Desarrollo de Herramientas para el

Manejo Integrado de Artrópodos

Perjudiciales
Resúmenes de actividades

Silvia N. López, Diego Sauka, Diego Segura y Mariana Viscarret

Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola – IMYZA – CICVyA

2019
632.93 Desarrollo de herramientas para el manejo integrado de artrópodos perjudiciales :
D45 resúmenes de actividades / editores literarios: Silvia N. López... [et al.] –
Buenos Aires : Ediciones INTA, 2019.
88 p.

Recopilación de resúmenes técnicos del Proyecto Específico del Programa Nacional de Protección Vegetal PNPV
1135033 “Desarrollo de herramientas para el manejo integrado de artrópodos perjudiciales”.

ISBN 978-987-521-989-2 (digital)

i. López, Silvia N.

PLAGAS DE PLANTAS – ARTHROPODA –INSECTOS DAÑINOS – CONTROL DE PLAGAS – GESTIÓN

DE LUCHA INTEGRADA – ARTRÓPODOS

INTA - DD

Editores Literarios: Silvia N. López, Diego Sauka, Diego Segura y Mariana Viscarret.
Diseño y Edición: Lorena La Fuente

Este libro
cuenta con licencia:
Índice

MÓDULO: CONTROL BIOLÓGICO POR ENTOMÓFAGOS E IMPACTO DE PLAGUICIDAS SOBRE

ENEMIGOS NATURALES Y ARTRÓPODOS PERJUDICIALES ............................................................ 7

Estudios de almacenaje en frío sobre dos especies de Trichogramma (Hymenoptera: Trichogrammatidae) ....... 8
Estudios biológicos sobre Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae) .......................................................... 11
Desarrollo de un protocolo de identificación molecular especie específico para el estudio de relaciones tróficas
en un sistema hortícola ........................................................................................................................................ 14
Estudios de control biológico con entomófagos en cultivos ornamentales .......................................................... 17
Evaluación de mejoras en la cría artificial del parasitoide de moscas de la fruta, Diachasmimorpha longicaudata,
que minimicen el efecto del superparasitismo ..................................................................................................... 20
Bases químicas de la atracción del parasitoide Diachasmimorpha longicaudata hacia frutos infestados por
larvas hospedadoras de Ceratitis capitata ........................................................................................................... 22
Integración del control biológico mediante el uso de entomófagos con la Técnica del Insecto Estéril para el
control de la polilla del tomate Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechidae)............................................................. 25
Evaluación del efecto de plaguicidas sobre insectos benéficos en laboratorio .................................................... 28

MÓDULO: CONTROL MICROBIANO MEDIANTE EL USO DE VIRUS, BACTERIAS Y HONGOS

ENTOMOPATÓGENOS .......................................................................................................................... 31

Caracterización de patógenos asociados a lepidópteros plaga ........................................................................... 32

Validación de estrategias de Manejo Integrado de carpocapsa en nogal: aplicaciones complementarias de
granulovirus de Cydia pomonella (CpGV) con insecticidas ovicidas y larvicidas ................................................. 36
Estrategias MIP para el control de Carpocapsa en montes de nogal de pequeños productores de la provincia de
Mendoza .............................................................................................................................................................. 41
Desarrollo de una nueva formulación del granulovirus de Cydia pomonella: hacia la producción nacional......... 45
Clones recombinantes de Bacillus thuringiensis que expresan proteínas Cry individuales ................................. 48
Selección de cepas de Bacillus thuringiensis con alta actividad insecticida para larvas de Cydia pomonella L.
(Lepidoptera: Tortricidae)..................................................................................................................................... 51
Aislamiento y caracterización de nuevos aislados de Bacillus thuringiensis a partir de larvas vivas y sanas de
carpocapsa .......................................................................................................................................................... 53
Cepas nativas de Bacillus thuringiensis con actividad nematicida ....................................................................... 56
Aislamiento, selección y estudio de hongos con capacidad nematicida para ser empleados como agentes de
control biológico de nematodos plaga.................................................................................................................. 59
Aislamiento y selección de cepas de Escovopsis sp. virulentas contra Leucoagaricus gongylophorus para el
control de hormigas cortadoras ........................................................................................................................... 62
Control de hormigas cortadoras con hongos entomopatógenos y aceites esenciales de plantas aromáticas ..... 64

MÓDULO: CONTROL GENÉTICO Y COMPORTAMENTAL ................................................................ 66

Mejoramiento del éxito de apareamiento luego del tratamiento con metopreno en machos de Anastrepha
fraterculus (Diptera: Tephritidae): valor adaptativo y mecanismos de acción ...................................................... 67
Mejoramiento del éxito de apareamiento luego de la exposición a volátiles de guayaba en Anastrepha
fraterculus (Diptera: Tephritidae): valor adaptativo y mecanismos de acción ...................................................... 70
Estudio del efecto de bacterias del tracto digestivo sobre el éxito copulatorio del macho de Anastrepha
fraterculus ............................................................................................................................................................ 73
Estudio genético y funcional de las bacterias intestinales de larvas de Anastrepha fraterculus .......................... 76
Estudios de las señales químicas en el sitio de oviposición en el picudo del algodonero: su efecto disuasorio de
nuevas infestaciones ........................................................................................................................................... 78
Bases genéticas y moleculares de la determinación del sexo en Anastrepha fraterculus en apoyo al desarrollo e
implementación de la Técnica del Insecto Estéril ................................................................................................ 80
Efecto de rayos X sobre el cariotipo y el esperma de Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) ........................ 84
Efecto de la radiación gamma sobre parámetros biológicos de la polilla del tomate Tuta absoluta .................... 86
Prólogo

Uno de los problemas más importantes de la agricultura moderna es la pérdida de

rendimiento derivada del ataque de invertebrados perjudiciales. El uso de plaguicidas químicos
para enfrentarlos se contrapone a la demanda mundial de alimentos sanos, con menores
niveles de residuos químicos y obtenidos bajo sistemas productivos respetuosos del ambiente.

El Programa Nacional de Protección Vegetal del INTA esta fuertemente comprometido

con la búsqueda de soluciones a esta problemática promoviendo el Manejo Integrado de
Plagas (MIP) y sus distintas tácticas de control. En este marco, el Proyecto Específico del INTA
PNPV1135033 “Desarrollo de herramientas para el manejo integrado de artrópodos
perjudiciales” se propuso generar conocimientos útiles para el desarrollo de métodos de control
biológico, microbiano, genético y comportamental de invertebrados plaga.

En lo que a organismos entomófagos se refiere, uno de los aspectos abordados fue el de

la calidad de la cría y uso eficiente de organismos biocontroladores. Tomando como modelos
biológicos tres especies (dos tricogramáticos parasitoides de huevos de lepidóptero y un mírido
predador de aleiródidos) pudieron establecerse protocolos de cría y almacenaje en frío de estos
entomófagos. Asimismo, se generaron conocimientos útiles para el manejo de parasitoides y
predadores como agentes de control biológico estudiando aspectos tales como la depredación
intragremial, identificación molecular de relaciones tróficas, integración con la Técnica del
Insecto Estéril (TIE), evitación del supeparasitismo y control biológico en sistemas
ornamentales. Paralelamente, se estableció el efecto de diversos fitosanitarios de uso
frecuente en frutihorticultura sobre la fauna benéfica (entomófagos y polinizadores)
estableciéndose una clasificación útil para la integración de ambos tipos de control en un
programa de MIP.

Los estudios sobre control biológico microbiano generaron gran cantidad de

conocimientos de utilidad para el control de distintas plagas y el desarrollo de futuros
bioinsumos. Así, se caracterizaron varios aislamientos de baculovirus de diversos lepidópteros,
entre ellos uno para el control de la polilla de la manzana Cydia pomonella del que, a la fecha,
se están evaluando formulados experimentales. Se logró establecer una estrategia para el
clonado y expresión de genes cry en Bacillus thuringiensis, lo que permitió evaluar la toxicidad
individual y de mezclas de protoxinas Cry sobre C. pomonella. Asimismo, se trabajó en la
selección de las cepas de B. thuringiensis más tóxicas que contenían las proteínas insecticidas

5
más activas para esta plaga. Además, se demostró que el aislamiento de B. thuringiensis es
factible a partir de un nuevo nicho ecológico como lo representan larvas vivas y sanas de
C. pomonella y se realizó el primer reporte de cepas argentinas de B. thuringiensis con
actividad nematicida. Finalmente, se seleccionaron cepas de hongos candidatas para el control
biológico de hormigas cortadoras y una cepa de hongo nematófago nativo con gran potencial
como controlador de nematodos fitoparásitos.

Respecto de la generación de conocimientos para ajustar la TIE para el control de la

polilla del tomate, se continuaron los estudios sobre la esterilidad heredada comenzados en la
cartera anterior pudiendo llegar a un protocolo de irradiación de pupas de Tuta absoluta con
rayos X y gamma a partir de su efecto sobre la biología, espermatogénesis y citología del
insecto. Respecto del desarrollo de la TIE para la mosca sudamericana de la fruta
Anastrepha fraterculus, se generó información básica relacionada con el sexado genético de
esta especie y sobre el aumento de la competitividad sexual de los machos a liberar a través
de su exposición a diversas sustancias. Asimismo, se estudió el efecto disuasorio de
compuestos químicos liberados por el picudo del algodonero, que afectan su comportamiento
de oviposición y que pueden ser utilizados en el manejo de esta plaga.

En este libro se presentan resumidos los principales resultados obtenidos a lo largo de

los 4 años y 9 meses de desarrollo de este proyecto.

Silvia N. López
Coordinadora PNPV1135033

6
Módulo: Control biológico por
entomófagos e impacto de plaguicidas
sobre enemigos naturales y
artrópodos perjudiciales

7
Estudios de almacenaje en frío sobre dos especies de Trichogramma
(Hymenoptera: Trichogrammatidae)
Study of cold storage on two species of Trichogramma (Hymenoptera:
Trichogrammatidae)

Cynthia Lorena Cagnotti, Silvia Noemí López y Mariana Mabel Viscarret*

Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola

(IMyZA). *[Link]@[Link]

Los enemigos naturales han sido sometidos a diferentes estudios de almacenaje. Este
almacenaje tiene como propósitos: ajustar el nivel de producción, sincronizar la presencia del
enemigo natural con el huésped para controlar, simplificar su envío y liberación, y mantener
un reservorio genético del enemigo natural que esta siendo criado. El objetivo del presente
estudio fue evaluar el almacenaje en frío en dos especies de parasitoides, Trichogramma
nerudai y Trichogramma pretiosum. Con este objetivo se realizaron dos tipos de estudio. En
el primer tipo de ensayo se evaluó la combinación de tres tiempos de aclimatación (previo a
la entrada en frío) de 0, 10 y 20 días a 11 ºC (±1) y cinco períodos de almacenaje en frío: 0,
25, 50, 75 y 100 días a 5 ºC (±1). Luego de la aclimatación y el almacenaje en frío, el material
fue mantenido bajo condiciones de cría. Se evaluaron: supervivencia preimaginal, porcentaje
de parasitismo, tiempo de emergencia medio de adultos y proporción sexual (en el caso de
T. nerudai, ya que T. pretiosum es una especie telitóquica). El segundo tipo de ensayo, efecto
materno, solo se realizó con el parasitoide T. nerudai. Huevos de Sitotroga cereallela,
previamente tratados con luz ultravioleta, fueron expuestos a hembras recién emergidas
durante 24 horas. Estos huevos fueron mantenidos a diferentes regímenes de luz/oscuridad
(L:O): 12:12, 9:15; 6: 18 y 3: 21 (generación maternal). A partir de esta generación se
obtuvieron las F1, una por cada período de L:O exponiendo huevos de S. cerealella a la
generación materna. Luego los huevos parasitados fueron colocados a 11±2 ºC y oscuridad
completa. Se registraron las siguientes variables: tiempo de emergencia del adulto, porcentaje
de emergencia, proporción de hembras y estado preimaginal de individuos no emergidos
luego del almacenaje.
Para el primer ensayo (aclimatación más almacenaje en frío), para T. nerudai se
evaluaron la F0 y la F1. La emergencia de los adultos almacenados (F0) disminuyó
significativamente con el incremento del tiempo de frío. Sin embargo, para el período más
largo de aclimatación (20 días), los valores de emergencia fueron mayores que los obtenidos

8
para el período más corto (10 días) (P< 0.0001). La exposición de T. nerudai al frío (5.4 ºC)
fue detrimental para su supervivencia. Los parasitoides tratados con un período de
aclimatación de 20 días y posteriormente a tiempos de almacenaje en frío de 50, 75 y 100
días mostraron un tiempo de emergencia similar al del control. Independientemente del tiempo
de almacenaje la proporción de hembras fue mayor cuando el período de aclimatación fue de
20 días en lugar de 10 (P<0.0001). En general se observó que, para ambos períodos de
aclimatación, a mayor tiempo de almacenaje en frío menor porcentaje de parasitismo. Para la
F1, la proporción de adultos emergidos en la progenie (F1) fue afectada por la aclimatación y
el tiempo de almacenaje en frío (P<0.0001). Esta proporción fue mayor al 90% para todos los
tratamientos excepto los de 100 días de almacenaje (15%-18%). En general para ambos
períodos de aclimatación, se observó que a mayor tiempo de almacenaje en frío menor es la
proporción de hembras. De acuerdo a los resultados obtenidos, solo el tratamiento de 20 días
de aclimatación y 50 de almacenaje en frío sería de utilidad para establecer un protocolo de
almacenaje en T. nerudai. En estas condiciones se observan una alta emergencia
(aprox. 90%) y parasitismo (aprox. 75%), siendo el tiempo de emergencia del adulto y la
proporción sexual similares a las de los controles. Para el ensayo de almacenaje de T.
pretiosum se evaluó solo la generación parental F0. T. pretiosum resultó afectado fuertemente
por el frío, con un efecto detrimental en la emergencia al aumentar el período de almacenaje
(P˂0.01). Con 50 días de almacenaje, la emergencia cae por debajo del 60%. Sin embargo,
para un mismo período de almacenaje, una mayor aclimatación produjo una mayor
emergencia (P˂0.01). En el caso del efecto materno evaluado para T. nerudai, la mayoría de
los autores consideran a la prepupa de Trichogramma spp. como el estado diapausante. En
el presente estudio la mayor proporción de prepupas se registró para el tratamiento 12L:12O
(P˂0.01). La máxima proporción de individuos diapausantes es inducida por luz de día-corto
y este efecto se registra cuando el desarrollo de la descendencia (F1) ocurre a temperaturas
cerca del umbral de desarrollo (~10 ºC). Por medio de disecciones se registraron pupas y
adultos vivos. Un porcentaje significativo de pupas fue registrado, incluso más que prepupas
para todos los períodos de L:O. Asimismo, hubo diferencias significativas, aunque el
tratamiento de 12L:12O fue el que presentó menor proporción de pupas vivas (P˂0.05). El
porcentaje de adultos emergidos fue significativamente menor para el tratamiento 9L:15O
(P˂0.01), pudiendo indicar algún estado de quiescencia de estos individuos para el
fotoperíodo estudiado. El tiempo de emergencia fue similar para todos los tratamientos.
Considerando la posibilidad de almacenar T. nerudai los mejores tratamientos resultaron
3L:21O y 12L:12º permitiendo mantener el material bajo almacenaje durante 3 meses con un
porcentaje de emergencia de 80% y 70%, respectivamente. Cabe destacar que la mayor

9
proporción de hembras fue obtenida para el tratamiento 3L:21O, aumentando la factibilidad
de utilizar este tratamiento para el almacenaje.

