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JOURNAL OF BIOSCIENCE AND

BIOENGINEERING Vol. 97, No. 6, 347-364.
2004

Metodologías de scale-up para procesos de

fermentación de Escherichia coli y levaduras
BETH HELENE JUNKER1
Merck Research Laboratories, Bldg. 810-127, PO Box 2000, Rahway, NJ 07065, USA1

Recibido el 22 de agosto de 2003/Aceptado el 15 de marzo de 2004

Se han recopilado y revisado técnicas de ampliación de la literatura para su aplicabilidad a

los procesos de Escherichia coli y levadura. Se estableció la consistencia de los parámetros
de diseño y operación de los recipientes a escala piloto en una planta piloto de fermentación
existente, con un volumen nominal de 100 l a 19.000 l, y se comparó favorablemente con los
enfoques encontrados en la literatura. Se observaron diferencias en función de parámetros
como la escala del fermentador, la geometría del recipiente, el tipo/tamaño del agitador y la
potencia de entrada no gaseada/gaseada. Se realizaron análisis adicionales utilizando datos
reales de fermentación para procesos de desarrollo históricos y recientes recogidos durante un
período de 10 años, centrados en las condiciones de funcionamiento con tasas máximas de
absorción de oxígeno en el cultivo. Las estimaciones de la escala se formaron en base a la
similitud geométrica, la velocidad de la punta del agitador, la energía gaseada por unidad de
volumen y el tiempo de mezcla. En general, los cálculos de la escala de 280 l fueron más
similares a los parámetros de los equipos instalados. Escalado a partir de la escala de
laboratorio de 30 l, típicamente los parámetros no previstos, siendo el más apropiado el
escalado a partir de la escala de 280 l. La instalación del fermentador de 19.000 l fue
notablemente diferente en cuanto a la similitud geométrica de las escalas de 280 l-1900 l, ya que
su diseño fue concebido para acomodar una amplia gama de volúmenes de operación. Se
realizó un análisis del rendimiento histórico y reciente del proceso para las fermentaciones
bacterianas unicelulares o de levadura que dieron lugar a condiciones de funcionamiento
óptimas de los fermentadores. Se consideró que la identificación de los temas clave asociados
con la ampliación de la escala de estos recipientes de plantas piloto específicas era
fundamental para el desarrollo eficiente del proceso, la producción de material clínico y la
transferencia esperada del proceso a una instalación de fabricación.
Palabras clave: escalamiento, Escherichia coli, levadura, planta piloto, fermentador.

Van Brunt (1) ha abordado las preocupaciones generales bueno. Además, el papel de los estudios de reducción de
sobre el aumento de la escala del ADN recombinante. escala puede ser significativo para identificar y evaluar
Aunque las tres escalas principales para el desarrollo de problemas a gran escala (8-11).
bioprocesos son laboratorio, planta piloto y producción (2), Los factores biológicos afectados por la escala incluyen
Votruba y Sobotka han añadido a esta lista la escala del el número de generaciones asociadas con las fases de
vaso agitador (3). El ratio de escalado es típicamente de 1 : desarrollo y producción del inóculo, la probabilidad de
10 para procesos biotecnológicos de hasta 100.000 l (3), mutación, la vulnerabilidad a la contaminación, la
pero a menudo se han utilizado ratios más bajos de 1 : 5 formación de pellets y la presión de selección (8, 12). Los
para aumentar los niveles de confort (es decir, reducir el factores químicos afectados por la escala incluyen (i)
riesgo de un rendimiento inesperado en el escalado). Es agentes de control del pH (es decir, tipo y concentración de
probable que la escala de producción de muchos productos ácido y/o base), calidad del me-dium (es decir, pureza de
de ADN recombinante sea de unos 10.000 l, lo que los componentes) y calidad del agua (8); (ii) carbohidratos
tradicionalmente es una escala piloto para otros tipos de (es decir, aceite), nitrógeno (es decir, amoníaco), fósforo y
productos (4). La metodología exacta utilizada para la concentraciones del producto (6); (iii) formación de espuma
ampliación depende en gran medida de las condiciones del y redox po- tencial debido a cambios en la tensión
proceso y de la existencia de datos preliminares que superficial (3). Los factores físicos afectados por la escala
demuestren que el procedimiento elegido es aplicable (5). incluyen la configuración del tanque, la aireación, la
Algunos autores sostienen que el ambiente total (Young agitación, la contrapresión (y la presión hidrostática), la
6] acuñado este término para abarcar todas las variables esterilización del medio, el control de
químicas y físicas relacionadas con el caldo fermentador) temperatura/transferencia y remoción de calor, y la mezcla
de la célula debe ser considerado (6). Un catálogo completo (3, 8, 12).
de los factores afectados por la escala es detallado Hay un documento exhaustivo en el que se esbozan las ap-
extensamente por Reisman (7) con puntos clave que son se aproxima a la ampliación (13) e incluye comentarios de
enfatizados por otros autores (1-6) como varios otros autores sobre las implicaciones de las
tendencias generales de la ampliación. A menos que se
mantenga específicamente constante con el escalado al
e.m ail: Beth_Junker@[Link] fermentador más grande, el dióxido de carbono disuelto
teléfono: +1-732-594-7010 fax: +1-732-594-7698 (dCO2) es más alto en el recipiente más grande que en el
más pequeño debido a la presión adicional de la tapa, la
variación de la fuerza de cizallamiento es mayor.
347
348 J. BIOSCI.
BIOENG..,
más alta, y la mezcla a granel es menos eficiente debido a transferencia de genes. Para el escalado de la producción de
los tiempos de circuito más largos y a las regiones toyocamicina por un mutante sensible al cizallamiento de
estancadas más grandes (8). Además, para el recipiente más Streptomyces chrestomyceticus, no se pudo utilizar ni el
grande, la relación entre la altura del líquido y el diámetro método Pg/VL constante ni el método OTR constante, por
del tanque puede ser mayor, el gas se mueve hacia arriba
con una mezcla posterior más limitada, existen gradientes lo que el escalado se realizó a la velocidad de punta más
verticales de oxígeno disuelto (DO) si la mezcla a granel es baja posible para el recipiente más grande geométricamente
más lenta que las tasas de transferencia de masa, y surgen similar (20). Se encontró que los tiempos de mezcla y
gradientes radiales de DO debido a que la tasa de circulación eran más importantes que el uso de una tasa
cizallamiento disminuye rápidamente con la distancia desde constante de captación de oxígeno (OUR) para el escalado
el impulsor (14). Otras tendencias en el escalamiento en el de una fermentación de 2,3-butanodiol por aerógenos de
clúster disminuyen la relación superficie/volumen de Enterobacter en condiciones microaeróbicas en las que la
transferencia de calor, disminuyen la calidad de la mezcla, homogeneidad era importante (21). Aunque, en general, la
generalmente una mayor velocidad superficial del aire y una ampliación basada en el CO2 sería aún más factible a
menor fuerza de cizallamiento promedio, aunque las fuerzas medida que se disponga de sensores de CO2 más fiables
de cizallamiento máximas son mayores (14, 15). Además, si (16), la tasa de evolución específica del dióxido de carbono
se han seleccionado componentes del medio más baratos se sigue considerando útil para la ampliación de los cultivos
con composición variable para diferentes lotes a granel, de metabolitos secundarios (22).
puede aparecer un patrón de crecimiento auxótrofico El propósito de este documento es describir brevemente y
previamente inadvertido (15), pero esta ocurrencia es mini- evaluar-
mizada por el uso de un medio definido. La mayoría de las veces, se utilizan métodos y enfoques
Hay varias descripciones publicadas de estudios de que se pueden aplicar a los procesos de E. coli y levadura,
escalamiento. por ejemplo. El primer paso consistió en catalogar las
medidas características de los fermentadores de laboratorio
y algunos ejemplos interesantes son dignos de mención. La (escala 30 l) y de planta piloto (escala 100 l-19.000 l)
transferencia de oxígeno a menudo puede ser más (Tablas 1 y 2). A continuación, se calcularon y compararon
importante a escala debido a su baja solubilidad en medio los parámetros pertinentes en función de la escala basada en
(16). La clave para escalar usando una tasa de transferencia la geometría, la potencia de entrada por unidad de volumen,
de oxígeno constante (OTR) es la capacidad de medir con el caudal de gas y el tiempo de mezcla (Cuadros 3-5). Se
seguridad o estimar el coeficiente de transferencia de masa exploraron varios escenarios de escalamiento basados en el
volumétrica, KLa, y la potencia gaseada por unidad de mantenimiento de la similitud geométrica (Tabla 6), la
volumen de líquido, Pg/VL. Las correlaciones publicadas velocidad constante del impulsor (Tabla 7), y la entrada de
pueden generar errores significativos como en el ejemplo de energía constante por unidad de volumen de líquido (Tablas
los factores KLa para una fermentación de penicilina a 8 y 9). También se completó una comparación basada en el
escala comercial (17). La ampliación de la producción de estrés térmico medio durante la esterilización (Tabla 10). Se
bialafos por Streptomyces hygroscopicus basada en KLa y elaboró una lista de las condiciones de procesamiento
Pg/VL no tuvo éxito debido a los grandes gradientes de históricas y recientemente alcanzables (Cuadros 11 y 12), y
concentración de oxígeno en el fermentador (18). En este se cuantificó la relación de OUR con KLa y Pg/VL con
ejemplo, el cultivo no fue sensible a los cambios de KLa para varios procesos (Cuadro 13). En aras de la
velocidad de la punta del impulsor durante el escalado. El coherencia, todos los volúmenes citados en este texto son
escalado fue exitoso cuando el objetivo de DO en el volúmenes nominales de los recipientes (en lugar de
laboratorio se utilizó para controlar el DO del fermentador a volúmenes totales o de trabajo), a menos que se indique lo
gran escala, utilizando una sonda ubicada en la parte contrario. Se seleccionaron unidades para minimizar los
inferior del fermentador a gran escala. De manera similar, el errores de redondeo cuando fue posible.
síndrome de producción deteriorada (SUDS, por sus siglas
en inglés) se observó durante el aumento de la producción
de milbemicina por parte de S. hygroscopicus cuando se I. MÉTODOS Y ENFOQUES DE SCALE-UP
utilizó la tasa de agitación para controlar la DO, tal como se A continuación se describen varios métodos de escalado,
hizo en la pequeña escala (19). El síndrome de SUDS y los enfoques de escalado seleccionados se evaluaron
incluyó cambios morfológicos en el cultivo que afectaron utilizando dos escalas como base: la escala piloto de 280 l,
el volumen y la viscosidad de las células compactadas,
cambios en la captación de las fuentes de carbono y que es una escala común del fermentador de la planta piloto
disminución de la productividad. Se desarrolló una de primer paso, y la escala de laboratorio de 30 l, que es
estrategia alternativa de control de oxígeno utilizando la común utilizar para la yeguada de la planta pre-piloto
tasa de aireación, la contrapresión y la temperatura, además (laboratorio).
de la tasa de agitación, para mantener el rendimiento del
laboratorio al momento de la ampliación.
Otros ejemplos adicionales se centran en parámetros
distintos del óxido.

