Curso de bacteriología

 Phylum BXII. Proteobacteria phy. Nov.

◦ Clase II "Betaproteobacteria"
◦ Orden IV " Neisseriales ”
◦ Familia I Neisseriaceae

REFERENCIA: George M. Garrity, Matthew Winters& Denise B. Searles. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd Ed. April
2001

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  Géneros:
◦ I. Neisseria ◦ VIII. Iodobacter
◦ II. Alysiella ◦ IX. Kingella
◦ III. Aquaspirillum ◦ X. Microvirgula
◦ IV. Catenococcus ◦ XI. Prolinoborus
◦ V. Chromobacterium ◦ XII. Simonsiella
◦ VI. Eikenella ◦ XIII. Vitreoscilla
◦ VII. Formivibrio ◦ XIV. Vogesella

REFERENCIA: George M. Garrity, Matthew Winters& Denise B. Searles. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2 nd Ed. April 2001

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  Especies:

◦ N. canis ◦ N. lactamica
◦ N. cinerea ◦ N. macacae
◦ N. denitrificans ◦ N. meningitidis
◦ N. elongata ◦ N. mucosa
◦ N. flavescens ◦ N. polysaccharea
◦ N. gonorrhoeae ◦ N. sicca
◦ N. subflava

REFERENCIA: George M. Garrity, Matthew Winters& Denise B. Searles. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2 nd Ed. April 2001

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 Cocos Gram negativos de 0,6
a 1,0 µm de diámetro
 Solos o en parejas con bordes
adyacentes aplanados
◦ Excepto Neisseria elongata,
diplobacilo o en cadenas cortas
 División celular ocurre en dos
planos en ángulo recto
 Pueden tener cápsulas o
fimbrias (pili)
 No forman esporas.

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 Son inmóviles, no presentan flagelos
 Algunas especies producen pigmento amarillo-verdoso.
 Algunas especies son fastidiosas para cultivar y son
hemolíticas
 Temperatura óptima 35 a 37C
 Son oxidasa positiva
 Catalasa positiva
◦ excepto N. elongata
 Reducen los nitritos
◦ excepto N. gonorrhoeae y N. canis
 Especie tipo: Neisseria gonorrhoeae
 Se consideran como especies patógenas:
◦ Neisseria gonorrhoeae
◦ Neisseria meningitidis

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 Oxigeno: son aeróbicas
 N. gonorrhoeae necesita de 4-8% de CO2 para el
aislamiento primario
 Carbohidratos: vías oxidativas para la producción
de ácido acético característico de cada especie,
N. meningitidis y N. gonorrhoeae
 Utilizan una combinación de: Vía de Entner
Doudoroff y Vía de Shunt de pentosa fosfato para
el metabolismo de glucosa.
 Ciclo de ácidos tricarboxílicos utilizado por
gonococo y meningococo para la producción de
ATP y precursores biosintéticos

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 La sangre hemolizada, el aumento de la
concentración de CO2 y la presencia de
almidón soluble incrementan el crecimiento de
N. gonorrohoeae y N. meningitidis.
 Los ácidos grasos libres inhiben el
crecimiento, pero pueden ser neutralizados
por la presencia de almidón, suero o carbón
activado en el medio de cultivo.
 Las neisserias patógenas crecen entre 24 a
41C, mientras que las no patógenas pueden
crecer a menos de 24C.
 El pH óptimo es de 6 -8.

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 Clínica
◦ gonorrea
◦ uretritis gonocócica ◦ faringitis
◦ cervicitis ◦ artritis gonocócica
◦ salpingitis ◦ meningitis
(enfermedad ◦ septicemia
inflamatoria pélvica) ◦ diseminación
◦ esterilidad hematógena
◦ proctitis ◦ artritis reactiva

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 Leucocito polimorfonuclear

Diplococo Gram negativo

extracelular

Diplococo Gram negativo

intracelular

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 4 tipos
 Tipos 1 y 2
◦ son virulentos
◦ se presentan en el
aislamiento primario
◦ tienen pili
 Tipos 3 y 4
◦ son avirulentos
◦ producen colonias
grandes.

