PRODUCCIÓN DE BIODIESEL A PARTIR DE LEVADURAS OLEAGINOSAS
I- Introducción
En la actualidad, más del 80% del suministro mundial de energía, es decir, más de cuatro
quintas partes, proviene de los combustibles fósiles, es decir, el petróleo, el gas natural y
el carbón. A nivel mundial, el petróleo proporciona un tercio de las necesidades
energéticas globales, el carbón más de una cuarta parte y el gas natural más de un quinto.
Para evitar los riesgos ambientales se propone la elaboración de biocombustibles estos
son carburantes líquidos – bioetanol, biodiesel – obtenidos de la transformación de
biomasa, que pueden ser utilizados en motores de vehículos complementando o
sustituyendo los combustibles derivados del petróleo y, en su caso, del gas, además
La mayor parte del biodiesel que se produce en la actualidad proviene de la combustión
de aceites vegetales de distinta procedencia o de los desechos de aceite que producen
algunas industrias. El problema de los primeros es la necesidad de grandes extensiones
de cultivo. Por ello, se investigan nuevas materias primas que sustituyan a los aceites
convencionales en la producción de energía sostenible. Es el caso de los microorganismos
oleaginosos, que también pueden ser una fuente para la producción de biodiesel. Los
microorganismos oleaginosos son los que acumulan más de un 20% de lípidos. En la
mayor parte de los casos, el aceite que se puede extraer de ellos está
en forma de triglicéridos, igual que en los aceites vegetales y las grasas animales. Por
tanto, los lípidos de los microorganismos podrían utilizarse en el proceso de producción
de biodiesel en la industria. Los principales microorganismos oleaginosos son las
microalgas, las bacterias, los hongos y las levaduras. La mayor parte de las
investigaciones actuales estudian la viabilidad de la utilización de microalgas, que utilizan
dióxido de carbono y luz solar para la producción de lípidos y tienen rendimientos de
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producción y velocidades de crecimiento superiores a los cultivos tradicionales de aceites
vegetales. La desventaja principal es la necesidad de luz y de grandes extensiones de
terreno.
La levadura especies Rhodotorula son hongos que forman parte de la microflora
comensal de la piel, uñas y membranas mucosas, entre las levaduras que se han estudiado
recientemente para la producción de lípidos como materia prima para fabricación de
biodiesel R. mucilaginosa se ha utilizado para producir lípidos a partir de productos de
desecho, como es el caso del almidón de tapioca, en un estudio reciente se utilizó dicho
almidón para el desarrollo de R. mucilaginosa y se obtuvieron porcentajes de 48% y 53%
de lípidos con respecto a su biomasa en un cultivo tipo batch y fed-batch respectivamente
(Mei et al., 2009).
II- Objetivo
El objetivo es extraer los lípidos de la levadura Rhodotorula
III- Marco teorico
1- Los Biocombustibles son ésteres que pueden hacerse a partir de distintos tipos
de aceites: girasol, soja, de palma e incluso de aceites usados provenientes de la
industria alimenticia, así como también de la grasa animal, se obtiene a partir de
biomasa que funciona en cualquier motor de ciclo diésel, sin necesidad de realizar
ninguna modificación en los mismos. (Corporación colombiana de investigación
agropecuaria CORPOICA. Producción de biodiesel. 2008). Este tipo de
combustible es biodegradable según ASOCAÑA: “el 85% se degrada en
aproximadamente 28 días, mientras que los combustibles fósiles pueden durar
años para degradarse”.
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2- Según el diccionario ABC: “La gasolina es una mezcla de hidrocarburos líquidos,
inflamables y volátiles logrados tras la destilación del petróleo crudo.
Tradicionalmente, se emplea como combustible en los motores de explosión
interna con encendido a chispa convencional, o en su defecto, por compresión y
también como disolvente. Esta se obtiene a partir del petróleo, en un recinto
especial conocido como refinería”.
3- Shchiffer y López afirman: “los vehículos a motor son la fuente de mayor
contaminación ambiental, ya que son los generadores principales de monóxido de
carbono (CO), óxidos de nitrógeno (NOx), compuestos orgánicos volátiles (cov),
y gases responsables del efecto invernadero (CO2 y metano). Por cada litro de
gasolina consumido por un automotor, unos 2.4 kg de CO2, se van a la atmósfera.”