CUADRO 1. Características de los buques de laboratorio y de

práctico Anchu
Volumen ra del Max.
del tanque de recipie caudal de
Escala trabajo, Buque
(volumen Installed Max. Altura total del depósito nte, aire,
nominal) SOB
velocidad del power, agitador del RED
OSIS
motor, (tangent/tangent, con la parte ,
superior e inferior del

VL (l) (hp) Nmáx (rpm) (m) plato de Qmax (l/min)

Po HTT
abajo), DT (m)
HT (m)
VOL. 97, METODOLOGÍAS DE SCALE-UP PARA PROCESOS DE
30 l
2004 20 1 875 0.66 0.742 0.31 30
100 l 75 3 400 0.785 0.96 0,41 (ID) 120
280 l 180 7.5 460 1.12 1.34 0.56 300
800 l 600 7.5 330 1.63 2.08 0.81 600
1000 l 750 10 300 1.52 1.88 0,86 (ID) 1200
1200 l 900 15 282 1.83 2.185 0.92 1200
1900 l 1500 15 230 2.13 2.57 1.07 1500
19000 l 15000 60 155 5.87 6.58 1.98 15000
El fermentador de 280 l se diseñó originalmente con un motor de 3 hp que se amplió a 7,5 hp para facilitar su sustitución. OD, Diámetro exterior;
ID, Diámetro interior.
 CUADRO 2. Características de los impulsores a escala de laboratorio y planta piloto
Escala Tipo de Diámetro del Velocidad de la Número de
(volumen nominal) impulsor impulsor, punta del impulsores, NI
(superior/infe
rior) DI (m) impulsor,
nNmaxDI (m/s)
30 l Rushton 0.102 4.7 4
100 l Hidroala 0.184 3.8 2
A315
280 l Rushton 0.205 4.9 2
Hidroala 0.28 6.7 3
Maxflo T
800 l Rushton 0.305 5.4 2
Hidroala 0.406 7.2 2
Maxflo T
Hidroala 0.406 7.2 2
A315
Smith Arriba, 0.343 Arriba, 6.1 2
CD-6 MTB, 0,356 MTB, 6,3
Hidroala / Herrero Arriba, 0.406 Arriba, 7.2 2
Maxflo T/CD-6 MTB, 0,394 MTB, 7.0
HE-3/Smith Arriba, 0.533 Superior, 9.4 2
HE-3/CD-6 MTB, 0,394 MTB, 7.0
1000 l Rushton 0.305 4.8 2
Hidroala 0.37 5.8 2
A315
1200 l Hidroala 0.46 6.8 2
A315
1900 l Rushton 0.42 5.1 3
Hidroala 0.535 6.4 3
Maxflo T
19000 l Rushton 0.685 5.6 4
Hidroala 0.915 7.4 4
Maxflo T
Hidroala Superior/Medio, 7.6 3
0.94
A315 (MTB, 8.4) (MTB, 8.4)
Datos del impulsor para los impulsores superiores/inferiores. Unidades de longitud seleccionadas para minimizar los errores de redondeo.
Impulsor superior, impulsor superior; impulsor medio, impulsor central; impulsor Btm, impulsor bot- tom.

CUADRO 3. Comparaciones geométricas para fermentadores de laboratorio y a escala piloto

Escal H /D D /(V )1/3 en (l), Re× 106
a V VL/VT
(volumen nominal) TTT DI/DT T L L (agua)
(HTT/DT) semejanza geométrica
 30 l 2.4 0.33 (R) 1.14 en 20 0.48 (R) 0.57
(2.1)
100 l 2.4 0.45 (A) 0.97 en 75 0.71 (A) 0.75
(1.9)
280 l 2.4 0.36 (R) 0.99 a 180 1.0 (R) 0.60
(2.0) 0.5 (M) 1.9 (M)
800 l 2.6 0.38 (R) 0,96 a 600 1.6 (R) 0.704
(2.0) 0.5 (M) 2.9 (M)
0.5 (A) 2.9 (A)
1000 l 2.1 0.35 (R) 0.95 a 750 1.5 (R) 0.75
(1.7) 0.43 (A) 2.2 (A)
1200 l 2.4 0.5 (A) 0,95 a 900 3.1 (A) 0.75
(2.0)
1900 l 2.4 0.39 (R) 0,935 a 1500 2.1 (R) 0.79
(2.0) 0.5 (M) 0.96 a 1400 3.4 (M)
19000 l 3.3 0.346 (R) 0,80 a 15.000 3.8 (R) 0.79
(2.9) 0.462 (M) 0,95 a 9000 6.8 (M)
0.47 (A) 7.2 (A)
(MTB, (MTB,
0.56) 8.8)
VT es la capacidad total del tanque, no el volumen nominal. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315; Btm, impulsor inferior.

ies. Los detalles de algunos de estos buques y sus

impulsores han sido discutidos en otra parte (23-25). La La similitud geométrica de la geometría del
reactor[DT/VT)1/3 o (DT/VL)1/3] La similitud geométrica se expresa
Figura 1 muestra un ejemplo típico de como sigue:
diagrama del fermentador con las ubicaciones D /D = (V /V )1/3 (1)
clave identificadas.
T2 T1 T2 T1
350 J. BIOSCI.
BIOENG..,
donde DTi es el diámetro del tanque y VTi es el volumen Los fermentadores con una geometría estándar son
total del tanque, i. Alternativamente, se puede utilizar el
volumen de líquido, VLi. Asume una geometría del beneficiosos ya que varias correlaciones de escalamiento
impulsor razonablemente constante (es decir, diámetro del publicadas asumen que la geometría es constante (8). Sin
impulsor, DI y número de impulsores, NI) como se especifica embargo, los fermentadores de laboratorio pueden tener
relaciones HT/DT substancialmente más bajas de 1:1 en
a continuación. Basado en los volúmenes de trabajo/total
objetivo obtenidos a partir de la similitud geométrica (Tabla comparación con 3:1 para los fermentadores a escala piloto,
6), el volumen de trabajo deseado en el fermentador puede por lo que los datos a escala de laboratorio pueden ser
ser alterado durante la experimentación. engañosos (8). Los fermentadores a escala piloto y de
Experimentos para obtener datos de varias correlaciones producción más grandes pueden ser firmados para
empíricas. volúmenes de trabajo variables para acomodar el mayor
de los buques geométricamente similares. Aunque la rango de tamaños de lotes esperados en una instalación
similitud geométrica es un requisito previo para aplicar las multiuso.
relaciones de ampliación establecidas, en la práctica rara La Tabla 6 muestra los parámetros de escalado de los
vez se puede lograr (26, 27). Posteriormente, se propuso un volúmenes totales y de trabajo esperados calculados en base
rango de aceptación de equivalencia (26) para incluir lo a la simi-lidad geométrica. Para la escala de 280 l, los
siguiente: (i) DI/DT= 0.3- 0.45, donde DI/DT es la relación entre números calculados difieren drásticamente de los equipos
el diámetro del impulsor y el del tanque; (ii) HL/DT es instalados para las escalas de 30 l y 19.000 l, pero están
menor o igual a 2 (no se dio ningún rango), donde HL es la razonablemente cerca (entre el 2 y el 17%) entre las escalas de
altura del líquido en el recipiente; y 100 l y 1900 l. Aunque los valores esperados de 19.000 l
iii) dos o tres impulsores. Como se muestra en la Tabla 3, fueron inferiores en un 30-47%, el valor de 30 l fue
Los valores de DI/DT oscilaron entre 0,33 y 0,5 para todos los superior en un 46-55%. Para la base de escalado de 30 l,
buques de esta categoría. Específicamente, el rango fue de todos los números calculados fueron sustancialmente más
0.33-0.39 para los buques con impulsores de flujo radial bajos que los valores en el punto muerto en un 19-45%
Rushton (Lightnin, Avon, NY, EUA), 0.462-0.5 para los entre las escalas de 100 l y 1900 l y en un 52-65% para la
buques con impulsores de flujo axial Maxflo T (Chemineer, escala de 19.000 l. Las razones de estas diferencias fueron
Dayton, OH, EUA), y 0.43-0.56 para los buques con evidentes al comparar los valores del parámetro de similitud
impulsores de flujo axial A315 (Lightnin). En el caso de los geométrica, (DT/VL)1/3, listado en la Tabla 3. Los valores para
buques estudiados, las relaciones HT/DT oscilaron entre 2,1 y la escala de 100 l a 1900 l variaron de 0,935-0,99
3,3, donde HT es la altura total del tanque. El rango de la (promedio de 0,958 ± 0,019); los valores para los 30 l y
relación entre la altura del tanque tangente y la tangente y el 19.000 l
diámetro del tanque, HTT/DT (que se consideró más útil que
HL/DT para comparar ya que los volúmenes de trabajo del
fermentador pueden ser variables), fue de 1,7-2,9, con un
valor de 2,9 para el fermentador de 19.000 l muy por
encima del resto, que osciló entre 1,7-2,1. Todos los buques
tenían dos o tres impulsores, excepto dos de los tres de
19.000 l ves- sels (aquellos con impulsores Rushton y
Maxflo T) que tenían cuatro impulsores.

FIG. 2. Disminución del consumo de energía instalada, no gaseada y

FIG. 1. Esquema del fermentador que muestra la nomenclatura. no gaseada por unidad de volumen de trabajo en función de la escala
para los fermentadores en estudio en las condiciones de
funcionamiento enumeradas en la Tabla 1 y para las geometrías de los
impulsores enumeradas en la Tabla 2. Para todas las escalas, 1,7<
HTT/DT <2,9 y 1,0< Qmax/VL <1,67.
(a) Para geometría Rushton (R), 0,33 < DI/DT< 0,39, 4,7 < ITS < 5,6.
(b) Para la geometría del hidroala Maxflo T (M), 0,462< DI/DT< 0,5,
6,4<ITS< 7,4. Para geometría de flujo axial A315 (A), 0,43 < DI/DT<
0,56, 5,8 < ITS < 7,6.
 TABLA 4. Comparaciones de tiempo de mezcla, potencia de entrada y flujo de gas para fermentadores de
laboratorio y a escala piloto.
P /V Q /V Flujo de gas
Tiempo de Pg/VL en Superficial
mezcla,
Qmax
Escal De
Tfrom Diseño o
Tierra Nmax máx L velocidad del gas,
a
(volume (observad (vvm en número,
n
mez
o en el (observad funciona Vs =
NA =
clar Po/VL
nominal Ec. 10h (hp/1000 agua) o en el miento V /(nD 2),
4QmaxT
(s) agua) Qmax/Nm D3
) l) (hp/1000 l a rpm) min-1)
L
(cm/s)
(hp/1000 l a lpm) ax I
 30 l 3.4 50.0 NI NI 1.5 0.66 0.032 (R)
100 l 13.4 40.0 NI NI 1.6 1.5 0.050 (A)
280 l 20.1 41.7 23.9 en 450 (R) 18.8 en 300 (R) 1.67 2.0 0.078 (R)
18.9 en 450 (M) 16.7 en 300 (M) 0.030 (M)
800 l 29.2 12.5 15.0 en 335 10 a 600 (R) 1.0 2.0 0.063 (R)
12.5 en 300 (R)
16.3 en 335* 8,8 a 600 (M) 0.027 (M)
12.1 en 300 (M)
11.2 en 335 7,8 a 600 (A) 0.027 (A)
8.7 en 300 (A)
1000 l 30.9 13.3 7.7 en 300 (R) 4.3 en 1200 (R) 1.6 3.4 0.140 (R)
5.1 en 300 (A) 4,9 a 600 0.079 (A)
3,5 en 1200 (A)
4,6 a 600
1200 l 32.3 16.7 10.1 en 282 (A) 6,8 a las 1200 (A) 1.33 3.0 0.044 (A)
7,1 a 600
1900 l 36.2 10.0 13.9 en 225 (R) 6.8 a 1500 (R) 1.0 2.8 0.088 (R)
10.0 en 225 (M) 8.0 a 1500 (M) 0.043 (M)
19000 l 53.7 4.0 4.4 en 142 (R) 2,0 a 15000 (R) 1.0 8.1 0.300 (R)
4.4 en 150 (M) 4.1 a 15000 (M) 0.130 (M)
4.4 en 150 (A) 3.2 a 15000 (A) 0.120 (A)
Mediciones de potencia realizadas a 25°C en agua y a presión ambiente. Condiciones no aireadas que no se pueden mantener a la velocidad
máxima para ciertos vehículos marcados con un asterisco debido al sobrecalentamiento de la unidad. No hay dispositivos de medición de potencia
instalados en escalas de 30 l o 100 l. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, Dispositivo de medición de potencia no instalado.

