PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR
INFORME DE LABORATORIO
FACULTAD: Bioquímica Clínica
ESCUELA: Bioanálisis
ASIGNATURA: Laboratorio de Bioquímica
INTEGRANTES: Carolina López
Mercedes Rodríguez
NIVEL: Tercero
PRÁCTICA Nº: 02
TEMA: Curva de titulación de Glicina
FECHA: 05 de Septiembre del 2013
1. OBJETIVOS:
Aprender a medir el Ph de una disolución. --‐ Preparación de
tampones. Cálculo teórico y preparación práctica. --‐
Conocer la estructura de los 20 aminoácidos que forman parte de
las proteínas.
Estudiar experimentalmente las propiedades acido--‐base de los
aminoácidos.
Determinar los puntos de equivalencia y los valores de pKa de un
aminoácido, por medio de titulación potenciométrica, para
identificarlo.
1. MARCO TEÓRICO:
Los aminoácidos por tener al menos un grupo ácido y un grupo amino pueden
considerarse
como anfolitos, es decir, sustancias que pueden comportarse como ácidos o
como bases.
Todos los aminoácidos poseen un punto en el que se comportan como una sal
neutra. En este punto la carga neta del aminoácido es nula ya que los dos grupos
disociables tienen su carga de signo contrario y compensado. Este punto recibe
el nombre de punto isoeléctrico.
En la titulación de la glicina Se pueden realizar las siguientes observaciones:
1. A pH ácido la Gly se encuentra como un ácido diprótico, ya que tanto el
grupo amino como el carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1,
el 100% de las moléculas de aminoácidos se encuentran en forma de catión.
2. Al ir añadiendo equivalentes de base, el grupo α-carboxilo (-COOH) se
disocia, cediendoprotones al medio y transformándose en un grupo
carboxilato; este equilibrio viene descrito por elpKc. Cuando pH = pKc, la
glicina se encuentra como 50% en forma de catión + 50% zwitterion. Por lo
tanto,el par -COOH/-COO- puede servir como un tampón amortiguador en la
región de pH cerca del
valorpKc. En cuanto a la carga, cuando pH = pKc, entonces [I] = [II] y por lo
tanto
la carga neta = 0.5; y cuando pH = pKc - 2; [I] / [II] = 100:1; Q = 1, es decir
prácticamente sólo existe la forma I e
3. En el pI, prácticamente el 100% del aminoácido se encuentra como ion
dipolar o
zwitterion, deforma tal que el aminoácido presenta una carga neta nula (el
aminoácido es eléctricamenteneutro).
2. FORMULAS O REACCIONES:
Los aminoácidos tienen curvas de titulación características
La representación grafica de la variación del pH de una solución debida al agregando
de una base o un acido se denomina curva de titulación. La curva de titulación surge
entonces de la relación entre la cantidad de acido o base agregada a una solución y la
variación del pH de la misma.
A pH acido, por ej. pH 1, podemos considerar que el 100% de las moléculas
aminoacidicas se encuentran como ion positivo porque estan como acido diprotico
(tienen protonizado el grupo carboxilo y el amino).
Si el pH aumenta, habrá un valor para el cual el 50% de estará como ion positivo y el
50% como dipolo, ese valor corresponde al pKa.
El valor de pH en el cual el 100% del aminoacido se encuentra como dipolo, se
denomina punto isoeléctrico: la molécula es eléctricamente neutra, no es un ion.
Por encima del PI la forma predominante del aminoacido será la de ion negativo, hasta
llegar a un pH en el que el 50% se encontrara como dipolo y el 50% como ion negativo,
ese valor corresponde al pKb.
A pH próximo a 14 el 100% del aminoácido estará como ion negativo.
