PRÁCTICA DE LABORATORIO NO 1.

MICROSCOPIA: MANEJO Y CUIDADO DEL

MICROSCOPIO. MEDIDAS MICROSCÓPICAS Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS
Harold Felipe Niño – 20171180049
Juan David Rodriguez – 20171180055
17/08/2017
1. OBJETIVO GENERAL.
Reconocer e indicar las partes del microscopio y conocer algunas medidas microscópicas
importantes.

2. OBJETIVOS ESPECIFICOS.
 Comprender el uso y la importancia de todas y cada una de las partes del microscopio.
 Realizar diferentes tipos de muestras para con estas conocer el alcance óptico del
microscopio.
 Analizar y reconocer los diferentes tipos de células de organismos llevados a la práctica.

3. MATERIALES
- Microscopio.
- Láminas y laminillas.
- Papel de arroz.
- Papel absorbente o servilletas.
- Tijeras.
- Papel periódico impreso.
- Tela de colores delgada.
- 3 toallas.
- Jabón de manos.
- Elodea.
- Azul de metileno.
- Lugol.
- ¼ de papel mantequilla milimetrado.
- Gotero.
- Isipós.
- Cebolla cabezona.
- 3 hojas de árbol.
- Cuchilla minora.
- Aguja de disección.

4. PROCEDIMIENTO
4.1 Uso del microscopio.
 Inicialmente escuche las indicaciones de la docente sobre la estructura del microscopio
y sus cuidados. Registre datos.
 Examine el microscopio cuidadosamente e identifique sus partes.
 Limpie cuidadosamente la lámina y la laminilla, en el centro de la lámina coloque una
gota de agua y sobre ella coloque, al derecho, una letra (A o E), que ha recortado del
papel prensa.
 Acerque la laminilla en posición oblicua y apoye una arista sobre la lámina, al lado de
la gota; déjela caer suavemente sobre la gota.
 Limpie cuidadosamente con una servilleta el exceso de agua y la parte de debajo de la
lámina.
 Coloque la lámina en la platina y asegúrela.
 Encienda el microscopio y asegúrese que el objetivo sea el de menor aumento (4X),
observe por el ocular y ajuste el enfoque con el botón macrométrico y luego el
micrométrico. Registre datos.
 Luego gire suavemente el revólver para colocar el siguiente objetivo (10X), tenga
cuidado de que el objetivo tropiece con la lámina o muestra. Registre datos. Repita el
procedimiento con el objetivo de 40X.
 Repita nuevamente el procedimiento haciendo un montaje de hebras de hilos de colores
o tela delgada. Observe al microscopio y registre datos.

4.2 Determinación del diámetro de los campos ópticos.

 Determinación del diámetro del campo óptico a menor aumento: Coloque una
pequeña muestra del papel milimetrado (1 cm2) en montaje húmedo y enfoque un
cuadrado de 1mm de área. Ubique el cuadrado pequeño en un plano diametral y mida
en mm el diámetro de campo óptico con el objetivo de menor aumento.
A: Enfoque de un cuadrado de 1 mm de lado
B: Medida en mm de diámetro del campo óptico a menor aumento. Una vez obtenido
el diámetro en mm realice la conversión a um.
 Determinación y cálculo del diámetro del campo óptico a mayor aumento: Con el
objetivo de mayor aumento, repita el procedimiento anterior. En el caso de que se
imposibilite la lectura del Ф, realice el cálculo según el principio por el cual al pasar a
un aumento mayor, la imagen se aumenta tantas veces más y el campo óptico se reduce,
proporcionalmente al aumento empleado; así por ejemplo:
Diámetro del campo óptico a 10X (< aumento) = 1300 um, entonces:
Diámetro del campo óptico a 40X (> aumento) = 10/40 x1300 = 325 um.

4.3 Estimación del tamaño celular.

 Tome una hoja de elodea ubique la hoja de manera horizontal, haga observación con el
objetivo 10x o 40 x, determine el número de células que hay en el campo óptico
horizontalmente y verticalmente.
 La Célula de elodea es rectangular, el área de un rectángulo es A = L x h, siendo L =
largo y h es = ancho. Determine el número de células que hay horizontalmente en el
campo óptico que observó, si el objetivo es 10x entonces:
Ф10x = El diámetro de 10x hallado/el número de células que hallo horizontalmente,
este valor corresponde a h.
  Luego haga el mismo procedimiento pero divídalo por el número de células halladas
verticalmente: Ф10x = El diámetro de 10x hallado/el número de células que hallo
verticalmente, este valor es L. ahora aplique la fórmula de área.
 Por ultimo haga ese mismo procedimiento con el lente de mayor aumento.