CUADRO 5. Comparaciones de transferencia de masa para fermentadores de laboratorio y a escala piloto

Scale Medido (Po/VL )a (V s)b (Pg /VL )a (V s)b
en QmaxQmax/VLP
(V nominales /P en utilizando la ecuación 9a utilizando la ecuación 9a
(cm/s) (vvm, min-1)g o y 9b y 9b
volumen/denominación) Qmax y y diseño Po y se midió Pg
Nmax
30 l 0.66 1.5 NA 31.1 NI
100 l 1.5 1.6 NA 15.5 NI
280 l 2.0 1.67 0.79 (R) 19.4 11.3 (R)
0.88 (M) 10.5 (M)
800 l 2.0 1.0 0.67 (R) 8.6 7.4 (R)
0.54 (M) 6.8 (M)
0.70 (A) 6.3 (A)
1000 l 3.4 1.6 0.55 (R) 12.8 6.0 (R)
0.69 (A) 5.3 (A)
1200 l 3.0 1.33 0.67 (A) 13.8 7.5 (A)
1900 l 2.8 1.0 0.49 (R) 9.3 7.2 (R)
El fermentador de 1000 l de escala se utilizaba normalmente a 600 lpm en lugar0.80 (M)
de a 1200 lpm de caudal máximo de aire, que se 8.0utilizaba
(M) para
obtener l valores calculados y medidos.
19000los 8.1 La ecuación 9a1.0se usa para la escala0.45 (R)l y la ecuación 9b se
de 30 10.3usa para las escalas de6.5100(M) l-19.000 l.
Mediciones de potencia realizadas a 25°C en agua y a presión ambiente. No hay dispositivos
0.93 (M) de medición de potencia instalados en 10.4 (M) de 30 l
escalas
o 100 l. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, Dispositivo de medición de potencia no instalado. NA, Cálculo no aplicable.

fueron notablemente diferentes (más de 4,5-9,5 DE de la velocidad del impulsor y diámetro del impulsor para el
media). La operación del fermentador a escala de 19.000 l a buque i (8). La Tabla 2 muestra que las velocidades típicas
un volumen de trabajo inferior acerca su similitud instaladas en la punta del impulsor oscilaban entre los
geométrica al valor medio de los recipientes más pequeños. siguientes valores
La velocidad constante de la punta del 3,8 a 7,6 m/s sin tendencia clara observada con la escala,
impulsor (ITS) o shearITS se expresa como pero con los impulsores de hidroala (A315 y Maxflo T) el
aumento es de aproximadamente un 25-37% mayor que con
los im-pulsores de turbina de disco (Rushton) para la misma
escala de fermentador, debido principalmente a que sus
N2/N1 = = diámetros mayores.
T1/VT2 )1/3(2) La velocidad de la punta se utiliza como regla para el
DT1/DT2 (V escalado cuando no hay un
que asume que ITS= nNi DIi donde Ni y DIi son los im- buena comprensión de la relación entre cizallamiento y
morfología para cultivos miceliales. Una regla general Si los valores de la Tabla 7 se modificaron tarde, esto
aproximada es que el daño celular puede ocurrir a explica por qué los valores de 30 l y 19.000 l eran
velocidades de punta superiores a 3,2 m/s, pero el valor sustancialmente diferentes de los valores instalados y por
exacto está influenciado por muchos factores como la qué los valores de la base de escalado de 30 l no estaban
reología del caldo (28). Las velocidades calculadas de las
puntas suelen ser superiores a 3 m/s para los fermentadores también de acuerdo.
de producción (29) y oscilan entre 5 y 7 m/s según un Potencia de entrada constante no gaseada o
estudio de fermentadores industriales (Einsele, A., Abstr. (más a menudo) gaseada
5th Intern. Ferment. Symp., p. 69, 1976). Se encontró que por volumen de líquido (Po/VL o Pg/VL) Los diseños de
una velocidad de punta constante en el rango de 5-7 m/s se escalado también pueden incluir la entrada de energía sin
usaba para el escalamiento de fermentaciones antibióticas gas, Po, que se ex-presiona como
(Einsele, Abstr. 5th Intern. Ferment. Symp., 1976). Aunque = NP N 3DI5q(3)
Po
es útil en fermentaciones de levaduras ramificadas,
bacterias filamentosas y hongos para estimar el potencial de donde NP, el número de potencia, es un factor de
rotura de las hifas y, por lo tanto, la alteración de la proporcionalidad basado en el diseño del impulsor (entre
morfología del caldo, la velocidad de la punta es menos útil otros factores) y q es la densidad del caldo (8) que
para las fermentaciones bacterianas unicelulares o de normalmente se considera ligeramente superior a la del
levaduras. agua. El número de potencia generalmente se repite
Si el escalado se lleva a cabo utilizando una velocidad de constante con escalado si se utiliza el mismo tipo de
punta constante (con impulsor.
geométrica), el valor de Pg/VL suele ser bajo, lo que puede La potencia constante no gaseada, (Po/VL)i, para el
afectar negativamente a la eficiencia de la aireación. Es recipiente, i, se exprime como
posible recuperarse de esta deficiencia usando más impulso.
en el buque más grande y de esta manera puede ser pos- (P /V) /(P /V) = (V /V) )c o P /V = f V c (4)
sible para mantener constante tanto la velocidad de la punta o L2 o L1 L1 L2 o L 1L
como la Pg/VL (30). Consejo
influye en el cizallamiento del impulsor que es proporcional donde c fue encontrado ser -0.37 en la práctica basado en
al producto de la velocidad de la punta del impulsor y al una encuesta de plantas industriales de varias escalas y
diámetro del impulsor, NDI2, para condiciones de flujo procesos (Einsele, Abstr. 5th Intern. Ferment. Symp., 1976).
turbulento (29). Se puede aplicar una relación similar para las entradas de
Como se muestra en el Cuadro 7, para la escala de 280 l, energía gaseada. Los valores generales de Po/VL son de 1-3
hubo un acuerdo razonable (entre el 2 y el 24%) entre el kW/m3 (1,3-4 hp/1000 l) para buques de hasta 300 m3
volumen total y el volumen de trabajo real y el volumen (300.000 l) de volumen de trabajo (Einsele, Abstr. 5th
total previsto para las escalas de 280 l a 1.900 l, pero los Intern. Ferment. Symp., 1976), y una regla general es que
valores esperados fueron sustancialmente inferiores (58-
69%) en la escala de 19.000 l y manifiestamente superiores Po/VL es de 2-4 kW/m3 (2,7-5,4 hp/1000 l) a la escala de

