fueron en su mayoría Gammaproteobacteria (100 cepas), Alphaproteobacteria (56 cepas) y
Betaproteobacteria (32 cepas). Las cianobacterias se representaron 25 veces y las proteínas RTX parecen, de
hecho, ser más abundantes en cianobacterias, con Trichodesmium erythraeum.

Bibliografía: Linhartová I., Bumba L, Basler M., et al. (2010). RTX proteins: a highly diverse family
secreted by a common mechanism. Consultado el 18 de Octubre de 2017, de
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3034196/