INFORME FINAL DE MICROBIOLOGIA: CARACTERIZACIÓN DE
BACTERIAS PSEUDOMONAS EN EL COMPST.
ANGIE JULIANA GUTIERREZ GARCIA.
LINA FERNANDA NIÑO ACERO.
FRAINER JULIAN JIMENEZ.
CAMILA BARRERA.
PRESENTADO A: TATIANA MONTES.
UNIVERSIDAD ECCI.
TECNGOLOGIA EN DESARROLLO AMBIENTAL.
BOGOTA D.C
2018.
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS PSEUDOMONAS EN EL COMPOST.
1. RESUMEN: This report is about the Pseudomona bacterium that was found in
piles of compost, placed in the compost of the Ecci university. There a sample of
compost was taken and removed to the laboratory of the university in ideal
conditions to identify the typues of microorganisms that were in the sample. Some
microorganisms sowins were done, microoscopic and macroscopic
characterization, tints, biochemical test and re-sows according to the
corresponding microorganisms (Pseudomona Bacterium).
2. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN:
3. OBJETIVO GENERAL Teniendo en cuenta las condiciones en las que se
hallaba la muestra de compost que se utilizó para el estudio, identificar y
reconocer los parámetros que se deben mantener en el laboratorio para identificar
características microscópicas y macroscópicas de microrganismos que se
encontraban en dicha muestra, para este estudio se trabajo con la bacteria
Pseudomona.
4. JUSTIFICACIÓN
Este estudio se realiza por que existe la necesidad de conocer propiedades
fisicoquímicas en las que se encontraba el compost para que creciera la bacteria
pseudomona y así mantener las mismas condiciones en el laboratorio, para
conocer mas afondo las características del microorganismo.
5. MARCO TEÓRICO:
Compost: El compost es un abono orgánico, obtenido a partir de la
descomposición controlada de la materia orgánica. Es un producto estable, con
multitud de propiedades beneficiosas para los suelos y plantas; que se consigue
tras la biodegradación en presencia de oxígeno de los residuos orgánicos, tales
como restos de jardín y residuos de cocina. El proceso del compostaje es llevado
a cabo por múltiples organismos descomponedores que comen, trituran, degradan
y digieren las células y las moléculas que componen la materia orgánica. Los
principales “operarios” de estas labores son las bacterias y hongos microscópicos.
Microorganismos: Los microorganismos se agrupan en dos categorías: procariotas y
eucariótas. En la primera están las archaeas y las bacterias, mientras que en la segunda
se encuentran hongos, algas y protozoarios. No obstante, de manera convencional los
virus, viroides y priones son también considerados microorganismos. No obstante, en la
actualidad el estudio del material genético (ADN y ARN) revela la existencia de miles de
millones de especies microbianas, sugiriendo que habitamos un mundo plagado de
microorganismos que incluso habitan el planeta desde mucho antes que cualquier otro
ser vivo, asimismo, se reconoce que los microorganismos son más diversos y versátiles
que los macroorganismos debido a su historia evolutiva y a su rápida capacidad
para adaptarse a los cambios ambientales. Los microorganismos participan en
procesos ecológicos que permiten el funcionamiento de los ecosistemas, y
biotecnológicos que son esenciales para la industria farmacéutica, alimenticia y
médica. Ellos son los principales responsables de la descomposición de la materia
orgánica y del reciclaje de los nutrientes (carbono, nitrógeno, fósforo, azufre,
etc.).
PSEUDOMONA. son bacilos Gram negativos, aerobios, oxidasa positivos.
Tienen, gracias a su metabolismo, una cierta facilidad de adaptación que les
permite adecuar el hábitat donde se encuentren para utilizar diferentes fuentes
como el carbono o el nitrógeno para su nutrición (1). Poseen una cápsula de
exopolisacáridos que facilita la adhesión celular, la formación de biopelículas y
las protege de la fagocitosis o los iones libres formados en la potabilización del
agua, aumentando así su patogenicidad.
MEDIOS DE CULTIVO. Es un conjunto de componentes que crean las
condiciones necesarias par el desarrollo de microorganismos.
1. Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos
(tales como aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales).
2. Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las bacterias
patógenas necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las
levaduras y hongos requieren un pH ácido (5.0).
3. Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones asépticas.
4. Estar protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón cardé,
tapones de goma, tapas metálicas o roscas.
