2.
ASPECTOS GENERALES PARA DISEÑAR UN PROCESO DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS
El diseño de un proceso de recuperación y purificación de proteínas comparte muchas
características con otras actividades de diseño de ingeniería. Para diseñar un proceso o una
operación se requiere:
1. Para satisfacer varias restricciones, como la pureza, la calidad, la temperatura del proceso y el pH,
el rendimiento deseado, etc.
2. Conocer las propiedades de los materiales, por ejemplo, propiedades químicas y bioquímicas,
propiedades termodinámicas y fluidas del material del proceso.
Usando la información y el conocimiento de (1) y (2) para proponer una secuencia de equipos
interconectados en un orden particular.
3.INFORMACIÓN BÁSICA PARA DISEÑAR UN PROCESO DE SEPARACIÓN
El diseño de un proceso para purificar económicamente una proteína, mantener un alto
rendimiento y obtener un producto prácticamente puro y minimizar el costo, requiere cuatro
consideraciones principales:
1. Definir producto final
2. Caracterización del material de partida.
3.Definir posibles tipos de separación y restricciones.
4. Evaluación de la posible integración de procesos.
3.1 DEFINICIÓN DEL PRODUCTO FINAL
Es necesario definir el producto final y tener información sobre su uso. Por ejemplo:
1.¿Cómo se usará el producto?
Industrial
Diagnóstico
Reactivo de laboratorio
Terapéutico
Las preguntas con respecto a la pureza de uso son vitales (por ejemplo, 80,99 o 99,98%), así como
los rangos permitidos de concentraciones específicas de impurezas.
1. ¿Qué tan grande es el caudal?
Más grande que 3 m3 / h
Menor que 3 m3 / h
3.2 CARACTERIZACIÓN DEL MATERIAL DE PARTIDA
El segundo punto importante es la caracterización del material de referencia. El diseño del proceso
dependerá principalmente de las propiedades físicas, químicas y bioquímicas de los materiales
contaminantes en el caldo original y de las proteínas que constituirán el producto final. Las
propiedades del material de partida estarán determinadas parcialmente por:
1. Su fuente de fermentación
Bacteriano
Levadura
Célula de mamífero
2. ¿Qué tan grande es la concentración celular?
3. El tipo de medio de cultivo utilizado
Presencia de albúmina
Suero de ternera
Presencia de proteasas
Cuerpos sólidos como células enteras o restos celulares
4.Localización del producto
Intracelular
Extracelular
5. Propiedades fisicoquímicas del producto y las proteínas contaminantes en la mezcla final de
proteínas en solución
Carga superficial a diferentes phs y pI
Hidrofobicidad superficial
Peso molecular
Bioespecificidad hacia ciertos ligandos
6. La estabilidad del producto final también es de extrema importancia, ya que esto afectará los tipos
de operaciones que se pueden utilizar, así como los tiempos de congregación y procesamiento que
se pueden anticipar.
3.3 DEFINIR POSIBLES PASOS DE SEPARACIÓN Y RESTRICCIONES
Es necesario tener una base de datos con todos los pasos de separación posibles (Tabla 1) y
considerar todas las restricciones potenciales (Tabla 2).
3.4 EVALUACIÓN DE LA INTEGRACIÓN POTENCIAL DEL PROCESO
Finalmente, el proceso de producción debe tratar de integrar tanto como sea posible, aguas arriba,
fermentación y procesos aguas abajo. Asenjo y Leser (1996) han descrito posibles áreas y niveles de
integración de ingresos. La integración de procesos puede involucrar todo el proceso, partes
específicas de las operaciones de unidades particulares como se muestra en la figura 2. En la tabla
3 se muestran ejemplos de integración de procesos entre fermentación y operaciones posteriores y
entre operaciones posteriores.
El conocimiento que se muestra en las secciones anteriores se puede utilizar para definir un sistema
experto para la selección racional de los procesos de proteínas posteriores.
Tabla 1 Pasos principales y operaciones de la unidad utilizadas en el procesamiento posterior
Etapas Operación Unitaria
Recuperación de proteínas
Separación celular Centrifugación, proceso de membrana (filtración, microfiltración) partición
acuosa en dos fases.
Interrupción celular (solo para Homogeneización, molienda de cuentas, lisis química y enzimática y
proteínas intracelulares) permeabilización.
Separador de residuos (solo Centrifugación, procesos de membrana (microfiltración, ultrafiltración)
para proteínas intracelulares) partición acuosa de dos fases.
Concentración Ultrafiltración, precipita
Purificación de proteínas
Pretratamiento o aislamiento Pretratamiento o aislamiento primario: adsorción por lotes, cromatografía
primario de intercambio iónico, adsorción por afinidad, cromatografía de interacción
hidrofóbica, partición acuosa de dos fases
Cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC), cromatografía de
Purificación de alta resolución intercambio iónico de alta resolución, cromografía de afinidad,
cromatografía de quelato de metal (IMAC) cromatografía de tinte-ligad
HPL.
Pulido del producto final
Gel de filtración (GF), cromatografía de intercambio iónico
Tabla 2 Restricciones Potenciales
Restricciones Observaciones
Rango de pH El producto solo es estable en un rango de pH (por ejemplo, 4-9)
Rango de temperatura El producto es estable solo hasta cierta temperatura
Proteasas Eliminación de proteasas, ya que podrían degradar el producto proteico
Cuerpos de inclusión Los cuerpos de inclusión deben solubilizarse y replegarse
Tabla 3
Nivel de integración Acción
Fermentación aguas abajo (el diseño Inmovilización celular, reciclaje celular mediante membranas, uso de
adecuado del paso de fermentación puede cromatografía de lecho expandido después de la fermentación.
proporcionar condiciones para facilitar el flujo
aguas abajo) uso de separación líquido-líquido, uso de lecho expandido para la
Aguas abajo (recuperación y purificación) recuperación de proteínas, uso de cromatografía de interacción
hidrofóbica después de la precipitación con sulfato de amonio
