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Manual Del Laboratorio de Quimica Bioinorganica PDF

Este documento presenta información sobre el hierro como nutriente inorgánico y su papel en el cuerpo humano. Describe las propiedades químicas del hierro y los factores que afectan su absorción. El objetivo del laboratorio es observar las propiedades químicas del hierro y cuantificar la concentración de hierro en vegetales mediante valoración con EDTA. El estudiante aprenderá técnicas de preparación de muestras y cuantificación de iones metálicos.

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Marielita Ramos
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Este documento presenta información sobre el hierro como nutriente inorgánico y su papel en el cuerpo humano. Describe las propiedades químicas del hierro y los factores que afectan su absorción. El objetivo del laboratorio es observar las propiedades químicas del hierro y cuantificar la concentración de hierro en vegetales mediante valoración con EDTA. El estudiante aprenderá técnicas de preparación de muestras y cuantificación de iones metálicos.

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Fac. Cs. Qs. Dpto.

De QUÍMICA INORGÁNICA
LABORATORIO DE QUÍMICA BIOINORGÁNICA
Q.F.B

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA


FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

ÁREA ESPECÍFICA DE: QUÍMICA INORGÁNICA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA: LABORATORIO DE QUÍMICA BIOINORGÁNICA

CÓDIGO: QUI 240L

FECHA DE ELABORACIÓN: MARZO 2001

NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO

TIPO DE ASIGNATURA: CIENCIA DISCIPLINARIA

PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIÓN:

M.C. MARÍA ASTORGA CANTÚ


M.C. ISMAEL SOTO LÓPEZ
M.C. JAVIER SOSA RIVADENEYRA
M.C. LEONCIO AVENDAÑO MARTÍNEZ
M.C. LEOPOLDO CASTRO CABALLERO
DR. GEOLAR FETTER

HORAS DE TEORÍA: HORAS PRÁCTICA: 2 CRÉDITOS:

PRE-REQUISITOS: Sin requisitos

RECOMENDACIONES: Química General, Análisis cualitativo y Cuantitativo, Biología,


Bioquímica, Química Orgánica I .

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Fac. Cs. Qs. Dpto. De QUÍMICA INORGÁNICA
LABORATORIO DE QUÍMICA BIOINORGÁNICA
Q.F.B

PRACTICA
METAL COMESTIBLE

INTRODUCCIÓN

El hierro es un biolemento que se haya en los protoplasmas de las células,


en las que se llevan a cabo funciones catalizadoras y de transporte de oxígeno,
gracias a su propiedad de pasar fácilmente del estado de oxidación bivalente a
trivalente y viceversa. Esto le permite concentrar cargas positivas que, al debilitar
los enlaces covalentes, los hace susceptibles de ruptura. En las células hay dos
tipos de compuestos de hierro: por un lado los hemínicos, en los que el hierro está
combinado con una porfirina en cuya molécula hay cuatro núcleos pirrólicos y un
átomo del metal (como la hemoglobina); por otro lado, los no hemínicos,
compuestos muy variados y con diversas funciones, a menudo sólo característicos
de ciertos grupos de organismos como lo son los "siderocromos", factores de
crecimiento de las bacterias y en algunos hongos; "siderofilina", proteína vehículo
del hierro en el plasma de animales; enzimas (ferrodoxinas), acenitasa,
oxigenasas de los fenoles; formas de reservas (ferritinas, hemosiderinas), etc.

El hierro es un nutrimento inorgánicos que se encuentra indistintamente en


alimentos de origen vegetal y animal, como son: las vísceras, las carnes, las
leguminosas, los cereales, el huevo, los mariscos y las frutas secas. Debido a que
el organismo carece de mecanismos eficientes de excreción, tiene una capacidad
limitada para absorber el hierro proveniente de los alimentos. Normalmente un
adulto sano absorbe entre el 5 y el 10% del hierro que ingiere mientras que las
personas con deficiencia, las mujeres embarazadas y los niños llegan a absorber
alrededor de un 25% o más.

El hombre y los animales superiores ingieren el hierro de los alimentos, en los


que se haya en estado férrico que es poco soluble. Al llegar al estómago, el ácido
clorhídrico lo reduce a ferroso, haciéndolo apto para ser absorbido, más adelante,
en el intestino delgado, en cuya mucosa se forma la ferrina (como un depósito
intestinal), en cuya virtud el ión ferroso se va liberando a la circulación. En la
sangre se oxida a férrico y se combina con una β-globulina (partícula esférica
cuyas lipoproteínas actúan como vehículos de productos no solubles), lo que da
lugar a la transferrina. Ésta en los órganos de depósito (hígado, bazo, médula de
los huesos) se acumula en forma de hemosiderina o es utilizada directamente para
la formación de la hemoglobina.

En el organismo de un hombre adulto hay de tres a cinco gramos de hierro, más


de la mitad se halla en la hemoglobina y el resto en la mioglobina y en algunas
enzimas celulares. El hierro contenido en la hemoglobina y mioglobina, conocido
como hierro hémico, esta presente exclusivamente en las carnes, el hígado y la
moronga, se caracteriza por absorberse en una proporción más o menos
constante de cerca del 10%, sin que existan factores que ayuden o impidan que

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esto suceda. Ésta forma de hierro se encuentra englobada o circundada por un
grupo prostético llamado Hemo (de ahí "hemínico") que protege al hierro de los
factores que intervienen con su absorción. El hierro que proviene de las demás
fuentes (cereales, leguminosas, huevo, etc.) e incluso sales de hierro
administradas con el propósito de corregir un problema de deficiencia, sí está
sujeto al control de los factores que facilitan o impiden que se absorba en mayor o
en menor proporción.

Existen diversos factores que pueden alterar la absorción del hierro por el
intestino; algunos de ellos ayudan a que se absorba eficientemente, mientras que
otros impiden que se absorba en cantidad suficiente. Entre los factores que
ayudan a que se absorba eficientemente se encuentran el estado de oxidación del
hierro (la forma reducida -ión ferroso- se absorbe mejor que la forma oxidada -ión
férrico-), la acidez, la presencia de vitamina C, la presencia de algunos
monosacáridos o de algunos aminoácidos, la ausencia de enzimas pancreáticas,
la deficiencia de hierro y, estados fisiológicos como el embarazo y el crecimiento;
entre los factores que interfieren se pueden mencionar: el hierro en forma férrica,
el consumo de antiácidos, la presencia de fitatos, fosfatos, oxalatos y taninos,
geofagía o "pica" (que es el consumo de tierra, gis, cal, etc.), los carbonatos, el
consumo excesivo de fibra, la mala absorción en general, el vómito, la diarrea y la
esteatorrea (excreción anormalmente alta de grasas en las heces).

La falta de hierro en el organismo repercute en la hematopoyesis (del griego


poieesis, "hacer", "producir", "crear"), que desciende, lo cual es causa de una
anemia ferropénica (del griego penía, "carencia"), o siderepenia, insuficiencia de
hierro. Por el contario, una excesiva acumulación de ese metal en los órganos da
lugar a la hemocromatosis, afección no muy frecuente, que tiene su manifestación
clásica en la triada: cirrosis hepática, diabetes y una característica pigmentación
cutánea causada por alteración de los compuestos ferruginosos de la
hemoglobina.

OBJETIVO

El alumno observará las propiedades químicas del hierro y


cuantificará la concentración de hierro en algunos vegetales.

OBJETIVOS PARTICULARES
El alumno aprenderá a preparar muestras para análisis.
El alumno aprenderá a cuantificar iones metalicos.

MATERIALES

Cápsula de porcelana Mechero, tripie


Vaso de precipitado Bureta de 25 ml.
Matraz erlemeyer Matraz volumétrico de 50 ml.
Tres tubos de ensayo 10 g. De vegetal seco (frijoles, acelgas,
espinacas,etc)

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REACTIVOS
EDTA 0.01 M Acido sulfosalicilico en solución
Ácido nítrico Solución de ácido salicílico
Solución de ácido sulfúrico al 10% Solución de yoduro de potasio
Soluciónes de cloruro férrico y ferroso Solución de permanganato de potasio

DESARROLLO EXPERIMENTAL

PARTE A. Química del hierro


1.- Poder oxidante: A un ml de solución de cloruro férrico añadir tres gotas de
solución de ácido sulfúrico y tres gotas de solución de yoduro de potasio. Observe
lo que ocurre.
2.- A un ml de solución de sulfato ferroso añadir tres gotas de permanganato
de potasio y tres gotas de ácido sulfúrico. Observe lo que ocurre.
3.- Formación de compuestos de coordinación: Coloque cinco gotas de solución
de cloruro férrico y tres ml de agua en dos tubos de ensaye, al primer tubo añada
unas gotas de ácido salicílico, al segundo tubo añada unas gotas de ácido
sulfosalicílico. Observe lo que ocurre.

PARTE B. Valoración del hierro con EDTA.


