Floculación

Es la Reacción en la cual la unión del antígeno con el anticuerpo se manifiesta en forma de grupos
o abultamientos (Flóculos) en lugar de un precipitado.

Coagulación de una solución coloidal diluida en forma de copos que se depositan en el fondo
del vaso.

Reacción de floculación (sífilis). Sinónimo: reacción de opacificación o de precipitación.

Aparición de la floculación en una solución coloidal titulada, a la cual se añade una cantidad
determinada de suero sifilítico. Las principales reacciónes son las de Kahn, de Kline,
de Meinicke, de Vernes, practicadas en la sangre, y del benjuí coloidal y de Targowla en
el líquido cefalorraquídeo. Conceptos relacionados: reacción de Kahn, reacción de
Kline, reacción de Meinicke, reacción de Vernes.

Prueba de VDRL Venereal Disease Research Test

 Reacción antígeno-anticuerpo de floculación en lámina.  Muestras: suero calentado o LCR.  El

antígeno es una solución alcohólica incolora que contiene cardiolipina, colesterol y lecitina
purificada para producir una reactividad estándar.  La solución salina amortiguada contiene
formaldehido neutro, fosfato disódico, fosfato monopotásico y cloruro de sodio.  Permite análisis
cualitativo y cuantitativo.

 Técnica: Preparación de antígeno: Laboratorio  Calibrar: Rotador: 180+- 2 rpm. Aguja calibre 18
(suero) Aguja calibre 21 (LCR) Baño termorregulado a 56ºC Temperatura ambiente de 23º a 29ºC 
Materiales: Láminas de vidrio 2x3 pulgadas con 12 anillos de parafina o cerámica. De 14 mm de
diámetro. Frascos de vidrio fondo plano de 35 mm de diámetro.

 Económica  Requiere de personal muy capacitado en la preparación del antígeno y lectura de

los resultados  Lectura macroscópica  Puede presentar en la cuantificación de las muestras, el
fenómeno de prozona  Requiere inactivación del suero  Estandarizada y de elección para LCR 
Técnica normada para el control de embarazadas  Control de tratamiento

PRINCIPIO DEL METODO La prueba de VDRL es una técnica no treponémica de aglutinación en

porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas. La suspensión
antigénica, una mezcla de lípidos complejos, es aglutinada en presencia de reaginas presentes en
la muestra del paciente afectado por sífilis. SIGNIFICADO CLINICO Las reaginas son un grupo de
anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que
sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de la sífilis. Este microorganismo produce
lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños componentes de estos
órganos no reconocidos por el propio individuo. El sistema inmunológico del paciente reacciona
dando lugar a la formación de reaginas, -anticuerpos frente a estos fragmentos1-5. REACTIVOS Ag
VDRL Solución alcohólica con una mezcla de lípidos (cardiolipina, lecitina y colesterol). DIL VDRL
Tampón fosfato 2 mmol/L, NaN3 0,95 g/L, pH, 6,0. Control + Suero humano con título de reaginas
≥ 1/8. NaN3 0,95 g/L. Control – Suero animal. NaN3 0,95 g/L. Precauciones: Todos los
componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el
anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
PREPARACION (Suspensión de Antígeno) 1. Atemperar el Ag VDRL y DIL VDRL a temperatura
ambiente (23- 29ºC). 2. Abrir un vial de Ag VDRL y pipetear 0,4 mL de DIL VDRL en un frasco de
vidrio de 25 mL de fondo plano. 3. Mediante pipeta de vidrio, añadir 0,5 mL de Ag VDRL, gota a
gota, sobre el DIL VDRL, haciendo girar vigorosamente el frasco sobre una superficie plana. 4.
Continuar la rotación durante 10 segundos más. 5. Añadir 4,1 mL de DIL VDRL dejando que
descienda por la pared del frasco. 6. Tapar el frasco y agitarlo verticalmente unas 30 veces durante
10 segundos. 7. Reposar 5 minutos. La suspensión antigénica está lista pasa su uso. Homogeneizar
antes de su empleo. CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los reactivos del kit están listos para su
uso, y son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se
mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la contaminación durante su uso. La
Suspensión del Antígeno una vez recién preparada es estable 24 horas a 15-25ºC. No congelar.
Indicadores de deterioro de los reactivos: presencia de turbidez. MATERIAL ADICIONAL - Agitador
rotatorio de velocidad regulable a 180 r.p.m. - Portas de vidrio - Microscopio óptico (100 x)
MUESTRAS Suero fresco, plasma o liquido cefaloraquídeo. Estable 7 días a 2- 8ºC o 3 meses a -
20ºC. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de usar. No utilizar
muestras bemolizadas o lipémicas. PROCEDIMIENTO Método cualitativo 1. Atemperar los
reactivos y las muestras a temperatura ambiente (Nota 1). 2. Depositar 50 µL de la muestra a
ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un
porta de vidrio. 3. Homogeneizar suavemente la suspensión del antígeno VDRL antes de usar, y
dispensar una gota (20 µL) sobre cada una de las gotas anteriores. 4. Situar el porta sobre el
agitador rotatorio a 180 r.p.m. durante 4 minutos (Nota 2). Método semicuantitativo Las muestras
positivas pueden ser tituladas. El título se define como la dilución mayor que da resultado positivo.
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L. 2. Proceder para cada dilución,
como en la prueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACION Examinar mediante microscopio
óptico (100 x) la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el porta
del agitador. Interpretación Tipo de aglutinación Lectura Resultado Agregados grandes o medianos
R Reactivo Agregados pequeños W Reactivo débil Ningún agregado o ligera rugosidad N No
Reactivo CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar
la funcionalidad del reactivo, así como modelo de comparación para la interpretación de los
resultados. CARACTERISTICAS DEL METODO Sensibilidad analítica: se corresponde a la observada
utilizando el “Human Reactive Serum” de la CDC (Centre for Disease Control) Efecto prozona: No
se observa efecto prozona hasta títulos ≥ a 1/128. Sensibilidad diagnóstica: 78 % (en sífilis
primaria) y 100 % (en sífilis secundaria). Especificidad diagnóstica: 98 %. Interferencias: Bilirrubina
(20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L) y lípidos (10 g/L), no interfieren. Los factores reumatoides (300
UI/mL), interfieren. Otras sustancias pueden interferir 6 . NOTAS 1. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas. 2. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos
positivos. 3. La prueba VDRL no es específica para el diagnóstico de sífilis. Se recomienda el ensayo
de todas las muestras Reactivas con métodos treponémicos como el TPHA y FTAAbs para la
confirmación de resultados. 4. Un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis. El
diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un único ensayo, sino que
debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del paciente. 5. La mononucleosis infecciosa,
neumonía viral, toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes pueden causar falsos
resultados positivos.

TÉCNICA DE FLOCULACION EN PORTAOBJETOS DE V.D. R. L. Elaborada en el Laboratorio de

