Universidad Autónoma de Chiriquí, Facultad de Ciencias
Naturales y Exactas, Escuela de Biología
Química analítica cuantitativa (QM-L 228)
Experimento 11
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN
Autores
Miranda, Yismerais, 4-812-1826
[email protected] Rovira, Angie, 4-823-392
[email protected] Coordinadora: Joyce Lezcano
Semestre I
17 de junio del 2019
Resumen
El objetivo primordial de esta experiencia fue realizar un análisis espectrométrico
UV-VIS para determinar la absorbancia de soluciones de permanganato de potasio,
nitrato de cromo y sulfato de níquel, a diferentes concentraciones. En donde se basó
en la interacciones entre las ondas electromagnéticas y la materia de la región UV-
VIS, conocido mejor como un análisis espectrofotométrico de absorción, que fue el
estudio de la cantidad de luz absorbida por la materia presente en la solución que
es característica de cada compuesto. Por ende se conoció que la respuesta de dicho
componente es función de las características del haz de luz incidente en cada
muestra, lo que permite determinar la respuesta en función de la calidad del haz
proporcionado. Del cual dicho conjunto de respuesta en el rango de longitud de onda
de la gama UV-visible se denomina espectro de absorción; dicha respuesta es el
código de cada compuesto.
Palabras claves: Concentración, espectrofotometría, ley Lambert-Beer, solución
patrón, absorbancia, región UV-VIS.
Objetivos
Adquirir conocimiento de la absorción de luz en algunos compuestos junto al
manejo adecuado del espectrofotómetro.
Determinar el aspecto que presenta el espectro de absorción de una muestra de
KMnO4, NiSO4, [Cr (NO3)3].
Explicar el proceso de absorción de energía radiante y las leyes que la rigen.
Marco teórico
De acuerdo con Kalimi y Sohonie, (1965), la espectrofotometría UV-visible es una
técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en
solución. Se basa en que las moléculas que absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida dependen de forma
lineal de la concentración. Además es usada para identificar compuestos por su
espectro de absorción y conocer la concentración de un material o sustancia, esto
último permite, seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas así como
determinar enzimas y proteínas incluso ácidos nucleicos.
Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, como ya
sabemos es un equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por
medio de una longitud de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un
medio es proporcional a la concentración del soluto presente, es entonces así que
la concentración de un soluto colorido en solución puede ser determinada en el
laboratorio mediante la medición de su absorción de luz a una longitud de onda
específica. Las muestras en estos equipos se utilizan en estado líquido y se colocan
en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes
tamaños y materiales. (Harris, 2001).
Según Gart, (2009), en espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma
visible de radiación electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son
invisibles. En espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del
ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm). La región UV se
define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una región de
energía muy alta. En la región visible apreciamos el color visible de una solución y
que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El
color que absorbe es el complementario del color que transmite. Por tanto, para
realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que
absorbe luz la solución coloreada. La fuente de radiación visible suele ser una
lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm.
Cita Clavijo, (2002), la transmitancia (T) de una sustancia en solución es la
relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha
atravesado la muestra y la absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la
muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.
Ley de Lambert-Beer, esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en
solución: A = log I/Io = ε.c.l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración a
mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también depende
de la distancia que recorre la luz por la solución a igual concentración, cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará; y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad denominada coeficiente de
extinción que es específica de cada cromóforo. (Zago, 2010).
Materiales y reactivos
Cuadro 1. Materiales
Descripción Capacidad Cantidad
Vasos químicos 100 mL 2
Bureta 50 mL 1
Espectrofotómetro (100-400) nm 1
UV-VIS (Gennessys)
Matraz volumétrico (200-300) mL 2
Celdas de plástico - 4
Cuadro 2. Reactivos
Reactivo Cantidad Toxicidad
Permanganato de 250 mL Ingestión: quemadura, edema, pulso lento, shock
potasio (KMnO4) con caída de la presión sanguínea.
Inhalación: irritación del tracto respiratorio, tos, falta
de respiración.
Contacto: enrojecimiento, dolor, quemaduras
severas, manchas de color café al contacto.