(97-355%) en las escalas de 30 l y 100 l). Para la base de producción sin rango de volumen dado por Kossen y
escalado de 30 l, todos los valores estimados fueron Oosterhuis (29).
sustancialmente más bajos (40- 85%) que los valores Si el escalamiento se lleva a cabo utilizando Po/VL constante
con geo-
instalados, excepto para el buque de 100 l que fue similitud métrica, luego tiempo de circulación, tiempo de
sustancialmente más alto (131-175%) debido a su mayor
tasa de agitación pico. Ya que la similitud geométrica se mezcla e im-
usó para calcular-
TABLA 7. Escalado basado en la velocidad constante del
CUADRO 6. Ampliación basada en la similitud geométrica impulsor
a. Caso base 280 l (escala piloto)
a. Caso base 280 l (escala piloto)Escala Total Total Trabajando Trabajand
o
Escala Total Total Trabajando Trabajando (nominal volumen, volumen, volumen, volumen,
(nominal volumen, volumen, volumen, volumen, volumen) actual, que se actual, que se
espera, espera,
volumen) actual, que se actual, que se VT (l) VT (l) VL (l) VL (l)
espera, espera,
VT (l) VT (l) VL (l) VL (l) 30 l 35 69 20 42
30 l 35 51 20 31 100 l 100 455 75 274
100 l 100 117 75 71 280 l 299 Base 180 Base
280 l 299 Base 180 Base 800 l 852 754 600 454
800 l 852 905 600 545 1000 l 1000 1078 750 649
1000 l 1000 1100 750 661 1200 l 1271 1298 900 781
1200 l 1271 1304 900 785 1900 l 2044 2392 1500 1440
1900 l 2044 2086 1500 1256 19000 l 18887 7815 15000 4705
19000 l 18887 13216 15000 7956 b. Caso base 30 l (escala de laboratorio)
b. Caso base 30 l (escala de laboratorio) Escala Total Total Trabajan Trabajand
do o
Escala Total Total Trabajan Trabajand (nominal volumen volumen, volumen, volumen,
do o ,
(nominal volumen volumen, volumen, volumen, volumen) actual, que se actual, que se
, espera, espera,
volumen) actual, que se actual, que se VT (l) VT (l) VL (l) VL (l)
VT (l) espera, VL (l) espera, 30 l 35 Base 20 Base
30 l 35 VT
Base(l) 20 VL (l)
Base 100 l 100 231 75 132
100 l 100 81 75 46 280 l 299 152 180 87
280 l 299 206 180 118 800 l 852 382 600 218
800 l 852 624 600 357 1000 l 1000 547 750 312
1000 l 1000 758 750 433 1200 l 1271 658 900 376
1200 l 1271 900 900 514 1900 l 2044 1214 1500 693
1900 l 2044 1439 1500 822 19000 l18887 3965 15000 2266
19000 l 18887 9120 15000 5211 Relación: N /N = 2D1 /D = (V /V ) 1/ 3
= (V /V )1/3 (asume que
Relación: D /D =(V /V )1/3= (V /V )1/3. T1 T2 T1 T2 L2 L1
geo-
similitud métrica).
T2 T1 T2 T1 L2 L1
 La velocidad de la punta del peller aumenta (30), pero el CUADRO 8. Escalado basado en potencia constante por unidad
tamaño de los remolinos no cambia (29). El Po/VL requerido de volumen para los impulsores de flujo radial
para proporcionar un cierto OTR generalmente disminuye Rushton
con la escala (2). Ampliación sobre la base de a. Caso base 280 l (escala piloto)
Po/VL constante puede resultar en un tamaño de motor más
Escala Po/VL Po/VL Pg/VL Pg/VL
(volume medido en esperado a medido en esperado en
grande de lo necesario. Además, es difícil tener una alta Nmax Nmax Nmax y Nmax y
potencia por unidad de volumen de entrada a gran escala n
nominal) (hp/1000 (hp/1000 l) Qmax Qmax
(27) debido a las limitaciones prácticas. l)
(hp/1000 l) (hp/1000 l)
en el tamaño del motor.
Suponiendo recipientes geométricamente similares en 30 l42NI 53.9 NI .4
los que D /D
=(V T1 T2 100 l26
T2(5) y, a continuación, escalado a partir de 280 l de gas constante
/V )gas
1/3
sin
T1 23.9 Base 18.8 Base
o energía gaseada por unidad de volumen ( Po/VL o Pg/VL, respec-800 l 15.0 15.3 10.0 12.0
) se simplifica hasta 1000 l 1200 l 7.7 14.1 4.3 11.1
N /N = (V /V ) 2/9
(5) NA 13.2 NA 10.4
2 1 T 1 T21900 l 13.9 10.9 6.8 8.6
Esta expresión es muy similar a N2/N1 =(VT1/VT2)1/3 utilizada 19000 l 4.4 4.65 2.0 3.7
en oL
Tabla 7 que se derivó para la ampliación sobre la base de con-b . Caso base 30 l de CV instalado (escala de laboratorio)
velocidad de punta stant y similitud geométrica (5). Aunque la Escala P /V Po/VL
la influencia de la tasa de gasificación se incorpora al valor de (nominal mesurado esperado
Pg
volumen) en Nmax en Nmax
basado en mediciones o disminuciones esperadas de la pérdida
de potencia
al gasear, puede ser difícil dar cuenta con precisión de 1000 l137.7 (hp/1000 .1 l) (hp/1000 l)
la Como se puede
eficiencia del ver en (aireación).
gaseado la Tabla 4, Además,
los valores medidos
esta de
relación- 30 l NI Base
Pg/VL con las tasas máximas de aireación (Qmax) y 1200 l12NA .2
agitación (Nmax) para los volúmenes de trabajo declarados 1900 l1013.9 .1
oscilaron entre casi 19 hp/1000 l y 1.000 l. 19000 l44.4 .3
2 hp/1000 l, ya que la escala pasó de 280 l a 19.000 l. Relación: (V /V )0,37= (P /V) /(P /V) o (P /V) /(P /V) . Mea-
L1 L2 oL2 o L1 gL2 gL1
Los valores medidos de Po/VL fueron más altos que los de Po y Pg utilizados en los cálculos, excepto para el caso base de 30 l, en
Pg/VL debido a la disminución de la potencia al gasear, y el que se utilizó un valor instalado para Po de 1 hp. NI, Dispositivo de
medición de potencia no instalado. NA, Cálculo no aplicable.
la relación de Pg/Po varió según el tipo de impulsor, la
escala del fermentador y la geometría del sparger/impulsor
(Tabla 5; 24). Las tablas 8a (para los impulsores de flujo CUADRO 9. Escalado basado en potencia constante por unidad
radial Rushton) y 9 (para los impulsores de flujo axial de de volumen para impulsores de flujo axial
hidroala Maxflo T y A315) muestran que el escalado hidroala
basado en los valores medidos de Po/VL y Pg/VL coincidió
razonablemente bien (dentro del 26%) con los valores Caso base 280 l (escala piloto)
esperados para las escalas de 800 l, 1900 l y 19.000 l. La Escala Po/VL Po/VL Pg/VL Pg/VL
excepción notable fue la escala de 19.000 l con impulsores (nominal mesurado esperado medido a se espera
Rushton, en la que el valor esperado era superior en un 85% en
al valor medido. Los valores esperados para los volumen) en Nmax en Nmax Nmax y Nmax y
fermentadores de 1000 l y 1200 l fueron notablemente (hp/1000 l) (hp/1000 l) Qmax Qmax
superiores en un 83-180% debido a que el Pg/VL medido (hp/1000 l) (hp/1000 l)
es inferior al típico para este recipiente de escala (en 30 l NI 42.6 NI 37.7
comparación con la potencia del motor instalado). Los 100 l NI 26.1 NI 23.1
valores medidos para las escalas de 30 l y 100 l no pudieron 280 l 18.9 (M) Base 16.7 (M) Base
ser comparados ya que no se instaló ningún dispositivo de 800 l 16.3 (M) 12.1 8.8 (M) 10.7
medición de potencia. 11.2 (A) 7.8 (A)
La Tabla 8b muestra el uso de los valores instalados para a favor de 1000 l 5.1 (A) 11.2 3.5 (A) 9.8
Po/VL 1200 l 10.1 (A) 10.4 6.8 (A) 9.2
el fermentador de 30 l como base para el escalado. La 1900 l 10.0
0,37=(M)
concordancia de los valores esperados y reales dentro de un Relación: (V /V ) (P /V) /(P /V) o (P /V) /(P /V) . Mea- 7.6
8.6 8.0 (M)
19000 l 4.4 (M) 3.7 4.1 (M) 3.3
30% fue evidente para todas las escalas, excepto para la
escala de 1000 l, que fue mayor en
L1 L2 oL2 o L1 gL2 gL1
70%. Tomando como base la escala de 1000 l (datos no Po y Pg utilizados en los cálculos. M, Maxflo T; A, A, A315.
mostrados), los valores esperados fueron inferiores para
todas las escalas en al menos un 40%, una tendencia que Para las condiciones máximas de funcionamiento de la
también se debe a que el Pg/VL medido es inferior al agitación (Tabla 1), el 106
número de impulsores de Reynold
típico. osciló entre 0,48-8,8 × para agua (o para E. coli de una
Número de impulsor similar de Reynold (NRe) sola célula y caldos de levadura con viscosidades similares
Ampliación
se puede lograr en base a un impulsor constante de Reynold. a las del agua), lo que sugiere que para los caldos
número, NRe: filamentosos con un flujo de viscosidades más alto, el flujo
puede cambiar de turbu-prestado a laminar. El uso de un
NRe = qNDI2/4(6) número constante de genes de Reynolds no ha funcionado
donde 4 es la viscosidad del caldo (8, 31). Para el mismo bien para el escalado de la fermentación, ya que no se
caldo, esta expresión se simplifica a incorporó el efecto de la aireación en el proceso (2), y el
número de impulsores de Reynolds generalmente aumenta
N2/N1 = (DI1/DI2)2 (7) para diseños de escalado exitosos (26). Otro sin dimensión
 CUADRO 10. Comparación de los tiempos típicos de calentamiento, mantenimiento y enfriamiento, así
como de los valores de Fo y Ro para esterilizaciones medias en función de la
escala.
Calentar arribaCalentar Sostén Enfriamiento
Escala (volumentype) revestimiento arribaSostener
nominal/tiempo de
tiempo moment Enfriamiento
tiempohacia abajoFoRo
totaltotal
(área%) (área%)
o
(min) (min) (área%) (min) (min) (min)
100 l (hoyuelo, presilla de la 29 24.3 40 65.5 18.6 10.2 75.0 61.6
chaqueta)
280 l (recto) 15.5– 15–16 40 74.9 26–29.4 9.6 74.9 57.0
16.2
800 l (hoyuelo) 20–21 13–15.6 45 74.3– 17.7–18.6 8.2–10.0 73.7 63.6
78.6
1000 l (hoyuelo, presilla de la 34–38 19–20 45 70–71 27–27.5 9–10 108.8 74.1
camisa)
1200 l (bobina de media tubería) 24–30 19–22 45 65–66 33–35 12–14.5 85.4 66.2
1900 l (bobina de media tubería) 35–42 24–27 45 61.8– 30–32 11–13 86.7 72.8
63.3
19000 l (bobina de media tubería) 83–88 37 45 46.4 95–110 16.4 91.2 86.6
Temperatura de conservación del medio de 123,5°C para la esterilización por lotes. Mantener temperaturas de 124°C para 1000 l y 123°C para la
escala de 100 l. Valores de Fo y Ro calculados según Junker et al. (38). Sólo se incluyeron en la suma las temperaturas superiores a 60°C. Tiempos
de calentamiento y enfriamiento calculados a partir de 40°C. Un buque de escala de 19.000 l utilizó agua de torre de refrigeración para enfriar y no
para agua refrigerada. Área% es el área bajo la curva de temperatura versus tiempo para la etapa dividida por el área total. Porcentajes de área de
calentamiento y enfriamiento calculados para temperaturas superiores a 60°C.

También se ha examinado la posibilidad de ampliar la pero principalmente entre la escala piloto y las etapas de
escala de los grupos con un éxito limitado, lo que a menudo producción. Más comúnmente cuando la potencia se cambia
ha dado lugar a que el equipo y los parámetros de sólo aumentando la velocidad de agitación, entonces la
funcionamiento no sean realistas desde el punto de vista Ecuación 9c se simplifica a
técnico. Como es difícil mantener constantes todos los
parámetros sin dimensiones en el momento de la KLa = f2(Pg/VL)0,50 para los buques de producción (33)
ampliación, se deben identificar con precisión los más (9d)
importantes para el proceso.
Tasa de captación de oxígeno constante (OUR), En los fermentadores a escala de laboratorio donde las
coeficiente de transferencia de masa (KLa) u oxígeno mediciones de Pg/VL son difíciles de obtener con precisión,
disuelto (DO) La escala basada en OUR constante se pueden utilizar los componentes clave del número de
supone que OUR es igual a OTR: potencia (N, DI):
K a = f (N 3D 2)0,42 para recipientes de laboratorio (34)
(9e)
L 2 I

OTR = KLa(Csat - CL) = OUR = µX/YX/O2(8) donde, aunque el exponente de 0,42 se estableció para un
donde Csat es la concentración de DO del caldo en la volumen de trabajo de 0,6 l, el rango de la literatura es de
saturación, CL es la concentración de DO del caldo medida, 0,16-0,68. Dado que, por lo general, son más aplicables en
µ es la tasa de crecimiento específica, X es la densidad las conexiones utilizadas para determinar los exponentes o
celular medida y YX/O2 es el rendimiento celular calculado cerca de ellas, la mejor manera de utilizar estas
por cantidad de oxígeno consumido (32). Los cambios en la correlaciones es sólo como orientación cualitativa en los
contrapresión y la presión hidrostática con escalado cálculos de escalado (28).
influyen en los valores de Csat (y posteriormente de CL). Como se muestra en la Tabla 5, los valores calculados de
También es posible utilizar la media de registro de la (Pg/VL)aVsb usando valores medidos de Pg/VL y la Ecuación
diferencia de concentración de oxígeno. Dado que para la 9a y 9b son razonablemente similares (promedio[ave]: 7,8 ±
mayoría de las fermentaciones aeróbicas la concentración 1,9; desviación relativa del dardo estancado[rsd]: 24%) de las
crítica de oxígeno que afecta negativamente a la tasa de escalas de 280 l a 19.000 l (180 l - 15.000 l de volumen de
crecimiento es muy baja, se supone que CL es cero. trabajo). Cuando los valores de cálculo de
Varias correlaciones de la forma general P /V se utilizan, valores mucho más altos de (P /V ) aV b son
ob-
o L g L s
K a = f (P /V ) aV b (9) de la forma esperada, siendo los valores razonablemente
similares
L 2 g L s Ecuación 9a-c son volúmenes de operación. Para estas
existen para estimar KLa utilizando la potencia gaseada por correlaciones, la dependencia de KLa de Pg/VL es menor a
volumen de líquido, Pg/VL, y la velocidad superficial del medida que aumenta la escala del vaso (es decir, el
gas, Vs, para las fermentaciones (similar a la correlación de exponente disminuye). Simi-larmente, la dependencia de
Van Riet para la transferencia de masa): KLa de Vs. también disminuye en
KLa = f2(Pg/VL)0.95V
s
0.67

para los recipientes a escala de laboratorio (8 l) (5)

(9a)
KLa = f2(Pg/VL)0.67V
s
0.67V

para los buques de escala piloto (400 l) (5) (9b)

KLa = f2(Pg/VL)0,50V
s
0,50V

para recipientes de producción (23.000 l-46.000 l)