1.- Calcinar 10 gramos de vegetal previamente secado y deshidratado
2.- Disolver con un ml de ácido nítrico, calentar ligeramente, en caso de que se
evapore añadir un poco mas de ácido y continuar calentando hasta obtener una
disolución completa. Evaporar casi a sequedad.
3.- Añadir un poco de agua destilada, vaciar a un matraz aforado y aforar con
agua destilada.
4.- Tomar una alícuota de 10 ml , colocar en un matraz erlemeyer y añadir 10 ml
mas agua destilada, y unas gotas del indicador.
5.- Valorar con EDTA 0.01 M hasta vire del indicador
6.- En caso necesario repita la valoración.
7.- Calcule la cantidad de hierro presente en su solución sabiendo que un ml. de
EDTA 0.01 M equivale a 0.558 mg de hierro.

CUESTIONARIO

*Investigue el contenido de hierro en al menos cinco de los alimentos que usted


consume.
*¿Qué cantidad de hierro es requerido para una mujer embarazada?
*¿Qué alimentos contienen mayor cantidad de hierro por gramo?
*¿Cuál es el estado de oxidación que debe presentar el hierro para ser absorbido
por el hombre?
¿Cómo explica lo ocurrido en los experimento de la parte A?
¿Qué cantidad de hierro en % contiene el vegetal que analizó?
*Mencione algunas enfermedades más comunes causadas por la deficiencia de
hierro en el organismo.
*Mencione algunas enfermedades causadas por una acumulación excesiva de
hierro en el organismo.

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Nombre del alumno:

CALIFICACIÓN: Número Letra

BIBLIOGRAFÍA

1. Coen, A. El hierro y la vida. Cuadernos de Nutrición. Vol. 16. No. 3, pág. 6-7.
Mayo-Junio (1993).
2. Kaufer, H. Martha. Cómo sacarle jugo al hierro. Consejos para mejorar la
absorción de hierro en la dieta. Cuadernos de Nutrición. Vol. 16.
No. 3. pág. 45- 47. Mayo-Junio
(1993).

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA.

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PRACTICA
IDENTIFICACIÓN DE LOS BIOELEMENTOS

INTRODUCCIÓN

El análisis químico de la matería viva revela que los seres vivos están formados
por una serie de elementos y compuestos químicos. Los elementos químicos que
forman parte de la matería viva se denominan bioelementos.

La mayoría de los Bioelementos se encuentran distribuidos muy ampliamente


entre todo tipo de alimentos, de tal modo que cualquier dieta que no sea aberrante
incluye una cantidad suficiente de la mayoría de ellos. Los únicos elementos de los
que pueden producirse carencias son el calcio, el hierro, el yodo y esto solamente
basadas en determinados alimentos que no los contienen o que los contienen en
una forma no asimilable por el organismo.

En cualquier ser vivo se pueden encontrar alrededor de setenta elementos


químicos, pero no todos son indispensables ni comunes a todos los seres. Los
bioelementos se pueden clasificar como primarios, secundarios y oligoelementos.
a) Bioelementos primarios: que aparecen en una proporción media del 96% en
la matería viva, y son carbono, oxígeno, higrógeno, nitrógeno, fósforo y azufre. b)
Bioelementos secundarios: aparecen en una proporción próxima al 3.3% y son
calcio, sodio, potasio, magnesio, cloro, y c) Oligoelementos: micro constituyentes,
que aparecen en la materia viva en proporción inferior al 0.1% siendo esenciales
para la vida: hierro manganeso, cobre, zinc, flúor, yodo, boro, silicio, vanadio,
cobalto, selenio, molibdeno y estaño.

El catión extracelular principal es el sodio y el catión intracelular es el potasio.


Los seres humanos pueden conservar el sodio, pero obligatoriamente pierden en
la orina cerca de 40 miliequivalentes al día de potasio.

El mineral más abundante en el hombre es el calcio, aunque el calcio se


encuentra sobre todo fuera de la célula, teniendo como función reguladora
importante dentro de las células.

OBJETIVO
Identificación de bioelementos en muestras biológicas.

OBJETIVOS PARTICULARES
1.- El alumno identificará por medio de análisis a la gota algunos de
los elementos químicos más importantes a nivel biológico en muestras
de origen estructural y funcional.

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MATERIALES

10 Tubos de ensayo 1 vaso de precipitado


1 Gradilla 1 capsula de porcelana
1 Mechero 1 papel filtro

REACTIVOS

Oxalato de Potasio
Hidróxido de Amonio
Cobaltinitrito de sodio: acetato de Solución de EDTA al 1.0%
sodio 2.8 g., Agua 10 ml., Ac.
Acètico 1.25 ml., Cobaltinitrito de
sodio 0.5 g., en ese orden)
Tiocianato de potasio o sodio
Cloruro de amonio Cloruro o sulfato de magnesio

DESARROLLO EXPERIMENTAL

PARTE A: PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS


Las muestras biológicas de origen animal o vegetal se preparan para el análisis
químico de acuerdo al tipo de muestra, que puede ser por calcinación o digestión
ácida.

1.- Las muestras de vegetales deben ser calcinadas, para cual coloque
porciónes de muestra en una cápsula de porcelana y calcine con el mechero.
2.- Posteriormente añada un ml de ácido nítrico para disolver las cenizas,
calentando ligeramente, hasta disolución completa. Añada 10 ml deagua destilada
3.- Para la preparación de la muestra de hueso, triture un pedazo de hueso de
pollo coloquelo en un frasco de vidrio, añadale ácido clorhidrico al 10 %,
solamente para cubrir el hueso, caliente ligeramente para acelerar el proceso de
disolución. Deje reposar por varias horas. Finalmente añada 20 ml de gua
destilada.

PARTE B: IDENTIFICACIÓN DE BIOELEMENTOS

1.-Identificación de Ca: A un mililitro de solución problema agregar unas


gotas de oxalato de potasio, si hay calcio presente se formará un precipitado de
color blanco.

2.- Identificación de Mg: a un mililitro de solución problema se agregan unas


gotas de solución concentrada de Hidroxido de amonio o de sodio, hasta que se
obtenga un gel característico. Para poder comprobar la reacción, se agrega una
gota de amarillo de titanio lo cual dará un color rojo.

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3.- Identificación de K: a la solución problema se le agrega algunas gotas del


reactivo de Cobaltinitrito de sodio (soln., de acetato de sodio 56 g., Agua 75 ml.,
Ac. Acètico 25 ml., Cobaltinitrito de sodio 20 g., en ese orden) y una gota de sal de
EDTA al 10% un precipitado amarillo característico indica prueba positiva.

4.- Identificación de Na: La identificación de sodio puede realizarse por


coloracióna la llama con una asa bacteriológica, el cual da una coloración amarillo
intenso.

5.- Identificación de Fe: a un ml., de soln. Problema añadir unas gotas de


Tiocianato de potasio. La coloración roja es característica de la presencia de
hierro.

7.- Identificación de Fosfatos: A un ml de solución problema agregar unas


gotas de cloruro de amonio y cloruro de Mg, en presencia de fosfatos se formará
un precipitado blanco.

REPORTE.
1.- Que es un bioelemento?
2.- ¿qué es un elemento traza?
3.- Describa las funciones del calcio en sistemas vivos
4.- ¿En que tipo de compuestos se encuentra el fósforo?
5.- ¿Qué elementos iodentifico en sus muestras?
6.- ¿Qué reacciones ocurren en la identificación de cada uno de los elemntos
estudiados?

Nombre del alumno:

CALIFICACIÓN: Número Letra

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PRACTICA
PIGMENTOS DE LA VIDA

INTRODUCCIÓN

Los iones metálicos en biología usualmente están unidos a ligantes mucho


más grandes y complicados que los relativamente usuales encontrados en la
química de coordinación. De hecho tales ligantes complicados son usados en
biología para controlar la función y reactividad de un metal en particular, por
ejemplo, el hierro en las hemoproteínas. Así, el ligante puede controlar el número
de coordinación, la detallada geometría de coordinación, el estado de espín, el
potencial redox y la velocidad de transferencia de electrones de un ión metálico de
transición al que esta unido. Puede proveer un medio ambiente hidrofóbico
alrededor del metal central que controlará varias interacciones electrostáticas y la
reactividad de el grupo.

Los iones metálicos pueden estar enlazados a los ligantes mediante diferentes
formas: proteínas, vía cadenas laterales de aminoácidos; ácidos nucléicos y
nucleótidos; varios ligantes macrocíclicos tetrapirrólicos; metales que pueden
ocurrir como dímeros o clausters teniendo sulfuro (S −2 ) u oxo (O −2) como
ligantes enlazantes. En las dos últimas clases, el número de coordinación de el
metal puede ser alcanzada por grupos de ligantes provenientes de proteínas.

Ciertos resíduos de aminoácidos en las proteínas son particularmente


importantes, notablemente cisteína e histidina los cuales proveen grupos tiol (SH)
e imidazol respectivamente.