4.4 Células epiteliales de la mucosa oral.

 La cavidad oral se encuentra revestida por una membrana celular de capas múltiples.
Es fácil desprender las células más superficiales de dicha membrana sin causar
demasiado traumatismo a la misma y estudiar sus características generales.
 Con un baja lenguas o un hisopo, efectúa un raspado de la mejilla interna y colócala
sobre un portaobjetos tratando que el material quede bien extendido.
 Agrégale una gota de azul de metileno, desecha el exceso y observa la preparación al
microscopio utilizando objetivos 4X, 10X y 40X.
 Registre los datos.

4.5 Células de la epidermis de cebolla.

 Las cebollas son bulbos formados por células vivas de las cuales pueden crecer raíces
y hojas cuando las cebollas se plantan o se almacenan en un sitio húmedo.
 Corte aproximadamente un cuadrado de 2 cm2 en la cebolla.
 Observe que la cebolla se separa en capas llamadas catafilos. Tome uno de estos
catafilos (2 cm2) con las pinzas desprende una capa muy delgada y transparente esta es
la epidermis.
 Colóquela en un portaobjeto con una gota de agua de modo que la superficie que estaba
en contacto con el catafilo quede hacia arriba. Coloque un cubreobjetos y observe al
microscopio. Registre datos.
 Retire la preparación del microscopio y colóquele una gota de Lugol en el borde del
cubreobjetos para que la solución penetre por difusión. Extraer el líquido sobrante con
papel absorbente. Observar al microscopio nuevamente y registre datos.

4.6 Estomas en hojas de árbol.

 Realice un corte longitudinal, por el envés, a la hoja de árbol.
 Colóquelo en una lámina con una gota de agua y la laminilla.
 Observa al microscopio, deberá identificar una estructura llamado estoma.

5. RESULTADOS.
5.1 Microscopio y sus partes.
El microscopio debe estar ubicado a ¼ de distancia de donde se ubica el estudiante hacia
el centro del mesón. Si se quiere correr el microscopio se debe hacer con cuidado y no
se debe arrastrar, para que su desplazamiento sea correcto se debe levantar de la base y
el brazo sin hacer fuerza en los objetivos o binoculares.
La luz cumple un factor muy importante en el desarrollo de la practica debido a que a
partir de la intensidad de esta puede hacer que la visibilidad de las muestras sea mayor
 o menor, al igual que al realizar el enfoque con los bonotes micrométrico y
micrométrico debido a que si no se hace un buen uso de estos, la muestra siempre se
verá borrosa o de poca calidad.
El microscopio tiene un revolver, este sostiene los aumentos de 4X, 10X, 40X y 100x,
este último es el de mayor alcance óptico y solo se utiliza haciendo uso de aceite de
inmersión, por el contrario este aumento está prohibido.
Con las muestras echas de la letra de periódico y trozo de tela se puede comprobar la
función del microscopio de aumentar la capacidad de la vista para poder ver detalles
que a simple vista no se puede. En periódico se puede observar que todas las muestras
se ven al contrario por ejemplo la letra ‘’a’’ no se observa así, si no así ‘’ɐ’’, con la
capacidad de los diferentes aumentos se pueden ver los detalles la tinta, las diferentes
capas de esta, los filamentos que componen el periódico y algo muy curioso es el color
de la letra todos la vemos negra, pero al examinarla con el aumento de 40X se puede
ver que la tinta puede variar sus tonos de rojos y naranjas a rosados morados.

5.2 Campos ópticos y sus dimensiones.

Para saber las medidas y dimensiones cada uno de los campos ópticos, se realizaron una
serie de muestras en donde se colocaba un centímetro cuadrado de una hoja mantequilla
milimetrada en la lámina con una gota de agua para así poder observar bien. Cada
cuadro dentro del centímetro cuadrado correspondía a un milímetro (1mm) y este a su
vez a mil micras (1000 um). Las dimensiones de los campos ópticos obtenidas en clase
fueron las siguientes:

AUMENTO FORMULA MEDIDA EN MEDIDA EN

MILIMETROS MICRAS (um)
(mm)
4X N.A 4.2 mm 4200 um
10X N.A 1.8 mm 1800 um
40X 4 0.42 mm 420 um
40x = ∗ 4200
40
100X 100x 0.168 mm 168 um
4
= ∗ 4200
100
Tabla 1, dimensiones de los aumentos. (Niño y Rodríguez, 2017)
Según la tabla se puede observar que para los aumentos de menor alcance no es
necesario aplicar la formula y estos tienen un campo óptico mayor, por el contrario para
los aumentos de mayor alcance es difícil calcular las dimensiones del campo óptico
manualmente, así que se hace uso de la formula y como resultado se obtiene que sus
dimensiones son menores.