(5) (9c)
donde f2 es una constante de proporcionalidad en todas las
ecuaciones cuyo valor varía dependiendo del proceso
específico y de las unidades de KLa, Pg/VL y Vs utilizadas
en los cálculos. Todos los volúmenes citados en la
(ave: 11,0 ± 2,2; rsd: 20%) de las escalas de 800 l a 19.000 aproximadamente con la inversa de la viscosidad aparente del
l y mucho mayor por debajo de la escala de 800 l caldo (15). La aireación de la superficie puede ser un factor
(volumen de trabajo de 600 l). Sólo una fracción de estos importante para los fermentadores de menor escala,
valores de diseño puede ser entregada al caldo de específicamente alrededor del 33% para los recipientes de 5
fermentación con la cantidad dependiendo de la geometría litros y alrededor del 10% para los de 50 litros (15). Los
del recipiente/agitador, la reología, la velocidad del fermentadores a escala piloto de menos de 250 l de volumen
agitador y la velocidad superficial (28). suelen tener una aireación superficial significativa en
A partir de un estudio de fermentadores industriales de comparación con los recipientes a gran escala, por lo que, en
hasta 100.000 l de volumen, los valores de KLa oscilaron general, es mejor escalar a partir de recipientes más grandes
entre 400 y 800 h-1 (Einsele, Abstr. 5th Intern. Ferment. de unos 500 l-1000 l (8). La aireación de la superficie
Symp., 1976). Los valores de KLa obtenidos en las Tablas 11 disminuye notablemente con la escala (27); por lo tanto, para
y 12 están generalmente dentro de este rango asumiendo una los buques más grandes, los valores de KLa pueden ser más
constante de la ley de Henry de 1 mmol/l-atm. La KLa varía fácilmente interpolados. La ampliación basada en KLa se
complica por el hecho de que
 CUADRO 11a. Comparación histórica representativa (de 1992 a mediados de 2001) de las condiciones de procesamiento alcanzables
en función de la escala para los cultivos de
E. coli
Pico de
Fermentación Flujo de Rodete Gaseado Calculada Valor de f2
oxígeno
aire
Cultivo/Evacuación de escalofríos tasa de Presión velocida poder, Pg/VL KLa en utilizando la
(l)
interés, d, Ecuación 9b
(volume) tasa Q (kg/cm2) N P (hp/1000 ) pico OUR K a/[(P /V )0,67
nominal g l L gL
(tipo de impulsor) (mmol/l-h-h-atm)×(V )0,67] s
(mmol/l-h) (l/min) (rpm) (hp)
E. coli DH5/280 l 180 (R) 260 300 1.8 400 NI NI 685 NA
E. coli DH5/280 l 150 (M) 172 190 1.25 400 NI NI 624 NA
E. coli PF436/280 l 175 (M) 65 80 0.6 383 NI NI 346 NA
E. coli RR1/280 l 160 (M) 77 80 0.3 409 NI NI 472 NA
E. coli OP50/280 l 175 (R) 39 100 0.5 213 NI NI 186 NA
E coli K12/800 l 605 (M) 94 400 0.7 287 6.3 10.4 434 76
E. coli DH5/1000 l 600 (M) 141 600 1.0 300 4.1 6.8 738 143
E. coli PF436/1900 l 800 (M) 38 400 0.7 178 5.6 7.0 167 55
E. coli RR1/1900 l 760 (M) 95 450 0.3 229 11.2 14.7 596 111
E. coli OP50/1900 l 810 (R) 49 500 0.7 125 2.7 3.3 303 143
E. coli Polym./1900 l 1080 (M) 101 600 1.2 225 9.0 8.3 486 110
P. aeruginosa/1900 l 1200 (M) 47 510 0.3 132 7.4 6.2 186 57
Los valores en negrita están a/cerca (dentro del 20%) de las condiciones máximas para esa escala en particular. R, Rushton; M, Maxflo T; A,
A315. NI, No se ha instalado el dispositivo de medición de potencia. NA, Cálculo no aplicable.

CUADRO 11b. Comparación histórica representativa (de 1992 a mediados de 2001) de las condiciones de
procesamiento alcanzables en función de la escala de los cultivos de levadura.
Fermentació Presión Pg/VL
Pico de Caudal (kg/cm2 Velocid Energí (hp/1000 l) Calculada Valor de f2
Cultivo/Escala n de aire, ) ad del a KLa en utilizando la
(volumen oxígeno Q
nominal) volumen (l) de consumo impulso gasead pico OUR Ecuación 9b
proporción r, a, K a/[(P /V )0,67
N P
×
g Lg L
(tipo de impulsor) (mmol/l-h) (l/min (rpm) (mmol/l-h-h- (Vs 0.67]
(hp)
) atm) )
 C. sorbophila/280 l 150 (R) 54 100 0.7 223 NI NI 226 NA
C. chilensis/280 l 180 (R) 141 180 1.5 400 NI NI 297 NA
S. cerevisiae QC2B/280 l 180 (R) 74 80 0.7 354 NI NI 350 NA
S. cerevisiae 1375/280 l 180 (R) 64 90 0.5 315 NI NI 324 NA
C. sorbophila/800 l 475 (R) 105 505 0.7 320 >7.5* >15.8 465 NA
475 (M) 90 475 0.7 286 >7.5* >15.8 386 NA
C. chilensis/800 l 600 (R) 106 335 1.2 245 4.2 7.7 325 77
500 (M) 117 490 1.7 220 3.2 7.0 318 62
S. cerevisiae QC2B/800 l 570 (M) 93 220 0.7 265 2.4 4.2 463 218
S. cerevisiae 1375/800 l 530 (R) 63 250 0.5 266 5.2 9.8 344 84
S. cerevisiae 1375/1000 l 600 (M) 60 400 0.34 308 4.2 7.0 844 211
C. chilensis/1900 l 1500 (M) 49 530 0.83 175 3.1 2.1 252 155
S. cerevisiae 1375/1900 l 1400 (M) 53 700 0.5 173 5.5 3.9 264 89
Los valores en negrita están a/cerca (dentro del 20%) de las condiciones máximas. Los valores marcados con un asterisco indican lecturas de
medición de potencia saturada. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, No se ha instalado el dispositivo de medición de potencia. NA, Cálculo no
aplicable.

que es específico del proceso y que cambia a lo largo de la

fermentación (35), lo que dificulta la verificación fiable. El número de flujo de gas constante (NA), la tasa de flujo
Alternativamente, se puede determinar un valor óptimo de gas volumétrico por unidad de volumen de líquido (vvm
para la CL a partir de estudios de laboratorio y utilizarlo para o Q/VL), o la escala de velocidad superfi cial (Vs) también
la ampliación (2). La ecuación 8 se puede reordenar para se puede realizar en base al número de flujo (aireación),
calcular los valores de KLa durante la fermentación a NA= Q/NDI3, donde Q es la tasa de flujo volumétrico. Un

diferentes edades. La ampliación basada en un DO rango típico para el número de flujo de los fermentadores
constante puede ser un método atractivo. Aunque KLa y de producción es de 0,1-0,15 (29), que se compara
OUR pueden cambiar dramáticamente en el transcurso de la favorablemente con los valores de 0,12-0,13 para los
fermentación, el valor mínimo aceptable de CL se conoce hornos de 19.000 l con impulsores de hidroala y es mucho
generalmente a partir de estudios de laboratorio. Una CL por más bajo que el valor de 0,3 obtenido para el fermentador
de 19.000 l con un impulsor de Rushton (Tabla 4). Los
encima del 30-70% de saturación suele asegurar una DO números de aireación para otros buques de escala piloto
adecuada en regiones menos mezcladas de una (100 l-1900 l) oscilaron entre 0,027-0,14 con un número de
fermentación micelial vis- cous; para una fermentación aireación de 0,032 obtenido para el buque laboratorio de 30
menos viscosa de E. coli o levadura, una CL por encima de l (Tabla 4).
un límite inferior de 10-30% de sat-uration puede ser Escalado basado en la tasa de flujo de gas volumétrico por
adecuada. El escalado basado en un DO constante debe unidad
considerar el escalado de métodos para controlar el DO, El volumen de líquido (Q/VL o vvm) también debe ser
tales como la agitación, la presión y el caudal de aire (19). examinado para asegurar que los valores resultantes de la
El control en cascada del oxígeno por agitación, presión y velocidad superficial sean re-seleccionables. Para un
caudal de aire puede ser eficaz para mantener el oxígeno proceso específico, se debe lograr un equilibrio. Si el caudal
por encima de los valores críticos (35). de gas volumétrico por unidad de volumen de líquido,
Q/VL, permanece constante en el momento de la
ampliación, entonces las Vs pueden aumentar hasta el punto
de inundarse en los tanques a escala de producción (2).
Simi-
CUADRO 12a. Comparación de las condiciones de procesamiento típicas alcanzables recientes (mediados de 2001 a 2002) en función de la escala de
Flujo de E. coli
los cultivos
Rodete Gaseado Calculada Valor de f2
Scale Fermentation máximo
, de aire
(nominal volumen (lOURrate Presión velocidad de Pg/VL KLa en utilizando la
Q , energía Ecuación 9b
volume) (tipo devolume) impulsor)(mmol/l-h) (kg/cm2) N Pg (hp/1000 l) pico OUR KLa/[(Pg/V L
)0,67
(l/min) (rpm) (hp) (mmol/l-h-h- ×(V s
)0.67
]
atm)
280 l 180 (R) 155 300 1.2 460 3.25 18.1 572 51
180 (M) 158 300 1.2 460 3.4 18.9 475 41
800 l 600 (R) 142 500 1.4 330 9.2 15.3 391 46
600 (M) 115 500 1.5 330 9.2 15.3 354 42
600 (A) 126 470 1.5 330 6.2 10.3 330 40
600 (HE) 127 500 1.2 338 8.6 14.3 393 48
600 (MC) 124 500 1.2 338 9.0 15.0 364 40
600 (CC) 136 500 1.25 330 7.2 12.0 527 70
Los l
1200valores 900están
en negrita (A) a/cerca (dentro
116 del 20%)1200 1.3
de las condiciones 280 para esa5.5
máximas 6.1
escala. R, Rushton; 296 T; A, A315; HE,
M, Maxflo 42 HE-
1900 l T; MC, Maxflo
3/Maxflo 1500 (R) 96
T/CD-6; CC, CD-6/CD-6. 1500 1.0 230 11.4 7.6 354 46

CUADRO 12b. Comparación de las condiciones de procesamiento típicas alcanzables recientemente (mediados de 2001 a 2002) en función de la
escala de los cultivos de levadura
oxígeno Flujo de Rodete Gaseado Calculada Valor de f2
Scale FermentaciónPico de
de absorción
(nominal volumen (l) aire Presión velocidad poder, Pg/VL KLa en utilizando la
g tasa de , Ecuación
L g
9b
interés,
proporción Q (kg/cm2) N P (hp/1000 l) pico OUR K a/[(P /VL )0,67
volume) (Tipo devolume) impulsor) (l/min) (rpm) (hp) (mmol/l-h-h- ×(V s)0.67]
(mmol/l-h)
atm)
280 l180(M) 98 235 1.0 338 1.7 9.6 430 69
800 l600(R) 93 500 0.7 325 7.7 12.8 453 60
500(M) 97 268 1.1 276 5.0 9.9 490 114
600(A) 82 500 0.7 327 5.0 8.3 577 101
600(MC) 92 500 0.7 271 4.6 7.7 461 85
1200 l 900 (A) 94 1000 1.1 226 2.8 3.1 390 99
1900 l 1500 (R) 79 925 0.97 172 5.0 3.3 385 120
Los valores en negrita están
1500 (M)a/cerca (dentro
88 del 20%)980
de las condiciones
0.97 máximas
170 para esa6.0
escala. R, Rushton;
4.0 M, Maxflo
450 T; A, A315; HE,
119 HE-
3/Maxflo
19000 l T; MC, Maxflo
14600 T/CD-6;
(M) CC, CD-6/CD-6.
78 7800 0.89 96 16.2 1.1 380 136

