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Comprobación de la primera y segunda ley de Mendel mediante el cruce
monohíbrido entre macho vestigial y hembra silvestre
Paipilla. C1,Rozo.N,2 Oliveros.S3
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Resumen
La mosca de la fruta Drosophila melanogaster ha sido de suma importancia en
la historia científica de la humanidad, ha servido de modelo para aprender
cómo funcionan los genes y cómo se expresan, en qué manera y porque. Este
insecto tiene un desarrollo completo (holometábolo), el ciclo de vida de
Drosophila melanogaster es corto, en promedio se dice que dura entre 15 y 21
días lo cual facilita mucho el estudio de algunas de las leyes de Mendel como
es este caso donde se tuvo un cruce monohíbrido comprobando así la primera
y segunda ley de Mendel, mediante el cruce entre macho vestigial y hembra
silvestre obteniendo la F1 con genotipo 100% heterocigoto y fenotipo 100%
silvestre, caracterizado por la presencia de alas largas y redondeadas, la F2;
30 moscas silvestres y 10 vestigiales, con genotipo 50% heterocigoto, 25 %
homocigoto vestigial y 25% homocigoto silvestre y fenotipo en relación de 3:1
para la expresión del carácter recesivo vg, que se caracteriza por la presencia
de vestigios de alas atrofiadas y cortas, de esta manera pudimos comprobar
experimentalmente la Primera y segunda ley de Mendel gracias a la
preservación de los individuos en condiciones adecuadas teniendo en cuenta
que la temperatura y el medio de cultivo son factores relevantes para el
desarrollo de Drosophila.
Palabras clave: Drosophila melanogaster, desarrollo, Mendel, cruce.
1
Oliveros Londoño Stefania, 20162140457. Universidad Distrital Francisco José de
[Link] Curricular Licenciatura en Biología. Bogotá, Colombia. Email:
stefanii318@[Link]
2
Paipilla Paula Camila, 2 0162140459. Universidad Distrital Francisco José de [Link]
Curricular Licenciatura en Biología. Bogotá, Colombia. Email: Camilapaipillag@[Link]
3
ozo Pinilla Jorge , 20162140665. Universidad Distrital Francisco José de [Link]
R
Curricular Licenciatura en Biología. Bogotá, Colombia. Email: Nico970210@[Link]
Abstract
The fruit fly Drosophila melanogaster has been of great importance in the
scientific history of humanity, has served as a model to learn how genes work
and how they are expressed, in what way and why. This insect of complete
development, holometábolo, the life cycle of Drosophila melanogaster is short,
on average it is said to last between 15 and 21 days which greatly facilitates the
study of some of Mendel's laws as in this case where there was a Monohybrid
crossing thus checking Mendel's first and second law, by crossing the vestigial
male and wild female, obtaining the F1 with 100% heterozygous genotype and
100% wild phenotype, characterized by the presence of long, rounded wings,
the F2; 30 wild and 10 vestigial flies, with 50% heterozygous genotype, 25%
homozygous vestigial and 25% wild homozygous and phenotype in relation of
3: 1 for the expression of the recessive character eg, which is characterized by
the presence of vestiges of atrophied wings and short, in this way we were able
to experimentally verify Mendel's First and Second Law thanks to the
preservation of the individuals in adequate conditions taking into account that
the temperature and the culture medium are relevant factors for the
development of Drosophila.
Keywords: Drosophila melanogaster, development, Mendel, crossing.
Introducción
La Drosophila melanogaster, se drosophila. Desde entonces, este
utiliza de forma generalizada en la pequeño insecto, que se cría
investigación científica y médica. rápidamente y se mantiene con
Se ha utilizado en la genética y la facilidad en un laboratorio, ha
biología de desarrollo durante casi desempeñado un papel
un siglo y en la actualidad varios fundamental en la investigación
miles de científicos trabajan en genética.
