Bioreactores

¿Qué es un bioreactor?
Bioreactor: device, usually a vessel, used to direct the activity of a
biological catalyst to achieve a desired chemical transformation.

Fermenter: type of bioreactor

in which the biocatalyst is a
living cell.

Pre-filtration

Input

Nutrients tank
Waste

Recycle

Product
Bioreactor
Product
separation & purification
• Mantener las células uniformemente distribuidas
en todo el volumen de cultivo.
• Mantener constante y homogénea la
temperatura.
• Minimizar los gradientes de concentración
de nutrientes.
• Prevenir la sedimentación y floculación.
• Permitir la difusión de gases nutrientes a la
velocidad requerida por el cultivo.
• Mantener el cultivo puro.
• Mantener un ambiente aséptico.
• Maximizar el rendimiento y la producción.
• Minimizar el gasto y los costos de producción.
• Reducir al máximo el tiempo.
• The performance of bioreactors
depends on several key aspects of
their design and operation.
• Reactor configuration. For example,
should the reactor be a stirred tank or an
air-driven vessel without mechanical
agitation?

• Reactor size. What size reactor is

required to achieve the desired rate of
production?
• Mode of operation. Will the reactor be
operated batch-wise or as a continuous flow
process? Should substrate be fed
intermittently? Should the reactor be operated
alone or in series with others?
• Processing conditions inside the reactor.
What reaction conditions, such as
temperature, pH, and dissolved oxygen
tension, should be maintained in the vessel?
How will these parameters be monitored and
controlled to optimise process performance?
How will contamination be avoided?
 Funcionamiento
• El tanque debe diseñarse para que funcione
asépticamente durante numerosos días, así como para
las operaciones de más larga duración.
• Se debe proporcionar un sistema adecuado de aireación
y agitación para cubrir las necesidades metabólicas de
los microorganismos.
• El consumo de energía debe ser tan bajo como sea
posible.
• Debe tener un sistema para el control del pH.
• El fermentador debe tener un sistema para la toma de
muestras.
• Debe existir un sistema para el control de la
temperatura.
• Las pérdidas por evaporación no deben ser excesivas.
• El diseño del tanque debe ser tal que las operaciones
laborales durante el funcionamiento, recolección, limpieza
y mantenimiento sean mínimas.
• El tanque debe ser versátil para la aplicación de diversas
modalidades de procesos.
• Las superficies internas del tanque deben ser lisas,
utilizando, donde sea posible, soldaduras.
• La geometría del fermentador debe ser similar a otros
tanques más pequeños o mayores de la planta o a los de
la planta piloto para poder reproducir procesos a diferentes
escalas.
• Deben emplearse los materiales más baratos que
proporcionen resultados satisfactorios.
• Debe existir un servicio adecuado de repuestos para el
fermentador
 RESUMEN
• Mantener las células uniformemente distribuidas en
todo el volumen de cultivo a fin de prevenir la
sedimentación o la flotación.
• Mantener constante y homogénea la temperatura.
• Minimizar los gradientes de concentración de
nutrientes.
• Suministrar oxígeno a una velocidad tal que
satisfaga el consumo.
• El diseño debe ser tal que permita mantener el
cultivo puro; una vez que todo el sistema ha sido
esterilizado y posteriormente sembrado con el
microorganismo deseado.
FACTORES
 Parámetros
Físicos Químicos Biológicos
Temperatura pH Concentración de
biomasa
Presión O2 disuelto Concentración de enzimas
Peso del reactor CO2 disuelto Composición de la
biomasa
Nivel de líquido Potencial redox Viabilidad
Velocidad del agitador Composición del gas de Morfología
salida
Potencia consumida Conductividad
Caudal de gas Composición del caldo
Caudal medio
Viscosidad del cultivo
Contenido en gas
 Oxígeno
• Uno de los factores más críticos en la
operación de fermentación a gran escala
es el suministro de un intercambio de
gases adecuado.
• El oxígeno es el sustrato gaseoso más
importante para el metabolismo
microbiano y el CO2 es el producto
metabólico más importante.
• El oxígeno es un gas de escasa
solubilidad ya que una solución saturada
de oxígeno contiene aproximadamente
9 mg/L de este gas en agua.
• Debido a la influencia de los ingredientes
del cultivo, el contenido máximo de
oxígeno realmente es más bajo de lo que
debería ser en agua pura.
• Por lo tanto, el suministro se logra
pulverizando aire en el fermentador
durante el proceso.
 O2 disuelto
Una vez disuelto el O2 éste tiene que transferirse
desde la burbuja de gas a cada célula individual.
Para ello deben ser superadas varias resistencias
parcialmente independientes:
1. La resistencia dentro de la película de gas a la
interfase.
2. La penetración de la interfase entre la burbuja
de gas y el líquido.
3. Transferencia desde la interfase al líquido.
4. Movimientos dentro de la solución de nutrientes.
5. Transferencia a la superficie de la célula.
• La Ley de Henry describe la solubilidad
del oxígeno en soluciones de nutrientes
en relación a la presión parcial del
oxígeno en la fase gaseosa:
C =Po/H
Donde:
• C = concentración de O2 de la solución de
nutrientes a cierta saturación
• Po = presión parcial del gas en la fase
gaseosa
• H = constante de Henry que es específica
para cada tipo de gas
 Temperatura
• La temperatura es otro de los parámetros
esenciales para el éxito de una
fermentación.
• Los microorganismos que crecen a una
temperatura inferior a la óptima tienen
retardado su crecimiento y por lo tanto
reducida la producción celular, es decir su
productividad
• Por otro lado, si la temperatura es
demasiado alta, pero no letal, se puede
inducir una respuesta de estrés al choque
térmico con la consiguiente producción de
proteasas celulares que ocasionan una
disminución en el rendimiento de los
productos proteicos.
• A fin de obtener rendimientos óptimos, las
fermentaciones deben ser llevadas a cabo
en un margen estrecho de temperatura y a
ser posible constante.
• La velocidad de producción de calor
debida a la agitación y a la actividad
metabólica de los microorganismos no se
ve compensada por las pérdidas de calor
que resultan de la evaporación, por lo que
se debe recurrir a sistemas de
refrigeración.
• Dentro de éstos, los más utilizados en las
fermentaciones industriales son las
camisas de agua.
• La relación temperatura-velocidad de
crecimiento esta dada por la ecuación de
Arrhenius:
𝑒 −𝐸𝑎 /𝑅𝑇
µ=𝐴
Donde:
• µ = velocidad de crecimiento
• A = constante de Arrhenius
• Ea = energía de Activación (kcal/mol)
• R = constante de los gases
• T = Temperatura absoluta
 Energía de activación
Es la energía mínima que necesita
un sistema antes de poder iniciar un
determinado proceso. La energía de activación
suele utilizarse para denominar la energía
mínima necesaria para que se produzca
una reacción química dada.
Para que ocurra una reacción entre dos
moléculas, éstas deben colisionar en la
orientación correcta y poseer una cantidad de
energía mínima. de sus enlaces.
• A medida que las moléculas se
aproximan, sus nubes de electrones se
repelen. Para superar esto se requiere
energía (energía de activación), que
proviene de la energía térmica del
sistema, es decir la suma de la energía
traslacional, vibracional, y rotacional de
cada molécula. Si la energía es suficiente,
se vence la repulsión y las moléculas se
aproximan lo suficiente para que se
produzca una reordenación de sus
enlaces.
 Bioreactor Design