En particular, si se desea mantener constante Vs al escalar, se logra manteniendo los tiempos de mezcla estimados.
entonces los valores mayores de Q/VL deben ser
implementados en la escala menor (36). Los valores típicos Varias relaciones han sido derivadas o desarrolladas
de Q/VL van de 1,67 a 1,0, y los valores generalmente empíricamente
disminuyen en la escala mayor (Tabla 4). Aunque el caudal Tmix = f3VL0.3(10a)
de aire volumétrico tiene relativamente poco efecto sobre el
valor de KLa, los caudales de aire más altos pueden causar de un estudio de fermentadores industriales de 50 l a
una formación de espuma dramática (27) y una mayor 100.000 l de volumen (26; Einsele, Abstr. 5th Intern.
retención de gas en el fermentador. Si la velocidad Ferment. Symp., 1976) y
superficial, Vs, y Pg/VL son constantes, la retención de gas
no cambia con el escalado (29). La inundación ocurre cuando Tmix = f3(Pg/VL)-0.37 (10b)
la velocidad del aire superficial, Vs, se aproxima al 25-50% para un proceso de tetraciclina de hasta 52.000 l de
de la velocidad de elevación de la burbuja, ya que el volumen (Einsele, Abstr. 5th Intern. Ferment. Symp., 1976),
volumen de retención de gas del fermentador sólo puede ser donde k es una constante de proporcionalidad en ambas
de aproximadamente el 20% o menos (15). En el caso del ecuaciones. Para recipientes geométricamente similares en
agua con una elevación media de burbuja de 22 cm/s, la la región de flujo turbulento:
inundación se produce a una velocidad de 5-10 cm/s (15).
Cuando
Si se produce una inundación, el impulsor no puede
dispersar todo el gas absorbido, el gas sube en forma de Me N2/3DI-1/6 = constante (5) (10c)
grandes burbujas a la superficie del líquido. zcl
a
y la acción de bombeo del impulsor disminuye (2). Como Por lo tanto, resolver la ecuación 10c suponiendo tiempos
se muestra en la Tabla 5, los rangos de Vs oscilan entre 0.66- de mezcla iguales da como resultado la ecuación 10d (5):
3.4 cm/s para los buques de entre 30 l y 1900 l de volumen
total, saltando a 8.1 cm/s para la escala de 19,000 l. Según N2/N1 = (DI2/DI1)1/4 (10d)
estas directrices, es posible que las condiciones Qmax de la y las correspondientes entradas de potencia vienen dadas
escala de 19.000 l sean propensas a las inundaciones. Tenga por la Ecuación 10e (5):
en cuenta que las inundaciones también pueden ocurrir a
bajas velocidades de agitación.
2
con un caudal de aire demasiado alto para (P /V) /(P /V) = (N )/(N 3D 2) (10e)
todas las básculas. 3D
oL2 oL1 2I2 1 I1
Mezcla constantetime Alternativamente, el
escalado puede ser
Para recipientes geométricamente similares en la región de
flujo turbulento donde tanto el Po/VL como el tiempo de
mezcla son constantes, la Ecuación 10e se convierte en (12)
N1/N2 = (DI2/DI1)2/3 (10f)
La potencia de entrada volumétrica necesaria para mantener
el mismo tiempo de mezcla aumenta a medida que aumenta
la VL2/3. Por lo tanto, usando la relación de la Ecuación
10f, Pg/VL puede llegar a ser prohibitivamente alta en el
momento de la escalada y por lo general se sobreestima.
Esta técnica generalmente no ha funcionado bien para las
fermentaciones (2).
También se ha propuesto un índice de mezcla, Im (7), que
no supone una similitud geométrica:
Im = f3(ITS)(DT/HT)(DT)-2/3 (10g)
Esta expresión puede ser particularmente útil para la
ampliación de buques ya construidos en los que puede no FIG. 3. Regresión lineal de los tiempos de mezcla de la literatura
haberse mantenido la similitud geométrica. Es necesario (ecuación 10h) reajustados para laboratorio, escala piloto y procesos
evaluar los tiempos de mezcla en relación con las tasas de de producción (4, 14, 20).
transferencia de masa de nutrientes para los cultivos
alimentados por lotes en presencia de la absorción de portado (14). Por último, se han registrado tiempos de
nutrientes celulares. Para un cultivo (no especificado pero mezcla de 15 s para 120 l, 40 s para 1200 l y 60 s para
que probablemente sea una levadura) con una densidad 12.000 l (20). Estos tiempos de mezcla fueron reportados
celular de 20 g/l que crece a una velocidad de 0,2 h-1 tanto para los fluidos/caldos Newtonianos como para los no
(tiempo de duplicación de 3,5 h), si el DO ( CL) está saturado Newtonianos.
al 20%, el oxígeno en el caldo se agotaría en 2,5 s (32). En Estas estimaciones de tiempo de mezcla pueden ser
el caso de que la glucosa fuera el nutriente limitante, la graficadas (Fig. 3). La regresión lineal de estos puntos de
glucosa podría agotarse tan rápido como 4,5 s (32). datos disponibles a partir de la literatura da como resultado
Tiempos de mezcla más largos pueden causar localmente la ecuación
altas tasas de glucosa, lo que a su vez puede causar Me = 17.5 (VL) - 19,4
localmente una baja concentración de DO
debido a un mayor metabolismo celular. Como zcl log10
consecuencia,
a
pueden resultar áreas locales de fermentaciones mixtas de (10 l a 60.000 l, r2 =0.876) (10h)
E. coli ácida, produciendo menores rendimientos de
biomasa al escalar (9). Por lo tanto, el escalamiento basado Tmix = 223.5 log10(VL) - 1004.6
en el tiempo de mezcla puede ser relevante para los cultivos (60.000 l a 120.000 l, r2 = 0,902) (10i)
de E. coli y levadura alimentados por lotes, especialmente a
altas densidades celulares. donde Tmix es el tiempo de mezcla en segundos y VL es el
El análisis de tiempo de característica anterior puede volumen de trabajo del líquido en litros. Claramente, el
ampliarse y dividirse en tiempos de característica para aumento del tiempo de mezcla con el volumen es más
fenómenos de transporte (transferencia o suministro) y pronunciado una vez que el volumen de trabajo está por
tiempos de característica para tasas de conversión (consumo encima de los 60.000 l. Se utilizó la ecuación 10 h para
o reacción) (11). Los fenómenos de transporte incluyen la estimar los tiempos de mezcla para cada escala de
transferencia de oxígeno (incluyendo la transferencia de fermentador existente (Tabla 4). Las magnitudes relativas
oxígeno desde la burbuja de gas al líquido), la circulación de estos tiempos pueden compararse con las obtenidas a
de líquido, la residencia de gas y la transferencia de calor. partir de los tiempos estimados utilizando la ecuación 10a y
Las tasas de conversión incluyen las tasas cero y de primer 10b como suma de la constante de proporcionalidad, f3, que
orden para el consumo de oxígeno y sustrato, el crecimiento permanece constante con la escala.
celular y la producción de calor. Otras influencias Después de implementar las estrategias
Puede ser importante comparar el consumo de nutrientes iniciales descritas anteriormente, el diseño del recipiente
y las tasas de transferencia entre sí, así como con los resultante necesita considerar otras influencias para asegurar
tiempos de circulación, para establecer si es probable que un rendimiento óptimo.
existan gradientes (11). Específicamente, para la Tasas de transferencia de calor La evolución del calor
fermentación del ácido glucónico en un tanque agitado por es la combinación del calor mecánico del agitador y del
un cultivo de hongos, la limitación de oxígeno puede calor metabólico del cultivo. La relación entre la evolución
ocurrir si las tasas de absorción y transferencia son del calor metabólico y el consumo de oxígeno es de
similares en magnitud. Si los tiempos de circulación del aproximadamente 115 kcal de calor por mol de oxígeno
líquido también son del mismo orden de magnitud, consumido en cultivos seleccionados de E. coli, levaduras y
entonces se favorecen los gradientes de oxígeno. Por el hongos (32, 37). La cantidad total de oxígeno sumada por el
contrario, es menos probable que se produzcan gradientes cultivo puede estimarse mediante la integración del valor
de temperatura ya que, aunque las tasas de transferencia y OUR versus la curva de tiempo y luego multiplicarla por el
de producción de calor son similares, a menudo son volumen de trabajo del tanque. El coeficiente de
sustancialmente mayores que los tiempos de circulación de transferencia de calor deseado y el área de la camisa pueden
los líquidos. Este análisis es aplicable a cultivos de alta ser evaluados utilizando los caudales de fluido refrigerante
densidad celular alimentados con E. coli y levaduras. esperados y las temperaturas de entrada/salida. Se
Existen tiempos de mezcla observados de varios segundos establecen los requisitos para el tipo de chaqueta (por
para el labo- ejemplo, hoyuelos, media bobina) y el área de la chaqueta.
de fermentación, 20-30 s para fer- mentores a escala piloto Para fermentadores grandes de más de 5000 l, puede ser
de 1000-2000 l y 70-140 s para fer- mentores a escala difícil mantener NUESTROS por encima de 300 mmol/l-h
piloto de 60.000 l-120.000 l de producción (4). Los tiempos ya que surgen problemas de transferencia de calor.
de mezcla específicos para estas básculas son de 5 s para 10 Efectos medios de esterilizaciónComo la escala del
l, 20 s para 1000 l, 29 s para 1800 l, 67 s para 60.000 l, 100 fermentador en
s para 100.000 l y 140 s para 120.000 l. se arruga, los tiempos de calentamiento y enfriamiento se
hacen más grandes
proporción del ciclo de tiempo total de esterilización, como
se muestra en la Tabla 10. El tiempo de calentamiento de las correlaciones Pg/VL y KLa.
aumenta de un 15% a un 37%, y la porción de enfriamiento Una aplicación de este método es el uso de KLa para
aumenta de un 10% a un 16% a medida que la escala escaldar una fermentación de Bacillus thuringiensis. Esta
aumenta de 280 l a 19.000 l. Las escalas de 100 l y 1.000 l ampliación se realizó utilizando la ecuación, KLa = N aV b
son excepciones a esta tendencia, ya que requieren un poco constante (obtenida combinando la ecuación 9, la relación s

