Práctica 3: EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS PRINCIPIOS
ACTIVOS DE LA MARIHUANA
Fundamentos teóricos
La marihuana (cannabis sativa) como problema de identificación con fines forenses representa sin
duda gran interés por ser la más común de las drogas de abuso en nuestro medio.
La mayoría de las muestras que llegan a un laboratorio de medicina legal están constituidas por
material vegetal de tamaño variable, más o menos seco en las cuales es posible reconocer los
elementos botánicos de la planta, residuos de combustión, residuos que pueden quedar en los
dispositivos utilizados para fumarla (pipa, boquilla, etc.), parte de la resina se adhiere a los dedos.
Los principios activos de la marihuana están constituidos por una esencia a base de p-cimeno y de
diversos productos orgánicos y minerales. La resina es poco soluble en agua, soluble en alcohol,
éter, cloroformo, éter de petróleo, aceites y esencias. Las propiedades narcóticas parecen
relacionarse con los componentes fenólicos o con alguno de ellos. Dichos componentes son: ácido
cannabidiólico (A.C.B.), cannabidiol (C.B.D), tetrahidrocannabinol (T.H.C), y el cannabinol (C.B.N). El
tenor de cada uno de estos componentes responde al grado de madurez de la droga, así, un cannabis
verde contiene una importante proporción de C.B.D y una muy madura presenta una tasa
aumentada de C.B.N.
Existen diversos métodos para la caracterización de la planta o sus resinas, estos métodos incluyen
técnicas microscópicas, ensayos químicos, y cromatografía en capa fina.
Identificación microscópica
El examen microscópico es el método más rápido y práctico para la identificación de los productos
de tráfico ilícito de la marihuana. Se basa en el hallazgo de los caracteres microscópicos de la planta
que son constantes y específicos de la misma. Consiste en examinar las muestras pulverizadas de la
planta mezcladas con agua o glicerina para determinar la presencia o ausencia de aquellos
elementos botánicos (glándula secretora de resina, pelo unicelular cistolítico, pelo simple) que son
característicos de la marihuana. Aunque el método se presenta sencillo al experto, existen casos en
los cuales surgen dudas o se pueden presentar equivocaciones.
Ensayos químicos
A pesar de que la identificación microscópica es suficiente para determinar que se trata de
marihuana, debe realizarse por rutina pruebas químicas sobre el material existente para
complementar y confirmar lo observado al microscopio.
Materiales, equipos y reactivos
Éter de petróleo
Carbón activado.
Reactivo de Bouquet
Reactivo de Duquenois
Solución azul sólido B
HCL(C)
Cloroformo
Amoniaco
Tubos de ensayo
Erlenmayer
Procedimientos
Identificación microscópica
Tomar una cantidad de la hierba y reducirla en un mortero hasta partícula fina, efectuar tres
extracciones con 10-15ml de éter de petróleo, reunir los extractos etéreos, si la solución presenta
una coloración castaño-verdosa, agregue una pequeña cantidad de carbón activado y filtre.
Divida el filtrado en cuatro porciones en pequeños vasos de precipitado y realice los siguientes
ensayos:
1. ENSAYO DE BOUQUET:
a. Preparación
Se toman 3 partes de etanol absoluto que se colocan en un Beaker y lentamente y con
agitación se añaden dos partes de ácido sulfúrico concentrado. (Este reactivo deberá
prepararse siempre fresco este reactivo deberá prepararse siempre fresco)
b. metodología
Evapore sobre baño María el contenido de uno de los vasos, disuelva el residuo en 1ml de
acetona, añada 0.5ml del reactivo de Bouquet recientemente preparado, dejar reposar. Un
color marrón-rojizo se desarrolla lentamente si el material es cannabis. Si se añade unas gotas
de agua destilada a la solución se observara una opalescencia blancuzca.
c. Observaciones:
Algunos otros materiales pueden desarrollar un color marrón con este reactivo pero, estos no
reaccionan de manera similar cuando se añade el agua.