5.3 Células de la elodea.

Las células de la planta elodea son de forma alargada y rectangular, por esta razón se
utiliza la fórmula del rectángulo para calcular su área. La área del rectángulo es H*L y
en esta caso H hace referencia a la medida del aumento dividida por el número de
 células horizontales, la L hace referencia a la medida del aumento dividida por el
número de células verticales. De esta forma se pueden calcular el área de las células
dependiendo del campo óptico:

AUMENTO CELULAS CELULAS H L AREA

VERTICALES HORIZONTALES
10X 15 48 120 37.5 4500
um um um
40X 4 11 105 38.1 4000.5
um um um
Tabla 2, dimensiones y área de la célula de elodea. (Niño y Rodríguez, 2017)
5.4 Células epiteliales de la mucosa oral.
Al enfocar con el aumento de menor alcance (4X) se puede observas que las células
están aisladas y son poco claras. Al ir subiendo de aumento a 10X y después a 40X se
puede observar unas células planas, poligonales y de forma más o menos irregular. Al
igual que en el aumento de menor aumento, en su mayoría las células están aisladas.
Para lograr el desprendimiento de las células epiteliales de la mejilla interna se tuvo que
hacer presión y raspado interno de manera brusca, por esta razón las células en su
mayoría se encuentran muertas y están dobladas en muchas ocasiones.
El azul de metileno ayuda a que por medio de su tente se distinga el núcleo del
citoplasma, tiñendo el núcleo de un azul intenso y el citoplasma de un azul más suave
y sutil.

5.5 Células de la epidermis de la cebolla.

La muestra de la epidermis de la cebolla en cualquiera de los tres aumentos (4X, 10X y
40X) se puede evidenciar fácilmente sus células cuando se hace uso del lugol, que
tienen forma de celdas alargadas, también se puede diferenciar la pared celular gruesa,
el citoplasma de la célula, y su núcleo teñido con el lugol.
Por otro lado, al observa la muestra de la epidermis sin un tinte como lo es el lugol es
difícil visibilizar las partes de la célula, aduras penas se puede ver las celdas alargadas
casi transparentes, y al aumentar la capacidad óptica con los aumentos la muestra a la
vista humana se distorsiona y no tiene forma alguna.