Publicaciones
Méndez, L.M.; Botto, E.N.; Flores, D.; Cagnotti, C.L.; López, S.N.; Viscarret, M.M. 2016.
Evaluación de tres clases de trigo para la cría de Sitotroga cerealella (Lepidoptera:
Gelechiidae) como hospedante utilizado en la cría de enemigos naturales. Revista de la
Sociedad Entomológica Argentina, 75 (3-4): 105-116.
Cagnotti, C.L.; Lois, M.; López, S.N.; Botto, E.N.; Viscarret, M.M. 2018. Cold storage of
Trichogramma nerudai using an acclimation period. BioControl
[Link]
Cagnotti, C.L.; Lois, M.; López, S.N.; Viscarret, M.M. 2017. Protocolo de almacenaje en frío,
con período de aclimatación, en Trichogramma nerudai. VI Reunión Argentina de
Parasitoidólogos. La Plata, Buenos Aires, Argentina.
Viscarret, M.M. 2014. Study of factors inducing dormancy on Trichogramma nerudai Pintureau
and Gerding and T. pretiosum Riley under rearing conditions. First Research
Coordination Meeting of an FAO/IAEA Coordinated Research Project, 21-25/07/2014.
Viena, Austria.
Viscarret, M.M.; Cagnotti, C.L.; López, S.N. 2017. Storage and maternal effect on
Trichogramma nerudai. 3rd RCM on Dormancy Management to Enable Mass-rearing and
Increase Efficacy of Sterile Insects and Natural Enemies. 29 de mayo al 02 de junio de
2017. Viena, Austria.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA-IAEA Nº18289. Study of factors inducing dormancy on Trichogramma nerudai
Pintureau and Gerding and T. pretiosum Riley under rearing conditions. 2014-2019.

10
Estudios biológicos sobre Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera:
Miridae)
Biological studies on Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae)

Silvia Noemí López1*, Virginia Fuentes Balluzzi1, Paola Irene Carrizo2, Marcelo Lois2 y
Mariana Mabel Viscarret1
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2 Facultad de Agronomía, Universidad de Buenos Aires (UBA). *[Link]@[Link]

Las moscas blancas (Hemiptera: Aleyrodidae) son plagas del cultivo de tomate cuyo
control se realiza normalmente con agroquímicos. Una alternativa es el control biológico
mediante el uso de parasitoides y depredadores. Entre los entomófagos asociados a las
moscas blancas en cultivos de tomate se destaca la chinche Tupiocoris cucurbitaceus
(Hemiptera: Miridae). Este predador requiere, para su cría en laboratorio, un sustrato para
oviposición y una presa para completar su desarrollo. Huevos de Sitotroga cerealella (Olivier)
(Lepidoptera: Gelechiidae) son habitualmente utilizados como insumo para la cría de diversos
entomófagos entre los cuales se encuentra esta chinche. Otro factor que afecta su desempeño
es la presencia de otros enemigos naturales parasitoides o predadores en el cultivo.
Encarsia formosa (Hymenoptera: Aphelinidae) es un microhimenóptero que al parasitar ninfas
de moscas blancas podría eventualmente ser presa de la chinche dando lugar a un proceso
de depredación intragremial. Se desconoce la posible existencia de esta interacción entre
estos dos enemigos naturales y el efecto sobre el control de la plaga. El objetivo de este
trabajo fue evaluar dos aspectos vinculados al desempeño de T. cucurbitaceus: 1-la
evaluación de diversos sustratos para su cría y 2-la evaluación de la depredación intragremial.
Para el primer objetivo se probaron tres dietas (tratamientos): dieta S: huevos
esterilizados de S. cerealella (cría rutinaria), dieta A: cistos de Artemia spp., dieta M: huevos
de S. cerealella y cistos de Artemia spp. en proporciones similares. La unidad experimental
(u.e.) consistió en una caja de Petri con una base de agar sobre la que se colocó una hoja de
tabaco (Nicotiana tabacum L). En cada u.e. se confinaron 3 hembras y 1 macho permitiendo
la oviposición. Previa a la fecha estimada para la emergencia de las ninfas se le asignó a cada
caja una de las tres dietas. Se registraron el número de ninfas que alcanzaron el estado adulto
en cada u.e., el tiempo de desarrollo de ninfa a adulto y el n.º de adultos obtenidos/u.e./dieta.
Los adultos emergidos de este ensayo fueron mantenidos en plantas, cada uno con su dieta
de origen y la supervivencia, proporción sexual y fertilidad fueron evaluados en la F2. El tiempo
de desarrollo de las ninfas de la F0 no presentó diferencias significativas entre las dietas (entre

11
10 y 13 días, p=0,20). La mortalidad de las ninfas bajo condiciones confinadas, en cajas de
Petri, no fue significativamente diferente entre las dietas probadas (aproximadamente 60%,
p=0,88). Los resultados obtenidos para la fecundidad de las hembras de la F2 no mostraron
diferencias significativas entre las tres dietas probadas (entre 75 y 102 ninfas1/tipo de dieta,
p=0,65). No se encontraron diferencias significativas para el número de adultos obtenidos/nº
ninfas por planta y por pareja (entre 55 a 57, p=0,99). Los valores obtenidos para la proporción
sexual en la F3 fueron elevados para las tres dietas probadas, encontrándose un mayor
número de hembras en la dieta M (valores entre 66 y 98 % de hembras/n.º total de individuos,
p=0,04). De acuerdo a los resultados encontrados es posible criar T. cucurbitaceus, al menos
3 generaciones, sin afectar sus parámetros biológicos.
Para el ensayo de depredación intragremial, se expusieron adultos hembras y machos
de la chinche a ninfas de T. vaporariorum sin parasitar y a ninfas parasitadas por E. formosa
durante 24 h, en pruebas con y sin opción. Los resultados obtenidos para los ensayos sin
opción mostraron que tanto la hembra como el macho de T. cucurbitaceus consumieron
significativamente más ninfas de mosca blanca no parasitadas que parasitadas por E. formosa
(hembras: p=0,0044; machos: p=0,046). En las pruebas con opción los adultos de ambos
sexos de T. cucurbitaceus consumieron un número similar de ninfas parasitadas y no
parasitadas (hembras: p=0,27; machos: p=0,37). Los resultados de las pruebas sin opción
demuestran que en condiciones de laboratorio T. cucurbitaceus es capaz de utilizar como
presa tanto a la mosca blanca como a su parasitoide, aunque se observó un nivel de consumo
menor sobre este último. En los ensayos con opción, T. cucurbitaceus no mostró preferencia
por ningún tipo de presa, sino que se alimentó de ambas en igual cantidad. Los resultados
obtenidos para los ensayos sin opción mostraron que el depredador consume menos presas
cuando estas están parasitadas, esto podría deberse a un mayor valor nutricional del
parasitoide en comparación con la mosca blanca, de modo que con menos ninfas parasitadas
la chinche cubre sus requerimientos nutricionales. O bien, podrían existir diferencias en el
tegumento entre las ninfas normales y parasitadas que hacen más dificultosa la depredación
en estas últimas. No obstante, este resultado, ante la posibilidad de elegir entre ambos tipos
de presas, T. cucurbitaceus no muestra preferencia por ninguna, sino que se alimenta de
ambas en igual cantidad, existiendo una relación intragremial entre ambas especies, chinche
y parasitoide.

Publicaciones
Fuentes Baluzzi, V. 2016. Interacción entre el predador Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera:
Miridae) y el parasitoide Encarsia formosa (Hymenoptera: Aphelinidae), enemigos

12
 naturales de la mosca blanca de los invernáculos Trialeurodes vaporariorum (Hemiptera:
Aleyrodidae). Tesis de grado Ingeniería Agronómica, Universidad Nacional de Luján.
Lois, M. 2017. Utilización de Artemia spp. (Anostraca: Artemiidae) como presa alternativa para
la cría de Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae), predador de plagas hortícolas.
Tesis Tecnicatura en Producción Orgánica, FAUBA.
Lois, M.; López, S.N.; Viscarret, M.M.; Carrizo, P.I. 2015. Evaluación de Artemia spp.
(Anostraca: Artemiiidae) como presa alternativa para la cría de Tupiocoris cucurbitaceus
(Hemiptera: Miridae), predador de plagas hortícolas. IX Congreso Argentino de
Entomología, 19-22 de mayo de 2015, Posadas, Misiones.
Fuentes Baluzzi, V.; Lois, M.; Riquelme, M.B.; Viscarret, M.M.; Andorno, A.; López, S.N. 2015.
Interacción entre el depredador Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae) y el
parasitoide Encarsia formosa (Hymenoptera: Aphelinidae), enemigos naturales de la
mosca blanca de los invernáculos Trialeurodes vaporariorum (Hemiptera: Aleyrodidae).
IX Congreso Argentino de Entomología, 19-22 de mayo de 2015. Posadas, Misiones.

13
Desarrollo de un protocolo de identificación molecular especie
específico para el estudio de relaciones tróficas en un sistema hortícola
Development of a molecular identification protocol specific to species for the study of
trophic relationships in a horticultural system

Cynthia Lorena Cagnotti1*, Silvia Noemí López1 y Daniela Sandra Tosto2-3-4

1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Instituto de Biotecnología. 3Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 4Universidad de Buenos Aires (UBA),
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. *[Link]@[Link]

El conocimiento de las interacciones tróficas en agroecosistemas es fundamental para

el establecimiento y la implementación de estrategias sustentables de manejo de plagas. La
investigación realizada en agroecosistemas se ha focalizado especialmente en las relaciones
entre predadores o parasitoides especialistas y sus presas o huéspedes, donde usualmente
hay poca duda acerca de la identidad de estas últimas. Cuando los predadores o parasitoides
son generalistas, la identificación y cuantificación de las presas y huéspedes es más
problemática, ya que se alimentan o parasitan un rango de diferentes especies. Hasta el
momento, el estudio de las relaciones predador-presa se basó en datos de observación de
campo, pero la determinación exacta del rango de presas consumido por predadores
generalistas es difícil de realizar bajo condiciones de campo. Por una parte, un método
alternativo es la identificación de los restos de la presa dentro del contenido estomacal del
predador mediante observación microscópica. Sin embargo, algunos predadores, como los
míridos, poseen un aparato bucal chupador lo cual imposibilita el reconocimiento de las
presas. Por otra parte, el método clásico para cuantificación de las tasas de parasitismo
consiste en la identificación y cuantificación de los parasitoides adultos que emergen de los
huéspedes colectados en el campo. En este caso, la primera limitante es la identificación del
parasitoide que requiere de un especialista en sistemática. Además, alta mortalidad durante
el transporte al laboratorio y el período de cría podría inducir subestimaciones del parasitismo
real.
En los últimos años se han desarrollado diversas técnicas moleculares para estudiar los
restos de presas dentro del aparato digestivo de predadores, las cuales se han basado en la
identificación de proteínas específicas o de secuencias de ADN de la presa. Actualmente, las
técnicas más utilizadas para analizar restos de presas en predadores son: el uso de
anticuerpos monoclonales y la utilización de marcadores moleculares específicos, como los
genes mitocondriales altamente conservados citocromo oxidasa I y II. Esta técnica también

14
se ha utilizado exitosamente para detectar ADN de los parasitoides dentro de los huéspedes.
La detección de ADN mediante métodos de amplificación basados en la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) muestra ciertas ventajas para la detección del ADN de la presa dentro
del aparato digestivo del predador y del parasitoide dentro del huésped como ser rapidez,
sensibilidad, disponibilidad de bases de datos de secuencias y detección del ADN de la presa
dentro del aparato digestivo del predador varias horas después del evento de predación.
El objetivo del trabajo fue desarrollar un protocolo mediante el uso de técnicas
moleculares para estudiar las interacciones tróficas predador-presa y parasitoide-huésped
presentes en dos sistemas hortícolas. El primer sistema esta integrado por la mosca blanca
Trialeurodes vaporariorum (plaga), el predador Tupiocoris cucurbitaceus y el parasitoide
Encarsia formosa que se encuentran asociados a esta plaga. Mientras que el segundo sistema
esta conformado por el pulgón Myzus persicae (plaga), el predador Chrysoperla externa y el
parasitoide Aphidius colemani que son enemigos naturales de pulgones. Se realizó un ensayo
de predación y otro de parasitismo con las especies del sistema 1 (T. cucurbitaceus-
T. vaporariorum- E. formosa) para evaluar cuánto tiempo después de la predación o
parasitismo es posible detectar indicios de las interacciones. Estos se realizaron en el
Insectario de Investigaciones para Lucha Biológica (IILB), Instituto de Microbiología y Zoología
Agrícola (IMYZA), CICVyA, INTA Castelar. En el ensayo de predación 20 ninfas IV de mosca
blanca sobre un folíolo de tomate fueron ofrecidas a una hembra de T. cucurbitaceus (en
inanición por 24 h). Se dejó alimentar a la chinche por 3 h y luego se contó el número de ninfas
consumidas por cada predador. Únicamente se tomaron las hembras que consumieron al
menos 4 ninfas y se guardaron en alcohol a 96° a distintos tiempos desde la finalización de la
alimentación (inmediatamente finalizada la alimentación, 1 h después de finalizada la
alimentación, pasadas 3 h, pasadas 5 h y pasadas 7 h). Además, se conservaron en alcohol
muestras de hembras de T. cucurbitaceus con 24 h de inanición. Por una parte, en el ensayo
de parasitismo hembras de E. formosa fueron aisladas y expuestas a folíolos de tomate con
ninfas III-IV de mosca blanca durante 24 h para permitir el parasitismo. Durante los próximos
12 días, aproximadamente 300 ninfas de mosca blanca se guardaron diariamente en alcohol
96°. Por otra parte, para estudiar las interacciones entre las especies del sistema 2
(C. externa- M. persicae – A. colemani) se fijaron en alcohol larvas de crisopas alimentadas
con pulgones y muestras de estos parasitados por A. colemani. En el Instituto de
Biotecnología, CICVyA se realizaron extracciones de ADN de las muestras de
T. cucurbitaceus/C. externa en inanición por 24 h, de T. vaporariorum/M. persicae no
parasitadas y de muestras de E. formosa y A. colemani (kit de extracción para tejidos
Quiagen). Se diseñaron primers específicos y se amplificaron regiones de la COI de las

15
especies estudiadas mediante una PCR convencional a partir de las extracciones de ADN
mencionadas. Los productos de las PCR se purificaron y se enviaron al servicio de
secuenciación del Instituto de Biotecnología. Una vez obtenidas las secuencias, se
compararon y se identificaron variantes distintivas de cada especie. Sobre estas diferencias
se diseñaron sets de primers especie-específicos (para PCR en tiempo real como en
multiplex) y adecuados para realizar la detección simultánea de la COI de la presa, el predador
y el parasitoide en las muestras de los ensayos que fueron conservadas en alcohol. Los
primers fueron diseñados contemplando diferencias entre especies en el extremo 3´,
utilizando los programas CLUSTAL W y primer3 (v. 0.4.0).