PRACTICA N 1: Siembra y diluciones:
OBJETIVO: Realizar correctamente las diluciones y la siembra para detectar el tipo de
microorganismo que se va a trabajar.
INTRODUCCION:
Dilución seriada: Una dilución es el procedimiento que se sigue para preparar una
disolución menos concentrada, es una mezcla homogénea, uniforme y estable, formada
por sustancias. La sustancia en mayor cantidad es el solvente y la de menos cantidad es
el soluto y es la sustancia disuelta.
Concepto de siembra: En microbiología una siembra es el proceso en el que se deposita
una pequeña cantidad de microorganismos en u medio de cultivo estéril. La finalidad de
la siembra es permitir una multiplicación del microorganismo, al mantener el cultivo en
condiciones optimas para su desarrollo, se debe tener en cuenta, temperatura, pH,
disponibilidad de oxígeno y otros factores.
Medio de cultivo PDA: Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa es de la marca
DIBICO, y es conocido como PDA por sus siglas en inglés, tiene la infusión de papa
como fuente de almidones y la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y
levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias.
PRACTICA:
MATERIAL.
Compost.
Cajas de PDA.
Balanza digital.
Espátula estéril.
Agua peptonada.
Pipetas de 1 ml.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
PRACTICA N°2: Siembra por estrías o por agotamiento:
OBJETIVO: Mediante la siembra poder aislar una colonia de la bacteria pseudomona
para trabajarla posteriormente en las demás prácticas.
INTRODUCCION:
Método siembra por estrías: La técnica de siembra en estría es usada para aislar cepas
puras en una placa Petri a partir de un inóculo o muestra con diferentes especies. La
técnica consiste en, mediante un asa de siembra previamente esterilizada, rayar la
superficie de cultivo de una placa Petri de forma que en cada pasada sea menor el número
de células depositado, las últimas pasadas deberán depositar un número tan bajo de
células que, una vez incubadas, se formen colonias puras.
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIALES.
Asa redonda.
Caja con cultivo cetrimide.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
Imagen 1.
PRACTICA N°3: Descripción macroscópica y microscópica- Tinciones:
OBJETIVO: Observar microscópicamente y macroscópicamente la bacteria
pseudomona e identificar sus características.
INTRODUCCION:
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIALES. EQUIPOS. REACTIVOS.
Frascos lavados con agua Microscopio. Colorantes de Gram.
destilada.
Pileta para realizar Incubadora. Azul de Lactofenol.
tinciones.
Aceite de inmersión.
Cajas de agar nutritivo.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
PRACTICA N°4: Caracterización microscópica y verificación de siembras.
OBJETIVO: Realizar tinción y hacer la caracterización microscópica correspondiente a
la pseudomona.
INTRODUCCION:
Tinción de Gram:
Tinción azul de Lactofenol:
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIALES. EQUIPOS. REACTIVOS.
Frascos lavados con agua Microscopio. Colorantes de Gram.
destilada.
Pileta para realizar Incubadora. Azul de Lactofenol.
tinciones.
Aceite de inmersión.
Cajas de agar nutritivo.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
PRACTICA N°5. Pruebas Bioquímicas
OBJETIVO: Determinar las características metabólicas de la pseudomona haciendo uso
de las pruebas bioquímicas.
INTRODUCCION: Mediante pruebas in-vitro es posible determinar las características
metabólicas para determinar el nivel de genero o especie del microorganismo. Las
pruebas bioquímicas determinan la vía metabólica a partir del sustrato que se incorpora
en el medio de cultivo si la modifica o no. Durante esta práctica se usaron las siguientes
pruebas bioquímicas:
Prueba catalaza: La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de
hidrogeno, el oxígeno y el agua; es una hemoproteína.
Prueba oxidasa: constituida por hemoproteínas capaces de catalizar la oxidación
de un citocromo, los anaerobios obligados no contienen oxidasa.
Prueba de oxidación- fermentación: esta prueba se utiliza para la diferenciación
de bacterias y es importante realizarla en las primeras etapas. El medio de agar
más común es el HUGH-LEIFSON.
Prueba fermentación- glucosa: es importante en las bacterias quimiotrofas, se
utiliza medio liquido que contiene glucosa, peptona e indicador de pH. Permite
detectar la presencia de ácidos.
