INFORME 1.
PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE
CULTIVO
Kelly Díaz Barraza
Instructora: Laura Muñoz Echeverri
CENTRO TEXTIL Y DE GESTIÓN INDUSTRIAL
QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRIA (FICHA: 1745745)
SENA
Introducción capaces de reproducirse. La
esterilización de material puede llevarse
Los microorganismos es un ser vivo que a cabo mediante calor seco o húmedo,
solo puede visualizarse con el siendo los métodos de mayor utilización
microscopio. Son organismos dotados de en microbiología.
la individualidad que representan, a
diferencias de las plantas y los animales. Otra condición importante para su
En su mayoría son unicelulares, aunque crecimiento y producción de los
en algunos casos se trate de organismos microorganismos es la selección de
cenóticos compuestas por células medios de cultivos adecuados, esto debe
multinucleadas, o incluso multicelulares. suplir requerimientos nutricionales
indispensables para el desarrollo celular,
Dentro de los microorganismos se permitirán diferenciar características del
encuentran organismos unicelulares crecimiento y establecer identidad.
procariotas, como las bacterias y Adicionalmente, conociendo que los
eucariotas como los son protozoos, una microorganismos se encuentren en
parte de las algas y hongos, e incluso los diversos ambientes naturales, los medios
organismos de pequeño tamaño como de cultivo deben asemejar dichos
los virus.[1] Los microorganismos ambientes con el fin de posibilitar su
dependen de varias condiciones para su crecimiento.
crecimiento y producción, en este caso
existen tipos de medios de cultivos para Objetivos
poder llevar a cumplir las condiciones, Emplear técnicas de limpieza y
para llevar a cabo debemos elaborar desinfección de materiales y
cierto parámetro para su cumplimiento, equipos para el trabajo con
microorganismo.
uno de ellos es la preparación y la
esterilización de materiales como Aplicar principios generales para
requisito para el trabajo con los seres la preparación y esterilización de
vivos dado a la ubicuidad de los medios de cultivo y materiales de
microorganismos y la existencias de vidrio de uso común en
estructuras celulares resistentes microbiología y biotecnología.
(esporas y endoesporas) se han
Conocer la composición y el uso
desarrollado procesos de esterilización,
de los diferentes medios de
es decir, de eliminación o destrucción de cultivo y otras soluciones
todo organismos vivo, como objeto utilizadas en el laboratorio de
esterilizado esté libre de células viables microbiología – biotecnología.
Lavar todo el material de trabajo
Materiales y escurrir el exceso del agua
Tubos de ensayo de 10 mm x 100
mm con tapa rosca
Tubos de ensayo de 16 mm x 150 Precalentar el horno a 80°C por
mm con tapa rosca 15 minutos, se procede a
Cajas petri de vidrio envolver las cajas Petri con el
Erlenmeyer de 500 -1000 mL papel kraf y con algodón y gasa
Erlenmeyer de 250 mL los Erlenmeyer
Erlenmeyer de 100 mL
Pipetas graduadas de 10 mL
Macropipeta de 1 mL a 10 mL
Preparar caldo nutritivo y vaciar
Puntas de micropipeta de 1 a 10
8mL en el tubo de ensayo
mL
Agitadores magnéticos
Papel kraf
Asas bacteriológicas (asas de Preparar agar nutritivo o plate
lupa) count en un Erlenmeyer y
Horno de calor seco calentar en plancha agitadora
Hisopo esteril, hasta ebullición
Algodón
Gasa
Vinipel
Tarro lavador agua destilada Vaciar 10mL del medio anterior
Planchas de calentamiento y en un tubo de ensayo y evitar
agitación solidificación agregando agua
Reactivos
Caldo nutritivo Realizar el mismo proceso para
Agar nutritivo o plate count agar para los hongos y dejar los
Agar papa dextrosa (PDA), agar medios de cultivos que se
sabouraud u Ogy
enfríen
Agar chromocult, VRB, EMB
Solución salina peptonada: (8.5 g
de NaCl, 1 g de peptona, 1000
mL de agua) Etiquetar 27 cajas Petri con AN y
Agua destilada 8 PDA, dejar que se solidifique
envolver dichosas cajas de Petri y
Procedimientos refrigerar
Preparación de materiales de
vidrio y medios de cultivos
Anexos 3. ¿Cómo se clasifican los medios
de cultivo según su función?
¿Para qué sirve cada uno?