Investigaciones y Centro de Adiestramiento de la Oficina Sanitaria Panamericana, Guutemab, C. A.
Preparación del antigeno.-El antígeno que se usa en esta prueba es una solución alcohólica que
contiene 0.03% de cardiolipina, 0.9% de colesterol y una cantidad de lecitina purificada lo
suficiente para producir una reactividad estándard. Cada lote de antígeno debe ser
serológicamente estandarizado por cuidadosa comparación con un antígeno cuya . reactividad
haya sido establecida (1, 2). El antígeno se distribuye en botellas de vidrio oscuro (que tienen una
cubierta interior de papel de estaño o vinilita) con tapa de caucho atornihable. Se almacena a la
temperatura de la habitación en la oscuridad. Los componentes del antígeno permanecen en
solución a temperaturas normaIes, de modo que cualquier precipitado que se observe, indicará
alteraciones debidas a factores tales como: evaporación o partículas de sustancias agregadas por
medio de las pipetas. Antígenos conteniendo precipitados no deben usarse. Preparación del
suero.-El suero debe ser claro. Se obtiene centrifugando sangre total coagulada. El suero se
calienta al baño Maria a 56” C durante 30 minutos o a 60”-62” C durante 3 minutos, antes de
usarlo. Al sacar el suero del baño María se examina y si contiene precipitados o partfculas
extrañas, se debe centrifugar nuevamente. Si las pruebas no se hacen dentro de las cuatro horas
siguientes a esta preparación, se deben recalentar nuevamente los sueros a 56” C durante 10
minutos. Preparación de la solución salina.-La solución salina amortiguada (solución bofer)
contiene cloruro de sodio (Q.P.) en una concentra 510 BOLETfN DE LA OFICINA SANITARIA
PANAMERICANA lavándolos cuidadosamente con jabón y agua abundante y tratándolos como si
fueran nuevos. Durante el proceso de limpieza de los portaobjetos debe tenerse cuidado de tomar
éstos por los bordes, evitando así dejar huellas digitales grasosas en las superficies. En los
portaobjetos limpios, el suero deberá extenderse fácilmente en el interior de los anillos de
parafina y si no se extiende es indicación de que el portaobjetos no está limpio y por lo tanto no
debe usarse. Los anillos se montan en los portaobjetos, transfiriendo parafina fundida por medio
de moldes de metal. La casa A. H. Thomas y Cía. de Filadelfia, Pensilvania, fabrica dispositivos
especiales para hacer anillos de parafina, ya sean manuales o automáticos calentados por
electricidad. Preparación de la emulsión de antígeno.-1. Con una pipeta poner 0.4 ml de solución
salina amortiguada en el fondo plano de una botella redonda de 30 ml de capacidad. Estas botellas
deben tener tapón de vidrio esmerilado o de caucho atornillable. 2. Con una pipeta de 1.0 ml,
graduada a la punta, agregar gota a gota 0.5 ml del antígeno directamente sobre la solución salina,
mientras se rota continua y suavemente el frasco.* 3. Soplar la última gota del antígeno. 4.
Continuar el movimiento de rotación del frasco por 10 segundos más. 5. Usando una pipeta de 5.0
ml, agregar 4.1 ml de la solución salina. 6. Tapar el frasco y agitarlo vigorosamente durante 10
segundos aproximadamente. 7. La emulsión de antígeno así preparada está lista para usarse y
puede usarse durante un dia. Esta cantidad es suficiente para efectuar 250 pruebas
aproximadamente. Puede prepararse de una vez doble cantidad de emulsión de antígeno, usando
un frasco de 30 ml y doble cantidad de antígeno y de solución salina. Para agregar los 8.2 ml de
solución salina debe usarse una pipeta de 10 ml graduada a la punta. De requerirse una cantidad
mayor de emulsión de antígeno, deberá prepararse por lotes separados, los cuales pueden
mezclarse y ensayarse después. Método para distribuir la emulsión de antígeno en los
portaobjetos.- La emulsión de antígeno puede distribuirse utilizando una aguja hipodérmica
calibre 22, bisel regular o de calibre 23 de bisel largo, adaptada a una jeringa de 1.0 6 2.0 ml y que
se debe mantener dentro del frasco de la emulsión de antígeno mientras no se esté usando. Se
deben obtener 60 gotas por cada mililitro de emulsión, esto se * El antígeno se agrega gota a gota,
pero lo suficientemente rápido para que los 0.5 ml sean transferidos al frasco, en
aproximadamente 6 segundos. La punta de la pipeta debe quedar en el tercio superior del frasco y
el moviemto de rotación que se da a éste no debe ser brusco para que la solución salina no moje
la pipeta. Mayo INO] SÍFILIS 511 logra sosteniendo la jeringa horizontalmente de modo que el bisel
