FORMATO GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
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PRÁCTICA
Título de la Práctica: Extracción de ADN
Asignatura: BIOQUIMICA
1. OBJETIVOS.
General:
1.1. Obtener conocimientos sobre extracción de ADN.
Específicos:
1.2.1: Extraer ADN de una muestra de origen vegetal.
2. INFORMACIÓN BÁSICA PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO
En todos los laboratorios de química se requiere por necesidad el establecimiento de ciertas
reglas de conducta y normas de seguridad, de cuyo cumplimiento dependen el orden en el
trabajo, la comodidad y la seguridad de todos los estudiantes y docentes dentro del laboratorio.
La mesa, materiales y equipos utilizados deben quedar limpios y en su lugar correspondiente
antes de salir del laboratorio. Las llaves del gas y del agua deben quedar debidamente
cerradas.
A continuación se enuncian algunas reglas generales que se deben leer cuidadosamente:
• Previamente para cualquier práctica de leer las instrucciones dentro de esta guía de
laboratorio y experimento antes de ir al laboratorio.
• Utilizar los implementos para su seguridad definidos en esta práctica de laboratorio.
• No toque nunca los compuestos químicos con las manos a menos que se le autorice.
• Para la manipulación de compuestos químicos, utilizar espátulas, pinzas, etc.
• Lavarse las manos antes de salir del laboratorio.
• Deje pasar suficiente tiempo para que se enfríen el vidrio y los objetos calientes antes de
manipularlos.
• Todos los sólidos y papeles que sean desechados se deben arrojar a un recipiente
adecuado para desechos contenedores y caneca de color rojo.
• No arroje al sifón cerillas, papel de filtro o sólidos poco solubles.
• Compruebe cuidadosamente los rótulos de los frascos de reactivos antes de usarlos.
• No devuelva nunca a los frascos de origen los sobrantes de compuestos utilizados, a menos
que se le indique.
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3. FUNDAMENTO TEÓRICO
Todo organismo vivo está formado por la ampliamente estudiada y conocida molécula de DNA.
Sabemos que los organismos vivos provienen de una única célula ancestral llamada LUCA.
Este hecho nos indica que entre organismos vivos compartimos mucho más de lo que a veces
nos podríamos llegar a imaginar. Por ejemplo, los humanos compartimos el 50% del DNA con el
plátano. Sin embargo, el porcentaje de DNA que compartimos depende de cómo se mida. Si
medimos secuencias idénticas de pares de bases, entonces es bastante bajo, pero si nos
fijamos en los genes con funciones idénticas o similares entonces es de hecho el 50 %.
Algunas de las cosas para las que estos genes codifican son de bioquímica básica: la
replicación del DNA, la transcripción, la traducción, el metabolismo del DNA (recombinación,
reparación), el metabolimso de la célula (catabolismo y anabolismo) y la regulación del ciclo
celular (mitosis). Este tipo de genes son nombrados por los biólogos como “secuencias
conservadas”.
La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en las
características fisicoquímicas de la molécula. El ADN está constituido por dos cadenas de
nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Los nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o
citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces
fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen
mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal. Los grupos fosfato
están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una carga neta negativa
y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción. Los grupos
fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite
disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula.
Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos
fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las
fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el ADN precipite (Sambrook
et al. 1989).
Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas y matrices
inorgánicas cargadas positivamente (Nasón 1965, Travaglini 1973, Sambrook et al. 1989,
Sinden 1994). A lo largo del tiempo se han diseñado distintos protocolos con la finalidad de
obtener una cantidad y calidad de ADN adecuados, así como garantizar la eliminación de
inhibidores potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la molécula. Los métodos
tradicionales, desarrollados en los años 50, utilizan solventes orgánicos para separar a las
proteínas del ADN y, una vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo por precipitación con
etanol. Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción puede tomar desde unas
horas hasta varios días por los numerosos pasos que deben realizarse. En general, los
protocolos tradicionales consisten de cinco etapas principales: homogeneización del tejido, lisis
celular, separación de proteínas y lípidos, precipitación y redisolución del ADN
Para poder estudiar esta molécula con detalle se precisa generalmente su aislamiento de la
célula, y para ello es necesario un conjunto de material e instrumentos de laboratorio complejos.
Lo que este experimento pretende es un acercamiento simple y sencillo a la técnica de
extracción de DNA que se puede realizar en cualquier hogar con materiales de la vida cotidiana.
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4. TRABAJO PREVIO
1. • ¿Qué es ADN y estructuralmente cuál es la diferencia con ARN?
2. • ¿Cuál es el procedimiento en laboratorios clínicos para extracción e identificación
de ADN?
3. • ¿En qué casos se aplica la extracción y secuenciación de ADN?
4. • ¿Qué reacciones reversibles se pueden realizar sobre una molécula de ADN?
5. ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA
5.1 Materiales y Equipos
2 Vasos de 100 mL
1 agitador de vidrio
1 Probeta de 50 mL
1 Embudo
1 Aro de hierro y 1 soporte universal
Papel filtro
Papel tornasol- papel filtro- indicador
1 Matraz de 100 mL
1 Agitador de vidrio
1 Vidrio de reloj
1 Gradilla
5 tubos de ensayo
5.2 Reactivos
Cantidad Reactivo Concentración
200 mL Alcohol Isopropílico Puro
200 mL Estanol 95% (o alcohol líquido
de alta pureza)
30 gr NaCl sólido
5.3 Elementos de Protección Personal
Bata manga larga
Gafas de seguridad en el laboratorio
Guantes de nitrilo
Limpión o toallas absorbentes
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6. DESARROLLO EXPERIMENTAL
Cada grupo debe traer:
200 g de Fresas
1 Naranja
1 bolsa Ziploc
6.1 Preparar Solución extractora
1. Mida con la probeta 10 mL de jabón líquido
2. Pese 3 g de NaCl y adicione a un vaso de precipitados
3. Adicione el jabón líquido, el NaCL y 50 mL de agua destilada al vaso de precipitados
4. Agite y homogenice sin producir burbujas
5. Lleve al aforo del balón de 100 mL
6.2 Extracción de DNA
1. Introduzca cerca de 100 g dentro de la bolsa ziploc
2. Adicione la totalidad de la solución extractora dentro de la bolsa y ciérrela
3. Con sus dedos y la precaución de no perforar o romper la bolsa, empiece a macerar la fresa
por 15 minutos
4. Filtre el extracto obtenido para separar los sólidos resultantes
5. Tome el filtrado y ubíquelo en los tubos de ensayo
6. Lentamente adicione gota a gota el alcohol sobre el extracto hasta obtener una altura de 1-2
cm
NOTA: En este paso NO mezcle, agite u homogenice la solución extractora con el alcohol
7. Repita el mismo procedimiento con la naranja
7. RESULTADOS
Realice la comparación de los ADN extraídos
Explique en el informe que utilidad tiene cada uno de los materiales utilizados para la
extracción.
8 BIBLIOGRAFÍA
• BOHINSKI. 1991 Bioquímica. 5ed., Pearson. México.
• MATHEWS VAN HOLDE. 2004 Bioquímica. 3 Ed Pearson. España
• WILSON, K., AND WALKER, J. 2000. Principles and Techniques of practical
Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press.
• Sambrook J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual.
Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, EE.UU