1. ¿Para qué se usa una
incubadora? Los medio de cultivo se clasifican en:
La incubadora sirve para Líquidos: No contienen agar,
mantener y hacer crecer cultivos favorecen el crecimiento
microbiológicos o cultivos bacteriano ya que las bacterias
celulares, regulando factores de poseen una gran libertad de
crecimiento viables como por movimiento y al difundirse por
ejemplo la temperatura, la todo el medio encuentran sus
humedad y la ventilación. Las componentes nutritivos y
incubadoras vienen en distintos requerimiento del oxígeno con
tamaños, tan pequeñas como una mayor facilidad.
computadora portátil o tan grande Solidos: Su concentración de
como una habitación, agar es de 1.5% a 2%, las
dependiendo de los bacterias crecen con mayor
requerimientos del usuario. dificultad ya que los nutrientes
pueden agotarse fácilmente, se
2. ¿Cuál es la función de una cabina utilizan colonias, aislar
de flujo laminar? microorganismos, características
Cabinas o campanas se trabaja de crecimientos y entre otros.
con obleas de semiconductor, Semisólidos: Su concentración
cultivos celulares o cualquier otro de agar es 0.5%, se utiliza para
sistema que deba mantenerse estudiar el movimientos y algunas
limpio y deba evitarse la propiedades bioquímicas.
contaminación con partículas
minúsculas. Estas cabinas están 4. ¿Cuáles son los métodos más
diseñadas para proporcionar un corrientes utilizados para
aire limpio y constante a una esterilizar material de laboratorio?
velocidad de paso de aire de 0,3 Los métodos más utilizados para
a 0,5 metros por segundo para esterilizar los materiales del
así barrer la superficie de la zona laboratorio son:
de trabajo y evitar la suspensión
de partículas así como una Esterilización por vapor
posible contaminación de las húmedo: Vapor a presiones
muestras. El aire es inyectado a superiores a la atmosfera se logra
la zona de trabajo a través de un en equipos denominados
filtro HEPA o ULPA e insuflado en autoclaves. Esta es usada para
forma de un flujo laminar o flujo realizar medios de cultivos y
unidireccional, muy suave, hacia soluciones a 121°C y 15Lb de
el usuario. presión por 15-20 min. El material
se deja durante este tiempo para
asegurar la destrucción de
esporas reconocidas como las
estructuras microbianas más 5.
resistentes al color, temperatura
mayores pueden destruir 1 MICROPIPETA 8 CABINA DE
componentes de los medios. FLUJO LAMINAR
2 ERLENMEYER 9 HORNO SECO
Esterilización por vapor seco:
El calor seco desnaturaliza las 3 TUBOS DE 10 PROBETA
enzimas y destruye los ENSAYO
microorganismos por oxidación, 4 PLANCHA DE 11 BEACKER
por ejemplo al ponerlos CALENTAMIENTO
directamente en la llama de un 5 AUTOCLAVE 12 PAPEL KRAF
mechero o en un horno a 110°C
durante 2 horas. Estos métodos 6 CAJA PETRI 13 PIPETEADOR
se aplican principalmente en la
esterilización de asa 7 PIPETA 14 MECHERO DE
GRADUADA BUSSEN
bacteriológica y material de
vidrios y quirúrgica.
6. ¿Cuál es la función de la
autoclave? Describa en un
diagrama los pasos más
importantes asociados a su uso.
La autoclave es un 7. Seleccione uno de los medios
recipiente de presión usados en la práctica. Describa
metálico de paredes paso a paso el método de
gruesas preparación (puede usar
ilustraciones), desde empezar
desde la manera como se
Que se utiliza como una determinó la cantidad a pesar.
medida elemental de
esterilización de material El medio de cultivo a preparar de
PDA:
Se realizan los cálculos previos
Su proceso involucra vapor para determinar la cantidad a
de agua a altas
utilizar.
temperaturas
20mL 0.02 L
Pesa PDA: 39 g/L
El material a esterilizar es 0.02 L x 39 g/L = 0.78 g
de uso gradable, se requiere
dos métodos de testificación
de la calidad de dicha
esterilización
Referencias
Colocar 0.78g del medio de
cultivo en polvo en el Erlenmeyer Microorganismos. Ecured.
y agregar agua destilada https://www.ecured.cu/Microorgani
Colocarlo en el calentador smo
agregarle un agitador magnético,
dejar ebullir; dejar reposar. La cámara de flujo
Colocar los materiales en la laminar. Escuela Técnica
autoclave y esterilizar a 121°C Superior de Ingeniería
durante 20 min. Agrícola. Universidad de Lérida.
Luego de dejar de reposar el https://es.wikipedia.org/wiki/Cabin
medio de cultivo PDA, agregarlos a_de_flujo_laminar.
a las caja Petri estéril. En cada
caja Petri vaciar Medios de cultivos: Metodologia y
aproximadamente 20mL. usos. 2013.
https://es.slideshare.net/WARAUYA
8. ¿Qué cantidad en gramos (g) de 20/medios-de-cultivos-metodologa-
agar nutritivo debo pesar, para y-usos
preparar 500 mL de medio?
NOTA: según las instrucciones
del fabricante por cada 1000 cm3
de agua se deben agregar 0.034
kg de agar nutritivo.
500mL 0.5L
1000cm3 1000mL
Conclusión
De acuerdo con lo realizado en la
presente práctica se puede
concluir que es de gran
importancia preparar y seguir el
procedimiento en la esterilización
y elaboración de los medios de
cultivos, añadir la cantidad de
solución exacta, para obtener los
resultados esperados.