Prueba fermentación de azucares TSI: producción de ácidos y gas a partir de
glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. Detección de producción de H2S.
Prueba producción de Indol: es uno de los productos de la degradación metabólica
de tridofano.
Prueba roja de metilo: se utiliza para identificar distintos tipos de enterobacterias.
Fermentación acido-mixtaza y la fermentación 2,3-Butanodiol. Esta prueba es
indicadora de pH.
Prueba de citrato: Útil para identificar enterobacterias, se detecta el medio de
cultivo con citrato.
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIAL REACTIVOS
Gradilla Medio citrato
Pipeta Medio TSI
Caldo Indol
Caldo RM
Caldo VP
Reactivo Kovax
Rojo de Metilo
PROCEDIMIENTO.
RESULTADO.
Se realizo el procedimiento correspondiente de cada prueba. A los 8 días se observó que
la prueba de citrato como única fuente de carbono fue la única que dio positiva ya que se
evidencio un cambio de color (Azul).
Imagen 2. Imagen 3. Imagen 4.
PRACTICA N°6. Resiembra de microorganismos
OBJETIVO:
INTRODUCCION: Es necesario realizar cada cierto tiempo resiembras a un nuevo
medio de los organismos analizados. Esto permita la supervivencia del cultivo en
periodos cortos de tiempo.
Se trasladan los microrganismos a partir de la primera siembra, hasta otro medio de
cultivo nuevo, esto se realiza para evitar el envejecimiento del cultivo y poder seguir
analizándolo.
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIALES.
Asa redonda.
Cultivo King B para
pseudomonas.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
PRACTICA N°7. Ambientes Externos
OBJETIVO: Enfrentar aislamientos ambientales a condiciones extremas.
INTRODUCCION: La ley de tolerancia de Shelford, señala que la existencia y
prosperidad de un organismo depende en particular del carácter completo de un conjunto
de condiciones. La ausencia total o el descenso de ese organismo. Se debe a la deficiencia
al exceso cualitativo o cuantitativo a los limites de tolerancia dl organismo, excesivo de
factores físicos, químicos o bilógico. Hay limites ambientales, que se encuentran por
encima o por debajo los cuales no permiten que algunos microrganismos crezcan. El
crecimiento de un microorganismo en la naturaleza es mucho mas lento que en un
laboratorio donde se encuentra en condiciones optimas ya que en la naturaleza se
encuentra con carencia de nutrientes, en la naturaleza se encuentran libres en el suelo y
usualmente existen biofilms. Se desarrollan prácticamente en todas las superficies
inmersas en ambientes acuosas naturales, biológicos, como piedras, vegetales, plásticos,
etc. Así las interacciones son numerosas como sinérgicos y antagónicos.
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
MATERIAL Y EQUIPOS.
1 tubo con PH 5
1 tubo con PH 10
1 tubo con agar nutritivo + 5% de sal
1 tubo con agar nutritivo +30% de sal
1 tubo con agar nutritivo + 5% de azúcar
3 tubos con agar nutritivo
1 tubo con caldo de trigolcolato
PROCEDIMIENTO:
RESULTADOS:
PRACTICA N°8:
OBJETIVO: Identificar si las pseudomonas crecen en distintos ambientes (temperatura)
y comparar los tubos con los distintos medios.
INTRODUCCION:
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA:
PROCEDIMIENTO:
RESULTADO:
Se observo que en el tubo que se dejo a una temperatura de 48C crecieron
pseudomonas.
En los demás tubos también se observo crecimiento microbiano, pero no de la
pseudomona debido a que este microorganismo solo crece a temperaturas
superiores a los 30C.
En algunos tubos no se ve fácilmente el crecimiento de microorganismos debido
a la turbidez que el tubo presento.
6. CONCLUSIONES
7. DISCUSION:
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Amigos de la Tierra. Manual básico para hacer compostaje. (08 de mayo
de 2015). Recuperado de: [Link]
content/uploads/2015/03/compost_esp_v04.pdf
Montaño N, Sandoval A. Camargo S, Sánchez J. Los microorganismos:
pequeños gigantes. Elementos 77(2010)
1523.[Link]
Diluciones (mayo 20-2016) Recuperado 15/05/2018, de:
[Link]
Dibico. Agar de Dextrosa de papa. Recuperado 15/05/2018, de
[Link]
reactivos/agar-de-dextrosa-y-papa/