4- La corporación colombiana de investigación agropecuaria CORPOICA, afirma
que “El biodiesel es un combustible sustituto del combustible para motores diésel,
que puede ser producido partiendo de materias primas agrícolas (aceites vegetales
y/o grasas animales), aceites o grasas de fritura usados y metanol o etanol (estos
también pueden ser obtenidos a partir de productos agrícolas)”.
5- Según el grupo de investigación del programa de maestría de sistemas energéticos
y medio ambiente de la universidad de Strathclyde: “Este tipo de bicombustible
es una mezcla de diferentes ésteres alquílicos producidos de aceites vegetales, a
través de un proceso llamado transesterificación. En este, los aceites vegetales y
una cadena corta de alcohol (metanol o etanol principalmente) en la presencia de
un catalizador (usualmente NaOH o KOH) se convierten en ésteres alquílicos y
glicerine.” (5). La corporación colombiana de investigación agropecuaria
CORPOICA, también afirma que “El biodiesel puro es biodegradable, no tóxico
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y esencialmente libre de azufre y compuestos aromáticos, sin importar
significativamente el alcohol y el aceite vegetal que se utilicen en este proceso”.
Figura No. 1. Proceso de producción del biodiesel tradicional.
6- Según el Instituto Interamericano de cooperación para la agricultura ICA: “Los
vehículos que funcionan con biodiesel reduce las emisiones de dióxido de
carbono hasta en un 78%, disminuyen los hidrocarburos cancerígenos hasta en
un 75%, reduce la emisión del hollín en un 40% a 60% y reduce la emisión de
monóxido de carbono CO entre un 10% y 50%. Si se reemplaza una tonelada de
ACPM por una tonelada de biodiesel, se evitaría la emisión de 3.3 toneladas de
CO2”.
7- En el artículo Proceso para la producción de biodiesel (metilester o ésteres
metílicos de ácidos grasos), Refinación de glicerina, el Ing. Rodolfo J. Larrosa
dice que las emisiones de gases con el biodiesel son:
• Monóxido de carbono (CO): la emisión durante la combustión del biodiesel en motores
diésel es 50% menor a la producida cuando se usa el combustible diésel.
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• Dióxido de azufre (SO2): no se produce emisión de dióxido de azufre por cuanto el
biodiesel no contiene azufre. Este gas es nocivo para la salud humana y también para la
vegetación.
• Material particulado: la emisión de estas partículas finas nocivas para la salud con el
empleo del biodiesel, se reduce del 65% respecto del combustible diesel.
• Productos orgánicos aromáticos: el biodiesel no contiene productos aromáticos
(benceno y derivados) siendo estos bastante tóxicos para la salud.
• Balance de dióxido de carbono (CO2): el dióxido de carbono emitido durante la
combustión del este biocombustible es totalmente reabsorbido por los vegetales. Por lo
tanto, el biodiesel puede ser considerado un combustible renovable.
8- Según la empresa GNSA ingeniería:
En caso de pérdidas de derrames de biodiesel en el terreno o en el ambiente en general,
el mecanismo predominante de la biodegradación es aquel debido a la actividad
microbiana. La biodegradabilidad es la facilidad con la cual la molécula de un compuesto
químico se rompe en otras más simples llegando a formar CO2 y H2O.
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El biodiesel está formado por cadenas hidrocarbonadas que forman ésteres con dos
átomos de oxígeno, lo que lo hace biológicamente activo. En el proceso de degradación
los ácidos grasos se oxidan y degradan formando ácido acético y un ácido graso con pocos
átomos de carbono.
A diferencia del biodiesel, los componentes del diesel se biodegradan lentamente o no
son biodegradables. Esto es porque este combustible está formado por una mezcla de
alcanos, alcanos ramificados, cicloalcanos e hidrocarburos aromáticos. Muchas
especies de microorganismos pueden degradar los alcanos, los otros compuestos pero
los aromáticos son más resistentes a la degradación. El diesel contiene pocos
componentes que poseen oxígeno en su molécula y por este motivo se considera como
poco activo biológicamente.
En la tabla que se muestra a continuación, se realiza una comparación entre el
combustible diesel tradicional y el biodiesel, evidenciándose una menor emisión de
compuestos contaminantes con el uso del biocombustible.
Tabla No. 1. Beneficios ambientales del biodiesel.
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Fuente: Universidad del Norte (2005). “Emisiones gaseosas y opacidad del biodiesel de
palma”.