muchos aspectos diferentes de su (Ashburner & Wright,1978)
biología. La importancia de la La Drosophila ha contribuido al
Drosophila como modelo animal fue desarrollo de fármacos para
descubierta por Thomas Hunt combatir a los patógenos
Morgan, que consiguió el Premio responsables de diversas
Nobel de Fisiología y Medicina en enfermedades, desde infecciones
1933 después de haber demostrado de la piel hasta la neumonía y
que los cromosomas portan la meningitis. La investigación reciente
información genética, utilizando la con moscas de la fruta se ha
centrado en la patología de la amarilla, o totalmente negra. El
enfermedad de Alzheimer, porque a género Drosophila está conformado
pesar de que las moscas tienen un por unos 15 subgéneros y cerca de
cerebro muy simple disponen de 2000 especies. La especie D.
nervios y músculos altamente melanogaster fue descrita por
desarrollados. Ashburner, Golic, Maigen en 1830, y pertenece al
(Hawley,2005) subgénero Sophophora, el cual
La especie mide cerca de 3 mm, contiene cerca de 150 especies
siendo la hembra ligeramente más divididas en 10 subgrupos
grande que el macho. Su cuerpo diferentes, perteneciendo D.
está formado por tres tagmata melanogaster al subgrupo
(regiones): cabeza, tórax y melanogaster. (González, 2002)
abdomen. El número de segmento
de la cabeza (6) y el tórax (3) es Gen vestigial
similar en machos y hembras, La mutación vg exhibe una herencia
mientras que el número de autosómica recesiva y se
segmentos del abdomen es mayor caracteriza por mostrar alas
en hembras (7) que en machos (6). reducidas a vestigios, por lo
Los seis segmentos cefálicos están general, dispuestas en ángulo recto
fusionados y el primero se reconoce respecto al cuerpo.
porque porta las antenas, las cuales El gen vg está mapeado
están formadas por tres piezas citológicamente en la posición 49
denominadas artejos. Los tres D2-E1 del brazo derecho del
segmentos del tórax también están cromosoma 2 (2R). vg tiene una
fusionados y cada uno de ellos longitud de 16 Kb que dan lugar a
porta un par de patas. Las alas un transcrito procesado de 3.8 Kb
están insertas en el segundo (Williams et al., 1990). Los 8 exones
segmento del tórax. La diferencia en que componen el transcrito del gen
el número de somitos abdominales procesado codifican para una
en ambos sexos es debida a la proteína de 453 aminoácidos con
fusión, en los machos, de los dos escasa homología a las descritas
últimos segmentos. hasta el momento (Williams et al.,
1990; Williams and Bell, 1988). Vg
Como su nombre lo indica, las actúa como un regulador
moscas de esta especie presentan transcripcional (Halder and Carroll,
el vientre de color oscuro, sin 2001; Halder et al., 1998) tras
embargo, existen mutaciones que interaccionar con el producto del
pueden afectar la cantidad y gen scalloped (sd) (Campbell et al.,
distribución de pigmentos en su 1992; Simmonds et al., 1998;
cuerpo, dándoles una coloración Vaudin et al., 1999). sd se expresa
en todos los territorios con
expresión Vg y pertenece a la
familia conservada de proteínas con
capacidad de unión al DNA, Paumard-Rigal et al., 1998),
TEA/ATTS (Campbell et al., 1992; provocando la diferenciación
Campbell et al., 1991; Vaudin et al., cuticular característica del ala (Kim
1999). et al., 1996; Simmonds et al., 1998)
La expresión de vg comienza a
observarse en el primordio del disco Leyes de Mendel
imaginal de ala al final del desarrollo 1ª LEY DE MENDEL: Ley de la
embrionario (Williams et al., 1991). uniformidad de los híbridos de la
Posteriormente durante el desarrollo primera generación filial. Esta
larvario y pupal, dos secuencias defiende que al cruzar una raza
reguladoras, localizadas en el pura de una especie (AA) con otro
segundo y cuarto intrón del gen, individuo de raza pura de la misma
dirigen su expresión. especie (aa), la descendencia de la
Función vestigial durante el primera generación filial será
desarrollo del ala fenotípicamente y genotípicamente
Diferentes combinaciones hetero igual entre sí (Aa) y fenotípicamente
alélicas de falta de función de vg igual a uno de los miembros de la
impiden el desarrollo de las partes generación parental, en concreto, al
distales del ala y, ocasionalmente, portador del alelo dominante (A).
