Reporte: Producción de biomasa

Equipo 1
Cassandra Melissa Valerio Martínez 35%
César Abraham Rojas Guerrero 35%
Andreanni Villanueva de la Rosa 30%
Fundamento
Desde el punto de vista comercial, las fermentaciones se pueden clasificar tomando en cuenta los productos
finales que se obtendrán. Entre ellos se pueden mencionar 2 clasificaciones:
 Células microbianas (biomasa).
 Metabolitos microbianos (enzimas, etanol, butanol, acetona, ácidos orgánicos, etcétera).
También es posible clasificar las fermentaciones con base a la presencia o ausencia de oxígeno molecular
durante el proceso. De acuerdo con esta división, los procesos se pueden clasificar en:
 Fermentaciones aerobias: aquí el aceptor final de electrones es el oxígeno; es imprescindible su
presencia para el desarrollo del microorganismo y la producción del compuesto deseado. En este tipo
de procesos, se produce fundamentalmente biomasa, CO2 y agua.
 Fermentaciones anaerobias: aquí el proceso de producción del metabolito de interés se desarrolla en
ausencia de oxígeno; los productos finales son sustancias orgánicas, por ejemplo, algunos ácidos
orgánicos y alcoholes. Sin embargo, en la mayoría de este tipo de fermentaciones se requiere un poco
de oxígeno al inicio del proceso para favorecer el crecimiento y la reproducción del microorganismo.
Entonces, a través de la cantidad de oxígeno, se puede manipular un proceso de fermentación para incrementar
la producción de la sustancia de interés, obteniendo, de manera general, metabolitos microbianos en
concentraciones límitadas de oxígeno y biomasa en concentraciones altas de oxígeno.
El concepto de biomasa nos resulta muy familiar, aunque posiblemente no todo el mundo lo defina de la misma
manera. El glosario de términos de la OCDE define la biomasa como «la cantidad de materia viva de origen
vegetal o animal presente en un momento dado en un área determinada.
Entre los microorganismos que pueden ser utilizados para la producción de biomasa se encuentran las
levaduras los cuales juegan desde hace siglos un papel fundamental y muy beneficioso en las relaciones con
los seres humanos. Las levaduras son responsables de los procesos de fermentación alcohólica, a partir de
azúcares y en ausencia de oxígeno las levaduras generan alcohol, dióxido de carbono y aromas. Este proceso
bioquímico es imprescindible para la producción de alimentos consumidos diariamente por millones de personas
en nuestro planeta: el vino, el pan y la cerveza.
Además, desde hace algunos años es conocido el papel de la levadura como alimento pro-biótico, tanto en
seres humanos como en animales. Una vez ingeridas, ya dentro del sistema digestivo del animal, las levaduras
desarrollan una acción altamente beneficiosa: favorecen el equilibrio de la flora intestinal, favorecen la sensación
de bienestar, potencian el sistema inmunológico, mejoran el estado fisiológico y el tracto del sistema digestivo,
etc.
Las levaduras también han formado parte de la dieta de los seres humanos y de los animales desde hace siglos.
Su composición nutricional es excepcional. Tanto las levaduras en si, como partes de sus células o las
moléculas por ellas sintetizadas, presentan un gran interés en salud y nutrición de seres humanos, animales,
plantas e incluso otros microorganismos.
Inclusive se han utilizado las levaduras en la industria cosmética y para la producción de bioetanol siendo este
tipo de microorganismos de gran interés industrial.

Procedimiento
 Preparación de los medios

•Se prepararon 960 mL de medio de cultivo con una

concentración de 2% (NH4)2SO4, 0.04% NH4H2PO4, 0.25%
MgSO4 H2O, 0.25% extracto de levadura y un pH entre 4.5 y 5.0.
•Se tomaron 700 mL de medio cultivo y se le añadió una
concentración de 1.5% de sacarosa.
Medios de •Se calentaron durante una hora a temperatura de 80-90°C.
fermentación •Se esterilizó, por calor humedo, en un autoclave con las
condiciones 15 lb/ 121°C/15 miu.

