UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE HIGIENE Y SEGURIDAD INDUSTRIAL

RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS EN PLACAS DE PETRI. EXPRESIÓN DE

RESULTADOS. CARACTERIZACIÓN DE LAS COLONIAS. SIEMBRA DE
MICRORGANISMOS DE MEDIO SOLIDO A LÍQUIDO. COMPORTAMIENTO DE
BACTERIAS EN CALDO NUTRITIVO Y CALDO BHI.

CUARTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

CARAZAS FERNADEZ HERISSON ESTEBAN 20151519E

HUAMANI YALAUPARI WILBERT DAVID 20172758C
LOPEZ SEDANO JIMY 20180593J
MONTES USCAMAYTA JEAN PIERRE 20172708F
TOLENTINO ESPINOZA FERNANDO OSCAR 20180594F

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
20 de setiembre del 2019
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Facultad de Ingeniería Ambiental

INDICE
RESUMEN ............................................................................................................................................ 3
INTRODUCCION ................................................................................................................................... 3
OBJETIVOS ........................................................................................................................................... 3
MARCO TEÓRICO................................................................................................................................. 4
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ....................................................................................................... 6
RESULTADOS ....................................................................................................................................... 7
DISCUSION DE RESULTADOS ............................................................................................................... 9
CONCLUSIONES ................................................................................................................................. 10
RECOMENDACIONES ......................................................................................................................... 11
BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................................................... 12
ANEXOS ............................................................................................................................................. 12
DATOS ORIGINALES Y OBSERVACIONES ................................................ Error! Bookmark not defined.

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RESUMEN
En este laboratorio hallaremos el recuentro estándar en placa Petri por siembra de
profundidad, mediante métodos donde realizaremos la dilución y siembra.
Para realizar la dilución se tendrá que pesar 10 g de muestra en condiciones de asepsia y
homogenizar con 90 ml de solución diluyente (AP) en la licuadora ,después lo podemos en
un matraz y lo traspasamos 10ml a 4tubos de ensayo después realizaremos la siembra en
donde adicionaremos de 15 a 20 ml de agar (APC) tripona extracto de levadura fundido y
enfriado a 45°C en placas Petri estériles conteniendo inoculo de 1 ml por dilucida después
homogenizamos la muestra y el agar mediante la rotación y vaivén y lo incubamos en cajas
en posición invertida a 35°C por 48 horas y finalmente contaremos aquellas placas que
tengan entre 30 a 300 colonias y lo reportamos como ufc/gr.

INTRODUCCION
En diversos estudios microbiológicos se requiere conocer el número de microorganismos
presentes en un material con objeto de determinar su calidad esto también ayudara al
operador a tomar una decisión al momento de poder inferir si es que el alimento está en
buen estado o simplemente puede ser dañino para el consumo humano. El procedimiento
es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento de las poblaciones de
bacterias El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante
métodos de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente
proporcional al número de células, (métodos de determinación del peso, de la actividad del
cultivo o métodos turbidimétricos) el cual se ocupa en espectrofotometría o por la
determinación del número de células. Los microorganismos Aerobios mesofilos
generalmente son un indicador de contaminación existente en la gran mayoría de las
comidas por ende entender su forma de actuar beneficia mucho a una persona para su
salud y posterior vida, además estos organismos indican en el control de calidad una tarea
muy importante que es el tema del almacenamiento o mala manipulación de este y no tener
los estándares de almacenamiento a regla, “libre de contaminación”.

OBJETIVOS
 Aprender y valorar la importancia del procedimiento de la toma de muestra y
dilución de muestras ambientales.
 Aprender la técnica de preparación y dilución de muestras ambientales.
 Aplicar en la práctica el procedimiento de la preparación y numeración de
microorganismos.
 Determinar la carga microbiana en una muestra ambiental.