Sulfato de níquel 250 mL Ingestión: dolor abdominal, diarrea, náuseas y
(NiSO4) vómitos.
Inhalación: irritaciones en vías respiratorias, tos,
dolor de garganta y dificultad para respirar.
Contacto: irritaciones, enrojecimiento y dolor.
Nitrato de cromo 250 mL Ingestión: irritación gastrointestinal.
[Cr(NO3)3] Inhalación: tos.
Contacto: irritación, enrojecimiento.
Fase Experimental
A. Preparación de las soluciones madres de KMnO4, NiSO4, [Cr (NO3)3].
Se prepararon 250 mL de
Realizamos caculos para
soluciones patrones de
preparar los patrones
KMnO4, NiSO4, [Cr (NO3)3]
correspondientes de
de concentraciones de
dichas soluciones
0.0003M, 0.225M, 0.150M
B. Determinación de la longitud de onda de máxima absorción por las
soluciones permanganato de potasio, sulfato de níquel, nitrato de cromo.
Se verifico el equipo Se calibro el aparato
(condiciones Fijamos los con un blanco de agua
operacionales ) y se parámetros destilada a 100% de
seleccionó modo correspondientes transmitancia y 0% de
espectrofotométrico absorbancia
Determinamos la longitud de onda
Se realizó un que corresponda a la máxima
barrido de (400- absorbancia de las soluciones de
700) nm KMnO4, NiSO4, [Cr (NO3)3]
C. Construcción de la curva de calibración
Una vez determinada Construimos una
las longitudes de onda gráfica de la
de máxima absorbancia vs
absorbancia para las concentración, con la
soluciones de longitud de onda de
diferentes máxima absorbancia
concentraciones constante
Resultados y cálculos
Cuadro 4. Datos de la Curva de calibración del Nitrato de cromo.
Concentración (M) absorbancia
0.150 0.073
0.120 0.042
0.090 0.038
0.060 0.027
0.030 0.021
0.015 0.006
Preparación de las muestras patrones de nitrato de cromo
Solución madre de [Cr (NO3)3]
𝑔 237.93𝑔
𝑀 = (𝑃.𝑀.)(𝑉 𝑔 = (𝑀)(𝑃. 𝑀. )(𝑉) 𝑔 = (0.150𝑀 ) ( ) (0.250𝐿) = 5.985𝑔
𝐿) 𝑚𝑜𝑙
Solución 0.120 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.120𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 80 mL
0.150𝑀
Solución 0.090 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.090𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 60 mL
0.150𝑀
Solución 0.060 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.060𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 40 mL
0.150𝑀
Solución 0.030 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.030𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 20 mL
0.150𝑀
Solución 0.015 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.015𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 10 mL
0.150𝑀
Graficó 1. Curva de calibración del [Cr (NO3)3]
Cuadro 5. Datos de la Curva de calibración del Permanganato de potasio a
526nm.
Concentración (M) absorbancia
0.003 2.513
0.0024 2.462
0.0018 2.375
0.0012 2.160
0.0006 1.217
0.0003 0.523
Preparación de las muestras patrones de permanganato de potasio
Solución madre de (KMnO4)
𝑔 158.034𝑔
𝑀 = (𝑃.𝑀.)(𝑉 𝑔 = (𝑀)(𝑃. 𝑀. )(𝑉) 𝑔 = (0.003𝑀 ) ( ) (0.250𝐿) = 0.1185𝑔
𝐿) 𝑚𝑜𝑙
Solución 0.0024 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.0024𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 80 mL
0.003𝑀
Solución 0.0018 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.0018 𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 60 mL
0.003 𝑀
Solución 0.0012 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.0012𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 40 mL
0.003𝑀
Solución 0.0006 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.0006𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 20 mL
0.003𝑀
Solución 0.0003 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.0003𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 10 mL
0.003𝑀
Graficó 2. Curva de calibración del KMnO4.
Cuadro 6. Datos de la Curva de calibración del Sulfato de níquel.