5.6 Hojas de árbol y sus estomas.

La muestra de la hoja de árbol se debe obtener con mucho cuidado y por el envés de la
hoja (por detrás) en esa delgada capa se pueden observar las estomas desde el aumento
4X y en el aumento de 40X se ve perfectamente sus componentes, estos al momento de
verlo en el microscopio están abiertos.
Se encuentran estomas en abundancia y presentan un color oscuro y brillante (negro).
6. ANALISIS DE RESULTADOS.
 Microscopio óptico:
Con el nombre de microscopio se refiera a todo instrumento que nos permite visualizar
y estudiar aquellas estructuras cuyo tamaño se sitúa por debajo del nivel de resolución
del ojo humano, es decir por debajo de 250 um (De Juan Herrero, 2013)
En estos tipos de microscopios, el área observada esta ampliada e iluminada y los
objetivos normalmente alcanzan hasta 1000 aumentos, el límite útil de estos aumentos
es de 2000. (Arraíza y Navarro, 2000)
 Componentes del microscopio:
PARTE OPTICO MECANICO FUNCION
Ocular X Ampliar la imagen del objetivo.
Tornillo de X Aproxima el enfoque, consigue el
enfoque enfoque correcto.
Objetivo X Amplia la imagen de la muestra.
Condensador X Concentra los rayos lumínicos.
Revolver X Contiene los lentes ópticos.
Cabezal X Contiene los lentes oculares.
Platina X Lugar donde se coloca la muestra.
Diafragma X Regula la cantidad de luz.
Soporte X Mantiene la parte óptica.
Foco X Dirige los rayos de luz al
condensador.
Tabla 3, partes y funciones del microscopio. (Niño y Rodríguez, 2017)
 Azul de metileno:
El azul de metileno, cuyo nombre científico es cloruro de metiltionina, es un colorante
que se usa para tratar una enfermedad llamada metaheglobinemia. El azul de metileno
se usa también para teñir ciertas partes del cuerpo antes y durante las cirugías. Esta
sustancia tiene forma de cristales o polvo cristalino y presenta un color verde oscuro
con brillo bronceado. Es inodoro y estable al aire sus soluciones en agua o alcohol son
azul profundo. (Domingo et al., 2012)
 Tinción del azul de metileno:
El tamaño de las células bacterianas es tan pequeño que resulta fácil verlas en el
microscopio óptico, por eso se lleva a cabo un proceso de tinción, que es el teñido de
los microorganismos aplicando una solución colorante. (Domingo et al., 2012)
 Desventajas del azul de metileno y lugol:
En algunas ocasiones se abusa del uso de lugol o azul de metileno lo cual no permite
tener una vista clara y concisa de las estructuras, además de que estos colorantes matan
la materia viva y las células pueden verse afectadas por los químicos que los colorantes
contienen, (Meza y Rojas, 2012)
 Célula vegetal:
Las estructuras especiales llamadas ribosomas, que se encuentran en el citoplasma de
todas las células. Los diversos tipos de proteínas sintetizadoras por las células incluyen
aquellas que se encuentran en las membranas celulares y enzimas que permiten que
ocurran las reacciones metabólicas. (Audesirk y Byers, 2008)
 La célula vegetal consta de núcleo, aparato de Golgi, retículo endoplasmatico rugoso y
liso, ribosomas, vacuola, cloroplasto, pared celular, membrana celular y mitocondria.
(Pérez, 2013)
 Diferencia entre célula animal y vegetal:
Entre la célula animal y la célula vegetal comparten muchas de sus partes como la
membrana, la mitocondria, el núcleo y demás, pero se diferencian la una de la otra por
que la célula animal contiene centriolo y la vegetal no, además de que esta última
también tiene orgánulos específicos de ella, como lo son la vacuola, el cloroplasto y por
ultimo una pared celular que protege la membrana. También se pueden diferenciar por
el tamaño, puesto que la célula vegetal puede medir entre 10 y 100 um y la animal entre
10 y 30 um, por esto se deduce que la célula vegetal puede ser más grande. (Pérez,
2013)
 Estomas y respiración:
Es el caso especial de evaporación de agua, desde un tejido vivo hacia el exterior. Tal
fenómeno puede tener lugar en cualquier parte del tejido vegetal que este expuesto al
aire, pero son las hojas los órganos que lo realizan con mayor intensidad, y representa
alrededor de 90% del total del agua perdida. (Lallona, 2003)
La transpiración estomática es regulada por los estomas, los cuales se cierran cuando
hay un déficit apreciable en agua en la planta y constituyen la vía mas importante para
el cambio gaseoso entre el meso filo y la atmosfera. El número de estomas por unidad
de superficie varía según las especies y las condiciones ambientales en las cuales
desarrolla la planta, puede oscilar entre 50 y 500 por milímetro cuadrado, existen
plantas con estomas solamente en la cara superior de la hoja, (Lallona, 2003)

 Especie de elodea:
Engería densa es una nativa del sudoeste de Brasil y se ha venido vendiendo en el
comercio internacional de acuarios. A menudo se establecen en la naturaleza, se ha
observado que la planta de elodea engería densa se esparce y se encuentra fuera de su
área de distribución natural. Sus dimensiones son de 1 a 3 milímetros en sus tallos, hojas
verticiladas y recurvadas de 10 a 14 milímetros. (Foras, 2013)

7. PREGUNTAS ORIENTADORAS.
 ¿Cuál es la utilidad del papel milimetrado a la hora de trabajar el microscopio?
El papel milimetrado se puede emplear para medir de forma aproximada el diámetro
del campo visual y utilizar dicho diámetro para calcular el tamaño de cualquier
organismo que se observe con el microscopio. (Quijano, 2011)

 ¿Porque es importante conocer el tamaño de un organismo microscópico?

En el estudio histológico se hace necesario estar al tanto de las características
estructurales normales de las células y tejidos que ellas conforman. La forma
característica de las células, sus dimensiones, diámetros y tamaño, entre otras
variables, se constituyen en puntos de referencia al momento de estudiar tejidos que
presentan cambios morfológicos. Si se conoce lo normal, se estará en capacidad de
 identificar algún cambio en dicho patrón. Tal es el caso de la Anatomía Patológica,
disciplina que estudia todos los aspectos morfológicos de las enfermedades,
fundamentalmente a nivel celular y tisular. Estas transformaciones son analizadas
con diversos procedimientos, que actualmente incluyen desde la visión ocular
directa, la microscopía óptica y la ultra estructura, hasta la patología molecular.
(Karp, 2006)

 ¿Por qué se utilizó el azul de metileno?

