UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA
MESA
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA N° 4
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N° 7
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA
DE GLUCOSA
Integrantes:
1- Acuña Campos, Michelle 20160327
2- Alvarez Jijon, Jim 20160328
3- Ccahuay Ramírez, Diego Armando 20160337
4- Enriquez Araujo, Fabrizio
Grupo: Lunes 2-4pm F*
Fecha de la práctica: 15/05/17
Fecha de entrega de informe: 29/05/17
2017-I
INTRODUCCIÓN
La creatinina es una molécula de deshecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La creatinina
proviene de la creatina, una molécula muy importante para la producción de energía muscular. La
creatinina se transporta desde los músculos por medio de la sangre hacia el riñón.
Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial, ya que se ha
observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la función renal. Si
los riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto ésta se acumula en la sangre.
MÉTODO DEL FACTOR DE CALIBRACIÓN: Si consideramos que la absorción de una solución coloreada es
directamente proporcional a su concentración siempre que el desarrollo siga la Ley de Beer, entonces
tendremos que dos soluciones, una de concentración conocida (patrón) y otra desconocida (problema),
procesadas y leídas idénticamente guardan una relación entre sus absorbancias y concentraciones que
permite calcular la concentración desconocida.
RESULTADOS
Tubos
Reactivo
Blanco 1 2 3 4 M.P.
Estándar de glucosa (mL) - 0,4 0,6 0,8 1,0 -
Agua destilada (mL) 1,0 0,6 0,4 0,2 - -
Muestra (mL) - - - - - 1,0
Reactivo de Somogy (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Colocar en baño maría hirviendo por 10 minutos – Enfriar
Reactivo de Nelson (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Agua destilada c.s.p. (mL) 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5
Homogenizar y leer a 540nm
Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Muestra
Absorbancia 0 0,143 0,222 0,297 0,358 1,119
Concentración
3,2x10-3 4,8x10-3 6,4x10-3 8x10-3 2,45x10-2
en mg/mL
3,2x10−3 4,8x10−3 6,4x10−3 8𝑥10−3 1
FC = (
0,143
+
0,222
+
0,297
+
0,358
) 4 = 2,19x10-2
CM = FC x AM = (2,19x10-2) X (1,119) = 2,45x10-2mg CM = 2,45mg%
Concentración en la botella de cifrut de 240 mL
2,45x10-2mg--------- 1 mL
3,06x10-1mg -------- 12,5 ~ 1 mL
3,06x10-1mg --------- 1 mL
15,3 mg -------------- 50 mL ~ 5 mL
15,3 mg-------------- 5 mL
153 mg-------------- 50 mL ~ 5 mL
153 mg-------------- 5 mL
X --------------------- 240 mL
X = 7344mg = 7,344g
DISCUSIONES
Como los glicosidos son acetales (o cetales) no están en equilibrio con el aldehído (o la cetona) de cadena
abierta en disoluciones acuosas neutras o básicas. Al no estar en equilibrio con un compuesto que tenga un
grupo carbonilo, no se pueden oxidar con reactivos como Ag+ o Br2. Por consiguiente, los glicosidos son
azucares no reductores: no pueden reducir Ag+ ni Br2.
En contraste, los hemiacetales (o los hemicetales) están en equilibrio con los azucares de cadena abierta en
disolución acuosa y pueden reducir Ag+ o Br2. En resumen mientras es azúcar tenga un grupo aldehído,
cetona, hemiacetal o hemicetal puede reducir a un agente oxidante y por consiguiente se le considera
azúcar reductor. Si carece de tales grupos se le considera como un azúcar no reductor. (Yurkanis)
La glucosa presente en la sangre tiene su origen en:
- Los hidratos de carbono ingeridos en la dieta.
- La eventual glucogenolisis del glucógeno hepático
- La gluconeogénesis, a partir de las proteínas.
Tras la absorción de la glucosa ingerida en la dieta, esta pasa a la sangre y entonces, los niveles normales
en ayunas (oscilan entre 60 y 90 mg/dL) se elevan hasta valores de 120-150mg/dL o, incluso más.
Alteraciones en el metabolismo de los hidratos de carbono
Hiperglucemia. En general, la hiperglucemia es una elevación anormal de la concentración de glucosa en
sangre que conduce a un síndrome clínico denominado “diabetes” del cual, el aumento de los niveles
plasmáticos de glucosa es solo su expresión más característica.