Algunos ligantes macrocíclicos como la porfirina y sistemas de anillos corrina


son bien conocidos, de los de más reciente interes son las Hidroporfirinas. El
Sirohemo (en isobacterioclorina) es el grupo prostético de la sulfito y nitrito
reductasas, las cuales catalizan la reducción de seis electrones de sulfito y nitrito a
H2S y NH3, respectivamente. La forma desmetalada del sirohemo, sirohidroclorina,
es un intermediario en la biosíntesis de la vitamina B12, así une los macrociclos
porfirina y corrina. El factor 430 es una tetrahidroporfirina, y su complejo con niquel
es el grupo prostético de metilcoenzima M reductasa. El factor 430 muestra
similitud estructural tanto con el sirohemo como con la corrina.

Debido a que muchos macrociclos están unidos a iones metálicos, éstos les
proporcionan color a sus complejos y hacen que la naturaleza se vista de colores.
De los siete pigmentos respiratorios producidos en la naturaleza, cuatro de ellos
contienen un grupo Hemo: hemoglobina, mioglobina, erotrocruorina y
clorocruorina, y transportan una molécula de oxígeno por cada átomo metálico.
Dentro de éstos podemos citar a la clorofila, que imparte el color verde a las
plantas, la hemoglobina que da el color rojo a la sangre. Los otros tres:
hemocianina, hemoritrina y hemovanadina, no poseen el grupo hierro-hemo. Esta
molécula al igual que la hemocianina, toma una molécula de oxígeno por cada dos
átomos metálicos. Otro caso es el de la hemovanadina, en donde se ha

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especulado sobre la posibilidad de un comportamiento similar a la hemocianina,
pero hasta la fecha no se ha podido establecer este comportamiento. por ejemplo,
la hemoritrina, ha sido encontrado en algunos animales marinos primitivos. Éstos
ligantes macrociclos son esencialmente macrociclos tetrapirrólicos, que actúan
como quelantes tetradentados. Especialmente importantes y ampliamente
difundidos en la naturaleza son las Porfirinas. De ellas se pueden derivar otros
sistemas similares como son las clorina, macrociclo presente en las clorofilas; la
corrina, el ligante de la vitamina B12.

El ojo humano responde sólo a fotones comprendidos dentro de una gama


limitada de energías (o longitudes de onda), casi siempre de 3800 a 7500 Å (Å=10-
8
cm). Los fotones con longitudes de onda cercanas al extremo bajo (de energía
más alta) se perciben con una coloración azul o violeta, y las que se acercan a
7000 Å (de menor energía), de color rojo. La luz que se compone de cantidades
casi iguales de fotones de todas las longitudes de onda comprendidas en la gama
visible es de color blanco. Cuando la luz blanca atraviesa una substancia que
absorbe fotones de ciertas longitudes de onda (energías) y no absorbe otros de
energías distintas, la luz que emerge de ella tiene más fotones de los que no han
sido absorbidos que aquellos cuyas energías se pueden retener y, entonces, la luz
aparece con una coloración.

La siguiente tabla muestra la relación entre los colores de la luz absorbida y no


absorbida.
Si se absorbe luz de este La longitud de onda de la Y la luz transmitida será:
color: luz absorbida es:
Violeta 4000 Å Amarilla verdosa
Azul 4500 Å Anaranjada
Verde 5100 Å Morada
Amarillo 5500 Å Azul violeta
Anaranjado 5900 Å Azul
Rojo 6400 Å Azul verde

OBJETIVO

*El alumno obtendrá los espectros de absorción ultravioleta visible de tres


sustancias conocidas como los "pigmentos de la vida"

*Determinará las longitudes de onda características de cada sustancia.

*Con ayuda del espectro de absorción, el alumno explicará el color de los


complejos metalicos de los macrociclos..

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MATERIALES

3 vasos de precipitados de 50 ml 3 agitadores de vidrio

REACTIVOS

Hemina comercial Clorofilina


1 ampolleta de vitamina B12 Agua destilada
Metanol

DESARROLLO EXPERIMENTAL

*Disolver un poco de hemina en 5 ml de metanol y obtener su espectro UV-


Vis.
*Disolver un poco de clorofilina en 5ml en agua y obtener su espectro UV-
Vis.
*Agregar a 5ml de agua aproximadamente 1ml de vitamina B12 y obtener su
espectro UV-Vis.

CUESTIONARIO

*¿Calcule de los espectros obtenidos lo siguiente?


Sustancia Soret Longitud de onda Color del complejo
Hemina
Clorofilina
Vitamina B12

*¿Qué es un compuesto o complejo de coordinación?


*¿Qué es el número de coordinación de un ión metálico?
*¿Qué se entiende por esfera de coordinación?
*¿Qué es el estado de espín de un ión metálico?
*¿Qué se entiende por un quelante?
*¿De qué depende el que pueda unirse un ligante a un ión metálico mediante uno
o más enlaces?

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*¿Cual es la estructura de la porfirina y la corrina (dibújelas o péguelas)?
*Escriba o pegue la estructura de las tres sustancias que se utilizaron en la
práctica (hemina, clorofila y vitamina B12).

BIBLIOGRAFÍA

1. The chlorophylls. J. Chem. Editorial Libros de Bioquímica y Bioinorgánica.

2. Martin N. Hughes. Coordination compounds in biology. Academic Press.


Cap. 26. (1986.)

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

Nombre del alumno:

CALIFICACIÓN: Número Letra

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PRACTICA
HEMOPROTEÍNAS: MIOGLOBINA

INTRODUCCIÓN

La mioglobina de los mamíferos (Mb) es una proteína monomérica enlazada


al oxígeno, que se encuentra en el músculo cardiáco y esquelético. Su principal
función es la de almacenar oxígeno hasta que éste sea requerido por el tejido. La
proteína tiene un solo grupo hemo (Fe-protoporfirina IX) que esta unido a una
proteína a través del resíduo de histidina 93 (His-93).

El hierro de la mioglobina puede presentar dos estados de oxidación:

Meta-mioglobina: Fe3+-H2O-Mb (Meta-Mb) (fig. 1a)

Oxi-mioglobina: Fe2+-O2-Mb (Oxi-Mb) (fig. 1b)

Proteína
Proteína

C H2 N
CH2 N
N
N H
H H O
O O
3+
Fe 2+
Fe
N N

N N
C H2 CH2

Proteína Proteína
(a) (b)
Figura 1. Representación del grupo hemo para los dos estados de
oxidación de la mioglobina: (a) Meta-mioglobina y (b) Oxi-Mioglobina

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En los sistemas vivos, la oxi-Mb y la desoxi-Mb, son las formas más
comunes. Sin embargo, en sistemas no vivos, la Oxi-Mb es convertida lentamente
a Meta-Mb, mientras el hemo unido a la molécula de oxígeno es liberado,
entonces en el sitio activo de la molécula el agua es enlazada.

La carne contiene altos niveles de Oxy-Mb y Meta-Mb, los cuales tienen


propiedades espectrales únicas (ver Tabla 1) que pueden ser usadas para
identificar y caracterizar la identidad de una muestra con respecto a cambios de
estados de oxidación y estados funcionales.

Tabla 1. Bandas de absorción para los complejos de Mioglobina


Muestra Región Visible b Región de Soret b
Meta-Mb 635 504 409 (179)
Oxi-Mb 580 542 417(128)
348
b
Longitud de onda, en nm; el coeficiente de extinción esta entre paréntisis en
unidades de mM-1 cm-1

Uno puede usar agentes químicos para duplicar las reacciones de oxidación
y reducción de los sistemas vivos. El estado funcionalmente importante, la Oxi-Mb,
puede ser convertida a la forma inactiva, Meta-Mb por oxidación en una reacción
donde un electrón del Fe2+ es donado al agente oxidante (ecuación 1).
Alternativamente, la Meta-Mb puede ser convertida a Oxy-Mb por una reacción de
reducción en la cual el hierro del hemo gana un electrón del agente reductor
(ecuación 2).

-1e-
2+
Fe -O2-Mb + [K3 Fe (CN)6] ⇒ Fe3+-H2O-Mb (ec. 1)
agente oxidante

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+1e-
Fe3+- H2O -Mb + [Na2 S2 O4] ⇒ Fe2+-H2O-Mb (ec. 2)
agente reductor

OBJETIVO

El alumno determinará el estado de oxidación de la mioglobina


mediante espectroscopía ultravioleta-visible

MATERIALES

2 vaso de precipitados de 50ml Jeringa de 3ml


6 tubos de ensaye de 10ml Agitador de vidrio
Papel filtro Pipetas Pasteur
Pipeta graduada de 1ml

REACTIVOS

Carne molida de res sin grasa 3 gramos Ditionito de sodio


Solución buffer de fosfato de sodio 100mM, pH Peróxido de hidrógeno
7.0 12.3mM
Ferricianuro de potasio (dos cristalitos) Guaiacol 20mM

DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. Extracción de mioglobina.

Colocar la carne molida de res en un vaso de precipitados de 50ml.


Agregar 6 ml de solución buffer de fosfato. Mezclar la muestra lentamente con un
agitador de vidrio por aproximadamente1min, para romper las células y liberar a
la Mioglobina. El mezclado debe realizarse con mucho cuidado, ya que una
agitación fuerte puede liberar las grasas y los ácidos nucléicos contenidos en la
muestra de carne.
Decantar el sobrenadante en un vaso de precipitados y dejar en reposo de
10 a 20 minutos o hasta que se observe la formación de dos capas. Con cuidado
extraer la solución roja con una pipeta Pasteur y colocarla en un tubo de ensaye
(puede presentarse una capa de grasa en la parte superior que puede ser extraída

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previamente con una pipeta Pasteur). Ésta solución roja es una evidencia visual
clara de que la mayoría del color de la carne proviene de la hemoproteína soluble.
Filtrar la mioglobina extraída con la jeringa y el papel filtro.