de la aguja quede hacia abajo, es decir la superficie de goteo es horizontal. Si se aumenta el ángulo
en que se sostiene la jeringa, la superficie de caída disminuye y por consiguiente disminuye
también el tamaño de la gota. Ya sea que se use este método u otro, es esencial que la cantidad
de emulsión de antígeno usada en cada prueba sea exacta (1/60 ml), pues el numero de partfculas
de antígeno por campo microscópico varía proporcionalmente al volumen de la gota de emulsión
de antígeno usada, por esta razón es necesario comprobar diariamente el numero de gotas por ml
que se obtienen con la aguja que se va a usar. Cuando el antígeno se ha dejado reposar deberá
agitarse suavemente, rodando la botella y llenando y vaciando la jeringa, antes de volverse a usar.
Ensayo preliminar de la emulsión de antígeno.--Cada lote de emulsión de antígeno debe ser
primero comprobado con sueros positivos y negativos conocidos, siguiendo la técnica descrita más
adelante (Prueba Cualitativa). Estas reacciones deben dar resultados típicamente positivos y
negativos respectivamente y el tamaño y número de las partículas de antígeno, por campo
microscópico, debe ser el óptimo en el suero negativo. Si las partículas de antígeno, en el suero
negativo, aparecen muy grandes es debido a mala preparación de la emulsión y en este caso no
debe usarse. Técnica de la prueba cualitativa.-1. Poner con una pipeta 0.05 ml del suero preparado
en uno de los anillos parafinados del portaobjetos. 2. Agregar una gota (1/60 ml) de la emulsión de
antígeno a cada suero. 3. Los portaobjetos se rotan durante 4 minutos. Si la rotación se hace a
mano, debe hacerse sobre una superficie plana, circunscribiendo un círculo de más o menos 5 cm
de diámetro a 120 rotaciones por minuto. Puede usarse también el rotador tipo Boerner,
fabricado por A. H. Thomas y Cia. de Filadelfia, Pensilvania, ajustado a 180 revoluciones por
minuto. 4. Leer los resultados inmediatamente después de la rotaci6n.* Lectura e informe de los
resultados.-Las pruebas se leen microscó- picamente con objetivo débil (100 aumentos). Las
partículas de antígeno aparecen como barritas cortas con este aumento. La agrupación de estas
partfculas en grumos pequeños o grandes se interpretan como grados de positividad. Asf:
Ausencia de grumos o aspereza leve.. . . . . . . . . , . . . . Negativa (N) Grumos pequeños.. . . . . . _ . . . _
. . . . _ . . . . . . . . . . Positiva Débil (P.D.) Grumos medianos y grandes. . . . . . . . . . . _ . . . . Positiva (P)
* Se deben incluir siempre sueros conocidos (controles) Positivos, Débilmente Positivos y
Negativos. 512 BOLETfN DE LA OBICINA SANITARIA PANAMERICANA Se recomienda que
solamente los términos Positivo, DEbilmente Positivo y Negativo, sean usados para informar los
resultados de estas pruebas. A fin de obtener una lectura e interpretación correcta de los
resultados es necesario que los técnicos hayan tenido entrenamiento y práctica en la técnica
empleada. La reacción positiva común se caracteriza por el tamaño más 0 menos uniforme de los
grumos, ya sean éstos grandes o pequeños. Las reacciones zonales, debidas a un exceso de
reactivo componente en el suero, se caracterizan por la irregularidad en el tamaño de los grumos y
por la poca cohesión de éstos, a veces mezclados con particulas de antfgeno libre. Siempre que se
sospeche una reacción zonal, el suero debe ser diluído al 1: 5 y 1:25 y repetidas las pruebas. Si las
reacciones se encuentran más intensas en las diluciones que en el suero no diluído, el resultado
final se considera positivo. Manera de preparar las diluciones: en dos tubos de ensayo colocar 0.4
ml de solución salina (0.9yo) en cada uno; al tubo No. 1 se le agrega 0.1 ml del suero inactivado,
mezclarlo bien y pasar 0.1 ml al tubo No. 2. Técnica de la prueba cuantitativa.-La prueba
cuantitativa se efectúa en una serie de diluciones del suero en soluciún salina, haciendo
individualmente en cada dilución la prueba cualitativa. Las diluciones se preparan de la siguiente
manera: en cada uno de 6 o más tubos se colocan 0.5 ml de solución salina fresca (0.9%). Al tubo
No. 1 se le agrega 0.5 ml del suero preparado, se mezcla bien el contenido y se transfieren 0.5 ml
al tubo No. 2, continuando esta operación hasta el tubo No. 6, que contendrá 1.0 ml, así se
obtendrán diluciones al 1~2, 1:4, 1:8, 1:16, etc. Cada dilución de suero es probada como se
describe en la técnica de la prueba cualitativa. Lectura e informe de los resultados.-1. Las pruebas