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◦ Cápsula: antifagocítica, levemente adherida a
pared celular
◦ Pili: Adherencia a células humanas (epitelio de
vagina, trompa de falopio y cavidad bucal)
◦ OMP: 16 serotipos, 66% de la proteína total
 Proteína I: Mayor antígeno de superficie, forma poros,
serotipos específicos asociados con la virulencia.
 Proteína II: Asociado con la virulencia, colonias opacas,
responsable de la adherencia intracelular.
 Proteína III: Podría proteger otros antígenos de superficie
de la acción bactericida de los anticuerpos.
◦ LPS: actividad endotóxica

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 Cápsula

Pilli
Membrana externa
Fosfolípidos
Proteína III
Proteína II
Proteína I
Lipooligosacárido
Capa de peptidoglican

Membrana citoplasmática

Citoplasma

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 Es competente para transformación en cualquier
momento del ciclo en los tipos 1 y 2, esta
capacidad es 1000 veces mayor que en los tipos 3
y 4.
 Conjugación, poseen tres tipos de plásmidos:
◦ un plásmido críptico de 2.4 x 103 KD
◦ un plásmido de 2.4 x 104 KD para conjugación y factores
de resistencia (R)
◦ un plásmido de 3.2 x 103 KD o 4.4 x 103 KD para b-
lactamasa

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 Factores bacterianos
Enzima extracelular que se une a IgA y la inactiva
 Posible replicación dentro de los neutrófilos
 Presencia de Pili para adherencia, permanecen en medio
extracelular, las no piliadas son fagocitadas y eliminadas
 Presencia de b-lactamasa por Plásmido de Resistencia
 Las bacterias que causan enfermedad diseminada son:
◦ sensibles a Penicilina
◦ resistentes a la acción bactericida del suero
◦ requieren arginina, uracilo e hipoxantina para crecer.

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 Adhesión inicial al epitelio genital por pilli.
 La adhesión por (Opa) proteínas de
membrana externa y LPS.
 Por endocitosis pasa al subepitelio y
provoca respuesta inflamatoria liberando
citoquinas.
 La bacteria puede ser engolfada y muerta
por un macrófago.
 La mayoría evaden los PMN a través de
estrategias de variación antigénica.
 El factor de necrosis tumoral (TNF) liberado
por las células epiteliales es estimulado por
la capa de LPS de la Neisseria gonorrhoeae,
que lleva a daño celular.
 Las bacterias infecciosas se liberan a través
de las secreciones mucosas e infectan
cuando entran en contacto las secreciones y
células epiteliales.
 Si no se trata, la infección y la inflamación
puede extenderse y causar la enfermedad
pélvica inflamatoria.

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 Cápsula
◦ Compuesta por polisacáridos, permite dividir la especie en
serogrupos: A, B, C, H, I, K, L, X, Y, Z, 29E, y W-135.
◦ Los grupos B y C se pueden dividir en serotipos de
acuerdo a proteínas de la membrana externa: el serotipo 2
que es idéntico tanto bioquímica como serológicamente
en ambos serogrupos, es el más común.
◦ Lipopolisacárido: tiene efecto tóxico, con cantidades 10
veces menores que las que necesitan el LPS de las
enterobacterias. Induce producción de anticuerpos pero
no se ha establecido su rol en la protección.

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 La cápsula tiene propiedades antifagocíticas.
 Los anticuerpos anticapsulares son bactericidas.
 Los efectos tóxicos de la infección meningocócica
son debidos al LPS.
 Se observan un rash maculopapular y presencia de
hemorragia petequial durante la fase bacteriémica
de la enfermedad.
 Los meningococos son patógenos extracelulares.
 En algunos casos se pueden ver en forma
intracelular en las muestras clínicas, probablemente
no puedan multiplicarse dentro de los neutrófilos.

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 Se puede inducir inmunidad por medio de
polisacáridos capsulares de los serogrupos A y C.
 Están disponibles vacunas bivalentes contra estos
serogrupos.
 La protección es producida por anticuerpos
bactericidas mediados por complemento y su
duración puede ser de hasta 5 años después de la
vacunación.
 El serogrupo B es pobremente inmunogénico y no
produce anticuerpos protectivos en humanos.
 Hay estudios de vacunas asociadas con otros
antígenos bacterianos.

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 Ocurren epidemias en adultos jóvenes y personas
que están confinadas (personal militar, presos,
colegios).
 Reservorio: nasofaringe humana.
 Tasa de portadores: varia entre 3 a 30% en
cualquier momento, pero durante las epidemias
puede llegar hasta el 95%, aunque solo el 1% de
las personas afectadas desarrollará una
enfermedad sistémica.
 Los portadores son corrientemente mayores de
21 años a pesar que los niños tienen la mayor
incidencia de enfermedad.