2. Oxidación y reducción de la mioglobina.


Tomar una alícuota de 1ml de mioglobina y agregarle 4ml de buffer de fosfato
de sodio 100mM, pH 7.0 (dilución de 1:5). De esta solución colocar en tres
tubos de ensaye previemente etiquetados A, B y C) una alícuota de
0.5ml y agregarle a cada uno 2.5 ml de buffer de fosfato.
A la solución del tubo A, realizarle su espectro de absorción ultravioleta-
visible.
A la solución del tubo B, agregarle dos cristalitos de ferricianuro de potasio y
agitar. Realizar su espectro de absorción UV-Vis
A la solución del tubo C, agregarle dos cristalitos de ditionito de sodio.
Realizar su espectro de absorción UV-Vis.

3. Espectroscopía de absorción electrónica.


Las curvas de absorbancia se obtendrán en un rango de longitudes de onda
de 700 a 300nm y se utilizará como disolvente de referencia el buffer de
fosfato de sodio.

Para la obtención de los espectros se requiere de un espectrofotómetro de


absorción ultravioleta- visible y celdas de cuarzo. Al espectrofotómetro deberá
realizarsele previamente la línea base colocando en ambas celdas solución
buffer de fosfato de sodio.

CUESTIONARIO

*¿En los moluscos, artrópodos, en ciertos escorpiones y arañas como se le


denomina a la molécula encargada de transportar al oxígeno?. Dibuje o pegue su
estructura.

*Dibuje o pegue la estructura de la mioglobina.

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*Investigue cual es la función principal y el ión metálico que contiene en su centro
activo, de al menos otras tres hemoproteínas.

Hemoproteína Ión Metálico Función principal

BIBLIOGRAFÍA

1. Sheri A. Bylkas, Anderson A. Laura. Microburger Biochemistry: Extraction


and spectral characterization of myoglobin from Hamburger. Journal of
Chemical Education. Vol. 74. No. 4. Abril (1997).
2. Martin N. Hughes. Coordination compounds in biology. Academic Press.
Cap. 26. (1986.)

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

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HEMOPROTEÍNAS: HEMOGLOBINA

INTRODUCCIÓN

La hemoglobina (Hb) es el principal componente de la sangre roja y es el


compuesto responsable de transpor al oxígeno desde los pulmones a los tejidos,
así como la de transportar el bióxido de carbono hasta los pulmones.

La hemoglobina es una proteína conjugada de peso molecular de 64,450


daltons. La hemoglobina consta de cuatro grupos HEMO. Cada hemo consiste de
un ión Fe (II) en el centro de una molécula de porfirina y está envuelto por
cadenas de aminoácidos. Las cuatro cadenas de la porción prostética
pertenecientes a la molécula son denominadas GLOBINAS y consisten en dos
cadenas idénticas.
El grupo hemo por sí solo no enlazará al oxígeno, pero la combinación
específica de hemo con la globina permite que los cuatro iones Fe(II) dentro de la
molécula se activen para captar oxígeno.

Debido a que el grupo hemo esta formado por el ligante tetradentado de la


Protoporfirina IX y Fe(II), tiene un número de coordinación de seis, formando con
ligandos un compuesto octaédrico. La quinta posición de coordinación esta
ocupada por un grupo imidazol de una histidina proveniente de la globina de la
molécula. La sexta posición puede ser ocupada por una molécula de oxígeno para
producir la Oxihemoglobina (Hb-O2), por NO para formar la Nitrosilhemoglobina
(Hb-NO), con CO para generar la Carbonilhemoglobina (Hb-CO), con CO2 para
constituir la Carboxihemoglobina (Hb-CO2), con el ión CN- para formar la
Cianohemoglobina (Hb-CN) y con agua para producir la Metahemoglobina (Hb-
H2O), dondel el hierro se encuentra en el estado de oxidación de III.

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La toxicidad del CO, CO2, NO, CN-, se debe a que se une al átomo de hierro del
grupo hemo como la hace la molécula de oxígeno pero con una mayor afinidad,
por ejmplo el CO desplaza a la molécula de oxígeno según la reacción:

Hb-O2 + CO ⇒ Hb-CO + O2

OBJETIVO

El alumno
*formará los complejos de hemoglobina con los gases
presentes en la respiración

*podrá determinar la fuerza de enlace de diferentes ligandos


tóxicos con hemoglobina mediante métodos
espectrofotométricos

MATERIALES

2 pipetas graduadas de 10ml 2 agitadores de vidrio


10 tubos de ensaye de 10 ml vaso de precipitados de 250ml
2 celdas de cuarzo vaso de precipitados de 25ml
papel filtro

REACTIVOS

3 ml de sangre carnero reactivo ferroso tartárico amoniacado


agua destilada nitrito de sodio 0.5M
reactivo ferroso tartárico nitrito de sodio 0.025M
amoniaco ferricianuro de potasio al 10%
gas CO ácido ascórbico 0.5M (pH 4.5)
reactivo ferroso amortiguador de fosfato de potasio pH 7.0
amoniacado

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DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. FORMACIÓN DE DIFERENTES HEMOGLOBINAS

a) Solución A:
Extraer 3ml de sangre venosa. Tomar 2 ml de esta sangre y
agregarlos a 100ml de agua destilada, agitar vigorosamente por
algunos minutos. Filtrar la solución resultante, que es la
Oxigemoglobina. Anotar sus observaciones.

b) Etiquete cinco tubos de ensaye del 1 al 5.


A cada tubo agréguele 5ml de la solución A . El tubo 1 servirá como
testigo.

c) Desoxihemoglobina. Al tubo 2 agreguele 2 gotas del reactivo ferroso


tartárico, 2 gotas de amoniaco y mezcle por inversión. Compare con
el tubo1. Anote sus observaciones.
Posteriormente agite vigorosamente con un agitador de vidrio la
desoxihemoglobina formada hasta regenerar la oxihemoglobina, por
comparación con el testigo.

d) Carbonilhemoglobina. Al tubo 3 pasarle un flujo de gas de CO.


Anotar sus observaciones. Compruebe como en el caso
anterior si el proceso es reversible.

e) Nitrosilhemoglobina. Al tubo 4 agregarle tres gotas de ácido ascóbico


0.5M (pH 4.5) y dos gotas de nitrito de sodio 0.5M. Agitar un poco
y compare con el tubo testigo. Anotar sus observaciones.

f) Metahemoglobina. Al tubo 5 agregar tres gotas de ferricianuro de


potasio al 10%, mezclar con agitador de vidrio y espere a que la
reacción se complete. Anotar sus observaciones al comparar con
el testigo.

g) Desprendimiento de oxígeno al formarse metahemoglobina. Preparar


en el vaso de precipitados una solución concentrada de Hb-O2,
agregando 0.5ml de sangre sin diluir a 10ml de agua destilada y agitar
vigorosamente. En tubo de ensaye coloque 8 ml de esta solución
(no requiere ser filtrada). En otro tubo de ensaye coloque 3 ml de
ferricianuro de potasio.
Mezcle lentamente el ferricianuro con la Hb-O2, sin utilizar agitador
de vidrio ni inversión del tubo, sino inclinando y girando el tubo.
Anote sus observaciones.

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2. CINÉTICA DE METAHEMOGLOBINA.

a) Preparar una solución de Hb-O2 de absorbancia 0.5 a 500nm.,


diluyendo con agua destilada si es necesario.

b) Mezclar 7.5ml de la solución de Hb-O2 0.5 de absorbancia y


agregarle cuidadosamente la misma cantidad de amortiguador de
fosfatos de pH 7.0.

c) Coloque en una celda ____ ml de la solución anterior y al tiempo cero


agregarle 0.3ml de la solución de nitrito de sodio 0.025M
inmediatamente mezcle e inice la toma de lecturas de absorbancia
cada 30 segundos. Use como blanco la Hb-O2 en el
amortiguador de fosfatos. Grafique el tiempo vs la absorbancia.

d) La longitud de onda que se utilizará para la cinética es de ____nm.

3. ESPECTROS DE ABSORCIÓN.

Obtener los espectros de absorción en el rango de 450 a 650nm de la


oxihemoglobina, desoxihemoglobina, y metahemoglobina. Se usará la solución de
Hb-O2 de absorbancia de 0.5 unidades a 500nm preparada en el apartado 2.

a) Oxihemoglobina.
Celda de muestras: 13 ml de Hb-O2 y 2ml de agua destilada.
Celda de referencia: 15 de agua destilada.

b) Desoxihemoglobina.
Celda de muestras: Mezclar 12ml de Hb-O2 , 2.5ml de reactivo
ferroso amoniacado y dejar en reposo durante 10
minutos.
Celda de referencia: 12ml de agua destilada y 2.5ml de reactivo ferroso
tartárico amoniacado.

c) Metahemoglobina.
Celda de muestras: 12ml de Hb-O2 y 2.5ml de ferricianuro de potasio
al 0.2%
Celda de referencia: 12ml de agua destilada y 2.5ml de ferricianuro de
potasio al 0.2%.