se leen microscó- picamente con objetivo débil (100 aumentos), como se describe en la prueba
cualitativa. 2. Se hace la prueba en cada dilución y en aquella que se obtenga una reacción Positiva
(no ligeramente positiva), se interpretará como el punto final de la reacción de acuerdo con el
siguiente ejemplo: Diluciones del Suero Informe 1:2 1:4 1:s 1~16 1:32 1:64 ~--~-- P P P P.D. N N
Positivo, dilución al 1:s (3) P P.D. N N N N Positivo, dilución al 1:2 (3) P.D. N N N N N Positivo, con
suero no diluido (3) Si se desean otros patrones cuantitativos, pueden prepararse diluciones de
suero al 1: 5, 1: 10, 1: 20, etc. ensayándolos y dando el informe como se ha indicado
anteriormente. Mayo 19bO] SfFILIS 513 Nota: En ciertos climas en que hay alta temperatura y bajo
grado de humedad como sucede en los meses de verano en ciertas regiones, la emulsión de
antígeno puede guardarse en refrigeradora. Para evitar evaporación en el portaobjeto, las pruebas
deben hacerse y leerse lo más r&pidamente posible. PRUEBA DE FLOCULACION EN TUBO DE
V.D.R.L. Antígeno.-El antígeno se prepara como para la Prueba de V.D.R.L. en portaobjeto.
Preparación de las soluciones salinas.-1. La solución salina amortiguada V.D.R.L. al 1.0% se prepara
como para la prueba de V.D.R.L. en portaobjeto. 2. La solución de cloruro de sodio al 1% no
amortiguada se prepara agregando 1 gramo de cloruro de sodio seco a cada LOO ml de agua
destilada. Preparach del suero.-El suero debe ser claro. Se obtiene centrifugando sangre total
coagulada. El suero se calienta al baño María a 56” C durante 30 minutos o a 6OO-62” C durante 3
minutos,‘antes de usarlo. Al sacar el suero del baño María se examina y si contiene precipitados o
partículas extrañas, se debe centrifugar nuevamente. Si las pruebas no se hacen dentro de las
cuatro horas siguientes a esta preparación, se deben recalentar nuevamente los sueros a 56” C
durante 10 minutos. Preparación de la emulsión de antfgeno.-1. Preparar la emulsión de antígeno
como para la Prueba de V.D.R.L. en portaobjeto. 2. Agregar cuatro partes de solución de cloruro
de sodio al 1% a una parte de la emulsión de antígeno para la prueba de fluculación de V.D.R.L. en
portaobjeto. Mézclese bien y déjese reposar cinco 6 más minutos (no más de dos horas) antes de
usarse. Esta solución será llamada Emulsión de Antígeno Dilufdo. Prueba cualitativa.-1. Poner con
una pipeta 0.5 ml del suero calentado en un tubo de 12 x 75 mm (D.E.). 2. Agregar 0.5 ml de
emulsión de antígeno dilufdo a cada suero. 3. Agitar los tubos en la agitadora de Kahn durante 5
minutos. 4. Centrifugar todos los tubos durante 10 minutos a una fuerza equivalente a 2,000
r.p.m. en la Centrífuga International Electric Co., No. 1 ó a 1,700 r.p.m. en la Centrffuga No. 2. 5.
Regr&ense los tubos a la agitadora de Kahn y agftense por un minuto exactamente. Lectura e
informe de la prueba cualitativa.-1. Léanse las reacciones tan pronto se termine Ea segunda
agitación, sosteniendo los tubos al nivel del ojo, junto a la pantalla de una lámpara de escritorio,
que tenga un fondo oscuro. Una lampara fluorescente con pantalla o una lampara de escritorio
con bombilla azul son fuentes satisfactorias de luz para la lectura. 514 BOLETfN DE T,A OFICINA
SANITARIA PANAMERICANA 2. Repórtense los resultados como sigue: Positkw Partfculas visibles
en un medio claro o ligeramente turbio. Todas las reacciones en las cuales el observador tiene
duda acerca dela visibilidad de los grumos, deberán reportarse como negativas. Negativo: No hay
agregación de partículas de antígeno ni grumos visibles. Aspecto ligeramente turbio o granular.
Remolino sedoso bien marcado al agitar suavemente. Nota: Los sueros hemolizados o turbios
pueden dar lugar a que las pruebas terminadas resulten demasiado turbias para la lectura
macroscópica. El líquido de estos tubos puede ser examinado en el microscopio. Pueden
reportarse resultados positivos si se observan al microscopio masas grandes de partículas de
antfgeno cuando el suero probado no revela partículas extrañas al observarlo al mismo aumento.
Las reacciones zonales, debidas al exceso de elemento reactivo en la composición del suero,
pueden aparecer como muy débiles y en raros casos negativas. Siempre que se sospeche una
reacción zonal, deberá hacerse otra prueba usando 0.1 ml del suero inactivado y 0.4 ml de
solución salina en lugar de 0.5 ml del suero original. Si se obtiene un resultado positivo con 0.1 ml