•Se tomaron, en un MEM de 250 mL, 50 mL de medio de cultivo y

se le añadió una concentración de 0.5% de sacarosa.
•Se tomaron, en un MEM de 500 mL, 200 mL de medio de cultivo
y se le añadió una concentración de 1.0% de sacarosa.
Medios de
inoculación

•Preparar 2 tubos de 18x150 con 5 mL de medio de cultivo con

una concentración de sacarosa al 1.5%.
Medios para la
calibración del
espectrofotómetro
 Preparación del inóculo

•A partir de un cultivo puro de Saccharomyces cereviciae inocular el

matraz que contien 50 mL de medio de cultivo con una concentración
de sacarosa de 0.5%
Inoculación 1

•Incubar a temperatura ambiente en agitación a 200 rpm durante 18-24

horas.
Incubación 1

•Tomar un inoculo del 10% v/v y transferirlos al matraz que contiene

200mL de medio de cultivo y una concentración de sacarosas de
1.0%
Inoculación 2

•Incubar a temperatura ambiente en agitación a 200 rpm durante 18-24

horas.
Incubación 2

•Tomar un inoculo del 10% v/v y transferirlos al matraz que contiene

700mL de medio de cultivo y una concentración de sacarosas de
1.5%
Inoculación 3

•Incubar a temperatura ambiente, en agitación a 200 rpm. Tomar

muestras de 10 mL de muestra cada dos horas durante 8-10 horas
Incubación 3 y para la realización de muestras posteriores.
toma de
muestras
 Determinaciones

•Se tomarón las muestras de 10 mL y se les determinó el pH

pH

•Se tomó una muestra de 10 mL cada 120 minutos, a la cual se le midio

su absorbancia en un espectrofotometro a una ʎ=665 nm.
Turbidez

•Se tomó lo restante de las muestras y se procedió a determinar esto en

Azucares base al siguiente diagrama.
reductores

 Determinación de azucares reductores

•Se prepararon, a partir de una solución patrón de 1 M, 9 estándares

de concentraciones de 1-10 μM e tubos de 18*150.
Curva de
calibración

•Se tomó 1 mL de cada concentración y pasar a un tubo de 18*150.

•Se añadió 1 mL de ácido 3,5-dinitrosalicílico a cada uno.
•Se calentaron inmediatamente por 5 min.
•Se llevaron a baño de hielo y se aforaron a 10 mL, con agua
Tratamiento de destilada fría.
estándares •Se leyeron en el espectrofotómetro a una ʎ= 540 nm.

•Se prepararon 4 diluciones de cada una de las muestras en

proporciones 1:10, 1:20, 1:50 y 1:100.
•Se les realizó a las cada una de las diluciones el mismo tratamiento
que a los estándares.
Tratamiento de •Se les determinó la concentración a cada una de las diluciones en
muestras μM/mL.
Resultados y discusiones
 Efecto del pH en el proceso de fermentación de la producción de biomasa
El pH en la producción de biomasa es un aspecto importante, ya que la actividad del microorganismo
disminuye cuando la concentración de ácido es baja, por lo que el pH óptimo en levaduras para llevar
a cabo una buena fermentación se encuentra en un valor de 3 – 5. 1 En la tabla 1 se encuentran los
valores de pH antes y después de la inoculación del microorganismo.
Tabla 1. pH de la producción de biomasa.

Muestra Tiempo (h) pH

1 0 4.95
2 1 4.95
3 96 5
4 168 4.98
5 264 4.94

Como se puede observar en la figura 1, el pH afecta la fermentación del microorganismo

Saccharomyces cerevisiae de manera decreciente en función del tiempo, esto es debido a que, durante
dicho proceso, conforme pasa el tiempo existe consumo de sacarosa por parte de la levadura.

Tiempo vs pH
5.01
5
4.99
4.98
pH

4.97
4.96
4.95
4.94
4.93
-50 0 50 100 150 200 250 300
Tiempo (h)

Figura 1. Efecto del pH sobre la fermentación de Saccharomyces cerevisiae.

 Turbidez en la producción de biomasa

La turbidez se define como la reducción de la transparencia de un líquido causada por la presencia de
partículas no disueltas de material distinto al propio líquido, este es un indicador de apariencia óptica,
ocasionado por la dispersión y absorción de la energía lumínica a través del líquido. 2 Para su
determinación se tomaron muestras antes y después de la inoculación, los resultados son mostrados
en la tabla 2.
 Tabla 2 Turbidez en la producción de biomasa.

Muestra Tiempo (h) %Transmitancia

1 0 58.6
2 1 75
3 96 24.4
4 168 27
5 264 34

En la figura 2 se muestra el efecto de la turbidez en la producción de biomasa en muestras tomadas

durante la fermentación a diferentes tiempos, donde podemos observar que conforme este transcurre
hay una mayor turbidez a causa de la producción del microorganismo.