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CUESTIONARIO

*¿Cómo se clasifican a las proteínas?

*¿Qué se entiende por una proteína conjugada?


*¿Cómo se define una unidad Dalton?

*Escriba el nombre, fórmula abreviada, estado de oxidación del fierro y el color de


cada una de las hemoglobinas formadas.

NOMBRE FÓRMULA ESTADO DE COLOR


OXIDACIÓN

*¿Qué diferencia existe entre oxidación y oxigenación de la hemoglobina?

*¿Qué diferencia existe entre plasma y suero sanguíneo?

*Pega la gráfica (en excell) de la cinética de metahemoglobina.

*Explica a partir de la gráfica de la cinética de metahemoglobina a que se debe


que la absorbancia permanezca constante en determinado intervalo de tiempo.

*Pega los espectros de absorción obtenidos indicando las longitudes de onda de


máxima absorción:
Oxihemoglobina

Desoxihemoglobina

Metahemoglobina
*Investigue y describa brevemente el método para determinar la cantidad de Hb
presente en sangre.

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BIBLIOGRAFÍA

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METALES Y PROTEÍNAS

INTRODUCCIÓN

La ovotransferrina o conalbúmina es una proteína que se encuentra presente


en el huevo. La transferrina es una proteína muy parecida a la conalbúmina, pero
ésta se encuentra en el organismo humano. En ambos la función de ésta proteína
es la del transporte de hierro.

El hombre y los organismos superiores ingieren éste metal en los alimentos,


en éstos se haya en estado férrico poco soluble, pero al llegar al estómago se
reduce para poder ser absorbido y en la sangre se vuelve a oxidar y se combina
con una beta-globulina para dar lugar a la transferrina. El hierro se acumula en
forma de Hemosiderina y de ahí se utiliza directamente para la formación de
hemoglobina.

La falta de éste metal en el organismo se manifiesta rápidamente en un


estado anémico, pero su acumulación excesiva puede provocar transtornos muy
graves.

OBJETIVO

Observar la interacción de proteínas con iones metalicos.


Al terminar la practica el alumno habra observado la interacción de la
conalbumina con el hierro tres.
Con ayuda del maestro interpretara el espectro U.V visible.

MATERIALES

2 Vasos de precipitados de XXml Agitador de vidrio

REACTIVOS

Agua destilada Bicarbonato de sodio Sulfato ferroso


Clara de huevo Cloruro férrico
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DESARROLLO EXPERIMENTAL

DESARROLLO EXPERIMENTAL

PARTE 1. OBTENCIÓN DEL COMPUESTO DE Fe-CONALBUMINA

1.- Separe una clara de huevo y colóquela en un vaso de precipitado de 250 ml


2.- Añada 100 ml de agua y agite hasta obtener una mezcla homogénea.
3.- Añadir 0.5 g de bicarbonato de sodio y agitar. Dividir la solución en dos partes
iguales.
4.- A una parte añadir 2 ml de solución de cloruro férrico, agitar y dejar reposar,
observar.
5.- A la segunda fracción añadir 0.5 g de sulfato ferroso, agitar y observar lo que
ocurre. Dejar reposar y separar por decantación.
6.- Prepara una solución testigo para comparar sus resultados.
a) A 20 ml de una solución de bicarbonato de sodio añada 2 ml. de
solución de cloruro férrico.
b) A otros 20 ml de solución de bicarbonato de sodio añada una pequeña
cantidad de sulfato ferroso.
c) Observe y compare sus resultados.

PARTE 2. ESTUDIO ESPECTROSCÓPICO

1.- A la solución de color naranja obtenidas en los puntos 4 y 5 de la primera


parte, obtenga el espectro UV-Vis y compare.
2.- En caso necesario obtenga los espectros de las soluciones testigo.

CUESTIONARIO

*¿Qué moléculas captan, transportan y acumulan al hierro?

*Dibuje o pegue la estructura de la conalbúmina.

BIBLIOGRAFÍA

1. Martin N. Hughes. Coordination compounds in biology. Academic Press.


Cap. 26. (1986.)

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PRACTICA

CLOROFILAS

INTRODUCCIÓN

Hay un número de biomoléculas en las cuales el ión metálico se encuentra


encerrado dentro de una cavidad correspondiente a una estructura molecular.
Algunos ejemplos de estas, son enzimas como la anhidrasa carbónica, antibióticos
como la valinomicina o monensina, las cuales actúan en el transporte activo de
cationes (Na+, K+) a través de la membrana celular; también compuestos que
transportan oxígeno como la hemoglobina; o bien, la clorofila, encargada de
atrapar la energía solar para nosotros y también responsable del color verde las
plantas.

Las clorofilas son un grupo muy importante de biomoléculas metálicas


localizadas en los organelos intracelulares denominados cloroplastos.

La clorofila tiene un magnesio tetrapirrólico de la clase de la clorina que tiene


un anillo alicíclico único. La figura 1 muestra la estructura de la clorofila, junto con
partes de la estructura de la clorofila b y bacterioclorofila a La quinta y sexta
posición de coordinación pueden ser ocupadas por el solvente agua, y también
ofrecen la posibilidad de la formación de dímeros o agregados de mayor tamaño.
La estructura, función y organización de la clorofila ha sido bien estudiada.
En un tiempo se pensó que la clorofila estaba presente en la forma a o b, la b
teniendo presente el grupo formilo en la posición 3 más que el grupo metilo. Sin
embargo, clorofilas del tipo c, d, c1 y c2 han sido conocidas. Los dos últimos
ejemplos involucran porfirinas más que clorinas.

OBJETIVO
El alumno:
¾Aislará y caracterizará mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una
clorofila
¾Determinará mediante espectroscopía ultravioleta-visible la influencia de la
sustitución del ión magnesio por otros iones metálicos en el anillo de la clorofila

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MATERIALES

mortero lámpara de luz tira de papel filtro


ultravioleta
vaso de precipitados de 4 tubos de ensaye de tira de papel alumninio
50ml 10ml
vaso de precipitados de Pipeta Pasteur regla y lápiz
250ml
espátula

REACTIVOS
acetona al éter etílico Sol´n concentrada de una sal ácido acético al
80% de Zinc 10%
gis blanco HCl 0.1N Sol´n concentrada de una sal 1 hoja de acelga u
semicompa de Cobre (II) hoja verde
cto
mezcla de elución: éter de petróleo:acetona:n-propanol (90:10:0.5)

DESARROLLO EXPERIMENTAL.

1. EXTRACCIÓN LAS CLOROFILAS.

Despedace finamente una hoja de acelga o cualquier otra hoja verde


tierna.
Macháquela en un mortero con un poco de acetona al 80%. Decante la
mezcla. El extracto es una mezcla impura de clorofila a y b.
Coloque el extracto obtenido ante una lámpara de luz UV. Anote sus
observaciones.

2. SEPARACIÓN DE LAS CLOROFILAS.

Marque en el gis una escala de 0.5 en 0.5cm comenzando a


aproximadamente unos 6mm del extremo grueso.
Con una pipeta Pasteur coloque una pequeña franja del extracto de
clorofila justo sobre la marca inicial del gis y déjelo secar.

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Prepare una cámara de elución colocándo en el vaso de precipitados de
10 a 15 ml de la mezcla de elución, coloque la tira de papel filtro
dentro del vaso y sobre las paredes.
Introduzca con cuidado el gis con la muestra seca a la cámara de
elución.
Tape la cámara de elución con el papel aluminio el cual tendrá una
perforación para detener al gis.
Cada tres minutos anote la distancia recorrida por cada uno de los
componentes de la muestra. Registre el gráfico correspondiente
tiempo contra distancia de desplazamiento.
Pare el desarrollo de la cromatografía cuando el eluente se encuentre a
0.5cm del límite superior del gis.

3. INTERCAMBIO DEL IÓN MAGNESIO POR LOS IONES ZINC Y COBRE


EN EL ANILLO DE FEOTININA.

Reemplazo por etapas:

A 2 ml de extracto crudo de clorofila añada 0.5ml de HCl 0.1N. Caliente


un poco para acelerar la reacción. Esta solución irradiela con luz UV.
Observe y describa los cambios.
Obtenga el espectro de absorción ultravioleta visible de la solución
obtenida en el rango de 700 a 250nm.
Divida la solución anterior que contiene a la feofitina divídala en dos
partes.
A una de las partes agréguele 1ml de solución concentrada de de una
sal de zinc y a la otra parte 1 ml de una solución concentrada de cobre
(II). Cada una de ellas irrádiela con luz UV. Observe y describa los
cambios.
Obtenga los espectros de absorción UV-Vis para las dos soluciones en
el rango de 700 a 250nm.