IV- Antecedentes
Historia de los biocombustibles:
A finales del siglo XIX, Rudolf Diesel (1858-1913) un ingeniero alemán, inventó un
motor de combustión que utilizaba fuel oil y a partir de allí desarrolló tempranas versiones
de una máquina que utilizaba aceite de maní como energía, incorporando desde ese
entonces un combustible a parte de los fósiles, pero fue a partir del año 1970 que el tema
de biocombustibles se desarrolló de forma significativa a raíz de la crisis energética del
momento y del elevado costo del petróleo. A finales del año 1979, debido a la
preocupación que generó la primera crisis del petróleo, empresas estadounidenses como
Oil Company comenzaron a comercializar una mezcla de etanol para diluir la gasolina.
Los combustibles alternativos se convirtieron así en la solución al problema que
representaba el agotamiento de los recursos no renovables. En 1982, en Austria y
Alemania, se llevaron a cabo las primeras pruebas técnicas con este combustible vegetal
y en 1985, en Silberberg (Austria) se construyó la primera planta piloto productora de
biodiesel a partir de las semillas de colza o canola (NextFuel. Historia del biodiesel.
2006), pero originalmente fue Expedito Parente un científico brasileño desarrolló el
primer proceso industrial de producción de Biodiesel y definió los parámetros de
fabricación y controles de calidad que sirven para calificar un combustible como
Biodiesel. (Gautier,J. Historia del biodiesel. 2012).
Años después, se fueron desarrollando medidas en países como Austria, Italia, Francia y
Alemania para incrementar el uso de estos biocombustibles. En el año 2005, en Estados
Unidos, específicamente en el estado de Minnesota, se hizo obligatorio mezclar la
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gasolina con un mínimo de 2% de Biodiesel, esto con el fin de reducir las emisiones de
gases contaminan el medio ambiente. (NextFuel. Historia del biodiesel. 2006).
Historia: producción de biodiesel a partir de microorganismos.
Pérez, Otero y Álvarez en su artículo “Producción de biodiesel a partir de
microorganismos oleaginosos. Una fuente de energía renovable”, afirman que:
Desde finales del siglo XX aparece un creciente interés en la producción de biodiesel
microbiano como una fuente de energía alternativa para la sustitución de los combustibles
hidrocarbonados empleados en el transporte, debido a la posibilidad real del agotamiento
de los combustibles fósiles en el futuro, así como una vía para reducir el calentamiento
global debido a las emisiones de gases con efecto invernadero. En la naturaleza se
encuentra un amplio rango de microorganismos capaces de incorporar en su biomasa
cantidades significativas de lípidos bajo ciertas condiciones de propagación: microalgas,
levaduras, hongos y bacterias. Estos lípidos en algunos casos presentan un perfil de ácidos
grasos adecuados para la producción de biodiesel. Se ha demostrado que la producción
de aceites microbianos presenta varias ventajas con relación a su producción a partir de
las plantas: poseen un tiempo de reproducción más corto, requieren operaciones menos
complejas, no se afectan por los cambios climáticos o estacionales y su producción es
mucho más fácil de escalar.
Antecedentes de producción de biodiesel a partir de microorganismos:
Como antecedente local, se tiene el estudio “Producción de biocombustibles de tercera
generación: Transesterificación de aceite sintético de microalgas para la Producción de
biodiesel”, por V. Plata y V. Karkof, en el cual se realiza un análisis de la mezcla de los
aceites obtenidos por transesterificación de dos especies de microalgas: Chlorella
protothecoides y Nannochloropsis oculat, cuya composición de ácidos grasos se
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aproxima a la del aceite de la microalga Chlorella Vulgaris, que es la especie utilizada
para la producción de este tipo de biocombustibles pero por la imposibilidad de adquirir
este aceite o producirlo en cantidades necesarios en Colombia, se optó por seguir esta
metodología propuesta en este proyecto de investigación, el cual está apoyado por el
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural de Colombia. El estudio concluye que la
producción de biodiesel a partir de aceite de este tipo de microorganismos contribuirá
notablemente a la disminución de emisiones de gases de efecto invernadero producidos
en la combustión de combustibles fósiles y que igualmente evita el uso de cultivos que se
pueden emplear para la alimentación humana como materia prima.
El otro antecedente es el proyecto: “Bacterias: materias primas de los biocombustibles”,
realizado por el grupo de investigación de la facultad de ciencias naturales de la
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco, en el cual se estudian bacterias
oleaginosas capaces de transformar los residuos orgánicos en aceites para biodiesel que
pueden ser obtenidos del ambiente, producto de la contaminación.