generan duplicaciones de tórax
(Van de Bor et al., 1999; Williams et 2ª LEY DE MENDEL: Ley de la
al., 1993). Estos fenotipos son el segregación. Esta ley dicta que en
resultado de fallos en la la segunda generación filial,
especificación temprana del ala obtenida a partir del cruce de dos
(segregación tórax-ala inadecuada) individuos de la primera generación
y muerte celular (Van de Bor et al., filial, se recupera el genotipo y
1999; Williams and Bell, 1988) (Fig. fenotipo del individuo recesivo de la
7A). Los estudios de primera generación parental (aa) en
sobreexpresión han mostrado su un 25%. Del 75% restante,
capacidad para inducir la expresión fenotípicamente iguales, el 25%
ectópica de marcadores genéticos tiene el genotipo del otro parental
característicos del “wing blade” inicial (AA) y el 50% restante se
fuera del ala (Halder et al., 1998; corresponde con el genotipo de la
primera generación filial.
hongos, micoplasmas) (Smith,
Materiales y método 2014)
Obtención de las cepas Cruce
Pasados 8 días se procedió a
Se obtuvieron las cepas de moscas trasladar a las moscas a los
silvestres a través del Instituto de respectivos medios para realizar el
genética en la universidad de los cruce. Para esto se tuvieron
Andes , la cepa de moscas medidas estrictas de asepsia,
vestigiales se obtuvo a través de la teniendo en cuenta las
Universidad Pedagógica Nacional recomendaciones de la docente.
en el Departamento de Biología. Para dormir a las moscas y evitar
Anterior a la preparación de los que se escaparan se utilizó éter en
medios se realizó la esterificación un frasco de vidrio y con mucha
de los tarros en los cuales se precaución se pasaron unas
agregó el medio. moscas a este y se procedió a
separarlas por género (Macho,
Preparación de los medios hembra). Se eligieron 5 machos
vestigiales y se pusieron en un
Para la preparación de los medios frasco y en el caso de las hembras
de cultivo se utilizó harina de trigo, se esperó aproximadamente 5 días
agar, agua, levadura, ácido acético a que salieran de los huevos
glacial y azúcar, en primer lugar se nuevos.
calentó el agua, después se
adiciono azúcar y harina, esta Seguimiento
mezcla se dejó hervir por 4 minutos Una vez realizado el cruce , las
, después se disolvió lentamente la moscas se acomodaron en una caja
levadura en agua tibia, de cartón con un bombillo pequeño
posteriormente se agregó el agar a 15 cm de distancia, esto con el fin
hasta que se disolviera, por último de mantenerlas a una temperatura
se añade el ácido acético glacial, adecuada, se hicieron
una vez preparado el medio se observaciones diarias teniendo en
depositó en los frascos de vidrio de cuenta las fechas, la temperatura
mayonesa con sus respectivos que fue medida con un termómetro
tapones de gasa , se dejó solidificar digital y los estadios presentes en
por 24 horas, todo este cada dia como la aparición de
procedimiento se realizó en huevos y larvas. Todo con su
términos de asepsia total para evitar debido registro fotográfico. Al quinto
la proliferación de organismos día los parentales fueron retirados
patógenos (Bacterias, levaduras, del medio y se continuó con la
observación y el conteo de los retirados y puestos en un medio
nuevos individuos correspondientes nuevo para la obtención de la filial
a la filial 1 , estos a su vez fueron 2.
Tabla N°1 Cronograma
Fecha Observaciones
Semana 1- mayo 15-22 15 M- Las proporciones en el N° de
moscas para el cruce fueron: 4
machos vestigiales y 3 hembras
silvestres, fueron colocadas en
frascos separados con medio
nutritivo. Posterior a ello se
mantuvieron en una caja de cartón
con 1 bombillo pequeño para
proporcionar calor, a una temperatura
de 22- 24°C.