Hipoglucemia. La hipoglucemia, se define como un estado fisiopatológico de etiología muy variada, que
consiste en la existencia de una cifra de glucosa plasmática inferior a los 45-50 mg/dL, acompañada o no de
signos clínicos. (Ocon .García .Vicente)
Glucosa en la muestra:
Carbohidratos del limón
La siguiente tabla muestra una lista de la cantidad de hidratos de carbono simples del limón en 100g:
Nutriente Cantidad Nutriente Cantidad
Azúcar 3,16 g. Glucosa 1,40 g.
Fructosa 1,35 g. Maltosa 0 g.
Galactosa 0 g. Sacarosa 0,41 g.
Carbohidratos de la piña
La siguiente tabla muestra una lista de la cantidad de hidratos de carbono simples de la piña en 100g:
Nutriente Cantidad Nutriente Cantidad
Azúcar 10,40 g. Lactosa 0 g.
Fructosa 2,05 g. Maltosa 0 g.
Galactosa 0 g. Oligosacaridos 0 g.
Glucosa 1,79 g. Sacarosa 6,56 g.
Carbohidratos del maracuyá
La siguiente tabla muestra una lista de la cantidad de hidratos de carbono simples de 100g de maracuyá:
Nutriente Cantidad Nutriente Cantidad
Azúcar 9,54 g. Glucosa 3,64 g.
Fructosa 2,81 g. Sacarosa 3,09 g.
CONCLUSIONES
Se determinó la concentración de glucosa en la muestra.
Se ejercitó en el uso de factores de calibración promedio para cálculos de concentraciones en
espectrometría.
El método de nelson-somogyi se fundamenta en la oxidación de la glucosa por acción de un reactivo
cuproalcalino y posterior formación de un complejo coloreado azul verdoso por acción del ácido
molibdico arsenioso.
Los métodos más antiguos de determinación se basan en la reducción de iones cúpricos a cuproso.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Paula Yurkanis Bruice. (2008). Química orgánica. México: Pearson Educacion.pp.999-1000.
Robert Thornthon Morrison. Robert Neilson Boyd. (1990). Química Orgánica. Estados
Unidos: Addison-wesley iberoamerica.
Jeremy M. Berg. John L. Tymocsko.Lubert Stryer. (2008). Bioquímica. España: Editorial
Reverte.
Carmen D´Ocon. José García .José Vicente. (1999). Fundamentos y técnicas de análisis
bioquímico. España: Editorial Paraninfo.
PROBLEMAS ENCARGADOS
1. ¿En qué momento se realiza la precipitación de las proteínas y por qué?
Al momento de añadir en un tubo de 50 ml, 15 ml de agua destilada, 1 ml de sangre anticoagulante, 2 ml
de hidróxido de Bario 0,3N y 2 ml de solución de Sulfato de Zinc. Se deja reposar 10 min y se aprecia la
precipitación de proteínas.
2. ¿Cuál es el papel del oxalato de amonio?
El papel que cumple es evitar la hemólisis en la sangre, también se le denomina a este compuesto en la
determinación de glucosa (sangre anticoagulante).
3. ¿Cuál es el fundamento del método de Somogy-Nelson? Explique si se produce una reacción de
oxidación o reducción.
El método de Nelson- Somogy se fundamenta en la oxidación de la glucosa por acción de un reactivo cupro-
alcalino y posterior formación de un complejo coloreado azul verdoso por acción del ácido molíbdico y
arsenioso. La intensidad de coloración de este complejo es proporcional al contenido de glucosa en la
muestra. Esta coloración es leída a 540 nm junto con una curva de calibración de glucosa
4. El coeficiente de extinción molar de una sustancia es de 3257 𝑐𝑚−1 𝑚𝑜𝑙 −1 en una celda de 1 cm y con
una longitud de onda 280 nm. ¿Cuál será la concentración en mg o en g sí se obtuvo una absorbancia de
0,215, sabiendo que el peso molecular es 328?
E: 3257
b:1 cm
A: 0,215
PM:328
A= E.b.c
0,215= 3257𝑐𝑚−1 𝑚𝑜𝑙 −1 .1 cm .c
0,00006 mol= c