más de tiempo que los rangos esperados, ya que están esperada de Pg/VL, y la ecuación 3) con la ampliación
equipadas con un lazo de camisa de recirculación con sobre la base de KLaPT, donde PT es la presión total en el
calentamiento y enfriamiento indirectos a través de recipiente incluyendo la presión de la cabeza (40). Otra
intercambiadores de calor. Los valores de Fo aumentaron de aplicación es utilizar una estrategia iterativa basada en los
unos 75 a unos 91 minutos y los valores de Ro aumentaron caudales de aire incrementales para calcular los parámetros
de escalado resultantes y luego examinar cada conjunto de
de unos 57 a unos 87 minutos en este mismo rango de parámetros para un caudal particular a fin de optimizar aún
escalas (Tabla 10; 38). Estos pliegues en Fo y Ro se traducen más los requisitos de potencia del compresor y del
directamente en un aumento en el nivel de esterilización por generador (36).
exceso y por estrés térmico medio, respectivamente, a Método de Ju y Chase/Diaz y Acedevo Este
medida que aumenta la incrustación. El impacto adverso del (2, 41) se centra en la ampliación basada en OTR
estrés de calor medio depende del proceso y puede ser equivalentes, no en KLa. Primero se selecciona el volumen
minimizado con el uso de esterilización continua (alta de escalado y luego se utiliza la similitud geométrica para
temperatura, corto tiempo). obtener el DT. Se supone que la velocidad constante de la
Factores biológicos Factores biológicos, como el num- punta del impulsor es N. Usando la relación, se estima
En la selección de la escala de producción final, es Pg/VL= f1VLc (ecuación 4), Pg/VL y, usando relaciones
necesario tener en cuenta las generaciones a través de las em-piricales entre Pg/VL y KLa (ecuación 9a-c), se
cuales el organismo progresará en el curso de las determinan los valores de KLa para el fermentador de
fermentaciones de la semilla y de la producción. escalado. Finalmente, la tasa de OTR para el fermentador
Suponiendo un crecimiento exponencial, el número de grande se compara con la del fermentador a pequeña escala
generaciones, Ng, puede expresarse como (12) y la contrapresión para el fermentador grande se calcula
asumiendo que CL es de 0 mmol/l.
Ng = 1,44 (lnVL + ln XN - ln XNo) (11) El elemento clave de este método es que hay tres de-
donde XN es el número (o masa) final de la célula y XNo de libertad para el scale-up. Estos son comúnmente N, Q y
es el número (o masa) inicial de la célula del inóculo. La DI/DT (es decir, la geometría del reactor). Por lo tanto, sólo
estabilidad de la inserción de ADN recombinante y el se pueden especificar tres elementos para que sean
requisito de que un agente ejerza una presión selectiva constantes para la ampliación. Si se añade otro valor de
deben evaluarse en función del número de generaciones libertad, como el de la fase gaseosa parcial, entonces este
previstas en el proceso, más un cómodo margen de valor también puede especificarse para mantener la máxima
seguridad. constante OTR. Para determinar el efecto sobre el cultivo,
Enfoques generalizados para el scale-up generalmente es útil realizar fermentaciones a pequeña
Varios autores han recomendado enfoques o combinaciones escala utilizando la mezcla de gases para variar la presión
de ap-proaches para el scale-up basados en las ecuaciones y parcial de entrada de oxígeno.
principios descritos anteriormente. Ningún método parece En este método (42), se mantienen constantes dos valores
ser adecuado para todas las fermentaciones con una alta clave en el momento de la ampliación: KLa (calculado por
probabilidad de éxito (5), y la aplicabilidad de un método la ecuación 9a-c) e ITS. La relación DI/DT entonces se ajusta
sobre otro es específica del proceso. El éxito a menudo dentro de límites razonables para completar el diseño.
depende de la fiabilidad de las correlaciones empíricas y de Aunque no se mantiene la similitud geométrica, la variación
la integridad de los datos a pequeña escala. A continuación resultante de la relación DI/DT con la escala a menudo todavía
se destacan algunos ejemplos. puede proporcionar una dispersión de gas ade-cuencia. Esta
Método de Hubbard Este método (39) fue técnica añade flexibilidad para la instalación de
desarrollado como una combinación de enfoques de otros fermentadores existentes.
autores. Durante la fermentación a escala de laboratorio, se Propuestas para mejorar los cálculos de ampliación Este
miden el caudal de aire, la velocidad del impulsor, el El método simplificado (27) evalúa las cantidades clave de
rendimiento y las dimensiones geométricas del fermentador. interés de la ampliación sobre la base de dos variables: N y
Las propiedades básicas del caldo, como la densidad, la DI. El número del impulsor Reynold está representado por el
viscosidad, la tensión superficial y el coeficiente de difusión NDI2, el número 2DI3 de Froude por el N 2DI, el número de
de oxígeno, no se tienen en cuenta en la extracción. (De Weber por el N , la potencia gaseada por unidad de
estas propiedades del caldo, probablemente sea más volumen de líquido por el N 3DI2, la velocidad de la punta
importante entender el comportamiento reológico del caldo del impulsor por el NDI, y Q/HT por el DI/N (donde HT es
en los cultivos miceliales.) Varias cantidades, tales como específicamente la altura del fermentador y no la altura del
Q/VL, NRe, ITS y NA, se calculan a partir de las volumen del líquido). Combina el análisis de grupos sin
condiciones de ferrorización a escala de laboratorio basadas dimensiones relevantes con otros parámetros empíricamente
en cantidades medidas. aplicables.
Para el fermentador a escala de planta, se selecciona un El análisis de escalamiento usando una o más de estas
volumen basado en metanfetaminas.
sobre el rendimiento del producto y la capacidad de la ods ha sugerido métodos para operar los fermentadores de
planta. La similitud geométrica se utiliza entonces para laboratorio para obtener el mejor rendimiento a escala. Por
calcular las dimensiones de los recipientes. El scale-up se ejemplo, se recomienda utilizar aire diluido con nitrógeno
basa en igualar los valores de KLa y luego proceder de una en la escala de 10 l para imitar adecuadamente la escala de
de las dos maneras. La primera forma es calcular el caudal, 10.000 l (2). Los estudios de reducción de escala diseñados
Q, ya sea manteniendo Q/VL o la velocidad superficial, Vs, para simular condiciones de operación a gran escala han
con- stant, y luego calcular la velocidad del impulsor, N, sido altamente exitosos en algunos casos para predecir el
basándose en las correlaciones Pg/VL versus KLa (Ec. 9a- comportamiento e identificar las causas de un desempeño
c). La segunda forma es ajustar N utilizando una velocidad sub-óptimo a gran escala (43-46).
constante de la punta del impulsor, y luego calcular Q
 Las prácticas actuales de escalado para los cultivos de E. III. ESCALADO DE LOS
coli y levadura se basan en gran medida en el RESULTADOS DE
mantenimiento de un rendimiento equivalente de CL, KLa u FERMENTACIONES
OTR como primera medida. En estas fermentaciones, el ANTERIORES (DE 1992 A
suministro de oxígeno se limita al escalado debido a la alta MEDIADOS DE 2001)
demanda de oxígeno celular y no debido a la alta viscosidad Se llevó a cabo un estudio de procesamiento en esta
del caldo como en el caso de los cultivos de hongos. planta piloto de fermentación desde 1992 hasta mediados
Posteriormente se puede llevar a cabo una evaluación del de 2001 para obtener información sobre las condiciones de
impacto del tiempo de mezcla en el DO y la distribución de proceso alcanzables para las fermentaciones de E. coli
nutrientes, lo que se recomienda especialmente para (Tabla 11a) y levadura (Tabla 11b). Los valores en negrita
cultivos de alta densidad celular alimentados por lotes. representan el funcionamiento dentro del 20% de las
condiciones máximas de agitación y aireación para los
II. CONDICIONES DEL PROCESO DE fermentadores de la planta piloto que se muestran en la
FERMENTACIÓN Tabla 1. En el caso de la contrapresión del fermentador, el
valor máximo deseado se fijó en 1,5 kg/cm2, aunque
Para evaluar el rendimiento operativo de los recipientes durante este período de funcionamiento (principios de la
de escala piloto existentes, se compilaron las condiciones década de 1990) se realizaron algunas fermentaciones a
del fermentador (volumen de trabajo, caudal de aire, presiones de hasta 1,8 kg/cm2, y posteriormente se
presión, velocidad del impulsor, consumo de energía descubrió que una contrapresión afectaba negativamente a
gaseada, coeficiente de transferencia de masa, OUR) la longevidad del cierre mecánico doble del agitador.
basándose en registros históricos de varios cultivos de E. También durante este período, no se disponía de lecturas de
coli (Tabla 11a) y levaduras (Tabla 11b). OUR se calculó potencia en la escala de 280 l y los transductores de vatios
sobre la base de mediciones de la composición del gas de instalados en la escala de 800 l, que no fueron corregidos
escape mediante un espectrómetro de masas (47). Los datos por las pérdidas de la caja de cambios (24), se convirtieron
se tomaron en el momento del pico OUR, que no en satélites con mayor potencia de salida.
necesariamente correspondía al momento del pico de La Tabla 11a ilustra que los cultivos históricos de E. coli
transferencia de masa co-eficiente. En la última década, los En las escalas de 280 l y 1.000 l, la velocidad máxima del
cultivos se realizaron en las escalas de 280 l a 1900 l. impulsor se ha visto desafiada de forma predominante. Sólo
Además, se realizaron estudios específicos recientes en unos pocos cultivos de 280 l se acercaron simultáneamente
varias escalas (280 l-19.000 l), por ejemplo, E. coli (E. coli a las condiciones máximas de caudal de aire, agitación y
DH5, Tabla 12a) y un proceso de levadura ex-amplio presión. El pico OUR osciló entre 38 y 260 mmol/l-h con
(Candida chilensis, Tabla 12b) utilizando medios de OURs por encima de 90 mmol/l-h alcanzados para cada una
fermentación diseñados para promover la OTR de alto de las cuatro escalas probadas. Los valores de Pg/VL y
rendimiento. Los datos tabulados son representativos de las KLa calculados en el pico OUR oscilaron entre 3,3-14,7
fermentaciones típicas de ese proceso específico a la escala hp/1000 l y 167-738 mmol/l-atm, respectivamente. Aunque
seleccionada. había una amplia experiencia en las básculas de 280 l y
Parámetros de control para cada fermentación, variados 1000 l con altas fermentaciones OUR, el grado de desafío a
de acuerdo a los siguientes criterios la capacidad operativa de los recipientes en las otras
a los objetivos de desarrollo. Después de su disminución básculas era limitado. Los valores de KLa alcanzados en la
inicial de los niveles de pre-inoculación, el DO fue escala más pequeña de 280 l fueron generalmente
controlado generalmente entre el 30% y el 80% de la alcanzables al escalar a las escalas de 1000 l o 1900 l para
saturación, calibrado al aire a presión am-biental, usando aquellos procesos para los cuales esto era una meta de
varias estrategias. En algunos casos, la fermentación se desarrollo (E. coli DH5, E. coli RR1). Los valores del
inició con la agitación, la contrapresión y/o los caudales de parámetro de proporcionalidad, f2, a partir de la ecuación
aire en el control en cascada con oxígeno. En otros casos, 9b oscilaron entre 55 y 143, lo que indica una variabilidad
cuando la necesidad de controlar el oxígeno en su punto de esperada en el desempeño de cualquier correlación empírica
consigna hacía que los caudales de agitación y de aire de escalamiento debido a los parámetros específicos del
alcanzaran los valores máximos de consigna, estos dos proceso, escalamiento y operación.
parámetros se ponían en modo automático en sus puntos de La Tabla 11b resume los datos históricos comparables para
consigna máximos y luego la contrapresión se ponía en la levadura
control en cascada. Se utilizaron otras estrategias, cultivos. Como se ha señalado en el caso del procesamiento
dependiendo de los requisitos específicos del proceso. Por de E. coli, se presentaron pocos desafíos a las condiciones
ejemplo, si se produce espuma en la fermentación o se operativas máximas, excepto en las escalas de 280 l y 1000
desea una concentración más alta de dCO2, la contrapresión l. El pico OURs fue notablemente menor que en el caso de
se eleva típicamente a 1-1,5 kg/cm2 más temprano en el las fermentaciones de E. coli, oscilando entre 49 y 141
proceso. mmol/l-h con OURs por encima de 50 mmol/l-h alcanzados
Se han publicado descripciones de procesos específicos para cada una de las cuatro escalas probadas. Los valores de
para algunos de los procesos descritos (E. coli RR1[48, Pg/VL y KLa calculados en el pico OUR oscilaron entre
49], E. coli OP-50[50], E. coli PF436[51], Saccharomyces 2,1 hp/1000 l y más de 15 hp/1000 l y 226-844 mmol/l-h-
cere- visiae QC2B[52], S. cerevisiae 1375[53], atm, respectivamente. Estos rangos fueron similares a los
Pseudomonas aeruginosa MB5001[54], y Candida observados para los procesos de E. coli. Una vez más, la
sorbophila[55-57]). No se publican otras descripciones de amplia experiencia en las básculas de 280 l y 1000 l no ha
procesos (E. coli DNA polimerasa, E. coli K12, E. coli sido igualada en las otras básculas. En el caso de estos
DH5, C. chilensis), pero son consistentes con los procesos de levadura (C. sorbophila, C. chilensis y S.
procedimientos más avanzados actuales. La ejecución cerevisiae 1375), los valores de KLa alcanzados en la
exacta de los procesos se basó en estas descripciones, pero escala de 280 l fueron generalmente obtenidos en las
en muchos casos se desviaron significativamente para escalas mayores de 800 l, 1000 l y 1900 l. Los valores de la
alcanzar los objetivos de desarrollo del proceso. constante de proporcionalidad, f2, a partir de la ecuación 9b
oscilaron generalmente entre 62 y 218, indicando de nuevo
la variabilidad esperada en el rendimiento debido a los
parámetros de proceso, escalado y operación. Para un
proceso específico a una escala específica, el rango era
sustancialmente menor.
360 J. BIOSCI.
BIOENG..,
IV. RESULTADOS DE LA AMPLIACIÓN DE LOS de los conjuntos de datos de desarrollo de procesos típicos.
ESTUDIOS ACTUALES A menudo, el rango de condiciones de proceso necesarias
entra en conflicto con la forma de ejecutar los procesos de
Basándose en este análisis histórico del rendimiento del forma óptima, lo que dificulta la obtención y el cálculo de
proceso, se llevaron a cabo estudios recientes (desde los datos. Puede ser difícil variar las condiciones dentro de
mediados de 2001 hasta el presente) para demostrar el un mismo cultivo como se hizo anteriormente (58) sin
desafío de fermentar en condiciones de funcionamiento afectar negativamente los datos posteriores.
óptimas para las fermentaciones de E. coli y levadura. En el Consecuentemente, no todos los procesos/escalas pudieron
caso de las fermentaciones de E. coli, las concentraciones ser analizados si las condiciones de operación en el punto
iniciales de carbono y nitrógeno se elevaron para aumentar máximo NUESTROS valores para cultivos individuales no
el pico OUR más allá de lo que normalmente se podría variaban lo suficiente.
observar con este proceso. Se decidió realizar estudios La Tabla 13a resume la relación entre el pico OUR
específicos en las escalas de 800 l, 1200 l, 1900 l y 19.000
l para obtener una información más completa. y KLa:
sobre las capacidades del equipo de escala piloto instalado. OUR = A K a + (12a)
B
Se instalaron variadores de frecuencia variable (VFDs) 1L 1
mejorados en todos, pero los recipientes de escala de 19.000 para procesos históricos y actuales seleccionados a varias
l (que conservaban sus transductores de vatios) en los que escalas para los cuales los niveles de DO para caldos eran
se monitoreaba el consumo de energía directamente desde similares. La pendiente, A1, varía de 0,075 a 0,46, lo que
la corriente eléctrica del VFD (Altivair 66; Schneider indica una gran dependencia de las condiciones de proceso
Electric, Palatine, IL, EUA) Esto dio como resultado la y funcionamiento de la transferencia de masa. Sin embargo,
nueva capacidad de medir el consumo de energía en la para un proceso específico, los valores que se podían
escala de 280 l y un rango de medición ampliado para la alcanzar eran razonablemente constantes en el momento de
escala de 800 l. la ampliación.
La Tabla 12a resume las condiciones de procesamiento Los estudios previos de escalado en embarcaciones a
alcanzables para el proceso de DH5 de E. coli para un escala piloto se han basado en fermentaciones secundarias
proceso escalado basado en el mantenimiento de niveles de metabolitos en las que se encontró un acuerdo general
mínimos de oxígeno similares. Para estos procesos con las tendencias establecidas de KLa y Pg/VL (58).
aeróbicos, se requería que el oxígeno estuviera por encima Desde que el enfoque más reciente de los estudios de planta
de su valor crítico para maximizar el crecimiento y la piloto se ha centrado en la ampliación de los cultivos de E.
productividad. El pico OURs se arrugó ligeramente de coli y levadura, se han analizado los datos de los picos de
aproximadamente 155-158 mmol/l-h a aproximadamente los estudios recientes de ampliación y se han presentado los
96-116 mmol/l-h al escalar de las escalas de 280 l a 1900 l. resultados en la Tabla 13b. El exponente de Pg/VL en la
El Pg/VL disminuyó con la escala esperada, oscilando entre ecuación 9b, A2, se calculó para procesos históricos y
18-19 hp/1000 l en la escala de 280 l a 6,1-8,8 hp/1000 l en actuales seleccionados a varias escalas según
la escala de 2,5 hp/1000 l.
Escalas de 1200 l y 1900 l. Valores de KLa calculados log K a = A log(P /V) + B (12b)
declinados
sólo ligeramente con escala, disminuyendo de 475-572 Las relaciones establecidas para la ampliación pueden ser
mmol/l difíciles de utilizar debido a la falta de datos suficientes
h-atm en la escala de 280 l a 354-465 mmol/l-h-atm en la sobre una gama de procesos.
escala de 1900 l. Los valores de f2 en la Ecuación 9b fueron
sustancialmente más uniformes que los encontrados con los
datos históricos, oscilando entre 40 y 70, comparando el
rango más bajo encontrado con el histórico
Datos del proceso de E. coli. Los valores fueron
relativamente consistentes con la escala y las condiciones
de operación, lo que sugiere que se puede obtener una
relación empírica confiable.
En el Cuadro 12b se resumen las condiciones de
procesamiento alcanzables para el proceso de elaboración
de la levadura C. chilen- sis, que también se basan en la
ampliación utilizando niveles mínimos de oxígeno
similares. Al aumentar de la escala de 280 l a 19.000 l, el
pico OURs disminuyó ligeramente de unos 98 mmol/l-h a
unos 74-82 mmol/l-h. Como era de esperar, la Pg/VL
disminuyó con una escala que oscila entre alrededor de
9,6 hp/1000 l en la escala de 280 l hasta 1,1-2,0 hp/1000 l
en la escala de 1,0 hp/1000 l.
Balanzas de 19.000 l. Tanto los valores máximos de OUR
como de Pg/VL no fueron menores para el proceso de
levadura que para el proceso de E. coli. Los valores
calculados de KLa se redujeron sólo ligeramente con la
escala, pasando de unos 430 mmol/l-h-h-atm en la escala de
280 l a 343-380 mmol/l-h-atm en la escala de 19.000 l. Los
valores de f2 en la ecuación 9b oscilaron entre 60 y 136 y
fueron menos uniformes con la escala y las condiciones de
operación que los encontrados con los datos actuales del
proceso de E. coli. Esta diferencia puede deberse a la
tendencia de este cultivo a aglutinarse e incluso ramificarse
durante el crecimiento. El rango de valores de f2 también
fue más bajo que el encontrado con los datos históricos de
la levadura.