A los 5 días es decir el 20 de mayo
aparecieron larvas, se observaron
aproximadamente 9 larvas. Este día
se retiraron los parentales +/+ y se
dejaron sólo las larvas, después se
seleccionaron las hembras vírgenes,
y se hizo la cruza con los machos
vestigiales.
Semana 2- mayo 23-29 El día 25 de mayo aparecieron larvas
en el tarro de la cruza, se observaron
en sus diferentes estadios larvales, el
26 y 27 aumentó la cantidad de
larvas aprox. 40.
Semana 3- mayo 30-junio 5 El 30 de mayo se descartaron los
parentales vg y +, pupas en su último
estadio, el 4 de junio aparición de la
descendencia adulta, la F1 (100%)
heterocigotos con características de
la mosca silvestre tales como alas
largas y redondeadas. Debido a que
este es el genotipo dominante, se
realizó un conteo donde se
obtuvieron 75 individuos, 40 hembras
y 35 machos.
Estas moscas se pusieron en un
nuevo medio.
Semana 4 -junio 6- 12 Después de la aparición de la F1, se
agrego nuevo medio en el frasco
puesto que ya se lo habían
consumido, el 10 de Junio hubo
aparición de nuevas larvas, y el 11 -
12 de junio aumentaron la cantidad.
Cabe aclarar que en el proceso
algunos individuos se murieron, otros
a la hora de realizar los cambios de
frasco y medios se volaron.
Semana 5- junio 13- 19 aparición de nuevas larvas, aumenta
el número de adultos, junio 14 - 16
nueva aparición de larvas y huevos
sobre las paredes del medio. Las
proporciones trabajadas para la F2
fueron: 18 hembras y 12 machos ,
individuos obtenidos a partir de la F1.
F2 Aparición de 30 larvas en instar 1,
Semana 6 junio 20 - 26 2,3 , las larvas en instar 3 se
desplazaron sobre las paredes del
contenedor, Retiro de los parentales
progenitores del medio. Aparición de
pupas en instar 2 , posteriormente
eclosión de pupas.
Semana 7 junio 27 - julio 2 Conteo individuos F2: aparición de
alrededor 5 individuos adultos, 4
silvestres y 1 vestigial con vestigios
de alas , junio 26 aparición
aproximada de 15 individuos adultos,
10 hembras y 6 machos silvestres y 2
vestigiales , se observó una baja
actividad de los individuos adultos, se
presenta una leve mortalidad entre
los individuos adultos, baja actividad
de larvas, julio 1 se cuentan 4
individuos adultos muertos
Semana 8 Julio 2 - 8 Aparición de un número bajo de
larvas, el medio tiende a
desaparecer, se crena a los laterales,
baja la aparición de larvas
Semana 9 Julio 8 - 14 Aparición individuos adultos julio 8,
muerte masiva de individuos, julio 13
se contabilizan aproximadamente 15
individuos adultos muertos.
TOTAL DE LA POBLACIÓN F2 40 individuos adultos : 22 hembras y
18 machos.
10/ 40 homocigotos dominantes
20/40 heterocigotos
10/40 homocigotos recesivos
Resultados
Cruce monohíbrido : (macho vestigial x hembra silvestre)
♂ vg/vg x ♀ +/+
Tabla N°2 Cuadro de Punnett para filial 1 (F1)
♂ vg/vg / ♀
+/+ vg vg
+ +/vg +/vg
+ +/vg +/vg
Fenotipo: 100 % moscas silvestres
Genotipo : 100 % Heterocigotos o híbridos +/vg
Conteos Machos y Hembras total F1
Tabla N°3 Número de individuos F1
Género Nro. de Fenotipo Genotipo
individuos
Hembras 40 100% silvestres 4/4 híbrido +/vg
Machos 35 100% silvestres 4/4 híbrido +/vg
Total 75
Tabla N°4 Cuadro de punnett Filial 2 (F2)
♂ + /vg x /vg +
♀ + vg
virgen
+ +/+ +/vg
vg +/vg vg/vg
Fenotipo: 3/4 moscas silvestres, 1/4 moscas vestigiales
Genotipo: 1/4 Homocigoto +/+, 1/2 Híbrido +/vg y 1/4 Homocigoto vg/vg
Tabla N°5 Conteos machos y hembras vírgenes filial 2
Género Nro. de Fenotipo Genotipo
individuos
75%silvestres 1/4 Homocigoto
Hembras 22 25% vestigial +/+, 1/2 Híbrido
+/vg y 1/4
Homocigoto
vg/vg
75% silvestres 1/4 Homocigoto
Machos 18 25% vestigiales +/+, 1/2 Híbrido
+/vg y 1/4
Homocigoto
vg/vg
Total 40
Foto N°1 Preparación medios de cultivo nutritivos.