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Reemplazo directo:

Tomar una hoja de acelga u otra hoja verde y colocarla en tubo de


ensaye y añadir ácido acético al 10% y 1ml de una solución
concentrada de acetato de zinc o de cobre.
Comparar con las soluciones respectivas del apartado anterior.

Si dispone de tiempo en el laboratorio realice la separación mediante el


método cromatográfico descrito anteriormente.

CUESTIONARIO

¿Cuál es el papel del magnesio en la fotosíntesis?

*Describa el ciclo correspondiente a la fotosíntesis.

*¿Qué otros metales están asociados al proceso de la fotosíntesis?

*Explique por qué es posible la sustición del ión magnesio por otros iones
metálicos usados.

*Qué problemas puede presentar una planta si el ión magnesio es reemplazado


por otros iones metáilcos.

*Puede ser reemplazado el magnesio por iones metálicos pesados ¿Sí por qué y
no por qué?. Cite ejemplos.

*Proponga la estructura de como se encuentran unidos los iones metálicos que


sustituyeron al magnesio.

*Explique por qué es posible realizar la separación de un gis de los componentes


de la mezcla obtenida de la hoja verde.
*Escribir la traducción de la hoja en inglés de esta práctica

BIBLIOGRAFÍA

1. The chlorophylls J. Chem.

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Libros de bioquímica y bioinorgánica
Separaciones cromatográficas. Pedro J. Nathan ANUIES.

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PRACTICA

COMPLEJOS METÁLICOS CON EL EDULCORANTE ASPARTAME

INTRODUCCIÓN

En los ultimos 50 años se ha notado una marcada tendencia hacia el


incremento en el consumo de azúcares en la dieta de un gran número de países.
Esta tendencia ha sido asociada a problemas de salud principalmente como la
obesidad, enfermedades cardiovasculares y caries dental.

Los edulcorantes de bajo contenido energético están siendo empleados en los


países desarrollados y algunos comienzan a ser utilizados a nivel mundial para
sustituir en parte el azúcar de caña o de remolacha de la dieta humana.

Sin lugar a dudas el edulcorante más importante que se introdujo al mercado


en la década de los ochentas es el Aspartamo (APM).

En México este edulcorante sintético conocido con el nombre de Canderel, se


utiliza en la preparación de refrescos o bien como sustituto del azúcar de mesa.

Desde el punto de vista químico APM es el éster metílico del dipéptido L-


aspartil-L-fenilalanina. Dicha molécula posee un gran poder edulcorante, sin
embargo, es susceptible a la hidrólisis con la subsecuente pérdida de su poder
edulcorante.

La interacción de iones metálicos con este dipéptido es interesante desde el


punto de vista biológico ya que provee un interesante sistema de estudio para
entender a nivel molecular la interacción de metales esenciales con péptidos y
protéinas. En la figura 1, se muestan los probables sitios de coordinación de esta
molécula: el nitrógeno del grupo amino y el oxígeno del grupo carboxilo del ácido
aspártico, el oxígeno y nitrógeno del enlace peptídico y el oxígeno del grupo
carbonilo del éster.

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El aspartamo es un polvo blanco el cual es ligeramente soluble en agua y etanol
(1g/ml y 0.4g/100ml, respectivamente), y cuyo peso molecular es de 294.3 g/mol.
Las constantes de disociación (pKa) son 3.1 y 7.9 a 25oC, y su punto isoeléctrico
es de 5.2.

La estabilidad del APM es afectada por la temperatura, humedad y pH. Como


el APM es un dipéptido, este no puede existir definidamente en agua, ya que el
enlace del ester metílico es hidrolizado produciendo metanol y el dipéptido L-α-
aspartil-L-fenilalanina (DIP). Posteriormente la hidrólisis del dipéptido de los
componentes aminoácidos L-aspártico y L-fenilalanina, además, es posible
obtener metanol y 3-bencil-2,5-piperacina-diona-6-ácido acético, que es la
dicetopiperacina (DCP) del dipéptido aspartilfenilalanina.

El aspartamo proporciona 4 kilocalorias por gramo, pero únicamente 0.04


gramos de éste (0.1 kcal) son necesarios para reemplazar una cucharadita de
sacarosa (16kcal). APM, es un potenciador de algunos sabores, en particular
sabores de frutas.

OBJETIVO

*Sintetizar los compuestos de coordinación de Cobre (II), Niquel(II) y


Cobalto (II) con el edulcorante Aspartamo.

*Observar la influencia del ión metálico en las propiedades espectroscópicas


del ligante aspartamo.

*Determinar mediante espectroscopía ultravioleta visible las bandas de


absorción características de cada compuesto sintetizado

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MATERIALES

5 vasos de precipitados de 50 ml Parrilla de calentamiento


5 Espátulas Cajas Petri

REACTIVOS

Sulfato de cobre pentahidratado Cloruro de cobre (II) dihidratado


Sulfato de niquel (II) Cloruro de cobalto (II) hexahidratado
Sulfato de cobalto (II) heptadidratado Cloruro de niquel (II)
Canderel 3 sobres Glicilglicina

DESARROLLO EXPERIMENTAL

*Obtención del aspartamo a partir de Canderel.

Vaciar el contenido de un sobre de Canderel en 5ml de agua destilada,


agitar durante 5 minutos con un agitador magnético.
Dejar en reposo por 10minutos.
Filtrar la solución con mucho cuidado con ayuda de una jeringa y como
filtro algodón.
Al sobrenadante realizarle un espectro de absorción Ultravioleta-visible en
el rango de 300a 230nm.
Adicionar HCl 0.5M (dos gotas) hasta obtener un pH de aproximadante
3.0 (medir con papel pH).

*Síntesis de los complejos de coordinación.

Disolver 0.1248g de CuSO4.5H2O ó 0.0852g de CuCl2.2H2O y 0.1248g en


3.0ml de agua destilada y mezclar con 3ml de la solución de
aspartamo. Obtener su espectro UV-Vis.
Incrementar el pH hasta 7.0 con NaOH 0.5M, hasta que se obtener un
precipitado de color azul. Obtener su espectro UV-vis.
Colocar la mezcla en una caja de petri, para evaporar el agua. Observar
después de dos días.

Disolver 0.1315g de NiSO4.6H2O ó 0.1189g de NiCl2. 6H2O en 3ml de agua


y mezclar con 3ml de la solución de aspartamo.
Incrementar el pH hasta 9.9 o hasta obtener un precipitado color verde
claro. Obtener su espectro UV-vis.

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Colocar la mezcla en una caja petri para evaporar el solvente. Observe
después de dos días.

Disolver 0.1406g de CoSO4.7H2O ó 0.1189g de CoCl2.6H2O en 3ml de


agua destilada y mezclar con 3 ml de solución de aspartamo.
Incrementar el pH hasta 8.33 hasta obtener un precipitado de color rosa.
Obtener su espectro UV-vis.
Colocar la mezcla en una caja petri para evaporar el solvente. Observe
después de dos días.

*Caracterización mediante espectroscopía ultravioleta visible de los


complejos obtenidos.

Obtener los espectros de absorción UV-Vis en el rango de 900 a 30nm.


Para la obtención de la línea base se usará como solución de referencia
agua.
Los espectros deberán ser obtenidos usando celdas de cuarzo.

CUESTIONARIO
*Investigue que otros tipos de endulcorantes existen en el mercado de alimentos.

*Haga una tabla comparativa del valor energético de los endulcorantes


encontrados.

*Mencione cual es la importancia de utilizar endulcorantes bajo en calorias.

*¿Qué beneficios da al paciente diabético el utilizar endulcorantes bajo en


calorías?

BIBLIOGRAFÍA
1. Martin N. Hughes. Coordination compounds in biology. Academic Press.
Cap. 26. (1986.)
2. Hernández, A. Guadalupe y González V. Enrique. Síntesis y
caracterización de complejos de coordinación de Cobre (II), Níquel (II) y
Cobalto (II) con el edulcorante asparatamo. Tesis de Licenciatura. BUAP.
Abril (1990).

Nombre del alumno:

CALIFICACIÓN: Número Letra

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PRACTICA

CATALASAS

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son catalizadores biológicos involucrados en las reacciones


químicas que suceden en el organismo. Estas ejercen un papel importante en los
procesos biológicos debido a tres propiedades importantes que ellas tienen: a)
poder catalítico, b) poder selectivo y c) control sobre la reacción.

Las catalasas están ampliamente distribuidas en organismos vivos que


presentan metabolismo aeróbico y catalizan la reacción:

2H2O2 → 2H2O + O2

La molécula de catalasa puede descomponer cerca de 107 moles de H2O2


por segundo, siendo una de las reacciones enzimáticas más rápidas que se
conocen.

La catalasa existe en general como un tetrámero y cada subunidad tiene una


cadena polipeptídica sencilla conteniendo un grupo protohemo IX. La actividad
catalasa no lleva ningún cambio en el estado de oxidación del Fe(III) contenido en
el grupo prostético.

De acuerdo con la naturaleza del grupo prostético, la catalasa es inhibida en


forma irreversible por sustancias que forman complejos con el hierro y que
continen ligantes como CN-, F-, CO, NO, etc.