Publicaciones
Cagnotti, C.; López, S.N.; Peluffo, L.; Viscarret, M.; Tosto, D. 2017. Desarrollo de un protocolo
para la detección molecular de relaciones tróficas en sistemas de producción hortícola.
XLVI Congreso Argentino de Génetica, 01-04 de octubre de 2017. San Fernando del
Valle de Catamarca, Catamarca.
Cagnotti, C.; López, S.N.; Gutiérrez, A.; Tosto, D. 2018. Identificación de relaciones tróficas
en sistemas de producción hortícola utilizando marcadores moleculares. X Congreso
Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de 2018. Mendoza.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA PNBIO 1131044. Genómica aplicada a estudios de ecología molecular y
diversidad genética. 2013-2018.
Proyecto AMIGA. Assessing and Monitoring the Impacts of Genetically Modified Plants on
Agro-ecosystems. 2014-2016.

16
Estudios de control biológico con entomófagos en cultivos
ornamentales
Studies of biological control with entomophagous in ornamental crops

Silvia Noemí López1*, Andrea Verónica Andorno1, Paola Carrizo2 y Martín Fernández3
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Universidad de Buenos Aires (UBA). Departamento de Producción Vegetal, Cátedra de
Zoología Agrícola. 3Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Floricultura.
*[Link]@[Link]

Las plagas pueden ser limitantes para la producción de cultivos ornamentales. Dada la
escasa información para el empleo del control biológico como táctica de manejo sanitario en
estos cultivos, se planteó la necesidad de generar información de base relacionada con el
desempeño de enemigos naturales entomófagos en estos sistemas. En este contexto, se
llevaron adelante dos estudios en cultivos de interés para el Instituto de Floricultura del INTA
Castelar.
1) Desarrollo de los predadores Orius insidiosus (Hemiptera: Anthocoridae) y
Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae) en dos especies ornamentales nativas.
Glandularia sp. (Verbenaceae) y Calibrachoa sp. (Solanaceae) son especies vegetales
cultivadas para ornato, particularmente Calibrachoa sp. se comercializa en los mercados de
Europa y EE. UU. El INTA esta impulsando su producción y comercialización en el mercado
nacional de flores para lograr su adopción entre productores de pequeña o mediana escala.
Entre los problemas sanitarios que presentan estas especies se destacan el ataque de trips y
moscas blancas. Una alternativa al uso de insecticidas para combatir estas plagas podría ser
el control biológico mediante el uso de los predadores Orius insidiosus y
Tupiocoris cucurbitaceus cuya efectividad como controladores biológicos de trips y moscas
blancas, respectivamente, ha sido probada en diversos cultivos hortícolas. El desarrollo
exitoso de estos predadores depende de la calidad adecuada de los tejidos de la planta
hospedante, debido a que insertan sus huevos en el interior del tejido vegetal y realizan
fitofagia en estadios tempranos de su fase inmadura. Esto requiere de la evaluación de
Glandularia sp. y Calibrachoa sp. como hospedantes adecuadas para estos enemigos
naturales. Para ello, en condiciones de laboratorio se analizaron las variables que determinan
el cumplimiento exitoso de su ciclo vital: la longevidad, la fecundidad y la proporción sexual
de la progenie producida sobre estas plantas. Se realizaron ensayos por separado para cada
predador. El pimiento y el tomate fueron considerados como tratamiento control para

17
O. insidiosus y T. cucurbitaceus respectivamente, ya que se conoce su buena aptitud como
hospedera para cada predador. Parejas de adultos de cada especie fueron expuestas a
plantas de Calibrachoa sp., Glandularia sp. y control en condiciones controladas (T°: 25±3 ºC,
HR: 55-20 %, fotoperíodo: 16:8 (L: O)) en un DCA (n=10). Se registraron día por medio:
longevidad de la hembra y del macho de cada pareja y número de ninfas y adultos, mortalidad
ninfal y proporción sexual de la F1. Los resultados fueron analizados mediante MLMG
(distribución Poisson y Binomial, función de enlace: log) y DGC como prueba a posteriori.
Para O. insidiosus se observó que la longevidad de los adultos de la F0 y la proporción
sexual de la F1 fueron semejantes entre las plantas hospederas. La cantidad de ninfas
producidas en la F1 fue significativamente mayor en el pimiento respecto de las dos especies
ornamentales. Hubo más adultos en la descendencia en pimiento respeto de Glandularia sp.,
y a su vez en esta respecto de Calibrachoa sp. Finalmente, la mortalidad ninfal fue
significativamente mayor en Calibrachoa sp. comparada con Glandularia sp. y menor en el
pimiento. Estos resultados indican que Calibrachoa sp. posee una calidad hospedera inferior
que Glandularia sp. y esta una calidad inferior a C. annum, aunque aceptable para el
desarrollo de O. insidiosus. Respecto de T. cucurbitaceus, tanto Glandularia como
Calibrachoa resultaron igualmente aceptables como hospedante de esta chinche ya que,
excepto la longevidad de los machos, las pruebas no mostraron diferencias significativas entre
hospederas.
2) Evaluación de Encarsia formosa y Orius insidiosus para el control de Trialeurodes
vaporariorum y Frankliniella occidentalis en Gerbera jamesonii bajo invernáculo. Se evaluó al
parasitoide Encarsia formosa (Ef) y al depredador Orius insidiosus (Oi) como controladores
de Trialeurodes vaporariorum y Frankliniella occidentalis, respectivamente, en plantas de
Gerbera. En un invernáculo se ubicaron 24 jaulas de exclusión (55x60x80 cm) con una planta
de Gerbera infestada naturalmente con ambas plagas. Se asignaron al azar los tratamientos:
T1=control, T2=introducción Oi (6 parejas/semana) durante 3 semanas, T3=introducción Ef
(10 adultos/semana) durante 3 semanas, T4=introducción Oi y Ef a las dosis y frecuencias
mencionadas en T2 y T3. Semanalmente se contabilizó el número de trips/flor, de ninfas y
adultos de Oi/flor; número de adultos de Trialeurodes vaporariorum y de ninfas y adultos de
Oi/3 hojas; número de ninfas de mosca blanca sanas, parasitadas y predadas/hoja. Los
resultados muestran que la población de adultos de mosca blanca fue significativamente
menor en los tratamientos de liberación de Ef (T3 y T4). En T4. Asimismo, la población de
ninfas fue significativamente menor posiblemente debido a la acción conjunta de ambos
entomófagos, con niveles máximos de 80 % de las ninfas parasitadas y 3,5 ninfas
predadas/hoja. Las poblaciones de trips se mantuvieron en niveles bajos no observándose

18
diferencias entre los tratamientos. Los resultados obtenidos son promisorios para el control
de mosca blanca mediante biocontroladores. Se requiere realizar ensayos para validar los
resultados bajo condiciones de producción, así como profundizar los estudios sobre control
de trips.

Publicaciones
Fernández, M.; Andorno, A.; Mata, D.; López, S.N. 2016. Evaluacion de Encarsia formosa y
Orius insidiosus para el control biológico de Trialeurodes vaporariorum (Homoptera:
Aleyrodidae) y Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae) en gerbera bajo
invernáculo. XXIX Congreso Argentino de Horticultura, 26-29 de septiembre de 2016.
Santa Fe, Argentina.
López, S.N.; Del Punta, L.; Fernández, M.; Carrizo, P. 2018. Desarrollo del predador
Orius insidiosus (Say) (Hemiptera: Anthocoridae) en las especies ornamentales
Calibrachoa sp. (Solanaceae) y Glandularia sp. (Verbenaceae). X Congreso Argentino
de Entomología, 21-24 de mayo de 2018. Mendoza, Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA PNHFA 1106093. Desarrollo y ajuste de tecnologías para una producción
florícola sustentable y de calidad. 2013-2018.

19
Evaluación de mejoras en la cría artificial del parasitoide de moscas de
la fruta, Diachasmimorpha longicaudata, que minimicen el efecto del
superparasitismo
Superparasitism in the artificial rearing of Diachasmimorpha longicaudata using
Ceratitis capitata larvae as host

Francisco Devescovi1,2*, Mariana Mabel Viscarret3, Jorge Luis Cladera1 y Diego Fernando
Segura1,2

Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E.A. Favret”. 2Consejo

1Instituto

Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3 Instituto Nacional de Tecnología

Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola (IMyZA).
*frandevescovi00@[Link]

El endoparasitoide solitario larval Diachasmimorpha longicaudata ha sido ampliamente

utilizado como agente de control de moscas de la fruta, ya que estas generan grandes
pérdidas económicas. El control biológico de moscas de la fruta de importancia económica
esta siendo implementado en algunas zonas de la provincia de San Juan, Argentina y en otras
partes del mundo mediante el endoparasitoide larvo-pupal Diachasmimorpha longicaudata
Ashmead (Hymenoptera: Braconidae). Para su producción y liberación masiva se requieren
protocolos que minimicen los costos y maximicen el control de la plaga. Con el objetivo general
de conocer los procesos que influyen en su desarrollo y ciclo de vida utilizando
Ceratitis capitata como especie hospedadora, en esta tesis se evaluaron los efectos del
fenómeno conocido como superparasitismo (ej. oviposición en un hospedador previamente
parasitado por la misma u otra hembra de la misma especie) sobre parámetros relacionados
con el éxito reproductivo y con aspectos del comportamiento, genética y electrofisiología. El
superparasitimo resultó ser un fenómeno común en la cría experimental del IGEAF (INTA,
Castelar). En aquellos niveles de superparasitismo en los que fue posible un completo
desarrollo del adulto no se registraron consecuencias asociados al éxito reproductivo. La
eliminación de las larvas competidoras durante el primer estadio larval permitiría que la mayor
parte del desarrollo se produzca sin competencia, explicando la falta de efecto sobre el adulto.
Estudios comportamentales mostraron que algunas hembras evitan superparasitar mientras
que otras oviponen al azar, esto sugiere en estas últimas una incapacidad para discriminar
larvas parasitadas y no parasitadas. Al evaluar un posible componente genético en hembras
con y sin esa habilidad no se encontró una correlación con sus respectivas hijas (análisis de
correlación e isolineas). Estimulaciones en el extremo del ovipositor mediante técnicas de

20
electrofisiología no evidenciaron una habilidad de discriminación entre larvas parasitadas y no
parasitadas por parte del adulto. En conjunto, los resultados de esta actividad aportan nueva
información sobre la biología básica de D. longicaudata, y contribuyen a futuros estudios
dirigidos a una mejora en el proceso de cría artificial de este agente de control biológico de
moscas de los frutos.

Publicaciones
Devescovi, F.; Bachmann, G.E.; Nussenbaum, A.L.; Viscarret, M.; Cladera, J.L.; Segura, D.F.
2017. Effects of superparasitism on immature and adult stages of Diachasmimorpha
longicaudata Ashmead (Hymenoptera: Braconidae) reared on Ceratitis capitata
Wiedemann (Diptera: Tephritidae). Bulletin of Entomological Research, 107(6), 756-767.
Devescovi, F.; Nussenbaum, A.L.; Bachmann, G.E.; Lanzavecchia, S.B.; Cladera, J.L.;
Segura, D.F. 2018. Genetic variation in host discrimination ability in
Diachasmimorpha longicaudata (Hymenoptera: Braconidae) attacking Ceratitis capitata
(Diptera: Tephritidae). 10th International Symposium on Fruit Flies of Economic
Importance. México.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

PICT 2015-0182. Estudio de semioquímicos utilizados por el parasitoide
Diachasmimorpha longicaudata (Hymenoptera: Braconidae) durante la búsqueda del
hospedador, Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae).

21
Bases químicas de la atracción del parasitoide Diachasmimorpha
longicaudata hacia frutos infestados por larvas hospedadoras de
Ceratitis capitata
Chemical basis of the attraction of Diachasmimorpha longicaudata to fruits infested by
Ceratitis capitata

Francisco Devescovi1,2, Patricia Carina Fernández2,3, Guillermo Enrique Bachmann1,2, Ana

Laura Nussenbaum1,2 y Diego Fernando Segura1,2*

Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E.A. Favret”. 2Consejo

1Instituto

Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Instituto Nacional de Tecnología

Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Delta del Paraná.
*[Link]@[Link]

El control biológico de moscas de la fruta de importancia económica se esta

implementando en la provincia de San Juan, Argentina y en otras partes del mundo mediante
el endoparasitoide larvo-pupal Diachasmimorpha longicaudata Ashmead (Hymenoptera:
Braconidae). Para su producción y liberación masiva se requieren protocolos que minimicen
los costos y maximicen el control de la plaga. En este sentido, un cebo atrayente permitiría el
monitoreo de la abundancia y distribución de este agente de control, brindando información
para una mejor planificación. Como en muchos insectos, las hembras de esta especie son
capaces de ubicar el hábitat y localizar a su hospedador mediante información química
(semioquímicos). Dicho hospedador, al momento de ser atacado por el parasitoide se
encuentra alimentándose y desarrollándose dentro de los frutos de numerosas especies
frutales. En un estudio previo, y utilizando un olfatómetro de flujo estacionario, se determinó
que naranjas infestadas con larvas de la mosca del Mediterráneo, Ceratitis capitata
Wiedemann (Diptera: Tephritidae), o con distintos grados de maduración generan una
atracción significativamente mayor de hembras de este parasitoide al ser ofrecidas frente a
naranjas no tratadas. El objetivo del presente trabajo fue confirmar las bases químicas del
comportamiento de orientación de D. longicaudata hacia su hospedador, C. capitata,
utilizando un olfatómetro dinámico en Y (Experimento 1) e identificar compuestos químicos
candidatos asociados a este comportamiento (Experimento 2). Se evaluaron naranjas
infestadas con larvas de mosca (NI), naranjas infestadas, pero en las cuales las larvas ya
habían abandonado el fruto (NA) y naranjas sin infestación, pero en avanzado grado de
maduración (NM). Como control se utilizaron naranjas no infestadas y maduras (NC). Para el
Experimento 1, un parasitoide hembra fecundado de entre 5-10 días de edad fue evaluado

22
frente a una naranja tratada (NI/NA/NM) y una naranja no tratada (NC), ofrecidas en un
olfatómetro en Y, sin contacto visual. La hembra fue liberada en el brazo principal,
registrándose la primera elección realizada al entrar en uno de los brazos secundarios por
donde fluían los compuestos volátiles de cada tratamiento. Se evaluaron 40 hembras
(réplicas) por tratamiento y se comparó la frecuencia de elección hacia cada tipo de fruta
mediante una prueba de G. Para el Experimento 2 se utilizaron los mismos tipos de naranjas
para colectar los respectivos compuestos volátiles. Cada naranja fue colocada en una bolsa
para horno (B.p. Premium) y cerrada herméticamente. Durante 4 h se aplicó un flujo de aire
limpio (filtrado con carbón activado) mediante una bomba y tubos de teflón, conectando una
entrada y una salida a la bolsa con la naranja. A la salida se colocó un filtro adsorbente
(HayeSep) para retener dichos volátiles, que luego fueron eluídos con 250 µl de diclorometano
y recogidos en un vial. Se obtuvieron al menos 5 réplicas de cada tratamiento. Estas muestras
fueron analizadas mediante cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas.
Utilizando la base de datos NIST se identificó un gran número de compuestos. Se consideró
que un compuesto determinado era propio del tratamiento si era detectado en al menos
3 muestras. Mediante comparaciones de los perfiles cromatográficos se determinaron los
compuestos únicos o compartidos por dos o todos los tipos de frutas. En el Experimento 1
hubo una frecuencia significativamente mayor en la elección de cada tipo de naranja tratada
(NI/NA/NM) frente a naranjas no tratadas (NC). Por un lado, los análisis químicos realizados
en el Experimento 2 revelaron al menos tres compuestos compartidos por los tres tipos de
naranjas tratadas, no presentes en el tratamiento control: γ-terpineno, terpinen-4-ol y α-
terpineol. Por otro lado, también se encontraron compuestos exclusivos de cada tratamiento:
NI: acetato de isopentilo, acetato de geranilo, E-dihidrocarvona, longifoleno, α-terpinoleno y
acetato de bencilo, entre otros; NA: α-copano y Alloaromadendreno; NM: α-felandreno,
lactona de lavanda, acetato de terpinilo y oxido de cis-lonalool. Los resultados
comportamentales del Experimento 1 demostraron que la atracción de las hembras de
D. longicaudata es provocada por estímulos volátiles, aunque no exclusivamente asociados a
la infestación por su hospedador C. capitata, sino también al avance natural de maduración y
putrefacción de la fruta. Los tres compuestos volátiles compartidos por las naranjas atractivas
servirán como candidatos para ser evaluados en próximos bioensayos de atracción con
compuestos sintéticos análogos, con la finalidad de obtener un cebo atrayente para su uso en
el monitoreo de este parasitoide en el campo.