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MARCO TEÓRICO
El recuento o conteo de microorganismo nos sirve para conocer la población bacteriana; es
decir, la cantidad de microorganismos que habitan en una placa existen diversos métodos
para el recuento de microorganismos estos son los que presentamos a continuación:

Técnica de Dilución y Cuenta en placa:

La Manera en la que se cuantifica células viables de forma más usual en microbiología es
mediante el método de la dilución; este método consiste en la colocación de
microrganismos en un medio agar en este las bacterias se reprodujeran y formaran una
colonia visible en consecuencia el número de colonias que se observaran a simple vista
será igual al número de bacterias viables o unidades formadoras de colonias inoculadas en
el agar multiplicadas por la dilución.

Conteo en Placa:
Es la técnica más recomendable para el conteo de bacterias. Se prepara un caldo de cultivo,
el cual posteriormente se vierte en las placas de Petri. Dependiendo del tipo de sembrado,
puede que la muestra se encuentre incorporada en el agar o puede que la muestra se
disperse sobre el agar gelificado Lo que debería suceder es que cada célula o grupo de
células presentes en la muestra se reproducirá en sus múltiples alrededores para producir
"colonias de células" separadas en el agar. Cada colonia es llamada unidad formadora de
colonias (UFC). Es importante considerar un número limitado de colonias pues de no ser
así, éstas pueden sobre poblarse y dificultar el conteo de las mismas (rango sugerido de
acuerdo a FDA 25-250 colonias). El conteo se facilita utilizando un contador de colonias.
Este método es favorable pues se puede contar solo a las células viables a diferencia de
otros métodos. Una desventaja de la técnica es el tiempo que requiere para producir las
colonias, ya que se necesitan como mínimo 24 horas o más. Cabe resaltar que el método
no es100 % fiable en algunas ocasiones las colonias crecen juntas y se dificulta el conteo
se hace impreciso.
Técnica de Conteo por Filtración:
Esta técnica tiene la ventaja de ser sumamente rápida consiste es recomendable aplicarla
cuando la cantidad de bacterias es pequeña como las que se encuentras en lagos, para
realizar esta técnica necesitamos al menos 100 ml de agua que atraviesen una membrana
delgada de un filtro, con poros tan pequeños que no permitan el paso de bacterias, de esta
forma éstas son retenidas en la superficie del filtro.
Luego el filtro es transferido a una caja de Petri que cuenta con un caldo nutritivo, en la
cual las colonias surgen de las bacterias en la superficie del filtro. las colonias bacterianas
formadas por este método son distintivas cuando ocupan un medio diferencial. Este método

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es aplicado frecuentemente en la detección y enumeración de bacterias coliformes, las

cuales son indicadores de contaminación fecal en la comida o en el agua.
Caracterización de las colonias:
Las colonias bacterianas poseen una forma, textura, color, medida incluso olor
característico a pesar de que puedan variar conforme al medio en que se encuentren es
constante bajo condiciones controladas y depende también del tipo de especie con la cual
trabajemos a continuación expresaremos los términos descriptivos para la morfología de
las colonias en un medio sólido. Para la visualización de las imágenes referidas a la
morfología revise el Anexo 1. en la sección Anexos.
Forma
Está determinada por su borde y su espesor. se pueden
observar varias formas, elevaciones y bordes de colonias bacterianas. En tanto a ello las
formas pueden ser: Circular, Puntiforme, Irregular, Rizoide y Fusiforme.
Bordes
Estos pueden ser: Entero, Ondulado, lobulado, filamentoso
Consistencia y textura
La consistencia de las colonias puede variar desde una
colonia seca que puede moverse sobre el agar con el asa, hasta una colonia
viscosa que se pega al asa y forma filamentos o hilos mucosos cuando se trata de
separarla del agar.
Superficie
Puede ser: Lisa Rugosa o plegada.
Elevación de la colonia
Tenemos elevación plana, convexa y elevada.
Caracterización del Comportamiento Bacteriano en Medio Líquido.
También podemos dar la caracterización en otros medios tal es el caso de un medio líquido,
tal es el caso en el cultivo en caldo BHI o en caldo nutritivo en estos medios podemos notar
las siguientes características de las bacterias reflejadas en el líquido:
Turbidez: Opacidad más o menos densa. Es indicador de crecimiento.
Película: Crecimiento casi continuo sobre el líquido.
Sedimento: Deposito de células en el fondo del tubo que se re suspende al agitar.
Caracterización en Medio Semisólido
También se caracterizan los microorganismos en estos medios buscando así el análisis de
la motilidad de las bacterias.
Siembra en medio líquido:

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En este tipo de siembra se observa el crecimiento de microorganismos mediante el

entubamiento del medio de cultivo, la formación de sedimento, desarrollo floculento y
formación de membrana. Estas son características que evidencian el desarrollo de los
microorganismos en medio líquido. (UNESR)
“Un organismo se disemina de la línea de inoculación a toda la masa de Agar hasta la pared
del tubo de ensayo, con lo que se produce turbidez en el medio de cultivo. (Carpenter,
1969)”

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a) Materiales
Empleamos los siguientes materiales:
 Muestras bacterianas en placa Petri.
 Marcador.
 Contador de colonias.
 Asa de siembra.
 Mechero de Bunsen.
 Pipetas.
 Cuaderno de notas.
 Cámara fotográfica.

b) Metodología
Siembra de microorganismos de medio solido a liquido
1. Extracción del microrganismo en medio solido
 Calentamos al rojo vivo el asa de siembra, cogemos el tubo que posee los
los microorganismos que se desean aislar.
 Abrimos cuidadosamente la tapa y manteniendo siempre en todas nuestras
acciones la cercanía al mechero se introduce el asa de siembra y
removemos la muestra.
2. Inoculación
 Ahora colocaremos la muestra extraída en nuestros tubos que posee
medios de cultivo líquidos agar TSA, caldo nutritivo y agar BHI

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 Se introduce el asa de siembra en el tubo procurando que este ingrese en

el líquido.
 Retiramos el asa de siembra y cerramos cuidadosamente.
Caracterización de las colonias
1. Selección para la caracterización de las colonias en placa Petri:
 Seleccionamos las colonias más separadas de las demás y por fuera de la placa
con un marcador indeleble las encerramos en con un circulo
[Link] del contador de colonias:
 Al poseer una lupa y luz nos facilita la caracterización de las colonias.
2. Caracterización de colonias:
Bajo los parámetros planteados en teoría se realizó la caracterización de las
colonias tomando los apuntes respectivos.

RESULTADOS
Se obtuvieron los siguientes resultados:

Siembra en Agar Inclinado Crecimiento

I Crecimiento uniforme a lo
largo del tubo.

II Crecimiento uniforme.

III Poco crecimiento.

IV Poco crecimiento.

V Poco crecimiento .

VI Abundante crecimiento en la
parte superior del tubo.

VII Poco crecimiento.

VIII Presenta un crecimiento

uniforme a lo largo del tubo.

IX(Muestra de Boca) Poco crecimiento.

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X(Muestra de Mano) Presenta abundante

crecimiento.

Tabla1. Microorganismos de tierra, mano y boca en tubo de ensayo con Agar inclinado
(Medio solido).

Colonia Forma Borde

I Circular Ondulado

II Irregular Ondulado

III Fusiforme Redondeado

IV Circular Redondeado

V Fusiforme Ondulado

VI Irregular Ondulado

VII Circular Rizoide

VIII Puntiforme Circular

Tabla 2. Caracterización del comportamiento bacteriano en medio solido

Colonia Turbidez Sedimento Película

I No hay turbidez Sedimenta No presenta

II Poca turbidez Sedimenta Si presenta

III Turbidez Sedimenta No hay película

IV Poca turbidez Sedimenta No hay película

V Turbidez Sedimenta No hay película

VI Turbidez Sedimenta No hay película

VII Turbidez Sedimenta Si presenta

VIII Opaca Sedimenta No hay película

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[Link]ón del comportamiento bacteriano en BHI y caldo nutritivo (medio

líquido).