Concentración (M) absorbancia
0.225 0.402
0.18 0.302
0.135 0.232
0.090 0.163
0.045 0.077
0.025 0.057
Preparación de las muestras patrones de sulfato de níquel
Solución madre de (NiSO4)
𝑔 154.75𝑔
𝑀 = (𝑃.𝑀.)(𝑉 𝑔 = (𝑀)(𝑃. 𝑀. )(𝑉) 𝑔 = (0.225𝑀 ) ( ) (0.250𝐿) = 8.7047𝑔
𝐿) 𝑚𝑜𝑙
Solución 0.18 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.18𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 80 mL
0.225𝑀
Solución 0.135 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.135 𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 60 mL
0.225 𝑀
Solución 0.090 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.090𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 40 mL
0.225𝑀
Solución 0.045 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.045𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 20 mL
0.225𝑀
Solución 0.025 M
(𝐶2 )(𝑉2 ) (0.025𝑀)(100𝑚𝐿)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 𝑉1 = 𝐶1
= = 11.11 mL
0.225𝑀
Graficó 3. Curva de calibración del NiSO4.
Discusión
El espectro de absorción de las muestras patrones asignado muestra una creciente
al comenzar porque la concentración de las muestras van aumentando y alcanza
su punto máximo de absorbancia, para así, entonces, permitir asegurar que la
concentración es la que juega el papel más importante dentro de la solución, puesto
que si tiene muy poca, va a ser una absorbancia baja, porque “se absorben aquellas
frecuencias que son capaces de producir excitación electrónica”. Es decir la
absorbancia es directamente proporcional a la concentración, por lo tanto. Siempre
que la concentración de los patrones aumente, la absorbancia aumenta también.
(Brown, 2009).
La determinación del espectro de absorción tanto para la soluciones de KMnO4,
NiSO4, [Cr (NO3)3] se hace para conocer la concentración donde ocurre la absorción
máxima de energía que permite el mayor salto energético, es decir, que las
sustancias pasen de un estado menor a uno mayor conocido como estado excitado.
Además, para cada especie existen bandas de absorción que especifican la energía
necesaria para lograr esos saltos energéticos, siendo esto una huella digital para
identificar las sustancias, según Whitten, K (2008).
En consecuencia, un espectro de absorción no es más que una representación
gráfica que indica la cantidad de energía absorbida en función de la concentración
por cada especie química. En la práctica la concentración donde se daba la mayor
absorción para el permanganato de potasio fue de 0.003M, para el nitrato de cromo
fue de 0.150M, y la del sulfato de níquel a 0.225M, indicando así la concentración
donde se absorbe la cantidad de energía necesaria para dar el mayor salto
energético. Igualmente, muchos autores señalan que el espectro de absorción
puede verse afectado por los otros componentes de la solución, entonces, la
concentración donde ocurre la máxima absorción de las especies estudiadas se
encuentra sujeta al error de tal asociación, manifiesta Underwood, (1986).
Se recuerda que el espectro de absorción tanto para el KMnO4, NiSO4, [Cr (NO3)3],
se determinó a partir de una solución madre. Por otra parte, al tener para cada
especie determinada la concentración donde ocurre la absorción máxima, se
procede a construir la curva de calibración, que fue lo que se logró con las muestras
hijas, que nacen de porciones de la muestras madres diluidas a volúmenes fijos; ya
que para obtener los espectros en el ultravioleta con fines cualitativos se suele
emplear disoluciones diluidas del analito según Skoog, D (2010). Y aquí se
determina el valor de absorbancia para cada hija, referida en los cuadros de datos
4, 5, 6, y encontrado sustento en la ley de Beer, que establece que a bajas
concentraciones es menor la absorbancia, y a mayores concentraciones mayor
absorbancia. En tal sentido, las curvas de calibración se relacionan por medio de
una tendencia lineal o correlación lineal, donde los valores se grafican en función
de la absorbancia y la concentración, para cada curva de las especies (KMnO4,
NiSO4, [Cr (NO3)3]); dando así la linealidad explicada anteriormente, estableciéndola
mediante el coeficiente de correlación, el cual, según los valores reportados estuvo
en el rango 0 y 1 lo que implica una correlación positiva entre tales variables
(absorbancia y concentración).