Foto N°2 Temperatura
Foto N°3 Temperatura
Foto N°4 Casa de las moscas
Foto N°5 Cepa de moscas Semana 1. Mayo 15- 22
Foto N°6 Semana 2. Mayo 23 -29 .Larvas
Foto N°7 Larvas y Pupas. Mayo 26-28 Larvas y pupas
Foto N°8 Pupas F1 Semana 3- mayo 30-junio 5
Foto N°9 Aparición de la F1 Semana 4 -junio 6- 12
Foto N°10 Separación para la F2 Semana 4 -junio 6- 12
Foto N°11 Aparición de pupas Semana 5- junio 13- 19
Foto N° 13 Semana 7 junio 27 - julio 2 Aparición de las moscas
Foto N°14 Semana 8 Julio 2 - 8 Crenación del medio
Foto N°15 Semana 9 Julio 8 - 14 Reaparición de las moscas, con algo de
muerte de algunos individuos
Foto N°16
Análisis de resultados parte de recesivos (proporción 3:1)
(Garner et al., 2003)
La primera ley expresa que
mediante La meiosis los dos alelos El resultado del cruce de las cepas
que forman un gen se segregan y puras ♂ vg/vg x ♀ +/+ d
io como
cada uno va a un gameto. Este resultado individuos
principio se cumple en los cruces fenotípicamente 100% idénticos al
monohíbridos que equivalen al parental +/+ , debido a la naturaleza
análisis de la herencia de una sola de sus alelos de tipo autosómicos
característica (Miller, 2006) dominantes lo que conlleva a
expresar en todos los individuos de
El cruce monohíbrido es la
la filial uno sus características
combinación entre organismos que
donde se puede apreciar a
difieren en una característica, la
conformidad la validez de la primera
realización de este cruce revelará la
ley de Mendel siendo el resultado
primera ley de Mendel, la cual
descendencia híbrida en su
enuncia que los alelos de un gen se
totalidad con la expresión de
segregan independientemente en
caracteres fenotípicos del genotipo
los gametos. De tal manera, al
dominante de la línea pura + /+, en
cruzar líneas puras se obtiene una
cuanto a las proporciones
F1 con heterocigotos donde se
genotípicas calculadas se hicieron
expresa el carácter dominante y en
mediante la utilizaciòn del cuadro de
la F2 (autocruce F1xF1) se obtiene
punnett donde, se calculó como
tres partes de dominantes y una
resultado 4/4 híbridos +/vg, el
numero de individuos varió realizado estudios sobre algunos
sustancialmente en cuanto al sexo estadios en el ciclo de vida
de los individuos siendo las Drosophila como el paso de larva a
hembras las que se encontraron en pupa, relacionando la mortalidad
mayor número, la naturaleza de con la temperatura. para nuestro
este cruce se puede evidenciar màs experimento encontramos
adelante en la segregación de los funcionalidad para la F1 con valores
alelos que conforman el gen para entre los 22 a 24 ºC dado que la
una sola característica (Miller, 2006) temperatura ambiente donde se
lo cual se puede comprobar en el tenìa el cultivo oscilaba entre los 16
cruce de la filial dos +/vg x +/vg y 18ºC donde se trato de tener sin
donde se pudo observar el cambio resultados significativos
de las proporciones numéricas de transcurridos 7 dìas por lo cual se
los individuos en cuanto a la decide aumentar la temperatura, la
expresiòn de su fenotipo y los tolerancia de los individuos
cambios de los cálculos teóricos en obtenidos en la filial 2,
cuanto a su genotipo; en contraste relacionándolo según (Garner et. al,
con (Garner et. al, 2003) la cantidad 2003) se ha encontrado un cierto
de individuos machos y hembras cambio en los picos reproductivos
(22 y 18 respectivamente) se obtuvo para la F2 encontrándose a
en proporciones de 3:1 con temperaturas inferiores en
respecto al fenotipo obteniendo en comparación a la F1, esto
mayor cantidad moscas relacionado a la forma en la cual se
fenotípicamente silvestres y en da el aprovechamiento del cultivo y
menor cantidad vestigiales, de igual la velocidad de la actividad
manera que en el primer cruce las enzimática siendo mayor en la F1 lo
moscas hembras presentaron un cual podría explicar la disminución
número de individuos ligeramente en el número de individuos para la
màs elevado que machos . F2 a temperaturas equivalentes.