23
Publicaciones
Segura, D.; Nussenbaum, A.; Viscarret, M.; Devescovi, F.; Bachmann, G.; Corley, J.; Ovruski
S.; Cladera, J. 2016. Innate Host Habitat Preference in the Parasitoid Diachasmimorpha
longicaudata: Functional Significance and Modifications through Learning. Plos ONE.
[Link]
Devescovi, F.; Fernandez, P.; Bachmann, G.; Nussenbaum, A.; Schiavo, P.; Segura, D. 2016.
Identification of volatile compounds obtained from larvae-infested and rotten fruit
attractive for the fruit fly parasitoid Diachasmimorpha longicaudata Ashmead
(Hymenoptera: Braconidae). 1st Joint Meeting ISCE/ALAEQ, Brasil.
Devescovi, F.; Fernandez, P.; Bachmann, G.; Nussenbaum, A.; Schiavo, P.; Segura, D. 2016.
Semioquímicos atrayentes del parasitoide Diachasmimorpha longicaudata
(Hymenoptera: Braconidae) para su uso en programas de control biológico. VI Reunión
Argentina de Parasitoidólogos. Argentina.
Devescovi, F.; Fernandez, P.; Bachmann, G.; Nussenbaum, A.; Schiavo, P. Segura, D. 2017.
Identification of volatile compounds obtained from sources attractive to the fruit fly
parasitoid Diachasmimorpha longicaudata (Ashmead) (Hymenoptera: Braconidae). The
5th International Entomophagous Insects Conference. Japón.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

PICT 2015-0182. Estudio de semioquímicos utilizados por el parasitoide
Diachasmimorpha longicaudata (Hymenoptera: Braconidae) durante la búsqueda del
hospedador, Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae).

24
Integración del control biológico mediante el uso de entomófagos con la
Técnica del Insecto Estéril para el control de la polilla del tomate
Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechidae)
Development of the sterile Insect technique and its integration with biological control
with entomophagous parasitoids for the control of the tomato leafminer, Tuta absoluta
(Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae)

Cynthia Lorena Cagnotti1* y Silvia Noemí López1

1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). *[Link]@[Link]

El tomate (Solanum lycopersicum L.) es la hortaliza más cultivada en invernadero en la

Argentina, concentrándose esta actividad en las provincias de Corrientes y Buenos Aires
mientras que Mendoza es la principal provincia productora de tomate a campo. Las plagas
constituyen uno de los factores limitantes de la producción de tomate; Tuta absoluta (Meyrick)
(Lepidoptera: Gelechiidae) es la plaga clave de este cultivo en gran parte de la zona productiva
de nuestro país. Este es un insecto de distribución Neotropical (Centro y Sudamérica), que
ataca al cultivo desde la etapa de almácigo hasta la cosecha. La larva es la que produce el
daño directo sobre las plantas, ya que se alimenta del mesófilo foliar, barrena brotes o perfora
frutos generando enormes pérdidas económicas a los productores cuando no se aplican
controles.
El principal método de control de la polilla del tomate consiste en el uso de plaguicidas.
Ante la presencia de elevadas infestaciones, los productores han intensificado el uso de
productos químicos aumentando las dosis y el número de aplicaciones recomendadas. Esto
ha generado la aparición de poblaciones de T. absoluta resistentes a varios principios activos
de productos recomendados. Además, el empleo de plaguicidas afecta negativamente a las
poblaciones de insectos benéficos (parasitoides y predadores) a través de efectos letales y
subletales. Dadas las actuales exigencias de los mercados locales y regionales de una
producción con bajo nivel de contaminantes, se han propuesto otros métodos de control de
bajo impacto ambiental contra T. absoluta, entre ellos, el empleo de la Esterilidad Heredada
(EH) y el control biológico mediante el uso de parasitoides o predadores.
En cuanto a la EH, existe evidencia teórica y experimental que sugiere que el potencial
total de la EH para suprimir poblaciones de lepidópteros plagas podría ser alcanzado cuando
es combinada con otros métodos de control, logrando un efecto aditivo o sinérgico. Por lo

25
tanto, se espera que con el empleo combinado de un parasitoide/predador y la EH para el
control de la polilla del tomate, se alcancen mejores niveles de supresión poblacional que con
el uso de cualquiera de estos métodos por separado. La utilización de la EH para el control
de lepidópteros plagas implica que se esterilizan y liberan machos y hembras, de esta forma
todos los tipos de cópulas podrían ocurrir en el campo, incluyendo aquellos que involucran
polillas irradiadas. Las hembras irradiadas depositan huevos no viables en el campo, los
cuales podrían servir como huéspedes para parasitoides del género Trichogramma como
Trichogramma nerudai y Trichogramma pretiosum o como alimento para chinches predadoras
como el mírido sudamericano Tupiocoris cucurbitaceus.
Los objetivos del trabajo fueron los siguientes: 1) evaluar la aceptación por parasitoides
tricogramátidos de los huevos producidos por individuos irradiados de T. absoluta y la
adecuación de estos huevos para el desarrollo de los parasitoides, y 2) evaluar si los huevos
producidos por individuos irradiados de T. absoluta son adecuados como presas para la
chinche T. cucurbitaceus.
Por una parte, se estudió la aceptabilidad y adecuación de huevos provenientes de
parejas de T. absoluta irradiadas para el parasitismo de los parasitoides oófagos T. nerudai y
T. pretiosum. Para ello se irradiaron pupas de T. absoluta con rayos X (20834 R) y los adultos
emergidos fueron separados en parejas de acuerdo con los siguientes cruzamientos: ♂N x ♀N,
♂I x ♀N, ♂N x ♀I (N: no tratado, I: irradiado). En un experimento de no elección se expusieron
40 huevos de cada cruzamiento a una hembra de cada parasitoide durante 24 h. En el
experimento de elección, cada hembra de cada parasitoide fue expuesta a 40 huevos de polilla
no irradiada y 40 de polilla irradiada. Se registró el número de huevos parasitados y la
emergencia de la generación filial.
Por otra parte, se estudió el consumo de huevos de T. absoluta (procedentes de los
mismos cruzamientos que en los ensayos anteriores) por el predador sudamericano
T. cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae), en experimentos de elección y no elección. En el
experimento de no elección se expusieron 200 huevos de cada cruzamiento a una hembra de
T. cucurbitaceus y en el de elección la hembra fue expuesta a 200 huevos de polilla no
irradiada y a 200 huevos de polilla irradiada. Se registró el número de huevos consumidos.
Se obtuvieron los siguientes resultados: 1) todos los huevos de T. absoluta fueron
aceptados para la oviposición por T. nerudai y adecuados para su desarrollo. No obstante, los
huevos de hembras irradiadas fueron significativamente menos parasitados que los
procedentes de hembras no tratadas. T. pretiosum mostró un bajo parasitismo en todos los
tipos de huevos. En el experimento de elección, tanto T. nerudai como T. pretiosum no
mostraron diferencias en el parasitismo entre los huevos de polillas irradiadas y no irradiadas.

26
2) Respecto de T. cucurbitaceus, en el experimento de no elección, las hembras predadoras
consumieron la misma cantidad de huevos independientemente de su origen. En el
experimento de elección, T. cucurbitaceus consumió un número similar de huevos de padres
no tratados que de aquellos en los que el macho había sido irradiado. Pero consumió más
huevos ovipuestos por polillas irradiadas que por polillas no tratadas.
Estos resultados proveen evidencias de que los huevos dejados por padres irradiados
son aceptados para la oviposición y adecuados para el desarrollo de los parasitoides
estudiados, así como para el consumo del depredador evaluado y respaldan la idea de que la
Esterilidad Heredada puede ser usada de manera integrada con estos enemigos naturales
para el control de T. absoluta.

Publicaciones
Cagnotti, C. 2014. Desarrollo de la Técnica del Insecto Estéril y su integración con el control
biológico mediante entomófagos parasitoides para el control de la pollila del tomate Tuta
absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae). Tesis Doctoral, Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales, UBA.
Cagnotti, C.L.; Andorno, A.V.; Hernández, C.M.; Carabajal Paladino, L.; Botto, E.N.; López,
S.N. 2016. Inherited sterility in Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae): pest population
suppression and potential for combined use with a generalist predator. Florida
Entomologist. 99: 87-94.
Cagnotti, C.L.; Hernández, C.M.; Andorno, A.V.; Viscarret, M.M.; Riquelme, M.B.; Botto, E.N.;
López, S.N. 2016. Acceptability and suitability of Tuta absoluta eggs from irradiated
parents to parasitism by Trichogramma nerudai and Trichogramma pretiosum
(Hymenoptera: Trichogrammatidae). Agricultural and Forest Entomology. 18:198-205.
Cagnotti, C.L.; Carabajal, L.Z.; López, S.N. 2014. Development of the sterile insect technique
to control the tomato moth Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae). Final Research
Coordination Meeting on Increasing the Efficiency of Lepidoptera SIT by Enhanced
Quality Control. IAEA (International Atomic Energy Agency). 02-07/06/2014. Kelowna,
Canadá.
Proyecto con el que se cofinanció la actividad
Proyecto INTA-IAEA Nº 16332. Development of the Sterile Insect Technique to control the
tomato moth, Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) (financiado por la Agencia
Internacional de Energía Atómica). 2010-2014.

27
Evaluación del efecto de plaguicidas sobre insectos benéficos en
laboratorio
Laboratory test for evaluating effects of pesticides on the beneficial insects

Andrea Verónica Andorno1*, Paola Irene Carrizo2, Carmen Marcela Hernández1, Agustín
Pace3, Lucila Caruso3, Juan Ávila3, Mariana Mabel Viscarret1 y Silvia Noemí López1
1InstitutoNacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola.
(IMyZA). 2Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Agronomía. 3Pontificia Universidad
Católica Argentina (UCA). Facultad de Ingeniería y Ciencias Agrarias. *[Link]@[Link]

La Organización Internacional de Control Biológico (OICB) ha delineado pautas para

evaluar el impacto de los fitosanitarios sobre los insectos benéficos, una condición necesaria
para lograr la integración del control biológico y el químico. En el Insectario de Investigaciones
para Lucha Biológica del IMYZA, hemos evaluado el efecto de algunos plaguicidas
habitualmente utilizados en producciones hortícolas y frutícolas sobre tres predadores:
Orius insidiosus (Hemiptera: Anthocoridae); Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae);
Chrysoperla externa (Neuroptera: Chrysopidae), y un polinizador: Bombus atratus
(Hymenoptera: Apidae). Se evaluó la toxicidad directa de cuatro insecticidas de síntesis:
Cyazypyr (60cc/hl), Flubendiamida (25cc/hl), Indoxacarb (200g/hl) e Imidacloprid (55cc/hl); un
insecticida botánico: Neemazal (400 cc/hl); un fungicida: Azoxistrobina+Difenoconazole
(100cc/hl) y dos biopreparados: tinturas de ajo y ají picante (ambos dilución 1:10). En todos
los casos se determinó la supervivencia luego de 24h de exposición a los residuos secos
(control: agua), y bajo condiciones controladas de 24±1 ºC, 70±10 % HR y fotoperíodo de 16:8
L:O. Para ello, se utilizó un dispositivo (unidad experimental) conformado por dos placas de
vidrio de 13x13 cm separadas por un cilindro de PVC de 2 cm de alto con 4 orificios: 3
revestidos con tela de voile para ventilar y 1 con tapón de algodón, removible para la provisión
de alimento. Para la toxicidad directa, en el Instituto de Ingeniería Rural se aplicaron los
productos con un equipo con boquilla cono hueco 8001 Teejet® (presión: 2 bar, 0,40 m de
altura, velocidad: 4,5 km/h). En tal caso, los individuos (predadores en estado adulto y ninfa;
obreras del polinizador) fueron expuestos a las placas, luego de ser secadas al aire. Para la
persistencia, fueron asperjadas manualmente hojas de pimiento hasta el goteo, exponiendo
los individuos a los residuos secos luego de transcurridos 4, 14 y 29 días desde la aplicación.
El efecto sobre la fecundidad, medida como el nro. de huevos o ninfas/♀/día fue estudiado en
las hembras sobrevivientes de cada tratamiento, luego de introducirlas en recipientes plásticos
o cajas de Petri con el sustrato adecuado para la oviposición. Conforme a los resultados de

28
dichos estudios, los productos fueron clasificados siguiendo las categorías propuestas por la
OICB.
O. insidiosus: Cyazypyr, Flubendiamida y Azoxistrobina+Difenoconazole no difirieron
significativamente respecto del control y resultaron inofensivos para la variable supervivencia.
La fecundidad fue significativamente menor en las hembras expuestas a Indoxacarb, lo que
clasificó a este producto como moderadamente perjudicial. Respecto de su persistencia,
redujo la supervivencia y fecundidad de los adultos expuestos, hasta los 29 días anteriores a
la exposición, clasificando a este producto como persistente. La tintura de ají picante redujo
la supervivencia en un 10 %, pero ningún biopreparado afectó significativamente la
fecundidad. Según el criterio de clasificación de la OICB, la tintura de ajo resultó inofensiva y
la tintura de ají picante, poco perjudicial.
T. cucurbitaceus: Cyazypyr, Flubendiamida y Azoxistrobina+Difenoconazole no
difirieron significativamente respecto del control y resultaron inofensivos para la supervivencia.
La fecundidad resultó significativamente reducida en un 80 % en las hembras expuestas a
Indoxacarb, clasificando a este producto como moderadamente perjudicial. Al evaluar la
toxicidad directa de los biopreparados estudiados se observó que la tintura de ají picante
resultó moderadamente perjudicial, mientras que la tintura de ajo se clasificó como inofensiva.
C. externa: Tanto el Imidacloprid como el Neemazal no afectaron significativamente la
fecundidad de los adultos expuestos respecto del control. Sin embargo, los adultos expuestos
al Imidacloprid vieron reducida significativamente su supervivencia (50% respecto del control)
y por lo tanto este producto resultó poco perjudicial. Los biopreparados resultaron inofensivos
al contacto directo con los adultos de C. externa.
B. atratus: Luego de 72 h de exposición a residuos secos de Cyazypyr, las obreras de
B. atratus no presentaron diferencias significativas en la supervivencia respecto del control,
clasificando a este producto como inofensivo.
La información expuesta en esta presentación se considera relevante y puede ser
introducida en una base de datos como un insumo de utilidad para la integración de tácticas
en un programa de MIP, brindando la información para la selección de los pesticidas menos
nocivos para la fauna auxiliar.