2. ENSAYO DE DUQUENOIS Y NEGM:
a. Preparación
Se pesa 1 g de Vainillina, se añade 1 mL de acetaldehído y añade 100 mL de Alcohol Etílico.
b. Metodología
Evapore a sequedad sobre baño María el contenido de uno de los vasos, agregue 2ml del
reactivo de Duquenois, agite bien y trasvase a un tubo de ensayo, agregue con cuidado y
lentamente por las paredes del tubo 2ml de HCL(C), en la zona de separación aparece un anillo
que presenta diversos colores como verde pizarra, azul índigo, y violeta. Agitar con cuidado y
dejar reposar por unos minutos; el color violeta aumenta de intensidad progresivamente. Si se
agregan 2-3ml de cloroformo y se agita, el color se transfiere a la capa orgánica.
3. ENSAYO DE GHRAMRAWAY:
a. Preparación
Se pesa 10gr de p-metilaminobenzaldehido, se añade 100ml de alcohol etílico disolver y
posteriormente añadir 20 gotas de ácido sulfúrico concentrado (preparar en fresco).
b. Metodología
Evapore a sequedad sobre baño María el contenido de uno de los vasos; déjese enfriar y
añádase 2 mL del reactivo. Al añadir el reactivo si hay Cannabis se formara un color violeta
que al evaporar pasa a azul.
4. ENSAYO DE BEAM.
a. Preparación
Se pesa 10gr de hidróxido de potasio y se añade 100ml de etanol absoluto.
b. Metodología
Evapore a sequedad sobre baño María el contenido de uno de los vasos. Sobre el residuo
agregar 12 gotas de reactivo de Beam y dejar en reposo. Aparece gradualmente el color
violeta si existe resina camón indiano.
El residuo puede calentarse suavemente o bien agregar el reactivo estando caliente.
c. Interpretación y observaciones:
Esta reacción es producido por el cannabinol y no por el tretrahidrocanabinol, por lo tanto,
no refleja la actividad fisiológica de la droga.
Esta comprobación explica el resultado negativo que suele obtenerse con muestra de
cannabis ricas en resina fisiológicamente activa y, por el contrario, positivas con muestras
fisiológicamente inactivas o débiles
5. ENSAYO CON AZUL SÓLIDO B: sobre una hoja de papel filtro, colocar una gota del filtrado
etéreo, dejar evaporar el solvente, añadir una gota de solución azul sólido B, exponer a
vapores de amoniaco. La tonalidad de color rojo se intensifica.
Cromatografía en capa fina
Algunos autores expresan que los ensayos químicos son inespecíficos y proponen la resolución
cromatografía en capa fina que permite una buena separación de los principales componentes de
la resina C.B.D, T.H.C.
La aplicación del método permite tener una idea bastante clara de la composición de las muestras
en estudio; y la separación e identificación de los componentes de la resina constituyen un
importante juicio para sentar criterio presuntivo sobre la actividad farmacológica de las resinas.
Fase estacionaria: sílica-gel HF 254
Fase móvil:
Benceno-Hexano-Di etilamina (25-10-2)
Benceno.
N-Hexano - Dioxano(9-1)
Reveladores:
Azul sólido B: se obtiene colores púrpura para el C.B.N, rosa para el T.H.C. y rojo- violáceo con el
C.B.D.
Bencidina Diazotada: se obtienen colores amarillo-naranja para el C.B.N, rojo-naranja para el T.H.C,
y rojo castaño para el C.B.D.
Comentarios acerca de las observaciones
Precauciones:
Consulte la M.S.D.S. para mayor información.
TENGA CUIDADO CON:
Ácido Clorhídrico (HCl): esta sustancia provoca quemaduras e irrita las vías respiratorias. En
caso de contacto con los ojos, lave inmediatamente y con abundante agua. En caso de
accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico.
Cloroformo: esta sustancia es nociva por ingestión. Irrita la piel. Posibles efectos
cancerígenos. Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposición
prolongada por inhalación e ingestión. Úsense indumentaria y guantes de protección
adecuados.
Amoníaco (NH3): esta sustancia provoca quemaduras. En caso de contacto con los ojos, lave
inmediatamente y con abundante con agua. En caso de accidente o malestar, acuda
inmediatamente al médico. Deben evitarse las temperaturas mayores a 25 ºC. Los
recipientes abiertos liberan gases de amoníaco.
Elementos de protección personal:
Bata de laboratorio, gafas de seguridad con protección lateral y guantes de caucho.