Respecto al instrumento estadístico, fue usado el método de regresión lineal para
obtener los datos referentes a las variables de la función que correspondían a las
cifras obtenidas en cuanto a absorbancia y concentración; en este tópico es de notar
que la confiabilidad de los datos del sulfato de níquel son altos debido a poseer un
coeficiente de correlación igual a 0.9955; mientras que para el caso de nitrato de
Cromo y de permanganato de potasio los datos empíricos no arrojan una
confiabilidad tan precisa debido a que el coeficiente de correlación arrojo valores de
0.9148 y 0.7741 respectivamente; postulado que se corrobora al examinar las
gráficas correspondientes.
Conclusiones
La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para absorber la
radiación electromagnética, pudimos observar cómo, dependiendo de la
concentración y la longitud a la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un
punto máximo de absorción.
Por medio de esta práctica se logró familiarizarse y aprender el uso correcto y
manejo del espectrofotómetro de absorción UV-visible por medio de sustancias
que presentan color y que por medio de la espectrofotometría se puede observar
su región de absorbancia en determinada concentraciones que nosotros
podemos manejar de acuerdo a nuestras necesidades.
Por lo tanto, se manifiesta las ventajas y facilidades de este método, que se
simplifica gracias a equipos analíticos adecuados como el espectrómetro UV-
Visible, a disposiciones teóricas comprobadas como la Ley de Beer, a las
facilidades gráficas, proporcionadas por cualquier computador. En fin queda
expresado que es posible determinar la presencia y absorbancia de cualquier
sustancia, (para el particular: Potasio, Níquel y Cromo) contenida en muestras
de diferentes concentraciones, aplicando la espectrofotometría UV- Visible.
Referencias bibliográficas
Gart, C. (2009). Fundamentos de la Química Analítica. [en línea]. México:
McGraw Hill. Disponible: http://es.slideshare.net/CalexisIbal/quimica-analitica-
christian-6th?related=1, recuperado el 22 de junio del 2019.
Skoog, W. (2008). Química Analítica. [en línea], México: McGraw Hill. Disponible
en: http://es.slideshare.net/alis590/fundamentos-de-qumica-analtica-skoog-8va-
ed, recuperado el 19 de junio del 2019.
Sánchez B. (2007). Química Analítica General. [en línea], España: Síntesis S.A.
Disponible en: http://www.sintesis.com/data/indices/9788497563867.pdf.
recuperado el 21 de junio del 2019.
Day,Jr (2005).Quimica analítica cuantitativa. [en línea], México : Pretince Hall
Disponible:http://es.slideshare.net/dianitacajape/64572159quimicaanaliticacuan
titativadayunderwood?related=1. recuperado el 21 de junio del 2019.
Brown, T. (2009). La ciencia central. (Novena Edición). México: Pearson.
Omar, Omayra (2013), Manual de laboratorio Química Analítica I. Editor Omar
chacón, Omayra de Santamaría Panamá, Chiriquí.
Skoog, D y West, D, Holler F. Química Analítica. 4 Ed. Mc Graw-Hill. México.
1990 Págs. 225-230. Cardenas, Fidel A, y colaboradores Editorial McGraw
Reacciones oxidación-reducción, recuperado el 21 de junio del 2019 disponible
en:http://es.wikipedia.org/wiki/Reducci%C3%B3noxidaci%C3%B3n.
Titulación y valoración, recuperado el 22 de junio del 2019, disponible en:
www.uv.es/qflab/2013_14/.../1ING_Valor%20acidobaseCa .pdf.
Canales Margarita (1999). Reacciones redox. México: UNAM.
Clavijo. O, (2002). Fundamento de química analítica, equilibrio
iónico. Universidad de Colombia, Colombia.
Day Jr. R, Underwood A. Química Analítica Cuantitativa. (1989). Pearson.
Naucalpan de Juárez, México.
Skoog, D. y West, D. (2010) "Fundamentos de Química Analítica octava edición",
Cengage Learning Editores. Ciudad de México. México.
Whitten, K (2008) “Química octava edición” Cengage Learning Editores. Ciudad
de México. México.