DISCUSION DE RESULTADOS
De la primera tabla de microorganismos de tierra, mano y boca se debió encontrar en
los primero tubos una mayor cantidad de microorganismos pues esto poseerían un grado
de concentración de muestra mayor a las ultimas (método de dilución).

Los resultados
obtenidos tienen
cierta coherencia
con lo planteado.

Se encontraron una abundancia de crecimiento en la muestra de mano a diferencia a la de

muestra de boca esto se debe a que la muestra que tomamos de la mano posee más tipos
de microorganismos que los de la boca pues la mano está expuesta a diversas superficies
lo que genera una variedad de microorganismos que crecerán en el agar

De la tabla segunda tabla presentada en la que se mostraron el comportamiento de las

bacterias en medio solido encontramos una preponderancia del borde ondulado en nuestras
cepas se podemos inferir entonces que existe una gran cantidad de bacterias de forma
redondeada es probable que se traten de cocos pues estos poseen forma redondeada este
razonamiento se debe a que las formas filamentosas y lobuladas poseen formas alargadas
más propias de microorganismos alargados como bacilos

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Preponderancia de
borde ondulado
podríamos pensar que
se deba a la presencia
de microorganismos
redondeados tales
como los cocos.

En la tercera tabla mostramos el comportamiento de las bacterias en medio liquido usamos

el BHI y el caldo nutritivo en se notó principalmente turbidez con esto es indicador de
crecimiento microbiano también notamos que todos los tubos presentaron sedimento esto
se explica por la deposición de células en el fondo del tubo por efectos gravitacionales vale
recalcar que se re suspende al [Link] también una película gruesa en nuestros
tubos por lo planteado teóricamente esto se da debido a que se esta formando crecimiento
uniforme de los microorganismos.

La presencia
de película
muestra un
crecimiento
uniforme.

Producto de
Indicador de crecimiento
efectos
gravitacionales

CONCLUSIONES
En base o lo planteado en teoría conseguimos caracterizar colonias de microorganismos
previamente aislados considerando los parámetros de forma, borde y siguiendo las
terminologías correspondientes hemos observado la mayor preponderancia de la forma
circular y el borde ondulado en nuestras colonias.

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Se logró exitosamente la siembra de microorganismos de un medio solido a uno liquido

pues se observó en los tres medios inoculados estos son el agar TSA, Agar BHI y el caldo
nutritivo el crecimiento de los microorganismos lo cual se hizo posible la caracterización
en medio líquido.

RECOMENDACIONES
 Lavarse las manos con abundante agua y jabón, antes, durante y después de
terminar el laboratorio.
 Usar guantes (opcional) para evitar quemaduras.
 Usar la bata de laboratorio durante todo el tiempo que dure este.
 Las jóvenes deben tener el cabello recogido para evitar que la muestra se
contamine.
 Desinfectar el lugar en donde se realizará el respectivo laboratorio.
 Pesar la muestra con el mínimo error posible.
 Colocar las placas Petri invertidas en la estufa.
 Esterilizar las pipetas y otros materiales a utilizar al tomar las muestras y así evitar
la contaminación con otros microorganismos, los cuales no queremos analizar.

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BIBLIOGRAFÍA
 [Link]
 [Link]
placa_6527.pdf
 López Tevez, L. (2019). [online] [Link]. Available at:
[Link] [Accessed 11 Apr. 2019].
 Camacho, A., ,. (2019). Retrieved from
[Link]
placa_6527.pdf

ANEXOS

Recuentro estándar en placa Petri por siembra de profundidad (incorporación o

difusión)

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Muestras en Medio
Liquido Caldo nutritivo
y agar BHI

Muestra de agares
inclinados

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Bordes de las
colonias

Forma de
colonias

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