de suero, deberá reportarse el resultado como positivo. Prueba cuantitativa en suero.-1. Poner
con una pipeta 0.5 ml de solución salina 0.9%, recién preparada, en cada uno de 6 o más tubos de
ensayo (12 x 75 mm). 2. Agregar 0.5 ml de suero inactivado al primer tubo. Mezclar. 3. Transferir
0.5 ml del primero al segundo tubo. Mezclar. 4. Continuar transfiriendo 0.5 ml de cada tubo al
siguiente, mezclando hasta llegar al último tubo, así se obtendrán diluciones del suero al 1:2, 1:4,
1:8, l:lG, etc. 5. Descartar 0.5 ml del ultimo tubo. 6. Agregar 0.5 ml de la emulsión de antígeno
dilufdo a cada tubo y proceder como se describe en la prueba cualitativa en suero. Lectura y
resultados de la prueba cuantitativa.-La mayor dilución de suero que produce una reacción
Positiva bien definida se interpretará como el punto final de la reacción de acuerdo con el
siguiente ejemplo. Diluciones de Suero Informe 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 ___----- P P P P N N
Positivo, dilución al 1: 16 6 16 dils. (3) P P N N N N Positivo, dilución al 1:4 6 4 dila. (3) N N N N N N
Positivo en suero no diluido 6 1 dil”. (3) P-Positivo. N-Negativo. * Reacción positiva obtenida en
suero no diluído. Mayo 19601 SfFILIS 515 PRUEBA DE V.D.R.L. PARA LIQUIDO CÉFALORRAQUfDEO
Antígeno.-1. El antígeno se prepara como para la Prueba de V.D.R.L. en portaobjeto. Preparación
de la solución salina.-1 . La solución salina amortiguada al 1.0% se prepara como para la prueba de
V.D.R.L. en portaobjeto. 2. Solución de cloruro de sodio al 10%. a. Disuelvánse 10 gramos de
cloruro de sodio seco (Q.P.) en 100 ml de agua destilada. Preparación del liquido céfalorraquídeo.-
1. Centrifúguese y decántese cada líquido céfalorraquideo. Los líquidos céfalorraquídeos
visiblemente contaminados o que contienen sangre no resultan satisfactorios para la prueba. 2.
Inactfvese el líquido céfalorraquídeo a 56O C durante 15 minutos. Déjese enfriar a la temperatura
ambiente antes de probarlo. Preparación de la emulsión de antígeno sensibilizado.-1. Prepárese
emulsión de antígeno como se describe para la prueba de V.D.R.L. en portaobjeto. 2. Agréguese
un volumen de solución de cloruro de sodio al 10% a un volumen de la emulsión de antígeno de la
prueba de V.D.R.L. en portaobjeto. 3. Mézclese bien, y déjese reposar por lo menos 15 minutos,
pero no más de dos horas antes de usarse. Prueba cualitativa del lfquido céPalorraquídeo.-1.
Poner con una pipeta 1.0 ml de liquido céfalorraquídeo inactivado en un tubo de ensayo de 13 x
100 mm. Inclúyanse en la prueba controles de líquido céfalorraquídeo positivo y negativo. 2.
Agréguense 0.2 ml de emulsión de antígeno sensibilizado a cada líquido céfalorraquídeo. Vuélvase
a mezclar la emulsión de antígeno sensibilizado inmediatamente antes de su uso, invirtiendo el
frasco varias veces. 3. Agítese la gradilla de tubos en la agitadora de Kahn durante 15 minutos. 4.
Centrifúguense todos los tubos durante 5 minutos a 1,800 revoluciones por minuto en la
centrífuga No. 1 ó a 1,600 revoluciones por minuto en la centrffuga No. 2 (Centrifugas 1.E. Co.). 5.
Vuélvanse a agitar los tubos en la agitadora de Kahn durante 2 minutos exactos. Lectura e informe
de I.a prueba cualitativa.-1. Léanse los resultados inmediatamente después de la segunda
agitación, sosteniendo los tubos cerca de la sombra que proyecta una lámpara de escritorio y que
tenga un fondo oscuro.* * Durante la lectura cada tubo deberá ser sostenido fijamente o agitado
suavemente. Deber& evitarse la agitación excesiva. 516 BOLETfN DE LA OFICINA SANITARIA
PANAMERICANA 2. Repórtense los resultados de la siguiente manera: Positivo: Partículas bien
definidas suspendidas en un medio acuoso transparente o turbio; hay agregación. Negativo: No
hay agregación, dispersión completa de las particulas, apariencia turbia o ligeramente granulada.
Rxeba cuantitativa del liquido céfalorraquídeo.-1 . Modo de preparar las diluciones del liquido
céfalorraquídeo. a. Poner con una pipeta 1.0 ml de solución de cloruro de sodio al 0.9% en cada
uno de los cinco o más tubos de ensayo. b. Agregar 1.0 ml del liquido inactivado al tubo No. 1,
mezclar bien, y transferir 1.0 ml al tubo No. 2. c. Continuar mezclando y transfiriendo de cada tubo
al siguiente hasta que el último tubo contenga 2 ml. Descartar 1.0 ml del último tubo. Las
diluciones serán de 1:2, 1:4, 1:s; 1:16, 1:32, etc., respectivamente. 2. Probar cada una de las
diluciones del líquido céfalorraquídeo como se describe en la prueba cualitativa del liquido
céfalorraquideo.