Publicaciones
Andorno, A.V.; López, S.N.; Riquelme, M.B. 2014. Compatibilidad de algunos insecticidas en
cultivos hortícolas. Ediciones INTA.

29
Andorno, A.V.; Canalda, A.E.; Carrizo, P.I.; López, S.N. 2015. Efecto de algunos plaguicidas
sobre la supervivencia de ninfas de Orius insidiosus (Hemiptera: Antocoridae). XV
Jornadas Fitosanitarias Argentinas. 7-9 de octubre de 2015. Santa Fe. Argentina.
Andorno, A.V.; Carrizo, P.I.; Riquelme, M.B.; López, S.N. 2017. Compatibilidad de insecticidas
químicos e insectos benéficos en cultivos hortícolas. Jornadas de Actualización del
efecto de plaguicidas sobre enemigos naturales en horticultura. La Plata, Buenos Aires.
Ávila J., Pace A., Andorno A. V. y C.M. Hernández. 2018. Pruebas de toxicidad directa de
biopreparados sobre el predador Crysoperla externa (Neuroptera: Chrysopiade).
Jornadas Fitosanitarias Argentinas, 10-12 de octubre de 2018. Tucumán, Argentina.
Canalda, A.E.; Masiá, G.; Carrizo, P.; López, S.N.; Andorno, A.V. 2015. Compatibilidad de
algunos insecticidas/fungicidas con Orius insidiosus (Hemiptera: Antocoridae), enemigo
natural de plagas hortícolas. IX Congreso Argentino de Entomología. 19-22 de mayo de
2015. Argentina.
Carrizo, P.I.; Sánchez, A.M.; Andorno, A.V.; López, S.N. 2016. Efecto de residualidad de
indoxacarb sobre la supervivencia y fecundidad de adultos de Orius insidiosus
(Hemiptera: Antocoridae). H-SV 003. 39.º Congreso Argentino de Horticultura. Santa Fe,
Argentina.
Pace, A.; Ávila, J.; Hernández, C.M.; Andorno, A.V. 2018. Efectos letales y subletales de
biopreparados sobre ninfas de Orius insidiosus (Hemiptera: Antocoridade). Jornadas
Fitosanitarias Argentinas, 10-12 de octubre de 2018. Tucumán, Argenrina.
Viscarret, M.M.; Caruso, L.; Pace, A.; Andorno, A. 2018. Efecto de biopreparados sobre la
supervivencia y fecundidad de Tupiocoris cucurbitaceus (Hemiptera: Miridae). X
Congreso Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de 2018. Mendoza, Argentina.
Viscarret, M.M.; Pace, A.; Caruso, L.; Andorno, A.V. 2018. Efecto de biopreparados sobre la
supervivencia y fecundidad de adultos de Orius insidiosus (Hemiptera: Antocoridae). X
Congreso Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de 2018. Mendoza, Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Servicio Técnico INTA – Dupont Argentina (Nº 597) para la evaluación del efecto del principio
activo Cyantraniliprole (producto comercial Benevia®) sobre el polinizador Bombus atratus.
2014-2015.
UBACYT 20020130200112BA. Impacto de productos fitosanitarios convencionales y
bioinsumos sobre calidad del suelo, oligochetos, especies vegetales terrestres y entomófagos
presentes en sistemas cultivados. 2013-2017.

30
Módulo: Control microbiano mediante
el uso de virus, bacterias y hongos
entomopatógenos

31
Caracterización de patógenos asociados a lepidópteros plaga
Characterization of pathogens associated with lepidopteran pests

Joel Demian Arneodo1,2*, Catalina Taibo3, Emilia Inés Balbi4, Violeta Jakubowicz1,2, Ricardo
Salvador1, Graciela Mabel Quintana1, Marcelo Farinon1, Leticia Ferrelli2 y Alicia Sciocco-
Cap1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola

(IMyZA). 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Instituto Nacional

de Tecnología Agropecuaria (INTA). Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas (CICVyA).
Laboratorio de Microscopía. 4Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación
Experimental Agropecuaria (EEA) Marcos Juárez. *[Link]@[Link]

Los lepidópteros son susceptibles a la infección por diversos agentes patógenos. Los
baculovirus (virus de ADN doble cadena) y los microsporidios (grupo relacionado con los
hongos) se destacan entre los más comunes. Los primeros, además, presentan un alto
potencial para ser usados como controladores biológicos. A continuación, se refieren algunas
de las principales investigaciones en la temática realizadas durante los últimos años el IMyZA.
Ocurrencia y variabilidad genética del granulovirus de la carpocapsa (CpGV) en
Argentina. Se muestrearon larvas de Cydia pomonella en montes frutales de diversas zonas
de Argentina con distinta historia de manejo, donde insecticidas virales a base de CpGV: a)
fueron usados extensivamente (2000 - 2005) y luego discontinuados (Catamarca), b) fueron
aplicados muy esporádicamente (Mendoza) y c) los tratamientos se realizan
ininterrumpidamente desde 2001 hasta el presente (Río Negro, Alto Valle). En cada región se
relevaron lotes con aplicación directa de virus (actual o pasada) y lotes no tratados, con
distinto grado de cercanía de los primeros. Además, se colectaron insectos en regiones
alejadas de los puntos de aplicación de virus (Córdoba, Buenos Aires, Neuquén y RN –zona
andina y Valle Medio–), en busca de aislamientos autóctonos. Se analizaron por PCR 825
larvas, y se secuenciaron tres genes virales a partir de las muestras positivas para tipificar los
aislamientos. En el relevamiento efectuado, no se detectó CpGV en Mendoza ni en las
regiones donde no se utilizó el virus. En cambio, las muestras de Catamarca y el Alto Valle
(RN) revelaron la presencia de CpGV tanto en los lotes tratados como en montes aledaños,
sugiriendo cierta capacidad de dispersión y permanencia del virus en el ambiente. En cuanto
a la incidencia, se registraron grandes diferencias: mientras que en Catamarca los valores
fluctuaron en torno al 40 – 50 %, en el Alto Valle estuvieron en un rango de 1 - 20 %. Al analizar
las secuencias, se constató que las poblaciones de virus de ambas regiones son
genéticamente distintas. En Catamarca predomina una variante que exhibe similitud con un

32
aislamiento poco virulento de CpGV originario de Irán, lo que explicaría los altos porcentajes
de incidencia debido a la existencia de infecciones subletales y posible transmisión vertical.
En tanto, el tipo recuperado en el Alto Valle (hallado también minoritariamente en Catamarca)
se corresponde con el aislamiento mexicano de alta efectividad en el cual se basan los
formulados comerciales del virus disponible en el país, por lo que disminuyen drásticamente
las probabilidades de colectar larvas vivas portadoras del virus.
Desarrollo de un método para diferenciar a las especies de Helicoverpa presentes en
Argentina. La certera identificación del insecto infectado es fundamental a la hora de estudiar
las relaciones patógeno/hospedante. Las especies que conforman el complejo
Helicoverpa/Heliothis (representadas en la zona núcleo sojera y maicera argentina
principalmente por Helicoverpa zea y Helicoverpa gelotopoeon) pueden ser discriminadas
mediante el análisis microscópico de la genitalia de machos adultos, pero son indistinguibles
durante su fase larval. En nuestro país, a las polillas autóctonas mencionadas se sumó
recientemente la exótica H. armigera, una de las plagas más devastadoras de la agricultura a
nivel mundial. Por esta razón, se desarrolló una metodología de identificación rápida y efectiva
basada en PCR-RFLP. Para ello, se diseñaron nuevos cebadores universales que amplifican
el gen de la citocromo oxidasa I (COI) de todas las especies del complejo, para luego digerir
el producto con una enzima de restricción que produce un patrón distintivo. El método fue
validado en larvas y adultos de Helicoverpa spp. colectadas en diversos cultivos y zonas
geográficas, cuya identidad fue doblemente corroborada por genitalia (en el caso de machos
adultos) y secuenciación. Se obtuvieron las primeras secuencias de H. armigera en Argentina,
reportándose la presencia de esta plaga en localidades del norte y centro del país. Asimismo,
se anotaron secuencias de H. gelotopoeon (había solo una disponible hasta el momento) y
H. zea provenientes de diferentes provincias.
Nuevo aislamiento baculoviral obtenido de Helicoverpa gelotopoeon. Se caracterizó un
baculovirus obtenido a partir de larvas enfermas de la oruga bolillera H. gelotopoeon. El
tamaño de los cuerpos de oclusión, de estructura poliédrica, osciló entre los 0,6 y 1,2 μm de
diámetro. Los cortes ultrafinos de larvas inoculadas revelaron la presencia de cuerpos de
oclusión en los núcleos de las células infectadas (principalmente en los cuerpos grasos), y la
existencia de una única nucleocáspside por envoltura lipoproteica. El baculovirus investigado
pudo ser clasificado, entonces, como un nucleopoliedrovirus de nucleocápside simple (SNPV,
por sus siglas en inglés). Exámenes histopatológicos mostraron la naturaleza
poliorganotrópica de la infección: tejido graso, epidermis y matriz traqueal fueron colonizados
por el virus. La alta infectividad del aislamiento quedó evidenciada mediante bioensayos con
larvas neonatas de H. gelotopoeon, ya que la dosis letal para que el 50 % de los ejemplares

33
expuestos al virus muera resultó ser menor a 2 cuerpos de oclusión/larva. En cuanto al tiempo
letal, el promedio de supervivencia luego de la inoculación fue de 4 días. Por su alta virulencia,
el nucleopoliedrovirus aquí descripto (el primero en ser aislado de H. gelotopoeon) podría ser
usado para desarrollar un bioinsecticida. Los estudios moleculares identificaron al virus como
una variante Helicoverpa armigera SNPV. Se han reportado aislamientos de este virus a partir
de H. armigera y H. zea, lo que hace suponer que la presente variante podría ser efectiva no
solo para el control de H. gelotopoeon, sino también de otras especies del complejo. Esto
refuerza la importancia del hallazgo y la necesidad de profundizar los estudios en vista de su
futura aplicación.
Nuevo aislamiento baculoviral obtenido de Chrysodeixis includens. Se dilucidó la
etiología de la enfermedad que ocasionó mortandad masiva en una cría de laboratorio de la
“falsa medidora”. Mediante microscopía electrónica de barrido se observaron cuerpos de
oclusión poliédricos de morfología heterogénea, con un diámetro variable entre 0,7 y 1,6 µm.
La amplificación, la secuenciación y el análisis filogenético de tres genes conservados
(poliedrina, lef-8 y lef-9) permitieron identificar al patógeno, por primera vez en Argentina,
como Chrysodeixis includens NPV. Su alta virulencia y la calidad de plaga del insecto
hospedante (en especial en el norte argentino) animan a continuar investigando el potencial
biocontrolador de este entomopatógeno.
Detección e identificación de microsporidios. Si bien no suelen ser empleados en
programas de manejo integrado, a causa de su moderada virulencia (son comunes las
infecciones subletales), a menudo ocasionan problemas en lepidópteros criados en
laboratorio. Se reportó por primera vez la infección de larvas de Epinotia aporema por este
tipo de entomopatógenos, y se describió minuciosamente una nueva especie de microsporidio
muy frecuente en larvas de Rachiplusia nu, tanto de campo como de cría artificial:
Nosema rachiplusiae sp. nov. (Arneodo y Sciocco, 2018). Esta especie presenta esporas
diplocarióticas y de forma oval (3.61 ± 0.29 × 1.61 ± 0.14 μM), con una pared compuesta de
una exospora electrodensa y una endospora clara de cerca de 30 nm y 100-120 nm,
respectivamente. Su filamento polar esta organizado en filas simples de 10 a 12 vueltas
(moda: 11). Se localiza en el citoplasma de las células de los insectos, cerca del retículo
endoplásmico (en especial los estadios tempranos). Produce una infección poliorganotrópica,
con el cuerpo graso como el tejido más afectado, seguido por la matriz traqueal y la epidermis.
Los estudios filogenéticos basado en las subunidades de ARN ribosomal pequeño (SSU) y
grande (LSU) ubicaron claramente a la nueva especie dentro del clado “Nosema bombycis”;
el aislamiento más cercano fue un microsporidio proveniente de una polilla asiática,
Philosamia cyntia.

34
Publicaciones
Arneodo, J.D.; Balbi, E.I.; Flores, F.M.; Sciocco-Cap, A. 2015. Molecular identification of
Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae: Heliothinae) in Argentina and
development of a novel PCR-RFLP method for its rapid differentiation from H. zea and
H. gelotopoeon. Journal of Economic Entomology 108:2505-2510.
Arneodo, J.D.; Dami, L.; Jakubowicz, V.; Alzogaray, R.A.; Taibo, C. 2018. First report of
Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) infecting Chrysodeixis
includens (Lepidoptera: Noctuidae) in Argentina. Florida Entomologist 101(3):515-516.
Arneodo, J.D.; De Anna, J.; Salvador, R.; Farinon, M.; Quintana, G.; Sciocco-Cap, A. 2015.
Prospection and molecular analysis of CpGV isolates infecting Cydia pomonella at
different geographic locations in Argentina. Annals of Applied Biology 166:67-74.
Arneodo, J.D.; Sciocco-Cap, A. 2018. Biological and molecular features of Nosema
rachiplusiae sp. n., a microsporidium isolated from the Neotropical moth Rachiplusia nu
(Guenée) (Lepidoptera: Noctuidae). Parasitology Research 117:1325-1331.
Arneodo, J.D.; Taibo, C.; Sciocco-Cap, A. 2016. Light microscopy of microsporidian spores
and baculovirus occlusion bodies in Epinotia aporema and Helicoverpa gelotopoeon
larval tissues, respectively. Revista Argentina de Microbiología 48:358-359.
Ferrelli, M.L.; Taibo, C.; Fichetti, P.; Sciocco-Cap, A.; Arneodo, J.D. 2016. Characterization of
a new Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus variant causing epizootic on a
previously unreported host, Helicoverpa gelotopoeon (Lepidoptera: Noctuidae). Journal
of Invertebrate Pathology 138:89-93.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto PIP CONICET 114 201101 00306. Efecto de la dosis inicial y la edad de la larva al
momento de la ingestión en la cinética del baculovirus EpapGV en Epinotia aporema
(Lepidoptera: Tortricidae). 2012-2014.
Proyecto Nacional de Biotecnología (PNBIO)-INTA 1131044. Genómica aplicada a estudios
de ecología molecular y diversidad genética. 2013-2018.
Proyecto Nacional de Biotecnología (PNBIO)-INTA 1131023. Prospección y caracterización
funcional de genes de interés biotecnológico. 2013-2018.
Proyecto PICT-2016-1949. Baculovirus que infectan Helicoverpa spp. y Rachiplusia nu
(Lepidoptera): patogénesis comparada de virus específicos vs. generalista, interacciones en
infecciones mixtas y caracterización de una nueva especie viral. 2017-2019.