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OBJETIVO

Estudiar A la enzima catalasa y la relación que tiene con las condiciones de


reacción.

MATERIALES
2 vaso de precipitados de 100ml 1 probeta de 50 ml
Tubo de desprendimiento 1 agitador de vidrio
Pizeta

REACTIVOS
2 trozos pequeños de hígado solución de cloruro férrico
5 ml de H2O2 al 10% agua destilada

DESARROLLO EXPERIMENTAL

a) Etiquete cada vaso de precipitados y coloque un trozo de hígado


(previamente pesado).
b) A uno de los vasos de precipitados agréguele 3 ml de H2O2 al 10%.
c) Al otro trozo de hígado agréguele 1 ml de la solución de cloruro férrico y la
misma cantidad de H2O2 al 10%.
d) Repita la experiencia del inciso anterior, pero ahora coloque los reactivos
en un tubo de desprendimiento, que estará conectado a una probeta llena
de agua.

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CUESTIONARIO

1. Investigue la estructura de alguna catalasa ya estudiada y peque un copia de


su estructura.

2. ¿Qué acción tiene la catalasa sobre el peróxido de hidrógeno?

3. ¿Por qué solamente se inhibe la catalasa con algunos complejos como el


ferricianuro de potasio y otros como los mencionados anteriormente?

4. ¿Cómo explica dicha acción, en base a las dos respuestas anteriores?

5. ¿Qué grupo activo tiene la catalasa y que estructura tiene?

Es el grupo protético de la catalasa es el

_______________________________.

6. ¿En qué otras partes además del hígado se encuentran localizadas las
catalasas?

7. En base al peso del hígado utilizado ¿cuál es el volumen del gas obtenido?

BIBLIOGRAFÍA
1. Metaloproteins, chemical properties and biological effcets. S. Otsuka & T.
Yamanaka. Ed. ELSEVIER.1988.
2. Hemeproteins 7. Gunther L. Eichhorn . Ed. ELSEVIER. 1988.

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PRACTICA
PROPIEDADES PERIÓDICAS

INTRODUCCIÓN
Los elementos químicos presentan propiedades específicas cada uno, las
cuales son representadas en la Tabla Periódica en forma de periodos y grupos de
elementos con variaciones sistemáticamente definidas en sus energía como son:
Energía de ionización, Afinidad electrónica, Electronegatividad, etc.

OBJETIVO
Observar cómo varian las propiedades de los elementos químicos conforme
se avanza en los periódos 2 y 3 de la Tabla Periódica.

MATERIALES
1 vaso de precipitados de 250 ml 1 mechero de Bunsen
asa microbiológica 6 tubo de ensayo

REACTIVOS
Diferentes trozos de metales del grupo Y-A y del fenolftaleína
grupo II-A
HCl oxalato de potasio
agua destilada hidróxido de amonio
Etilendiamina carbón
ioduro de potasio cloro

DESARROLLO EXPERIMENTAL
a) En el vaso de precipitados colocar 250ml de agua destilada y una gota de
fenolftaleína, y agregar cuidadosamente uno de los trozos de los metales
entregados. Repita este procedimiento con el otro metal del gripo A y II-A
b) Someter a la flama un trozo de cada uno de los metales, mediante el uso
del asa microbiológica.

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c) Tomar un trozo de algún metal de transición (Fe, Cu, etc) y repita los
procedimentos anteriores. Posteriormente en un tubo de ensayo se le
agrega un poco de HCl. Dividir la solución resultante en cuatro partes y
agregarles agua destilada.
d) A uno de los tubos de ensayo agregarle oxalato de potasio, al segundo
tiocianato de potasio, al tercero hidróxido de amonio y al cuarto
etilendiamina.
e) Utilizando carbón, azufre o silicio, repetir los ensayos del inciso (d).
f) A 10 ml de agua destilada, agregarle unas gotas de solución de potasio y
burbujear un poco de cloro.

CUESTIONARIO
a) Explicar las diferencias entre Energía de ionización, afinidad electrónica y
electronegatividad.

b) En base a los conceptos anteriores identificar los metales de lo primeros


ensayos.
c) ¿Qué valencia y qué estados de oxidación presentaron cada una de las
especies químicas utilizadas durante cada uno de los ensayos, antes y
pues de la reacción?

d) Explicar por qué son diferentes los espectros de emisión de los elementos
estudiados.

BIBLIOGRAFÍA
1. Química inorgánica Avanzada. Cotton and Wilkimsos. De. Limusa
2. Modern Inorganic Chemistry. William L. Jolly. Ed. Mc-Graw Hill.
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PRACTICA

COMPUESTOS DE COORDINACIÓN

INTRODUCCIÓN
Los compuestos de coordinación los podemos definir como aquellos
compuestos (complejos) que constan básicamente de un metal de transición
unido a otras especies denominadas ligandos, a través de enlaces covalente
coordinados, entre los que podemos mencionar al agua, amoniaco, carbonilo, etc.
En la naturaleza existe un conjunto de compuestos de coordinación cuyas
funciones son básicas para los organismo, dentro de los cuales podemos
mencionar al grupo prostético hemo, forma de la hemoglobina, mioglobina; a la
corrina en los derivados de la vitamina B12; a la clorofila, etc.

El cobre esta comunmente distribuido en los sistemas vivos a niveles traza.


Niveles más altos en el hombre se han encontrado en el hígado, cerebro,
pulmones y en riñones a niveles más bajo. Altas concentraciones también han
sido encontradas en pigmentos que forman parte de el ojo asociado con
melaninas. Niveles altos de cobre están asociados con ciertos estados de
enfermedades, notablemente como la enfermedad de Wilson (degeneración
hepatolenticular), la enfermedad de Menke, que se presenta por un error de
nacimiento en el metabolismo del cobre que conduce a una esperanza de vida
menor a los tres años, y donde los síntomas clínicos pueden ser observados
grandemente en términos de la baja actividad de las enzimas que requieren de
cobre. El mayor efecto letal es la deficiencia de cobre en el cerebro. Una
característica muy notable de la enfermedad de Menke es una estructura muy
rizada del cabello.

El cobre tiene un papel esencial en un ngran número de enzimas, notablemente


con aquellas involucradas en al catálisis de la transferencia de electrones y en el
transporte de dioxígeno y en la catálisis de sus reacciones. La hemocianina, es un
acarreador de dioxígeno que contiene cobre, mientras que el papel del cobre en

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oxidasas es ilustrado por la citocromo oxidasa, el miembro terminal de la cadena
de transferencia de electrones mitocondrial (62.1.12.4), existen oxidasas azules
multicobre como por ejemplo la laccase, ascorbato oxidasa y ceruloplasmina
(62.1.12.6) y las oxidasas no azules (62.12.7). El cobre también esta involucrado
en las superóxido dismutasas que contienen Cu/Zn y en un gran número de
hidrolasas, tales como la tirosinasa (62.1.12.11.2) y dopamina-β-hidroxilasa
(62.1.12.11.3). Tirosinasa y hemocianina tienen centros binucleares de cobre
similares.

El cobre esta presente también en un número de proteínas pequeñas,


caracterizadas por un color azul intenso, que catalizan la transferencia de
electrones.

Los centros de cobre en las oxidasas azules multicobre han sido clasificados en
tres grupos. Esta clasificación puede ser extendida para incluir otras proteínas de
cobre.

Cobre tipo 1. Este es el centro de cobre responsable del profundo color azul de
las oxidasas azules y de las proteínas azules que transfieren electrones. Los
centros de cobre del tipo 1 tienen una banda de absorción muy intensa cercana a
los 600nm, con un coeficiente de extinción de cerca de 100 veces más que los
encontrados comúnmente para complejos de coordinación de Cu(II), junto con
otras bandas cerca de 450 y 750nm.

Cobre del tipo 2. Este centro presente en oxidasas azules multicobre, es similar
a los sitios típicos de Cu (II) de la geometría tetragonal encontrada en complejos
de coordinación de cobre. El cobre en oxidasas no azules es frecuentemente
registrado como cobre del tipo 2, aunque esto no fue considerado en la definición
original.

Cobre del tipo 3. Este centro consiste de un par de iones de Cu (II), los cuales
son diamagnéticos como resultado de un efecto de interacción antiferromagnética.

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Esta caracterizado por una fuerte absorción alrededor de los 330nm con
coeficientes de extinción en el rango de 3000 a 5000 dm3 mol-1 cm-1. El centro del
tipo 3 esta asociado con reacciones redox de dioxígeno, así puede transferir dos
electrones y así pasar por alto la formación del reactivo superóxido. Han sido
reportado un gran número de sistemas modelo de cobre del tipo 3.

Proteínas azules de cobre. Se pueden citar algunos ejemplos de este tipo de


proteínas como: Azurina, Plastocianina, Plantacianina, Laccase, Ceruloplasmina,
etc. Dentro de este grupo de proteínas pueden existir cobre del tipo 1, 2 ó 3.

Proteínas azules que transfieren electrones. Estas proteínas han sido aisladas
de una gran variedad de fuentes y tienen bajos pesos moleculares. Ellas forman
un círculo entre Cu(II) y Cu(I).