3. PARTE EXPERIMENTAL:
a. Registro de datos:
TABLA DE RECOLECCIÓN DE DATOS DE VALORACIÓN PONTENCIOMÉTRICA
TABLA #01
TITULACIÓN DE UN ACIDO DÉBIL CON BASE FUERTE
TITULACIÓN GLICINA CON ACIDO CLORHÍDRICO
HCl 0.1N agregados pH de la HCl 0.1N agregados pH de la
Glicina glicina
Añadido acumulado Añadido acumulado
1 0 2.02 12 22 12.04
2 2 2.13 13 24 12.11
3 4 2.30 14 26 12.17
4 6 2.61 15 28 12.21
5 8 3.15 16 30 12.24
6 10 8.84 17 32 12.30
7 12 9.63 18 34 12.32
8 14 10.22 19 36 12.34
9 16 11.36 20 38 12.36
10 18 11.77 21 40 12.37
11 20 11.94 22 42 12.43
TABLA #01
Valoración con NaOH (0.1 N)
TITULACIÓN GLICINA CON ACIDO CLORHÍDRICO
HCl 0.1N agregados pH de la HCl 0.1N agregados pH de la
Glicina glicina
Añadido acumulado Añadido acumulado
1 0 2.02 12 22 12.04
2 2 2.13 13 24 12.11
3 4 2.30 14 26 12.17
4 6 2.61 15 28 12.21
5 8 3.15 16 30 12.24
6 10 8.84 17 32 12.30
7 12 9.63 18 34 12.32
8 14 10.22 19 36 12.34
9 16 11.36 20 38 12.36
10 18 11.77 21 40 12.37
11 20 11.94 22 42 12.43
ácido : Toda sustancia que al disolverse (disociarse) aumenta la concentración de iones
positivos del disolvente (H+ o H3O+, caso del agua).
base : Toda sustancia que al disociarse, aumenta la concentración de iones negativos del
disolvente (OH-, caso del agua).
4. CÁLCULOS:
PM. Glicina 111.5 g/mol
Vol. 30 ml = 0.03L
M = 0.04 mol/L
[Link]
0.04 mol 0.03 L 111.5 g glicina
= 0.1338𝑔 𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎
1L 1mol glicina
Fijándose en la gráfica correspondiente, pH frente a Volumen, y a partir del volumen de NaOH
gastado en el primer punto de equivalencia se calcula la concentración real de problema.
Vvalorante en P.E. * Mvalorante = V inicial problema(100 mL) * Mproblema.
42 mL
5. OBSERVACIONES:
b. Análisis de datos:
Determinar cantidades en moles del vinagre
17.7 mL NaOH 1L 0.1 mol NaOH 1 mol CH3COOH
= 1.77 ∗
1000 mL 1 L NaOH 1mol NaOH 10−3 mol CH3 COOH
Determinar la molaridad del acido acético del vinagre
𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 1.77 ∗ 10−3 mol CH3 COOH
𝑀= = = 0.885 𝑀 CH3 COOH
𝐿 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 0.002 L vinagre
Determinar el porcentaje masa sobre volumen del acido acético en vinagre
1.77 ∗ 10−3 CH3 COOH 60g CH3 COOH
= 0.1062 g CH3COOH
1 mol CH3 COOH
Determinar el porcentaje masa volumen del acido acético en el vinagre
𝑚𝑎𝑠𝑎 0.1062𝑔 CH3 COOH
% = ∗ 100 = 5.31 %CH3 COOH
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 2 𝑚𝐿 CH3 COOH
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La valoración potenciomentrica de glicina protonada, NaOH dara lugar a una curva (pH
frente a volumen de valorante), características de un acido diprotico y a partir de ella
se puede calcular la concentración de glicina y los valores de las constantes de
equilibrio (Ka1 y Ka2)
Se puede observar los dos puntos de equivalencia con un primer salto muy brusco y
un segundo salto mucho menos brusco hasta alcanzar la fomra gly
7. calculos
8. CONCLUSIONES
Se concluye que la forma mas sencilla de comprender una reacción de
neutralización es a través del uso de curvas de valoración, ya que en estas se
resumen las características generales en este tipo de reacciones.
El punto de equivalencia lo indica el volumen adicionado necesario de una
solución para neutralizar a otra, independiente del pH resultante.
Cuando la neutralización se produce entre una base fuerte y un ácido débil. El
anión del ácido sufre una hidrólisis produciéndose iones hidróxido, por lo que
el pH es > 7.
La elección del indicador adecuado para determinar el punto de equivalencia
dependerá del pH final, que tiene que estar dentro del intervalo en el que el
indicador sufre el cambio de color.
9. BIBLIOGRAFÍA
[1][Link]
acion_de_%20la_Acidez_%20del_Vinagre_mediante_Valoracion_%20con_un_%20Indi
cador_y_por_Potenciometria.pdf
[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
con-una-base-fuerte/
[Link]
[2] Mar, G., (2009), Ácidos Carboxílicos,
[Link] 17 de Octubre del 2012.