La influencia de la temperatura, el De acuerdo a las imágenes se logra
tipo de medio es crucial en el observar como la mosca silvestre
desarrollo de los individuos, como difiere fenotípicamente de la mosca
establece Schnebel Grosfeld (1984) “mutante” vestigial en este caso en
se determinaron rangos de una sola característica que es en
temperatura dentro de los cuales los general el estado de las alas , lo
valores de cópula y oviposición son cual hace que sea un cruce
normales y aproximadamente monohíbrido, en el que solo se
constantes: de 9 a 30°C para la implica un carácter con sus formas
primera y de 16.5 a 28°C para la alternativas. Este carácter es de tipo
segunda. Así mismo, se han autosómico porque los genes de
ambos individuos se localizan en el cantidades del factor gelificante o
cromosoma 2 , la mutación vestigial AGAR, en primera instancia la
exhibe una herencia autosómica modificación a las cantidades en el
recesiva. medio provocó en dos ocasiones
una baja solidez al medio expuesto
Analizando la actividad de los dos
a incubadora (la cual se encontraba
tipos de moscas, la silvestre fue la
a un rango prudente) lo que
más productiva o resistente a
ocasionó la adherencia de varios
ciertos factores tales como la
individuos al medio aumentando así
temperatura, los nutrientes
la mortandad de los mismos, en
contenidos en el medio de cultivo,
segundo y último lugar se presentó
debido a que dicha cepa no
la disminución de la superficie del
presenta ninguna desventaja
medio lo que género espacios
respecto a la vg. La vestigial al
laterales en los cuales se
presentar una disminución en el
introducían varios individuos
tamaño del área del ala y un cambio
generando por desplazamiento y
en la posición de la línea a lo largo
movimiento de los cultivos
de la cual el ala se despliega del
aplastamientos accidentales.
disco imagal tiene dificultades en el
cortejo, ya que el éxito de
apareamiento depende de las
Conclusiones
vibraciones de las alas durante el
mismo. (Ramos, 1993) La El cruce monohíbrido realizado (+/+,
deficiencia en sus alas provocada vg/vg) en este caso coincide con lo
por la contracción desigual de los planteado por Mendel en la primera
epitelios superior e inferior durante Ley , la cual afirma que hay
el periodo de secado después de independencia alélica. Esto gracias
que la mosca emerge de la pupa , a la precaución con la que se trato a
provoca que el cortejo sea los individuos y las condiciones que
deficiente y por tanto que la se les otorgó, siendo la temperatura
productividad de adultos sea menor. y el medio de cultivo factores
Así pues que la proporción de importantes para el desarrollo de
vestigiales sea muy baja y muchos Drosophila melanogaster.
individuos hallan muerto durante el
experimento. El cruce monohíbrido reforzó el
concepto de dominancia ya que en
En cuanto al aprovechamiento del la F1 dos alelos diferentes están
medio se sugiere cambiar las presentes en un genotipo pero en el
proporciones para una futura fenotipo se observa solo el rasgo
replicación ya que presentó dos
problemas relacionados con las
codificado por uno de ellos (alelo - Kim, J., Sebring, A., Esch, J.
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