Turbidez en la producción biomasa

80

70
%Transmitancia

60

50

40

30

20
-50 0 50 100 150 200 250 300
Tiempo (h)

Figura 2 Turbidez en el proceso de fermentación de la producción de biomasa.

 Determinación de azúcares reductores

Para la determinación de azúcares reductores se utilizó el método de ácido 3,5-dinitrosalisílico DNS3,
las absorbancias se midieron en un espectrofotómetro Thermo Scientifc modelo Genesys 20 a una
longitud de onda de 540 nm, para comenzar con la determinación se procedió a elaborar una curva de
calibración, la cual se puede observar en la figura 4.
 Curva de calibración
0.9
0.8
0.7
y = -0.1673x + 1.7555
0.6 R² = 0.9734
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 9.5

Figura 4 Curva de calibración para la determinación de azúcares reductores

Posteriormente se realizaron diferentes diluciones a cada muestra, siguiendo el mismo método y se

procedió a medir la absorbancia de las mismas, los resultados son mostrados en la tabla 4.
Tabla 4 Medición de absorbancia en cada dilución.

Tiempo (h)
0 1 96 168 264
Dilución Absorbancia
01:100 0.218 0.112 0.18 0.18 0.058
01:20 0.091 0.039 0.067 0.094 0.066
01:50 0.011 0.003 0.018 0.037 0.057
0.1 0.002 0.0011 0.013 0.011 0.001

Tomando en cuenta la ecuación de la recta obtenida a partir de la curva de calibración, se procede a

calcular la concentración de azúcares reductores en cada muestra, los resultados son mostrado en la
tabla 5.
Tabla 5 Concentración de azúcares reductores en la producción de biomasa y el promedio.

Tiempo (h)
0 1 96 168 264
Dilución Concentración (uM) Promedio
01:100 9.19 9.82 9.41 9.41 10.14 9.59
01:20 9.94 10.26 10.09 9.93 10.09 10.06
01:50 10.42 10.47 10.38 10.27 10.15 10.34
0.1 10.48 10.48 10.41 10.42 10.48 10.45

Una vez tomado el valor promedio de las concentraciones de azúcares reductores para cada muestra
en diferentes tiempos, se procedió a hacer la cinética de producción de azúcares reductores, la cual
se muestra en la figura 5. Dicha figura nos demuestra como al paso del tiempo de fermentación los
azúcares tienen una mayor concentración.
 Cinética de producción de aúcares
reductores
10.6000
10.5000
10.4000

Concentración (uM)
10.3000
10.2000
10.1000
10.0000
9.9000
9.8000
9.7000
9.6000
9.5000
0 50 100 150 200 250 300
Tiempo (h)

Figura 5 Cinética de la producción de azúcares reductores en la producción de biomasa

Conclusiones
Se llevó a cabo la producción de biomasa por medio de una fermentación de Saccharomyces
cerevisiae, con la cual, se evaluaron distintos parámetros tales como, efecto de pH, turbidez,
concentración y cinética de la producción de azúcares reductores. Se observan cambios significativos
en cada uno de estos parámetros conforme aumentan la cantidad de células producidas. En el pH se
observa un decremento debido a la actividad reducida del microorganismo, asimismo, al aumentar la
cantidad de células, hay un aumento brusco en la turbidez de la muestra, por ende, significa que hay
una mayor concentración. Lo cual se puede comprobar en la cinética de reacción.
Referencias
1. Cahuancama, A. Optimización de un Método para la Producción de Biomasa de
Saccharomyces cerevisiae empleada en la etapade Fermentación del Mosto de Cerveza, desde
un nivel deLaboratorio a un nivel Piloto. 175 (2013).
2. Crouch, R. & HollerStanley, D. A. S. J. Principios de análisis instrumental. (2008).
3. Monsalve G., J. F., Medina de Perez, V. I. & Ruiz Colorado, A. A. Ethanol production of banana
shell and cassava starch. Dyna 150, 21–27 (2006).
4. Hernández A, Alfaro I, & Arrieta R, (2003), Microbiología Industrial, EUNED, 39
5. García J, Martínez M (2014), Biomasa y Biotecnología, Departamento biología medioambiental,
Centro de investigaciones biológicas del consejo superior de investigaciones Científicas,
Madrid, 58, 45.
6. Zuloaga L, Los nuevos usos de las levaduras,
([Link] consultado el 16/10/18 a las
03:00.