35
Validación de estrategias de Manejo Integrado de carpocapsa en nogal:
aplicaciones complementarias de granulovirus de Cydia pomonella
(CpGV) con insecticidas ovicidas y larvicidas
Validation of IPM strategies for codling moth in walnut: complementary applications of
Cydia pomonella granulovirus with ovicidal and larvicidal insecticides

Graciela Mabel Quintana1*, Alberto Gómez2, Carlos Flores2, Arturo Sardá2, Ricardo López3,
Mariela Civale3, Evangelina Zembo3, Rubén La Rossa1 y Juan José Cólica4
1InstitutoNacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Instituto de Sanidad y Calidad Agropecuaria Mendoza (ISCAMEN). Programa de Lucha
contra Carpocapsa y Grafolita. 3Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA).
Programa Nacional de Supresión de Carpocapsa. 4Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
(INTA). Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Catamarca. *[Link]@[Link]

Cydia pomonella, carpocapsa o gusano de la pera y la manzana, es plaga clave de los

cultivos de pepita y de nogal. Produce daños que ocasionan pérdidas en campo y en galpón
y, por su carácter de plaga cuarentenaria, el rechazo de partidas en el mercado internacional.
Tradicionalmente su control se basa en el uso de productos químicos convencionales
(neurotóxicos) que ocasionan resistencia, riesgos para la salud humana y el ambiente y dejan
residuos en frutos.
El control microbiano, y en particular el granulovirus de Cydia pomonella (CpGV) es una
alternativa efectiva y selectiva para el control de la plaga. El virus ha sido ampliamente
utilizado para el desarrollo de bioinsecticidas, su alta especificidad y eficacia, el escaso o nulo
impacto sobre el medio y la ausencia de residuos en frutos lo han posicionado como uno de
los agentes de control microbiano más exitosos del mercado mundial. En nuestro país, el INTA
registró el primer insecticida biológico sobre la base del CpGV en el año 2000 (Registro
SENASA, nro. 33531). El producto ha sido incorporado exitosamente en estrategias de
manejo integrado de carpocapsa en pepita y nogal, ya sea en aplicaciones complementarias
con productos químicos convencionales o usado como única herramienta. Para asegurar el
uso sustentable del CpGV en el cultivo es deseable combinar su aplicación con insecticidas
selectivos.
De modo paralelo, el impacto negativo de los productos convencionales, en particular
del metilazinfos, ha motivado su restricción, favoreciendo el registro de nuevos insecticidas
clasificados como de Riesgo Reducido o Alternativos a órganofosforados (OP). Estos
productos alternativos actúan principalmente cuando las plagas ingieren el alimento o cuando
el insecticida entra en contacto directo con los desoves. En la práctica, su uso demanda una

36
mayor precisión del momento de tratamiento y una mejor cobertura del follaje y frutos en
comparación con la aplicación de insecticidas de amplio espectro.
El mercado local dispone de una amplia gama de formulados con diferentes principios
activos registrados para el control de carpocapsa en los cultivos de pepita. Esto comprende
desde productos convencionales basados en organofosforados y piretroides hasta productos
alternativos como feromonas, kairomonas, virus entomopatógenos y reguladores de
crecimiento, entre otros.
Pero, solo unos pocos de esos productos estuvieron o están registrados para usar en
nogal: metil azinfos y fosmet (organofosforados); cypermetrina y lambdacialotrina
(piretroides); un insecticida biológico, larvicida, basado en el CpGV y una formulación de
feromonas sexuales (puffer) para emplear en técnica de confusión sexual (TCS). De estos
insecticidas registrados, solo el virus y las feromonas son aptos para programas de MIP y, en
general, son poco utilizados por los productores nogaleros, quienes de modo tradicional han
recurrido a reiteradas aplicaciones de productos organofosforados y piretroides. Es
indispensable ampliar la base de los insecticidas registrados en el país para el control de
plagas claves y secundarias en nogal.
Así, los trabajos conducidos durante el proyecto tuvieron como objeto evaluar la eficacia
de los insecticidas ovicidas y larvicidas metoxifenocide, spinetoram y rynaxypyr, en
aplicaciones complementarias con CpGV para el control de carpocapsa en el cultivo de nogal,
con el fin de alentar la ampliación de uso de estos productos y definir estrategias de uso
sustentable del virus, de modo de evitar o demorar la expresión de resistencia.
Durante cuatro campañas consecutivas, entre 2013 y 2017, se condujeron ensayos en
montes comerciales de nogal en fincas ubicadas en Andalgalá, Catamarca y en el Valle de
Uco, Mendoza, para evaluar insecticidas de bajo riesgo, definir estrategias sustentables del
virus y alentar la transición del sector nogalero hacia el MIP. Cabe aclarar que las
investigaciones se desarrollaron en el marco del Programa Nacional de Supresión de
carpocapsa (PNSC) del SENASA, junto con las EEA INTA Andalgalá en Catamarca y el
ISCAMen y la EEA Tupungato, en Mendoza.
En Catamarca, los ensayos comprendieron aplicaciones complementarias de
metoxifenocide, rynaxypyr y spinetoram con CpGV para el control de carpocapsa. El esquema
planteado consideró las siguientes alternativas: a- el uso de los ovicidas metoxifenocide o
spinetoram al inicio de las posturas durante la primera generación, seguidos de aplicaciones
retardadas de los larvicidas CpGV o rynaxypyr a partir de los 350 carpogrados, para cubrir el
período de mayor nacimiento de larvas, y hasta la cosecha. b- el uso de ambos larvicidas
combinados: 1- Rynaxypyr sobre la primera generación seguido de aplicaciones de CpGV

37
sobre la segunda y la tercera generación. 2- CpGV sobre la primera y segunda generación
seguido de aplicaciones de rynaxypyr sobre la tercera generación. c- el uso de los larvicidas
sobre la primera y segunda generación, seguidas de aplicaciones de los ovicidas sobre las
posturas de la tercera generación.
Los tratamientos se aplicaron en cobertura completa. Las aplicaciones se efectuaron
desde mediados de noviembre hasta fines de enero o principios de febrero, según el producto
o combinación evaluados. Como testigo se usaron lotes sin tratamiento.
Para el monitoreo se emplearon trampas cebadas con feromonas 1x (Tipo ISOMATE®
1X). Se registró el número de adultos capturados con una frecuencia de tres veces por
semana. La fecha del inicio de los tratamientos se estableció próxima a la eclosión de los
huevos de la primera generación, entre los 200 y 250 grados días (°D) post biofix.
Para el análisis, se registró el número de frutos dañados por carpocapsa en dos
momentos: “a fin de primer vuelo” y “a cosecha”. Durante el primer monitoreo se
inspeccionaron alrededor de 500 frutos con corte de 100. A cosecha se colectaron alrededor
de 1000 frutos por tratamiento con corte de 200. El análisis estadístico de los datos se llevó a
cabo mediante una prueba de comparaciones múltiples para proporciones basada en tablas
de contingencia 2xc con α=0,05. Para ello se utilizó una macro diseñada para el paquete
estadístico SAS®, denominada “compprop”.
Todos los tratamientos mostraron diferencias significativas respecto del testigo sin tratar,
que arrojó daños que oscilaron entre 9,7 y 38 %, en tanto que las combinaciones resultaron
similares entre sí, sin evidencias de incompatibilidad con daño <1 % y equivalentes a los
niveles de daño del tratamiento con virus como única herramienta, que oscilaron entre no
detectable y <1 %.
El uso del granulovirus de C. pomonella en aplicaciones alternadas y complementarias
con metoxifenocide, spinetoram o rynaxypyr fue muy promisorio en orden de evitar o demorar
la expresión de resistencia al virus y alcanzar un control satisfactorio con mínimo impacto
ambiental. Estos resultados le permitieron al sector privado alcanzar en 2014 la ampliación de
uso de metoxifenocide, iniciar el registro de spinetoram y, a la vez, establecer antecedentes
de la eficacia de rynaxypyr para el control de carpocapsa en el cultivo de nogal en la Argentina.
En Mendoza, de modo paralelo, las actividades estuvieron orientadas a la evaluación
del virus, como única herramienta de control de carpocapsa o en aplicaciones
complementarias del CpGV con metoxifenocide. A diferencia de Catamarca, estas
aplicaciones del virus en nogal fueron las primeras realizadas en la provincia.
En la campaña 2013-2014, se condujeron ensayos en fincas nogaleras ubicadas en el
Valle de Uco. Los tratamientos consideraron el uso del CpGV en cobertura completa sobre la

38
1.ª, 2.ª y 3.ª generación de carpocapsa, aplicado en intervalos de 10 días y en aplicaciones
complementarias con metoxifenocide según el siguiente detalle: metoxifenocide sobre la 1.ª
generación (dos aplicaciones) con intervalos de 14 días seguidos de CpGV sobre la 2.ª y la
3.ª generación y CpGV sobre la 1.ª y la 2.ª generación seguido de metoxifenocide
(2 aplicaciones). Las aplicaciones se iniciaron a mediados de noviembre y finalizaron a inicios
de febrero. En coincidencia con los resultados obtenidos en Catamarca, se observó un control
altamente satisfactorio de la plaga –niveles de daño no detectables a cosecha– tanto cuando
el virus se usó solo como cuando se complementó con metoxifenocide. Esto reconfirmó tanto
el alto grado de eficacia del virus como de las aplicaciones combinadas con insecticidas
selectivos. Se obtuvo un control satisfactorio de carpocapsa con mínimo impacto ambiental.
Los tratamientos tampoco difirieron del testigo convencional.
En general, la estrategia adquiere relevancia cuando se considera que la producción
nogalera esta altamente concentrada en los alrededores de centros urbanos y en su mayoría,
las fincas contienen la casa familiar, huertas, animales domésticos y de granja. La integración
del control microbiano con nuevos insecticidas para el control de carpocapsa en nogal ha sido
muy bien recibida por el sector y alienta la transición hacia el MIP en el cultivo.

Publicaciones
Quintana, G.; Cólica, J.J.; Farinón, O.M.; La Rossa, F.R. Evaluación de la eficacia de los
insecticidas metoxifenocide, rynaxypyr y spinetoram en aplicaciones combinadas con el
granulovirus de Cydia pomonella (CpGV) para el control de carpocapsa,
Cydia pomonella (L.) (Lepidoptera; Tortricidae), en nogal. RIA. (En revisión).
Quintana, G. 2013. Incorporación del virus de la granulosis de Cydia pomonella (CpGV) en
las estrategias de control de carpocapsa (C. pomonella L) en montes de pepita y nogal
en la Argentina. I Taller Argentino de Patologías de Insectos y sus Aplicaciones en
Biocontrol. 16-17 de octubre de 2013. pp. 145-152. Mar del Plata, Buenos Aires.
Quintana, G. 2015. Estrategias MIP en montes de nogal para el control de Carpocapsa.
III Simposio internacional de nogalicultura del NOA. Recuperado de: [Link]
content/uploads/2015/05/estrategias-mip-en-montes-de-nogal-para-el-control-de-
[Link]

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA PNFRU 1105072. Generación y desarrollo de tecnología para minimizar el
riesgo de introducción de plagas cuarentenarias ausentes y asegurar el manejo eficiente de
plagas cuarentenarias presentes. 2013-2018.

39
Proyecto INTA CATRI 1233102. Aportes al desarrollo territorial de Andalgalá, Pomán y
Tinogasta a partir de una nueva institucionalidad regional. 2013-2018.
Proyecto INTA MZASJ 1251205. Atención a las problemáticas de los nuevos modelos
productivos del Valle de Uco. 2013-2018.
CAT INTA-ISCAMEN 23012. Desarrollo de estrategias MIP para el control de carpocapsa y
grafolita en cultivos de pepita y nogal en Mendoza. 2014-2017.
CAT IMYZA-Arysta Life Science Argentina SA. Evaluación de nuevos aislamientos de CpGV
para el control de carpocapsa en cultivos de pepita, nogal y carozo. 2013-2018.
Convenio de Desarrollo de Productos INTA-BILAB S.A. Evaluación de nuevos aislamientos
de CpGV para el control de carpocapsa en cultivos de pepita, nogal y carozo. 2016-2017.

40
Estrategias MIP para el control de Carpocapsa en montes de nogal de
pequeños productores de la provincia de Mendoza
IPM strategies for the control of codling moth in walnut orchards of small farmers in
the Mendoza province

Graciela Mabel Quintana1*, Alberto Gómez2, Carlos Flores2, Arturo Sardá2, Federico
Fuligna3, Omar Farinón1 y Rubén La Rossa1
1InstitutoNacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Instituto de Sanidad y Calidad Agropecuaria Mendoza (ISCAMEN). Programa de Lucha
contra Carpocapsa y Grafolita. 3Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación
Experimental Agropecuaria (EEA) La Consulta. *[Link]@[Link]

Hacia 2014, la superficie dedicada al cultivo de nogal en Mendoza se había extendido

de modo notable y sostenido, ocupando el segundo lugar como productora de nuez a nivel
nacional, con un 24 % del total del país y liderando las exportaciones. Un análisis del sector
evidenció un bajo rendimiento promedio de frutos por hectárea debido a problemas de manejo
sanitario, conducción y riego del cultivo, entre otros. Carpocapsa, plaga clave, era una
limitante importante para la producción y su control convencional traía aparejado alto impacto
ambiental. La adopción de estrategias de MIP ofrecía, a priori, respuestas al sector para salvar
esta situación.
En 2014, en el marco de un convenio de asistencia técnica (SA23012) con ISCAMEN,
se elaboró el proyecto denominado: “Transición hacia el Manejo Integrado de Plagas (MIP)
en montes de nogal de pequeños productores de la provincia de Mendoza”. Este tuvo como
finalidad favorecer la adopción de prácticas MIP que contemplaran el uso de innovaciones
tecnológicas y herramientas alternativas al control químico convencional para alcanzar una
producción sustentable de nuez de nogal de pequeños y medianos productores de la provincia
de Mendoza.
Las actividades buscaron: modificar prácticas para alcanzar una protección aceptable
del cultivo manteniendo la rentabilidad y la sustentabilidad; reducir los riesgos de la exposición
a los plaguicidas de síntesis de amplio espectro y elevada toxicidad de los trabajadores
agrícolas; disminuir el impacto de las prácticas sobre el ambiente e introducir el concepto de
Buenas Prácticas Agrícolas (BPA).
Se consideró la incorporación de tácticas de control menos disruptivas de los enemigos
naturales, combinando herramientas de control microbiano (CpGV), insecticidas reguladores
de crecimiento (Metoxifenocide, Spinetoram) y Técnica de Confusión Sexual (TCS). El manejo