http://iris.paho.org/xmlui/bitstream/handle/123456789/11805/v29n5p509.pdf?sequence=1&isAll
owed=y

Pruebas no treponémicas: V.D.R.L. (Venereal Research Disease Laboratory). Únicamente puede

emplearse con suero; es un antígeno no particulado. La reacción que se obtiene con la muestra
positiva es de floculación. Lectura microscópica.

Comentarios a las pruebas no treponémicas Todas ellas se basan en antígenos compuestos de

soluciones alcohólicas con cantidades predeterminadas de cardiolipinas, colesterol y lecitinas.
Miden simultáneamente inmunoglobulinas IgG e IgM frente a estas sustancias que son producidas
en los tejidos dañados por el treponema o por otras enfermedades. Puesto que no miden
anticuerpos específicos frente a T. pallidum su positividad no asegura la enfermedad sifilítica. Para
su realización, el suero del paciente es mezclado con el antígeno en un soporte circular de
diámetro estándar. Si existen anticuerpos se combinan formando una floculación que es leída
microscópicamente (100 aumentos). El VDRL y USR (USR tiene el mismo antígeno del VDRL
estabilizado con EDTA y colina) necesitan de un microscopio de 100 aumentos para su lectura y
deberá realizarse meticulosamente tanto la preparación del antígeno como la lectura de la
reacción. El antígeno VDRL debe de prepararse frecuentemente aunque puede estabilizarse, para
su conservación durante unos dias, mediante la adición de ácido benzoico al 1%. El reactivo de la
prueba USR es más estable. Como dato importantísimo diremos que sólo la prueba VDRL está
validada para la detección de anticuerpos no treponémicos en LCR y, en consecuencia, es el único
útil para el diagnóstico de la neurosífilis. Todas las pruebas no treponémicas pueden presentar
fenómenos de prozona - falsos negativos - cuando las muestras son fuertemente reactivas, por lo
que es conveniente titularlas siempre. Esto es especialmente cierto cuando la prueba se realiza
con muestra no diluida y con un procedimiento incorrecto (como dispensar el antígeno sobre la
muestra no extendida en el círculo de reacción). La temperatura de los reactivos es igualmente
importantísima en relación con la sensibilidad. También puede obtenerse un resultado negativo en
las fases muy tempranas del período primario, incluso cuando la visualización de los treponemas
es positiva. Los falsos positivos no superan por lo general los títulos de 1/4 y pueden ser
transitorios o permanentes según persistan o no más de seis meses. Las muestras hemolizadas o
lipémicas pueden producir también este tipo de resultados. La prueba RPR tiende a dar títulos más
elevados que la prueba VDRL. Cuando se emplean para estudiar poblaciones todos los sueros
reactivos deberán confirmarse con una prueba treponémica. La sensibilidad de estas pruebas para
los periodos primario, secundario, latente y tardío se muestran en la tabla 3. Las pruebas
reagínicas son fundamentales para evaluar la eficacia de los tratamientos. Si es eficaz los títulos
deberán disminuir significativamente (hasta 8 veces) durante los 6-12 meses siguientes a su inicio.
Suele persistir reactividad a títulos muy bajos o en suero no diluído. Si el tratamiento se inicia en
estadíos latentes o tardíos lo habitual es conseguir una disminución de los títulos, de forma muy
lenta, y sólo en un 25-40 % de los pacientes. En el resto, la persistencia de la seropositividad no
indica ni fallo del tratamiento ni reinfección.