Para las solucione amortiguadora del acido acético con acetato de sodio
Calculamos el PH del acido acético 0.1M
0.1 moles 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 1000 mL solución 5.5*10-3 moles 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 60 mL solución
X = 5.5*10-3 moles 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯 55 mL x = 0.09 M 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯 1000 mL
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻(𝑎𝑐) ↔ 𝐻 + (𝑎𝑐) + 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
Concentración 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯(𝒂𝒄) 𝑯+ (𝒂𝒄) 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶− (𝒂𝒄)
Inicial 0.09 0 0
Cambio X x x
Equilibrio 0.09 - x x x
[𝐻 + ][𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− ]
𝐾𝑎 =
[𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻]
𝑥. 𝑥
1.8 × 10−5 =
0.09 − 𝑥
𝑥 2 = 8.244 × 10−6
𝑥 = 1.272 × 10−3
𝑝𝐻 = − log(1.272 × 10−3 )
𝒑𝑯 = 𝟐. 𝟖𝟗
pH de solución amortiguadora
0.1 moles 𝑁𝑎𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 1000 mL solución 5.0*10-4 moles 𝑁𝑎𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 60 mL solución
-4
X = 5.0*10 moles 𝑵𝒂𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯 5 mL x = 8.33∗ 𝟏𝟎−𝟑 moles 𝑵𝒂𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯 1000 mL
8.33∗ 𝟏𝟎−𝟑 M 𝑵𝒂𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎(𝑎𝑐) → 𝑁𝑎+ (𝑎𝑐) + 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎(𝑎𝑐) 𝑁𝑎+ (𝑎𝑐) 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
Concentración
(moles/litro) 𝟖. 𝟑𝟑 ∗ 𝟏𝟎−𝟑 𝟖. 𝟑𝟑 ∗ 𝟏𝟎−𝟑 𝟖. 𝟑𝟑 ∗ 𝟏𝟎−𝟑
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻(𝑎𝑐) ↔ 𝐻 + (𝑎𝑐) + 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
Concentración 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯(𝒂𝒄) 𝑯+ (𝒂𝒄) 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶− (𝒂𝒄)
Inicial 0.09 0 0 + 8.33 ∗ 10−3
Cambio X x x
Equilibrio 0.09 - x 0+x x + 8.33 ∗ 𝟏𝟎−𝟑 + 0
[𝐻 + ][𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− ]
𝐾𝑎 =
[𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻]
[𝑥][𝑥 + 8.33 ∗ 𝟏𝟎−𝟑 ]
1.8 × 10−5 =
0.09 − 𝑥
𝑋 = 1.95 ∗ 10−4
𝑝𝐻 = − log(1.95 ∗ 10−4 )
𝒑𝑯 = 𝟑. 𝟕𝟏
pH teórico de solución amortiguadora agregando 1mL de hidróxido de sodio 0.01M.
0.01 moles NaO𝐻 1000 mL solución 1*10-5 moles NaOH 31 mL solución
X = 1*10-5 moles 𝑵𝒂𝑶𝑯 1 mL x =3.226*10-4 moles NaOH 1000 mL
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎(𝑎𝑐) → 𝑁𝑎+ (𝑎𝑐) + 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
𝑁𝑎𝑂𝐻(𝑎𝑐) → 𝑂𝐻 − (𝑎𝑐) + 𝑁𝑎+ (𝑎𝑐)
𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻(𝑎𝑐) ↔ 𝐻 + (𝑎𝑐) + 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− (𝑎𝑐)
𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑵𝒂(𝒂𝒄) 𝑵𝒂+ (𝒂𝒄) 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶− (𝒂𝒄)
Concentración M 8.33 ∗ 10−3 8.33 ∗ 10−3 8.33 ∗ 10−3
𝑵𝒂𝑶𝑯(𝒂𝒄) 𝑶𝑯− (𝒂𝒄) 𝑵𝒂+ (𝒂𝒄)
Concentración M 3.226*10-4 3.226*10-4 3.226*10-4
Concentración M 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶𝑯(𝒂𝒄) 𝑯+ (𝒂𝒄) 𝑪𝑯𝟑 𝑪𝑶𝑶− (𝒂𝒄)
Inicial 0.09 0 0 + 8.33 ∗ 10−3
Cambio x x x
Equilibrio 0.09 – x – 3.226*10-4 0+x x + 8.33 ∗ 10−3 + 3.226*10-4
[𝐻 + ][𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂− ]
𝐾𝑎 =
[𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻]
−5
[𝑥][8.33 ∗ 10−3 + 3.22 ∗ 10−4 + 𝑥]
1.8 × 10 =
[0.09 − 3.226 ∗ 10−4 − 𝑥
−5
𝑥(8.65 ∗ 10−3 + 𝑥)
1.8 × 10 =
0.09 − 𝑥
8.65 ∗ 10 𝑥 = 1.62 × 10−6
−3
𝑥 = 1.87 × 10−4
𝑝𝐻 = − log(1.87 × 10−4 )
𝒑𝑯 = 𝟑. 𝟕𝟑