41
de la resistencia a insecticidas se basó en la alternancia, secuencia o rotación de insecticidas
con diferente modo de acción.
Con el fin de brindar asistencia técnica para la toma de decisiones, se estableció un
sistema de monitoreo de la dinámica poblacional de los adultos de carpocapsa. Se montó una
red con trampas cebadas con feromonas/kairomonas, 174 en total, para vigilar la evolución
del vuelo de los adultos y referenciarla a modelos de Grados Día, estimar la presión de plaga
a nivel de parcela y evaluar la presencia de hembras oviplenas para decidir la oportunidad de
inicio y continuidad de los tratamientos.
Para evaluar la marcha de las prácticas, se estimaron los daños en frutos en dos
momentos: a fin de primer vuelo de carpocapsa y a cosecha.
Se seleccionaron un total de 10 parcelas, de las cuales 8 estarían destinadas a un
manejo con insecticidas aptos para MIP, y 2 de ellas bajo la Técnica de Confusión Sexual.
A su vez, para lograr una mayor cobertura territorial, las parcelas MIP-insecticidas fueron
implementadas en los Departamentos de Tupungato, Tunuyán, San Carlos y San Rafael. En
cada uno de estos Departamentos se consideraron dos parcelas en las que se aplicaron
tratamientos que contemplaron el uso del virus sobre la primera generación seguido de
aplicaciones del ovicida sobre la segunda y viceversa. Este esquema se completaba con
aplicaciones del virus sobre la tercera generación y hasta cosecha.
Para la propuesta MIP-TCS se destinó una parcela bajo TCS para el Valle de Uco y otra
para el Departamento de San Rafael, con aplicaciones complementarias de virus e
insecticidas ovicidas para el control de la primera generación. Para el tratamiento de la
segunda y tercera generación se consideró la oportunidad de aplicar los insecticidas de
acuerdo con los niveles de capturas de adultos en trampas (sistema de alarma).
Para el inicio de los tratamientos se emitieron avisos de alertas diferenciados por zona
y hospedero. Los avisos se difundieron por SMS, página web, correos electrónicos y panfletos
entregados en finca. Con el fin de incorporar la implementación de Buenas Prácticas Agrícolas
(BPA), adicionalmente se entregaron cuadernos de campo para registrar información sobre
principios activos, fechas y frecuencias de los tratamientos fitosanitarios, registro de capturas,
monitoreo general de las parcelas y de producción, entre otros.
Evaluación a fin de primer vuelo. Las parcelas con tratamientos MIP-Insecticidas no
registraron diferencias significativas entre sí, ni con las testigo con manejo convencional. Los
porcentajes de daño en fruto en planta variaron entre <1 % a no detectables. El daño de frutos
en suelo por carpocapsa fue de 7 % y 10 % para tratamientos MIP-insecticidas y manejo
convencional, respectivamente, las pruebas estadísticas aplicadas no arrojaron diferencias

42
significativas. Respecto de los daños en las parcelas MIP-TCS en el Valle de Uco, los daños
en planta tendieron al 0 % y los detectados en piso alcanzó el 3 %.
Evaluación a cosecha. En los tratamientos MIP-insecticidas, no se registraron
diferencias significativas entre las parcelas demostrativas y los controles. El análisis de daño
en fruto arrojó valores entre 0,07 % y 0,32 %, respectivamente. En las parcelas MIP-TCS, los
porcentajes de daño comercial en frutos mostraron diferencias significativas cuando se
compararon con los observados en lotes con manejo convencional. El daño en las parcelas
con confusión sexual varió entre 0,03 y 0,04 % frente al 1 % arrojado en las convencionales.
En resumen, se lograron niveles de control de carpocapsa semejantes y muy
satisfactorios tanto en las parcelas que combinaron aplicaciones de insecticidas selectivos
con CpGV como en las parcelas tratadas con insecticidas convencionales. La estrategia MIP
evaluada permitió alcanzar un elevado control de la plaga con bajo o nulo impacto sobre el
medio y la entomofauna benéfica, favoreciendo el uso sustentable del virus y de los
insecticidas selectivos lo que evita o demora la expresión de resistencia en las poblaciones
locales de la plaga. Asímismo, la TCS, como herramienta alternativa complementada con el
virus y el producto larvicida, brindó un control efectivo. Su adopción permitiría ampliar el
intervalo entre los tratamientos o disminur las dosis de los insecticidas complementarios,
reduciendo los costos del manejo sanitario al productor.
En todos los casos se observó un incremento de poblaciones de coccinélidos por lo que
no fue necesario realizar tratamientos para el control de arañuelas ni pulgones, plagas
secundarias del cultivo y habituales cuando se realizan aplicaciones con insecticidas
organofosforados o piretroides.
El uso del cuaderno de campo tuvo un reconocimiento particular por parte de los
productores, quienes valoraron contar con registros ciertos que les permiten optimizar el
manejo sanitario y conocer el historial de la finca.
Los beneficios derivados de la adopción de las prácticas de MIP y del uso seguro de los
insecticidas fueron difundidos y extendidos a productores, técnicos, trabajadores agrícolas y
a su entorno a través de jornadas de campo, talleres y boletines de divulgación. Se creó un
fuerte vínculo con el sector nogalero lo que se tradujo en la incorporación del ISCAMEN y del
IMYZA en el clúster nogalero de la provincia como asesores y, además, la Ingeniera
Agrónoma Graciela Quintana (IMYZA) como referente y miembro del Consejo Federal de
Frutos Secos.

43
Publicaciones
Quintana, G. 2017. MIP de carpocapsa en nogal: incorporación del control microbiano. Virus
de la granulosis de Cydia pomonella. IV Simposio Internacional de Nogalicultura. Expo
productivo, 06-07 de agosto de 2017. Andalgalá, Catamarca.
Quintana, G. 2017. Control microbiano de carpocapsa: uso del virus de la granulosis (CpGV)
para el control de carpocapsa (Cydia pomonella L.) en Argentina. Tercera Reunión del
Consejo de Frutos Secos. Comisión de principios activos y de Mecanización. Estado del
Manejo integrado de plagas en el cultivo del nogal. p. 6.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA PNFRU 1105072. Generación y desarrollo de tecnología para minimizar el
riesgo de introducción de plagas cuarentenarias ausentes y asegurar el manejo eficiente de
plagas cuarentenarias presentes. 2013-2018.
Proyecto INTA CATRI 1233102. Aportes al desarrollo territorial de Andalgalá, Pomán y
Tinogasta a partir de una nueva institucionalidad regional. 2013-2018.
Proyecto INTA MZASJ 1251205. Atención a las problemáticas de los nuevos modelos
productivos del Valle de Uco. 2013-2018.
CAT INTA-ISCAMEN 23012. Desarrollo de estrategias MIP para el control de carpocapsa y
grafolita en cultivos de pepita y nogal en Mendoza. 2014-2017.
CAT IMYZA-Arysta Life Science Argentina S.A. Evaluación de nuevos aislamientos de CpGV
para el control de carpocapsa en cultivos de pepita, nogal y carozo. 2013-2018.
Convenio de Desarrollo de Productos INTA-BILAB S.A. Evaluación de nuevos aislamientos
de CpGV para el control de carpocapsa en cultivos de pepita, nogal y carozo. 2016-2017.

44
Desarrollo de una nueva formulación del granulovirus de
Cydia pomonella: hacia la producción nacional
Development of a new formulation of Cydia pomonella granulovirus: towards
domestic production

Graciela Mabel Quintana

Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola

(IMyZA). [Link]@[Link]

La preocupación creciente sobre el impacto ambiental y la sostenibilidad del uso de los

productos químicos de síntesis ha demandado el desarrollo y uso de tecnologías alternativas
para incorporar en las estrategias de MIP. Esta demanda se tradujo en un incremento de la
participación de los bioinsecticidas en el mercado global de productos destinados al agro. En
particular el control microbiano de insectos, a través del empleo de formulaciones basadas en
virus, bacterias, hongos y nematodos, se posicionó como una alternativa segura y eficaz de
control. En términos de valor, se espera que el mercado global de los bioinsecticidas supere
los 6 mil millones de dólares hacia 2020, lo que representaría un incremento del 18,8 % desde
2015. Un indicador de esta tendencia es la progresiva participación de las grandes compañías
del sector a partir de 2012, a través de adquisiciones de biofábricas, la participación en
sociedades y la obtención de licencias para desarrollar y producir insecticidas biológicos.
En este sentido, los virus entomopatógenos, en particular los baculovirus, poseen un
gran número de agentes con elevado potencial para el control seguro y eficaz de plagas. Una
vez establecido el potencial del aislamiento de un baculovirus, es posible multiplicarlo,
formularlo e incorporarlo en los programas sanitarios de los cultivos, utilizando los mismos
canales de comercialización y maquinarias de aplicación empleados para los insecticidas
químicos.
En el año 2000, luego de más de diez años de investigación y desarrollo, el INTA alcanzó
el registro del primer insecticida biológico para el control de carpocapsa (Cydia pomonella),
plaga clave de los cultivos de pera, manzana, nogal y membrillo. El producto, desarrollado a
partir del virus de la granulosis de C. pomonella (CpGV), es altamente específico, inocuo para
el hombre y los animales, la fauna auxiliar, abejas y plantas. No deja residuos tóxicos en frutos
y ambiente.
Con este resultado el INTA presentó al sector agropecuario un insumo tecnológico
sustancial para el desarrollo de la producción integrada u orgánica de frutales. La producción

45
convencional también se beneficiaba por el ingreso al mercado de un producto sustituto de
las últimas aplicaciones de insecticidas que dejan residuos indeseables en la fruta.
Para la transferencia al sector productor, se convocó al sector privado para la producción
y comercialización del formulado viral. Si bien la convocatoria fue amplia, no existían en el
mercado empresas con infraestructura y conocimientos como para llevar a cabo la producción.
Finalmente, la transferencia se concretó a través de la firma de un convenio con una empresa
francesa (Natural Plant Protection –ex Calliope– Arysta LifeScience S.A.) para la producción
y un acuerdo de asistencia técnica con una empresa local para su comercialización
(Agro Roca S.A.).
Desde el inicio, estas alianzas estratégicas tuvieron un marcado componente de
investigación adaptativa y de extensión. La cooperación se tradujo en una exitosa
incorporación del insecticida en la producción orgánica de estos frutales y en la ampliación de
uso al cultivo de nogal. Asimismo, fue favorable en la evaluación de nuevos productos que
colaboren con el uso sustentable del virus y el establecimiento de estrategias seguras y
eficaces, que eviten o demoren la expresión de resistencia.
En la actualidad, hay un marcado interés por parte de los productores de pera, manzana,
nogal y membrillo de las diferentes regiones para incorporar de manera efectiva el virus. Pero
dicha incorporación se ve limitada por el costo elevado del formulado, que aún continúa
produciéndose en Francia, como así también por la falta de nuevos insumos biológicos que
brinden soluciones integrales al manejo sanitario de los cultivos.
La comercialización de nuevos formulados con base en el CpGV en el mercado local ha
agregado un nuevo obstáculo en la comercialización eficiente y rentable del producto. Pero,
sin dudas, el hecho de tener que importar el producto licenciado por INTA lo torna menos
competitivo aún.
Del análisis de los resultados obtenidos, que comprenden aspectos técnicos y
económicos, surgió la conveniencia de trabajar en el desarrollo de una nueva formulación y el
diseño y establecimiento de una planta de producción nacional de insecticidas virales. Esto
permitiría sustituir la importación actual y contar con un producto más económico para ofrecer
al productor.
La línea de investigación encarada en el proyecto tuvo por objetivo el desarrollo de una
nueva formulación a partir de la producción masiva del virus. Dado que la multiplicación se
realiza in vivo sobre larvas de carpocapsa, se incrementó la cría de carpocapsa de laboratorio,
que se conduce en el IMYZA desde hace más de veinte años. Esto permite contar hoy con
insectos sanos y en número suficiente para la multiplicación del virus.

46
 Para el desarrollo de una formulación se replanteó y analizó un nuevo escenario de
cooperación con el sector privado. Este replanteo permitió no solo continuar la labor
desarrollada con el CpGV, sino también definir nuevos agentes de control microbiano objeto
de desarrollo. Se ha originado un convenio de transferencia de tecnología con diez años de
vigencia para la puesta a punto de la producción comercial de una nueva formulación.
El proyecto prevé, así también, la instalación de una planta piloto, la asistencia a la
empresa para el diseño, la instalación y la puesta en marcha de la planta, el ajuste de la
metodología de producción y el diseño conjunto de nuevas presentaciones de la formulación.
De modo paralelo, se asiste para el registro ante SENASA y se conduce la evaluación en
campo. A la fecha, se cuenta con dos nuevos preparados de CpGV que están siendo
evaluados en campo.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA MZASJ 1251205. Atención a las problemáticas de los nuevos modelos
productivos del Valle de Uco. 2013-2018.
Convenio de Cooperación Institucional con el Programa Nacional de Supresión de carpocapsa
(PNSC) del SENASA (23102). Evaluación, desarrollo y transferencia de estrategias de manejo
integrado de plagas alternativas al uso de insecticidas convencionales para el control de
carpocapsa y grafolita en cultivos de nogal, pepita y carozo de las diferentes regiones
productoras del país. Coordinación. 2014-2019.
CAT INTA-ISCAMEN 23012. Desarrollo de estrategias MIP para el control de carpocapsa y
grafolita en cultivos de pepita y nogal en Mendoza. 2014-2017.
CAT IMYZA-Arysta Life Science Argentina S.A. Evaluación de nuevos aislamientos de CpGV
para el control de carpocapsa en cultivos de pepita, nogal y carozo. 2013-2018.
Convenio de Desarrollo de Productos INTA-BILAB S.A. Transferencia de conocimientos y
tecnologías para contribuir al desarrollo de productos biológicos y su futura producción y
comercialización. Acta complementaria para el desarrollo nacional del virus de
Cydia pomonella. 2016-2026.

47
Clones recombinantes de Bacillus thuringiensis que expresan proteínas
Cry individuales
Recombinant clones of Bacillus thuringiensis that express individual Cry proteins

Diego Sauka1,2*, María Inés Onco1,2, Melisa Pérez1,2, Nanci López1, Marcelo Berretta1,2 y
Graciela Benintende1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).
*[Link]@[Link]

Bacillus thuringiensis es una bacteria entomopatógena que produce inclusiones

cristalinas durante la esporulación, constituidas generalmente por una combinación de más
de una proteína Cry distinta. Este grupo de proteínas constituye sus principales factores de
virulencia. Los cristales ejercen su actividad insecticida cuando son ingeridos por vía oral, son
solubilizados y sus toxinas activadas en el intestino medio del insecto susceptible.
La aplicación de B. thuringiensis se realiza principalmente como formulado a base de
un complejo espora-cristal o como parte de organismos genéticamente modificados
(por ej. plantas Bt) capaces de expresar las toxinas mencionadas. Para un uso eficiente de
las proteínas insecticidas de B. thuringiensis como parte de estos mismos es importante
conocer cuáles de estas proteínas presentan la toxicidad más elevada para una plaga blanco
y cómo interactúan cuando se las aplica simultáneamente. Es también de interés analizar el
potencial de mezclas de proteínas insecticidas para reducir o retrasar la selección de insectos
resistentes a proteínas individuales a partir del conocimiento de su interacción con los
receptores en el insecto. Para todos estos estudios es imprescindible clonar sus genes
respectivos en un principio y expresarlos individualmente.
Para la expresión de proteínas Cry se pueden emplear sistemas de expresión, tanto
procariotas como eucariotas. En el primer caso, se utilizan vectores plasmídicos para su
expresión en Escherichia coli y también en cepas acristalíferas de B. thuringiensis. En el
segundo caso, se utilizan vectores de baculovirus para expresar las proteínas Cry en células
de insectos.
En este estudio se realizó el clonado y expresión de los genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac,
cry2Aa y cry2Ab provenientes de las cepas de B. thuringiensis INTA TA21-2, INTA H48-5,
HD-73 svar. kurstaki, INTA H42-1 e INTA TA24-6 respectivamente, en la cepa acristalífera de
B. thuringiensis 4Q7.