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 Se debe dar tratamiento profiláctico durante 48 horas a
los portadores y a los contactos de los pacientes con
enfermedad meningocócica:
◦ Rifampicina
◦ Cotrimoxazol
◦ La minociclina produce alta tasa de resistencia.
 Incidencia de la enfermedad:
◦ Serogrupo B más frecuente en menores de 5 años
◦ Serogrupo C se observa frecuentemente en niños de 4 a 14
años. Es más frecuente en invierno y primavera.
◦ Los casos esporádicos se producen por los serotipos B, C e Y.
◦ Las epidemias son causadas por los serogrupos A, B y C.

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 1. Entrada
4. Salida

2. Diseminación

3. Enfermedades
Meningitis

Lesiones de la piel (rash)

Colapso vascular
Insuficiencia pulmonar
Necrosis adrenal

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 Glucosa Maltosa Lactosa Sacarosa Fructuosa Almidón
N. gonorrhoeae + - - - - -
N. meningitidis + + - - - -
N. sicca + + - v + +
N. lactamica + + + - - -
N. flava - - - - - -

Moraxella catarrhalis - - - -

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 GGA PA
N. meningitidis + V
N. gonorrhoeae - +
M. catarrhalis - -

GGA: Gamma Glutamil Aminopeptidasa

PA: Prolil Aminopeptidasa

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 Coaglutinación (Phadebact Monoclonal GC)
 Uso de anticuerpos monoclonales, prueba rápida
◦ Falsos positivo: N.lactamica, N. cinerea
 Pruebas de ELISA (Gonozime)
 Prueba para uso en consultorios:
◦ Identificación serológica N. meningitidis
◦ Pruebas de látex y coaglutinación para meningitis
bacteriana

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 Neisseria gonorrhoeae:
◦ Penicilina
◦ Espectinomicina
◦ Gentamicina
 Neisseria meningitidis:
◦ Penicilina
◦ Ceftriaxona
◦ Cloramfenicol
 Portadores de N. meningitidis:
◦ Cotrimoxazole
◦ Rifampicina
◦ Minociclina

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 Material de vidrio mal lavado.
 Espéculo vaginal con detergente, desinfectante o
lubricante.
 Uso de antisépticos en la preparación de las
pacientes ginecológicas.
 Desinfección inadecuada al obtener muestras de LCR
 No usar medios frescos.
 Medios sobreesterilizados.
 Velas con sustancias tóxicas.
 No uso de reactivo de oxidasa recién preparado.
 Inhibición de algunas cepas por la Vancomicina.

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 Cultivos de crecimiento lento
◦ Inóculo muy ligero o placas incubadas > 24 horas
◦ Inhibición con cultivos mixtos
◦ Maltosa contaminada con dextrosa
◦ Necesidad de control de calidad
◦ Reacciones atípicas o especies con patrón similar.

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 Examen directo:
◦ Gram, azul de metileno
 Secreción uretral
 Secreción cervical
 Secreción rectal
 Sangre
 Líquido céfalo raquídeo
 Hisopado nasofaríngeo

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 Medio selectivo de Thayer Martin:
◦ Agar GC + Hemoglobina al 1% + suplemento antibiótico
(Vancomicina Colistina, Nistatina c/s Trimetroprim)
 Las colonias aparecen generalmente como crecimiento puro
 Con inhibición de bacterias Gram positivas, Gram negativos y
levaduras. Agar Chocolate con sangre de carnero, CO2
 Medio para hemocultivo, con SPS 0.025 %, almidón
y gelatina
 Temperatura óptima 37° C
 CO2 : vela, sobres generadores, balones con mezcla
de gases.

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 Morfología típica de las colonias
 Oxidasa positiva
 Gram: diplococos Gram negativos
 Reacción de la catalasa (Peróxido de hidrógeno 30 %)
◦ Positivo: N. gonorrhoeae, N. meningitidis, N. lactamica

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 Mediante la determinación del metabolismo de
carbohidratos
 Presencia de enzimas características de cada
especie.
◦ Metabolismo de carbohidratos en CTA (Cistina Tripticase Agar)
◦ Utilización de azúcares por enzimas preformadas: no
depende del crecimiento bacteriano, resultados 1 - 4 horas
◦ Sistemas rápidos de identificación bioquímica
 Bio Merieux: Api NH
 Pasteur: Neisseria 4H
 Vitek
 Micro Scan

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