OBJETIVO
Observar las propiedades físicas y químicas de los metales de transición
y sus complejos, así como sintetizar un complejo con un aminoácido.
Al terminar la práctica el alumno:
a) Tendrá una visión general de las características fisicoquímicas de los
metales de transición y sus complejos.
b) El alumno aprenderá el manejo del equipo UV-Vis.

MATERIALES
10 tubos de ensayo y gradilla Agitadores y pipetas
Dos vasos de precipitado de 10 ml. Balanza analítica, Equipo UV- Vis.

REACTIVOS
Sol`n de ferrocianuro Solución de HCl concentrada Solución de sulfato cúprico
NH4OH concentrado Zinc en polvo Sol´n de cloruro férrico
Sol´n de Tiocianato de potasio Sol´n de cloruro de niquel
Sol’n de ácido salicílico Sol’n de dicromato de potasio
Acetato de cobre Glicina

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DESARROLLO EXPERIMENTAL
PRIMERA PARTE. FORMACION DE COMPLEJOS
a) El agua como ligando: Coloque un ml de cada una de las soluciones de
las sales de cobre, niquel y hierro. Observe el color característico que
proporciona el agua como ligando, ya que en estas soluciones varias
moléculas de agua están unidas al ión metálico a través de enlaces de
coordinación.
b) Amoniaco como ligando: A la solución de cobre y a la solución de niquel
agregue un ml de solución de hidroxido de amonio concentrado, en caso
de que aún persista un precipitado añada mas amoniaco. Observe el
cambio de color debido a la sustitución de las moléculas de agua por
moléculas de amoniaco
c) Coloque un ml de solución de cloruro férrico en tres tubos de ensaye
agregar al primer tubo unas gotas de solución de tiocianato de potasio. Al
segundo tubo añadir unas gotas de solución de ácido salicílico. Al tercer
tubo añada unas gotas de solución de ferrocianuro. Observe los cambios
de color debidos a la sustitución del agua por los ligandos tiocianato,
salicilato y cianuro, cuando se mantiene constante el ión metálico.
d) Número de oxidación variable: Coloque un ml de una solución de
dicromato de potasio en un tubo de ensaye, añada una pequeña cantidad
de zinc en polvo y cinco gotas de ácido clorhídrico. Observe los cambios
de color de la solución debida a los cambios en el número de oxidación
del cromo, el cual pasa de Cr(VI) a Cr(III) y finalmente a Cr(II).

SEGUNDA PARTE
Síntesis de bisglicinato cobre (II).
1.- Disolver 0.100 g de acetato de cobre monohidratado en 2.0 ml de agua
caliente.
2.- Disolver aparte 0.075 g de glicina en 2.0 ml de agua caliente.
3.- Mezclar ambas soluciones y dejar enfriar hasta que se formen cristales
de color azul claro.

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4.- Filtrar y dejar secar al aire.
5.- Disolver una pequeña cantidad del compuesto obtenido en 5 ml de
agua caliente. Con esta solución obtenga el espectro Visible.

CUESTIONARIO
1. Escriba cada una de las reacciones ocurridas en los distintos
experimentos realizados de la primera parte.
2. Dibuje la estructura del complejo formado con cobre y glicina.
3.- Que puede deducir del espectro de este complejo.

CALIFICACIÓN NÚMERO LETRA

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PRACTICA

EL pH METABÓLICO

INTRODUCCIÓN
El bióxido de carbono es un gas que esta cumpliendo con diversas funciones
fundamentales en el metabolismo general del organismo humano, debido a que
está relacionado con el proceso de respiración, control del pH respiratorio y
metabólico, formación de sustancias base del tejido óseo, etc.
La acidosis es una alteración que tiende a producir un pH ácido al menos
que haya un alcalosis oponente dominante. La alcalosis es lo opuesto y tiende a
producir un pH alcalino al menos que exista un acidosis oponente dominante.
La alcalosis es una condición provocada por el exceso de base (alcali) en los
líquidos del cuerpo. Los pulmones y los riñones regulan el estado ácido/base del
cuerpo la disminución en el bióxido de carbono o el aumento del nivel del
carbonato crea un exceso del estado alcalino llamado alcalosis.
La alcalosis respiratoria es ocasionada por los niveles bajos de dióxido de
carbono. La hiperventilación (aumento en la frecuencia respiratoria) hace que el
cuerpo pierde dióxido de carbono. La altitud o una enfermedad que produzca una
reducción de oxigeno en la sangre obliga al individuo a respirar más rapido,
reduciendo los niveles de dióxido de carbono, lo que provoca una alcalosis
respiratoria.
La alcalosis metabólica es ocasionada por un exceso de bicarbonato en la
sangre y la alcalosis hipoclorémica es causada por una deficiencia o pérdida
extrema de cloruro (que puede ser debido a un vómito prolongado). Los riñones
compensan la pérdida de cloruros mediante la conservación de bicarbonato.
El dióxido de carbono es el ácido respiratorio, es el único ácido que puede
ser exhalado. Estrictamente hablando el dióxido de carbono es un gas, no un
ácido. El ácido carbónico solo se forma cuando se combina agua. La acidosis
respiratoria es una presión de CO2 elevada.
El término “ácidos metabólicos” incluye a todos los ácidos del cuerpo a
excepción del dióxido de carbono. Los ácidos metabólicos no son eliminados por

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la respiración; ellos tienen que ser neutralizados, metabolizados, o excretados a
través del riñón. Acidosis metabólica es cuando el pH es más ácida que el
apropiado para la presión de CO2. Esta definición enfatiza la importancia del
componente respiratorio en el pH global. El pH es siempre un producto de dos
componentes, respiratorio y metabólico, y el componente metabólico es juzgado,
calculado, o computado de acuerdo a los efectos de la presion de CO2, por
ejemplo, cualquier cambio inexplicable en el pH por la presion de CO2, indica una
normalidad metabólica.

OBJETIVO
Estudiar el comportamiento del CO2 en agua y sus reacciones.

OBJETIVOS PARTICULARES
El alumno comprobará la importancia que tiene el pH en el metabolismo.

MATERIALES
Phmetro Jeringa de 5ml
Matraz de 100ml Sistema para medición de CO2

REACTIVOS
Agua mineral Solución de NaOH recien preparada libre de CO2
HCl concentrado Refrescos embotellados de diferentes sabores (dos al menos)
Solución de Ca(OH)2

DESARROLLO EXPERIMENTAL
a) Utilizando un pHmetro, medir el pH del agua mineral recien salida del
envase, el cual fue destapado en el momento previo a ser utilizado.
Posteriormente agitar el vaso y medir nuevamente el pH.
Asociar estos fenómenos con los procesos de acidosis y alcalosis tanto
respiratorias como metabólicas que ocurren en nuestro organismo.

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b) Construir un sistema de medición de CO2 (según instrucciones del profesor).
Coloque en el matraz erlemeyer 10ml de solución de NaOH, agitar el matraz
hasta que se estabilice la columna de agua. Tome nota de la altura de la
columna de agua.
c) Una vez estabilizado el sistema, un voluntario aspirará aire y retendrá la
respiración unos segundos y a continuación por uno de los tubos latex soplará
dentro del sistema e inmediatamente sellará el sistema, agitar nuevamente por 30
segundos, dejar que se estabilice la columna de agua, anotar la nueva altura de la
columna. NOTA: Con estos datos se calculará el volúmen de CO2 expirado, 6.
b) Instalar un sistema para obtener CO2, según instrucciones del maestro:
Colocar en el matraz un poco de carbonato de calcio industrial,. Agregar al
matraz que contiene el mineral, solución de HCl y burbujear el gas resultante
primero en un vaso con agua. Mida el pH de la solución resultante.
f) Burbujee el CO2 en una solución de Ca(OH)2 , que ocurre.
g) Aspirar aire y mantenerlo por unos segundos, burbujear el aire en un vaso
conteniendo solución de hidroxido de calcio. Que ocurre.

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es el pH sanguíneo de una persona normal?
2.- ¿Cuál es el sistema de regulación del pH más comun en el organismo
humano?
3. - ¿Cómo se produce la acidosis y alcalosis respiratorias y metabólicas?
4.- ¿Cuál es el origen del carbonato de calcio en estructuras como
huesos,dientes y caparazones como los cascarones de huevo?

5.- ¿Que pH produce la disolución de CO2 en agua?


6.- ¿Qué cantidad aproximada de CO2 se produce durante una aspiración?
CALIFICACIÓN NÚMERO LETRA

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ANEXOS

El reporte de cada una de las prácticas deberá ajustarse al siguiente formato.


En todos los casos la escritura deberá ser legible (letra de molde si es a mano)
y ordenada, guardando el orden que se especifica abajo.

OBSERVACIONES

RESULTADOS

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COMENTARIOS Y/ O CONCLUSIONES

CUESTIONARIO.

Cada pregunta que incluye el cuestionario deberá anotarse junto con su


respuesta, en un recuadro.

Pregunta 1
Respuesta:

Pregunta 2
Respuesta:

Pregunta 3
Respuesta:

Etc.

50

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