1. Aerobic bioreactor: Necesita

adecuado mezclamiento y
aireación
2. Anaerobic bioreactor: no
requiere burbujeo o
agitación.
 Configuración

• The cylindrical tank, either stirred or

unstirred, is the most common reactor in
bioprocessing.
• Yet, a vast array of fermenter
configurations is in use in different
bioprocess industries.
Configuración bioreactores
- 1. Estanque agitado
Método de mezcla:
agitación mecánica
Deflectores se usan
generalmente para redicir
vórtices

Aplicaciones: reacciones
de enzimas libres e
inmobilizadas
- Alta fuerza de cizalla
puede dañar las células.
- Requiere alta entrada de
energía.
Bioreactor Configurations
- 2. Columnas de burbujas
Método de mezclado: burbujeo de
gas
•Diseño simple
•Buena transferencia de materia
y energía
•Baja entrada de energía
•Gas-liquid mass transfer
coefficients depend largely on
bubble diameter and gas hold-
up.
-Aplicación: producción de
levadura de panadería, cerveza
y vinagre, y tratamiento de
aguas residuales
 Bioreactor Configurations
- 3. Reactor de tiro de aire

Mixing method: airlift

• Compared to bubble
column reactors, in an
airlift reactors, there
are two liquid steams:
up-flowing and down-
flowing steams. Liquid
circulates in an airlift
reactor as a resutl of
density difference
between riser and
downcomer.
 Bioreactor Configurations
- 4. Packed-bed reactor
Aplicación: Cultivo de células animales y vegetales y
catlizadores inmovilizados (menor cizalla) Packed-bed
reactors are used
with immobilized
or particulate
biocatalysts.