Se usa un único colorante, que siempre es de tipo básico. Se utiliza solamente para
incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedaran
teñidas de color azul. La coloración con azul de metileno tiñe a todas las bacterias
por igual, se utiliza el colorante para teñir las estructuras presentes en el citoplasma
de la bacteria; No es diferencial porque cuando se tiñen microorganismos con éste
colorante tiñe todos por igual, se comporta de la misma forma con una bacteria u
otra. (Surí, 2012)

 ¿Cuál es la función de las tinciones?

La tinción es una de las técnicas más utilizadas en los laboratorios de microbiología
para clasificar microorganismos. El tinte es un compuesto orgánico que le da
contraste a la célula, el cual contiene dos componentes el primero es el cromógeno,
que es un solvente orgánico que le provee las propiedades de color y el auxócromo,
grupo químico que se ioniza con el cromógeno y forma sales que se pegan a las
fibras y tejidos, además la adhesión del tinte va a depender de la carga que posea.
(“Tinción de microorganismos”,2012)

 ¿Cuál es la función de un estoma?

Los estomas son poros o aberturas regulables del tejido epidérmico, formados por
un par de células especializadas, denominadas células oclusivas o guarda. Al poro
en sí, se le denomina ostiolo, que comunica hacia el interior con una cavidad
denominada cámara su estomática. Adyacente a cada célula guarda se encuentran
generalmente 1 o 2 células epidérmicas modificadas que reciben el nombre de
células subsidiarias o accesorias, siendo las células oclusivas las que controlan la
apertura de los estomas, éstos tienen la función de liberar agua o retenerla para
liberar calor. (Rodriguez, 2009)

8. CONCLUSIONES.
 El fin de la practica en el laboratorio era poder comprobar porque se debe utilizar el
microscopio, comprender su funcionamiento y las partes que lo componen, durante toda
la práctica lo que se buscaba era esto.
Se realizaron diferentes tipos de montaje para poder analizar de diferentes formas cómo
funciona el microscopio, en las practicas nos pudimos dar cuenta de que el microscopio
muestra una imagen inversa o volteada comparada de cómo vemos el entorno nosotros.
Además pudimos comprobar que nuestra vista es engañosa debido a que nada de lo que
 vemos en realidad es como se percibe, los colores pueden tener diferentes tonalidades
y hay detalles imposibles de comprender a vista propia, como lo son los espacios en la
tinta, la cantidades de microorganismos en nuestro cuerpo y no solo en este sino en todo
organismo vivo ya sea animal o vegetal.
Pudimos ver que las medidas de lo que se observa en el microscópica son demasiado
pequeñas y tienen una unidad de medida especial (micras). No todo el muestreo tiene
el mismo tamaño ni forma, comprando las células, muchas de ellas tienen formas
alargadas y de tubos, pero a su vez muchas de ellas tienen una forma irregular.
Los colorantes usados para que las muestras puedan ser mejor analizadas matan a los
organismos vivos debido a sus componentes químicos, como prueba de esto está la
muestra de la mucosa bucal donde todas las células epiteliales de la mejilla interna
aparecían sin vida en la muestra, pero sin este tipo de colorante las practicas tendrían
más dificultad a la ora de reconoces diferentes tipos de microorganismos.
Por ultimo podemos concluir que en una sola muestra puede encontrarse un universo
totalmente diferente al nuestro y cada uno de sus componentes funciona de una manera
específica y perfecta para poder llegar a un fin concreto.

9. BIBLIOGRAFIA.

 Karp, G. (2006). Biología Celular y Molecular. 4ª ed. México: Mc Graw-Hill.

 Álvarez, G., Lopera, C., Usares, M.., Valle, Y. (2011). Microscopia. Universidad
católica de oriente. Recuperado de [Link]
 Foras, E. (2013). Elodea. Egeria densa.
 Mendoza, A., Suri, L. (2012). Tinción de azul de metileno. Columbus university.
 Tinción de microorganismos. (2012). Recuperado de
[Link]
 Rodríguez, A. (2009). Estomas. Universidad de Vigo.
 De Juan Herrero, J. (2013). Fundamentos y manejo del microscopio óptico, compuesto
y común. Universitat d´Alacant.
 Pérez, G. (2013). Epidermis de la cebolla. Universidad técnica de Machala.
 Arraíza, N., Navarro, J. (2000). Manual de microscopia. historia, descripción y uso de
microscopio óptico.
 Domingo, M., Mendoza, A., Suri, L. (2012). Tinción del azul de metileno. Columbus
university.
 Auderisk, G., Byers, C. (2008). Biología. Educación de México.
 Lallona, C. (2003). Manual de prácticas de fisiología vegetal.