https://www.seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/serologia/sifilis2.pdf

1. Resumen VDRL Limitaciones del procedimiento. Resultados falsamente

positivos pueden ser observados en individuos con cuadros patológicos
diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma,
tuberculosis, cáncer, diabetes, enfermedades autoinmunes. Estos casos no
son muy comunes y generalmente presentan reacciones con títulos bajos y
una historia clínica que no coincide con las características de la sífilis. La
especificidad del V.D.R.L está entre el 97 y el 99%, por lo que estos casos no
son muy frecuentes. Es imprescindible por estos motivos ante toda prueba
cualitativa reactiva realizar la prueba semicuantitativa (el de concentraciones).
A pesar de las ventajas de este método, sus resultados al igual que los de
cualquier prueba serológica sólo constituyen un dato auxiliar de diagnóstico
que debe corroborarse con la historia clínica del paciente. Diagnóstico La sífilis
es una enfermedad venérea causada por el Treponema pallidum. El contacto
sexual es la forma más común de transmisión. El diagnóstico de esta
enfermedad sufre la carencia de un método para cultivar el microorganismo en
medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la
enfermedad en los que no se observan lesiones epidérmicas. Sin embargo,
 desde el comienzo de la infección aparecen en el suero del individuo infectado
ciertas sustancias denominadas “reaginas”, que reaccionan con antígenos de
cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clínicos
(chancros) son por lo tanto los procedimientos más rápidos y útiles disponibles
para diagnóstico de sífilis. Las pruebas más usadas para identificar sífilis por
medio de anticuerpos no treponémicos son reagina plasmática rápida (RPR) y
Venereal Disease Research Laboratory (VDRL). La importancia clínica de la
V.D.R.L. reside en que con ella se confirma el diagnóstico de sífilis con un
resultado positivo, al medir cuantitativamente anticuerpos se puede evaluar la
actividad de la enfermedad y de igual manera vigilar la respuesta al
tratamiento. Fundamento del método y mecanismo inmune La infección
treponémica provoca el desarrollo de anticuerpos IgG o IgM que reaccionan
con un antígeno complejo lípídico llamado cardiolipina. Esta actividad
anticardiolipídica recibe a veces el nombre de reagina. Lo que hace esta
prueba es entonces la cuantificación de la concentración de IgG e IgM contra
el complejo antigénico de cardiolipina-lecitina y colesterol.
2. 2. En síntesis, el fundamento de la prueba del V.D.R.L. se basa en la
floculación visible del antígeno artificial (combinación de colesterol cubierto de
lipoide con cardiolipina) en presencia del suero del paciente, produciendo una
reacción de floculación visible al microscopio. Lissy Cascante Adrián Castro
Alejandro Cob Catalina Murillo
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