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Pruebas Bioquímicas en Medios de Cultivo

Este documento describe los procedimientos para realizar pruebas bioquímicas en medios de cultivo como el agar TSI, agar LIA, agar citrato de Simmons, caldo urea y caldo RM-VP para identificar bacterias como Salmonella. Instruye sembrar las muestras bacterianas por picadura, estría o loop en los diferentes medios e incubar a temperaturas específicas. Luego explica cómo observar resultados como la fermentación, producción de ácido y gases para identificar las bacterias.

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Este documento describe los procedimientos para realizar pruebas bioquímicas en medios de cultivo como el agar TSI, agar LIA, agar citrato de Simmons, caldo urea y caldo RM-VP para identificar bacterias como Salmonella. Instruye sembrar las muestras bacterianas por picadura, estría o loop en los diferentes medios e incubar a temperaturas específicas. Luego explica cómo observar resultados como la fermentación, producción de ácido y gases para identificar las bacterias.

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SEMBRAR POR ESTRÍAS SOBRE AGAR

EMB

RESIEMBRA SOBRE MEDIOS PARA PRUEBAS BIOQUÍMICAS NOM


114-SSA1-2004

• Observación de cultivos:
según la NOM

AGAR TSI. SIEMBRA POR PICADURA Y ESTRÍA


8.3.2.1 Agar TSI, en el fondo del tubo se observa vire del
indicador debido a la fermentación de la glucosa; en la
superficie del medio se observa un color rojo más
intenso que el medio original debido a la no
fermentación de la lactosa ni de la sacarosa. En la
mayoría de los casos se observa coloración negra a lo
largo de la punción debido a la producción de ácido
sulfihídrico. Incubar por 24 +- 2 h a 35°C
AGAR LIA. SIEMBRA POR PICADURA Y
ESTRÍA
8.3.2.2 Agar LIA, se observa intensificación del
color púrpura en todo el tubo por la
descarboxilación de la lisina. Considerar negativos
aquellos cultivos que produzcan claramente color
amarillo en el fondo del agar. La mayoría de las
cepas de Salmonella producen ácido sulfihídrico
en este medio con ennegrecimiento a lo largo de
la punción.

CALDO UREA. SIEMBRA POR LOOP


8.3.6.1 Con un asa estéril, tomar crecimiento del cultivo
presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e
inocular tubos de caldo urea. Utilizar un control de medio
para comparar el vire púrpura de las reacciones positivas
con el color del medio original. Incubar 24 +- 2 h a 35°C.

AGAR CITRATO DE SIMMONS. SIEMBRA POR PICADURA Y ESTRÍA

8.5.2.1 Agar citrato Simmons

Inocular por picadura y estría el tubo.

Incubar 96 + -; 2 h a 35 +-; 2°C.

Prueba positiva: crecimiento acompañado de un


cambio de color de verde a azul.

Prueba negativa: ausencia de crecimiento y sin


cambio de color
• 8.5.2.2 MEDIO SIM
• Inocular por punción.
• Incubar 24 h a 35 ± 2ºC.

• Movilidad.
• Prueba positiva: crecimiento a lo largo de la punción y en el seno del
medio de cultivo.
• Prueba negativa: crecimiento a lo largo de la punción exclusivamente.

• Producción De Ácido Sulfihídrico.


• Prueba positiva: desarrollo de un color negro a lo largo de la punción
que puede extenderse a todo el medio.
• Prueba negativa: ausencia de color negro.
• Producción De Indol
• Adicionar al tubo con medio SIM que presente crecimiento, de 0,2 a
0,3 ml de reactivo de Kovac.
• Prueba positiva: desarrollo de un anillo de color rojo.
• Prueba negativa: sin cambio de color.

VERIFICAR 3 PRUEBAS:
• 8.5.2.3 Caldo Rm-Vp…. Siembre Por Loop
• Inocular un tubo con el medio.
• Incubar 48 +- 2 h a 35 +- 2°C para la prueba de VP y 96 h para la prueba
RM.
• 8.5.2.3.1 Prueba De Voges-Proskauer (VP)
• Transferir a un tubo un ml del cultivo de 48 h.
• Adicionar 0,6 ml de solución de alfa naftol.
• Adicionar 0,2 ml de solución de hidróxido de potasio 40%.
• Adicionar algunos cristales de creatinina (opcional).
• Interpretar los resultados después de incubar 2 h a 35+- 2°C o 4 h a
temperatura ambiente.
• Prueba positiva: desarrollo de color rojo ladrillo.
• Prueba negativa: sin cambio de color.
• Reincubar el resto del medio RM-VP 48 h más a 35+- 2°C.

• 8.5.2.3.2 Prueba De Rojo De Metilo (RM)


• Adicionar al medio de cultivo de 96 h de incubación de dos a tres gotas
de solución de rojo de metilo.
• Interpretar los resultados inmediatamente.
• Prueba positiva: desarrollo de color rojo.
• Prueba negativa: desarrollo de color amarillo.

CALDO E.C
INOCULAR
POR LOOP:

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