V. TENDENCIAS Y CONSECUENCIAS PARA LA

AMPLIACIÓN
VOL. 97, METODOLOGÍAS DE ESCALADO PARA PROCESOS DE
2004
L 2 gL 2 regla general para la ampliación (27). La reología es menos
Los valores obtenidos parecen ser consistentes tanto para importante para las fermentaciones bacterianas unicelulares
el proceso de E. coli como para el de levadura y son y de levadura en comparación con las magnitudes relativas
aproximadamente de 0.96-0.98, comparados con 0.58-0.8 de la absorción de nu-trial y las tasas de suministro. Por lo
encontrados previamente para un cultivo de bacterias tanto, el scale-up basado en DO, OUR o KLa ha sido a
filamentosas y hongos (23, 58). Los valores más altos menudo más útil para estos cultivos. En el caso de
reflejan el mayor impacto de un cambio de KLa con OUR instalaciones con equipos instalados existentes, la escalada
para estos cultivos de E. coli y levadura, muy de reliajes se logra más fácilmente mediante la selección de
probablemente debido a su caldo más bajo vis- cosity y su las condiciones de operación de manera que el DO mínimo
morfología mayoritariamente unicelular. De manera permanezca simétrico entre las dos escalas. Las
interesante, el valor más alto del exponente parece ser más implicaciones para otros parámetros clave como OUR y
consistente con la correlación a escala de laboratorio KLa se pueden evaluar fácilmente. Debido a la
(ecuación 9a) que la correlación a escala piloto (ecuación disponibilidad de cultivos recombinantes de E. coli y
9b). levadura con altas productividades específicas, los
Para los caldos miceliales, las características reológicas volúmenes típicos de producción de proteínas recombinantes
influyen en el rendimiento de escalado. Las tasas de a menudo no superan los 5.000 litros y/o pueden no requerir
transferencia de calor y oxígeno son del 5-50% de las procesos de alta densidad celular. A medida que aumenta la
fermentaciones bacterianas y la mezcla a granel es más demanda de capacidad, se pueden realizar esfuerzos
pobre, lo que lleva a una menor homogeneidad del caldo adicionales para mejorar la productividad volumétrica y, de
(28). En consecuencia, los STI han sido a menudo una útil este modo, impulsar la
 CUADRO 13a. Comparación de la relación entre OUR y KLa para cultivos históricos y actuales seleccionados
RegresiónGamaOUR Gama KLaNúmero
utilizado para
Escala de cultivoA1coeficiente, usado paraof
( nominal (volume) atm) (mmol/l-h) cultivos de regresión
regresión r2 (mmol/l-
h-h-atm)
Histórico (1992 a mediados de
2001)
C. sorbophila 280 l 0.22 0.97 30–53 120–230 11
800 l 0.22 0.94 50– 230–470 11
105
C. chilensis 280 l 0.46 0.99 75– 160–300 4
140
800 l 0.32 0.99 65– 155–320 3
118
S. cerevisiae QC2B 800 l 0.19 0.98 40–92 180–460 22
S. cerevisiae 1375 280 l 0.19 0.91 25–66 140–340 33
800 l 0.17 0.84 53–67 285–370 11
1900 l 0.17 0.99 51–60 258–308 4
E. coli RR1 280 l 0.16 0.90 31–86 190–500 20
1900 l 0.18 0.88 25–97 151–596 5
E. coli DH5 1000 l 0.17 0.99 80– 412–780 16
150
E. coli OP50-1 1900 l 0.075 0.95 39–49 177–303 3
Reciente (mediados de 2001 a
2002)
C. chilensis 280 l 0.31 0.97 71– 230–535 7
158
1200 l 0.18 0.92 73–95 296–445 5
E. coli DH5 280 l 0.39 0.96 50–98 250–373 4
Ecuación 12a: OUR = A1KLa + B1. Basado en el pico OUR medido durante la fermentación (no necesariamente en la capacidad máxima OUR de
nuestro equipo).

CUADRO 13b. Relación entre KLa (mmol/l-h-h-atm) y Pg/VL (hp/1000 l) para resultados históricos y
actuales
Escala Regresión Número d
(volumen Velocidad Rango Rango KLa e cultivos
nominal) (tipo de superficial, B2coeficiente, Pg/VL utilizado
Cultivo Vs2 A utilizado para la
impulsor) r2 para la regresión
(cm/s) regresión (mmol/l-h-h-
Resultados a escala (hp/1000 l) atm)
individual
 S. avermitilis a 800 l (R) 0.667 0.58 1.8 NA 0.67– 35–90 1
8.0
(convertido a hp/1000 l 800 l (M) 0.667 0.59 2.2 NA 0.33– 50–180 1
a partir de kw/1000 l) 2.0
A. terreus b 800 l (R) 0.5–1.0 0.6 1.9 NA 0.38– 30–200 1
5.6
(convertido a hp/1000 l 0.8 1.2 NA 0.31– 4– 1
a partir de kw/1000 l) 4.4 45
S. cerevisiae 1375 1000 l (R) 1.13– 0.96 0.97 0.92 3.7–7 485–897 6
1.7
E. coli RR1 1900 l (M) 0.75–0.84 0.96 1.6 0.81 4.1–14.7 150–600 5
E. coli DH5 280 l (M) 2.0 0.98 1.5 0.89 8.3–18.9 230–535 7
Ecuación a escala múltiple
Ecuación 9b aplicada a 100 l-19000 l 1.5–8.1 0.67 NA NA 1–20 NA NA
los buques de las
instalaciones
Ecuación 12b: logKLa = A2log(Pg/VL)+ B2. Rango de velocidades superficiales asumidas constantes para los valores calculados. Logaritmo
común (base 10) utilizado. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NA, Cálculo no aplicable.
a
Ver Ref. 58.
b
Ver Ref. 23.

límites de la capacidad de diseño de los fermentadores

actuales y futuros. Cuando se adquiere más experiencia en c exponente (Ec. 4)
la ampliación de una amplia gama de volúmenes, se puede CC : Con- figuración del impulsor Chemineer CD-6
evaluar mejor la utilidad de varias metodologías de top/CD-6 bottom
ampliación. A lo largo de estas evaluaciones, un modelo de CL: concentración medida de oxígeno disuelto en caldo,
reducción de escala eficaz es clave para la resolución mmol/l o %saturación.
efectiva de problemas a gran escala, y su desarrollo debe Csat : concentración de oxígeno disuelto en el caldo a
ser una prioridad. saturación, mmol/l o % de saturación.
dCO2 : dióxido de carbono
disuelto DI: diámetro del
NOMENCLATURA impulsor, m DO : oxígeno
a exponente (Ec. 9) disuelto
b exponente (Ec. 9) DT: diámetro del recipiente, OD, m
DTi: diámetro del recipiente, i, OD, m
A1, B1: constantes de pendiente e intercepción (ecuación f1: constante de proporcionalidad (Ec. 4)
12a) f2 constante de proporcionalidade. 9, 9a-e)
A2, B2: constantes de pendiente e intersección (ecuación f3 constante de proporcionalidade 10a-g)
12b)
A: Configuración del impulsor Lightnin A315 (bombeo
hacia abajo)
 : matanza equivalente para la temperatura de
Fo
esterilización observada en relación con la µ tasa de crecimiento, h-1
temperatura a 121°C, min. q: densidad, g/cm3
gc: factor de conversión de la aceleración gravitacional, 4: viscosidad, g/cm-s (poise)
1 kg m/Ns2
HE : Chemineer HE-3 top/CD-6 bottom impeller con-
figuration
HL: altura del líquido en el depósito (incluido el plato REFERENCIA
inferior), m
S
HT: altura total del depósito (incluidos los platos superior
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