El objetivo del proyecto es desarrollar y optimizar el proceso de producción de aceites
para biodiesel a partir de residuos orgánicos por medio de bacterias oleaginosas. La
investigación logró desarrollar un método de tinción (método de coloración) de colonias
para la selección de bacterias oleaginosas del ambiente y obtuvo los valores de
rendimiento de biomasa y aceites, a partir de diferentes residuos orgánicos, utilizando
diferentes bacterias autóctonas de la Patagonia.
Además los investigadores involucrados encontraron algunos de los genes involucrados
de manera directa en la utilización de residuos orgánicos y en la producción de aceites en
las bacterias objeto de estudio. Estos resultados contribuyen a mejorar el entendimiento
de los procesos bioquímicos que intervienen en la producción de aceites en las bacterias
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y a partir de estos conocimientos, se trabaja en la optimización y desarrollo del proceso
de producción de aceites para biodiesel a mayor escala. El resultado que se busca es una
nueva fuente de biocombustibles, a través de diferentes microorganismos, procesos y
métodos de producción.
Rodhotula un género de levaduras pigmentadas
unicelulares, parte de la
división Basidiomycota . Es fácilmente
identificable por colonias distintivas de color
rosada / rojisa cuando se cultiva en SDA ( Agar de
Dextrosa de Sabouraud ). Este color distintivo es
el resultado de los pigmentos que la levadura
crea para bloquear ciertas longitudes de onda de
la luz (620–750 nm) que de lo contrario serían
dañinas para la célula.
Estos hongos forman parte de la microflora comensal de la piel, uñas y membranas
mucosas, aparecen también en el queso, los productos lácteos y diversas fuentes
ambientales como aire, suelo, cortinas de ducha, lechada blanca de las bañeras y cepillos
de dientes. Han sido encontradas en aguas de océano; pueden contaminar gel usados
para ultrasonido terapéutico, aires, soluciones intravenosas, catéter, además pueden
aislarse en orina y heces.
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Rhodotorula mucilaginosa es de distribución universal, se aísla de la naturaleza, la piel y
las mucosas del ser humano y de animales. (Arenas, 2008)
Azul de algodón Lactofenol, 40x. Se observan los blastoconidios de Rhodotorula
mucilaginosa ovales y elongadas. (Bonifaz, 2012)
Morfología Macroscópica:
Colonias de crecimiento rapido (maduran en 4 diás), con un tamaño de 2 a 3cm de
diámetro, con un color rosa coral, aunque pueden llegar a ser rojas o naranjas; Suaves,
lisas, húmedas y algunas veces de aspecto mucoide. (Bonifaz, 2012. Larone, 2011)
Cultivo de Rhodotorula mucilaginosa (antes conocida como R. rubra), con colonias
rojizas, suaves, lisas, humedas de aspecto mucoide. Sabouroad Dextrosa Agar.
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Morfología Microscópica:
Son levaduras, los blastoconidios son de 2 a 4µm de diámetro, ovoides o ligeramente
alargados, monogemantes de base estrecha, solo en ocasiones excepcionales forma
seudohifas. (Bonifaz, 2012)
Para diferenciar las especies se utiliza la prueba de asimilación de Maltosa. R.
mucilaginosa la asimila solo en algunas veces, R. glutinis, siempre la asimila y R.
minuta, no la asimila. Aunque R. minuta en algunas ocasiones asimila la lactosa, a
diferencia de las otras dos especies. (Larone, 2011)
Se observan los blastoconidios de 2 a 4µm de diametro, en la parte superior, un
blastoconidio monogemante de base estrecha. Gram, 100x.
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MATERIALES Y METODO
Células levaduriformes correspondientes al género Rhodotorula, al realizarle a estas
colonias la técnica de Gram, se observaron células levaduriformes, por lo que
nuevamente se inoculó el crecimiento en el medio de cultivo específico para aislamiento
de estas levaduras, que es el agar saboraud, agar papa dextrosa. Se siembran en tres
tubos y se incubaron a temperatura ambiente por un periodo de siete a diez días. En un
periodo de 48 a 72 horas un crecimiento de colonias mucoides, color rojizo, rosado
intenso. Se usa nuevamente la tinción de Gram, resultando células levaduriformes
ovaladas en brotes. Se realiza también coloración cotton blue y se observaron estas
características en el microscopio formando racimos irregulares, sin producción de
micelios. A dichas colonias se les realizaron diferentes pruebas bioquímicas para su
identificación, tales como: fermentación de azúcares, prueba de inositol (-), prueba de
ureasa (+), reactivos procedentes del Laboratorio BIOCEN de Cuba.
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