Medium can be
fed either at the
top or bottom and
forms a
continuous liquid
phase.
 Bioreactor Configurations
- 5. Reactor de lecho precolador

The trickle-bed
reactor is another
variation of the
packed bed
reactors.

Liquid is sprayed
onto the top of the
packing and
trickles down
through the bed in
small rivulets.
 Bioreactor Configurations
- 6. Reactor de lecho fluidizado

When the packed beds

are operated in upflow
mode, the bed expands
at high liquid flow rates
due to upward motion
of the particles.
MODOS DE OPERACION
• Es un sistema cerrado.
• Al inicio de la operación se añade la
solución esterilizada de nutrientes y se
inocula con el microorganismo,
permitiendo que se lleve a cabo la
incubación en condiciones óptimas de
fermentación.
• En los procesos comerciales la
fermentación se interrumpe al final de la
fase logarítmica (metabolitos primarios) o
antes de que se inicie la fase de muerte
(metabolitos secundarios).
• El crecimiento de microorganismos en batch
se refiere a que las células se cultivan en un
recipiente con una concentración inicial , sin
que sea alterado por nutrientes adicionales
o el lavado => volumen permanece
constante y solo las condiciones
ambientales del medio (pH, T°, velocidad de
agitación, etc.) son controladas por el
operador.
• El proceso finaliza cuando todo el sustrato
es consumido por la biomasa.
• Esta forma de cultivo es simple y se utiliza a
nivel de laboratorio y de escala industrial.
• Los nutrientes son alimentados al bioreactor
de forma continua o semicontinua, mientras
que no hay efluente en el sistema.
• Según sea el objetivo de la operación, la
adición intermitente del sustrato mejora la
productividad de la fermentación
manteniendo baja la concentración del
sustrato.
• Un proceso de este tipo está restringida por
la capacidad volumétrica del biorreactor.
• Consiste en alimentar nutrientes y retirar
continuamente de un bioreactor.
• Bajo ciertas condiciones el cultivo puede
alcanzar un estado estacionario, donde no
existe variación con el tiempo del volumen
en el reactor.
• De esta manera se puede utilizar el sistema
para producir sustancias biológicas en
condiciones óptimas.
• (Tipo tanque completamente agitado (CSTR)
=> quimiostato y turbidostato) y Tipo tubo
con flujo tapón (PFR))
 Enzimas inmobilizadas
• Existen distintos tipos de reactores que
operan con enzimas inmovilizadas.
• Entre otros, destacan los reactores que
utilizan enzimas inmovilizadas en
partículas porosas con forma esférica.
• En el interior de dichos poros, las enzimas
pueden quedar fijadas por métodos físicos
y químicos, que aquí no se detallan.
Reactores que
emplean enzimas o
células inmovilizadas.
(A) Reactor de lecho
fijo; (B) Reactor de
lecho fijo multietapa;
(C) Reactor de lecho
fluidizado; (D)
Reactor de
biopelícula; (E)
Reactor de
membrana; (F)
Reactor de cuadro;
(G) Reactor de lodos
 Enzimas inmobilizadas
• Los reactores que operan con este tipo de
partículas lo pueden hacer bien en lecho
fijo, lecho fluidizado o suspendidas en el
seno del líquido (tanque agitado o CSTR).
• También existen otro tipo de reactores
que utilizan enzimas incluidas en una
membrana semipermeable.
 Ventajas
• Permite la reutilización de las mismas, a la
vez que aumenta su estabilidad frente a
un abanico más amplio de valores de
temperatura y pH.
• También posibilita su operación en
continuo así como el diseño de reactores
enzimáticos de más fácil manejo y control.
 Desventajas
• El proceso de inmovilización puede bloquear
centros activos de la enzima, haciendo que
la actividad global disminuya.
• La proteína puede ver modificada su
conformación con respecto al estado nativo.
• Coste de la inmovilización, pero este se ve
compensado por la reutilización de la
enzima.