48
 En primer lugar, se amplificó mediante hot start PCR los genes cry mencionados de
forma completa. Se utilizaron un par de cebadores que contienen en sus extremos sitios de
restricción para el clonado correcto en el vector plasmídico pSVP27. Este vector tiene la
particularidad de replicar tanto en E. coli como en B. thuringiensis. Los amplicones generados
y el vector fueron digeridos con BamHI y SphI para permitir la ligación. Se transformaron los
productos de la ligación por electroporación en la cepa XL-1 de E. coli. Entonces se extrajo el
DNA plasmídico de los clones recombinantes y se transformó en 4Q7. La identidad de cada
gen cry clonado se corroboró mediante PCR con cebadores específicos para cada gen y del
vector, y secuenciación de sus amplicones. Se analizó la expresión mediante microscopía
óptica de contraste de fases en cultivos completamente esporulados de los clones
seleccionados, identificándose la presencia de cristales libres muy pequeños. Las bandas
esperadas de ca. 130 o 65 kDa correspondientes a Cry1 y Cry2 respectivamente, con
excepción de las que brindó el clon que expresa Cry1Ac, no se detectaron en los geles de
SDS-PAGE. Para terminar, se comprobó la actividad insecticida de los clones recombinantes
obtenidos para larvas neonatas del lepidóptero Cydia pomonella mediante bioensayos de
incorporación en dieta (1000 μg biomasa seca/ml de dieta). Además, se determinó la
patogenicidad para larvas de Aedes aegypti de los clones transformados con cry2Aa. Los
clones estudiados fueron responsables de altos porcentajes de mortalidad, con excepción de
los transformados con cry2Ab, que no demostraron actividad insecticida alguna.
Para concluir, se consolidó en el laboratorio una estrategia para el clonado y expresión
individual de genes cry en B. thuringiensis. Los clones recombinantes obtenidos expresarían
sus proteínas Cry respectivas debido a que mostraron estructuras similares a cristales tras la
esporulación; en algunos se detectó la banda de peso molecular esperado en los geles de
SDS-PAGE, pero sobre todo porque sus proteínas causaron mortalidad o alteraron
significativamente el crecimiento de C. pomonella. Esta premisa se refuerza particularmente
en aquellos clones que expresarían Cry2Aa, ya que, además, causaron mortalidad en larvas
de A. aegypti. Los clones recombinantes obtenidos se podrían incluir en estudios de tamizaje
de proteínas Cry con alta actividad insecticida en aquellas especies en las que no se conoce
su grado de virulencia, e incluir en estudios que analicen la interacción entre sus toxinas y
receptores correspondientes.

Publicaciones
Onco, M. 2018. Estudio de la toxicidad de proteínas insecticidas de Bacillus thuringiensis como
herramienta para optimizar el manejo de lepidópteros plaga de importancia
agroeconómica. Tesis Doctoral, Facultad de Agronomía, UBA.

49
Onco, M.; Sauka, D.; Berretta, M.; Pérez, M.; López, N.; Benintende, G. 2018. Clonado y
expresión de genes cry bajo el control de un promotor dependiente de esporulación en
una cepa acristalífera de Bacillus thuringiensis. IV Congreso Argentino de Microbiología
Agrícola y Ambiental y I Jornada de Microbiología General. Mar del Plata.

50
Selección de cepas de Bacillus thuringiensis con alta actividad
insecticida para larvas de Cydia pomonella L. (Lepidoptera: Tortricidae)
Selection of highly active Bacillus thuringiensis strains against Cydia pomonella L.
(Lepidoptera: Tortricidae) larvae

Diego Sauka1,2*, María Inés Onco1,2, Melisa Pérez1,2, Nanci López1 y Graciela Benintende1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).
*[Link]@[Link]

El control de Cydia pomonella, plaga principal de frutales de pepita, se basa

principalmente en el empleo de insecticidas químicos con los riesgos ambientales que
acarrean. Tecnologías que contengan Bacillus thuringiensis como base constituyen un
complemento eficaz y seguro para su control, por su toxicidad selectiva alta e impacto casi
nulo que generan en los ecosistemas. La característica principal de esta bacteria es que
produce cuerpos cristalinos constituidos por proteínas Cry durante la esporulación, y en
algunos casos también Cyt, que resultan tóxicos para larvas de insectos cuando estos son
ingeridos. Además, puede secretar otros factores de virulencia durante la fase vegetativa de
crecimiento que le confieren capacidad de multiplicarse en el huésped y producir septicemia.
El objetivo de este estudio fue seleccionar y caracterizar cepas nativas de
B. thuringiensis con alta actividad insecticida para larvas neonatas de C. pomonella. La
importancia de un estudio de este estilo radica en que las cepas de B. thuringiensis para
evaluar son propias del ecosistema argentino, una situación que no acontece al emplear cepas
exóticas para el control de insectos plaga, ya que, en muchos casos, estas responderían a
condiciones existentes en el ambiente del que fueron aisladas. Por ello, era de esperar que
este estudio permitiese la selección de cepas nativas con cualidades destacadas desde el
punto de vista de lo esperado para un bioinsecticida eficiente para el control de C. pomonella.
Se determinó la patogenicidad de 73 cepas nativas de B. thuringiensis mediante
bioensayos “burdos” utilizando una concentración final de biomasa (mezcla de esporas y
cristales) de 5 µg/ml de dieta utilizando larvas neonatas de C. pomonella. En general, los
resultados mostraron un nivel variable de toxicidad frente a dicha plaga. Se registraron
mortalidades comprendidas de 0 % a 95,8 %. Se obtuvieron 9 cepas nativas que demostraron
una mortalidad menor al 30 %, 3 entre 30 y 50 %, y 61 mayor al 50 %. Las cinco cepas nativas
que resultaron ser las más tóxicas para C. pomonella fueron B. thuringiensis INTA H12-5,
INTA Mo1-7, INTA 54-8, INTA L93-3, e INTA H42-1, con mortalidades comprendidas entre el

51
95,8 % y el 89,6 % respectivamente. Se identificaron en ellas cristales bipiramidales y cúbicos
bajo microscopio de contraste de fases. Se observaron bandas de ca. 130 y 65 kDa mediante
SDS-PAGE, asociadas a la morfología de cristales y consistentes con la presencia de genes
cry1 y cry2 detectados a través de PCR. Por la misma metodología se descartó la presencia
del gen thuE, sugiriendo que no producirían β-exotoxina. Todas mostraron perfiles
electroforéticos de REP-PCR idénticos y perfiles plasmídicos similares a los de la cepa serovar
kurstaki HD-1. Ciertas diferencias empezaron a aparecer cuando se analizaron los perfiles de
genes de toxinas insecticidas presentes en estas cepas. B. thuringiensis INTA L93-3 e INTA
Mo1-7 por un lado, y B. thuringiensis INTA 54-8 e INTA H12-5 por otro, presentaron perfiles
similares que se diferenciaron por la ausencia de cry1Ab en las últimas dos cepas.
B. thuringiensis INTA H42-1 presentó un perfil génico atípico no descripto previamente
(cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac y cry2Aa). Para finalizar, se cuantificó la virulencia estimando valores
de CL50. INTA H12-5 (CL50=1,2 μg de biomasa/ml dieta) resultó ser la más tóxica. No existieron
diferencias significativas entre los valores obtenidos para todas las cepas. Por todo lo
expuesto, B. thuringiensis INTA H12-5 podría considerarse como ingrediente activo de un
formulado de alta toxicidad para C. pomonella de aplicación regional. Otra cepa para tener en
cuenta podría ser B. thuringiensis INTA H42-1, debido a produjo una toxicidad similar a la de
HD-1 y a las variaciones en su perfil génico de toxinas insecticidas.

Publicaciones
Onco, M. 2018. Estudio de la toxicidad de proteínas insecticidas de Bacillus thuringiensis como
herramienta para optimizar el manejo de lepidópteros plaga de importancia
agroeconómica. Tesis Doctoral, Facultad de Agronomía, UBA.
Onco, M.; Sauka, D.; Pérez, M.; Benintende, G. 2015. Evaluación de la toxicidad de
Bacillus thuringiensis para larvas de la polilla del manzano. III Congreso Argentino de
Microbiología Agrícola y Ambiental. Buenos Aires. 2015.

52
Aislamiento y caracterización de nuevos aislados de
Bacillus thuringiensis a partir de larvas vivas y sanas de carpocapsa
Isolation and characterization of new Bacillus thuringiensis isolates from live and
healthy larvae of carpocapsa

Diego Sauka1,2*, María Inés Onco1,2, Melisa Pérez1,2, Nanci López1 y Graciela Benintende1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).
*[Link]@[Link]

Bacillus thuringiensis es la bacteria entomopatógena más estudiada y utilizada en el

mundo como agente de control microbiano. Se caracteriza por sintetizar factores de virulencia
que se conglomeran en inclusiones cristalinas parasporales (proteínas Cry/Cyt) durante la
fase de esporulación. Asimismo, puede secretar metabolitos insecticidas durante su fase
vegetativa de crecimiento, los que son activos per se o pueden contribuir sinérgicamente a la
toxicidad global de la cepa en estudio.
Durante los últimos años, se han establecido en distintas partes del mundo colecciones
de B. thuringiensis con la finalidad de encontrar nuevas cepas productoras de factores de
virulencia que posean mayor poder insecticida o tóxicas para insectos en los que no se ha
reportado actividad. Esta bacteria se ha aislado a partir de muestras de suelos, filoplano de
plantas, residuos de la molienda de granos, telarañas, e incluso larvas de insectos muertos o
enfermos. Sin embargo, el aislamiento de B. thuringiensis a partir de larvas vivas y sanas ha
sido muy poco explorado. En el presente estudio se describe el aislamiento y caracterización
fenotípica y genotípica de nuevos aislados de B. thuringiensis obtenidos a partir de larvas
vivas y sanas de la comúnmente conocida carpocapsa o polilla del manzano
(Cydia pomonella L. [Lepidoptera: Tortricidae]).
Se realizaron aislamientos a partir de 32 larvas vivas y sanas provenientes de distintas
fincas radicadas en Tunuyán (Mendoza) y en el Alto Valle (Río Negro), libres de la aplicación
de B. thuringiensis. A partir de tres de ellas, se obtuvieron 8 aislamientos que fueron
identificados por la presencia de cristales parasporales y análisis de un fragmento del gen 16S
rRNA, dejando claro que el aislamiento de B. thuringiensis a partir de este tipo de muestras
es totalmente factible. Se individualizaron cristales ovoides mediante microscopía de contraste
de fases en todos ellos. Su análisis mediante SDS-PAGE brindó la existencia de una banda
principal de ca. 130 kDa en la mayoría de estos, mientras que en otros, de ca. 180 kDa.
Posteriormente se procedió a la detección de genes que codifican proteínas tóxicas para

53
lepidópteros, coleópteros y dípteros, y de genes asociados a la síntesis de -exotoxina y
zwittermicina, mediante amplificación génica (PCR). Se obtuvo ausencia de amplificaciones
para los genes estudiados en todos los aislamientos, con excepción de la detección de genes
cry8 en todos los aislamientos de la muestra L276. Paralelamente, los nuevos aislamientos
se analizaron mediante Rep-PCR; lo que permitió que estos se agruparan dentro de uno de
dos perfiles electroforéticos distintivos. Se evidenciaron 18 bandas polimórficas en ellos. El
perfil de uno de estos grupos se asemejó al de la cepa coleoptericida DSM2803 utilizada como
referencia.
Finalmente se evaluó la patogenicidad de los nuevos aislamientos utilizando larvas de
lepidópteros (C. pomonella), coleópteros (Alphitobius diaperinus) y dípteros (Aedes aegypti).
Ninguno de los aislamientos nativos resultó significativamente tóxico para C. pomonella ni
A. diaperinus. Mostraron un nivel de actividad insecticida nulo a leve, reportando mortalidades
comprendidas entre el 0,0 % y el 10,4 % para C. pomonella y entre el 2,1 % y el 12,5 % para
A. diaperinus. Estos niveles de toxicidad para C. pomonella eran esperables, ya que los
aislamientos provinieron de larvas vivas y sanas de la misma especie donde se evaluó su
patogenicidad. Por una parte, se podría hipotetizar que estos B. thuringiensis se encontraban
en las larvas de donde se aislaron como saprófitos, y llegaron a ellas por estar en contacto
con sus esporas libres o contenidas en su alimento habitual. En cambio, la baja toxicidad
obtenida para A. diaperinus se pudo correlacionar con los aislamientos obtenidos de la
muestra L276 con la presencia de un cristal ovoide asociado a una proteína de ca. 130 kDa,
genes cry8 y un perfil de Rep-PCR similar al de una cepa coleoptericida. Por otra parte,
ninguno de los aislamientos tampoco produjo mortalidad, ni ningún efecto visible, en larvas de
A. aegypti. Teniendo en cuenta que en los aislamientos no se detectaron genes de toxinas
insecticidas asociadas con actividad diptericida, era de esperar que estos no sean activos.
Las proteínas Cry8 se han reportado como tóxicas para coleópteros, por ejemplo, para
Anthonomus grandis, y en particular, para ciertos miembros de la familia Scarabaeidae, y para
algunos lepidópteros como Anticarsia gemmatalis. Por lo tanto, los aislamientos INTA L276-
1, INTA L276-5, INTA L276-9, INTA L276-10, INTA L276-11 podrían ser tóxicos para otras
especies de coleópteros que no han sido aún evaluadas (por ejemplo, especies de
escarabeídos). No obstante, para descartar o confirmar una actividad insecticida importante
por parte de estos aislamientos nativos nuevos sería necesario realizar nuevos bioensayos
donde se enfrenten estos y larvas de insectos pertenecientes a otras especies de los órdenes
estudiados, incluso larvas de otros Filo como el Nematoda.

54
Publicaciones
Sauka, D.; Pérez, M.; Lopez, N.; Onco, M.; Berretta, M.; Benintende, G. 2014. G. PCR-based
prediction of type I -exotoxin production in Bacillus thuringiensis strains. Journal of
Invertebrate Pathology 122: 28-31.
Onco, M. 2018. Estudio de la toxicidad de proteínas insecticidas de Bacillus thuringiensis como
herramienta para optimizar el manejo de lepidópteros plaga de importancia
agroeconómica. Tesis Doctoral, Facultad de Agronomía, UBA.
Sauka, D.; Onco, M.; Pérez, M.; López, N.; Berretta, M.; Benintende, G. 2014. Rápida
predicción de la producción de -exotoxina de tipo I en Bacillus thuringiensis mediante
amplificación génica. XV Jornadas Argentinas de Microbiología. Córdoba.
Sauka, D.; López, N.; Berretta, M.; Benintende, G. 2015. Predicción de la producción de
zwittermicina A en Bacillus thuringiensis a través de amplificación génica de zmaA y
zmaC. III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental. Buenos Aires.
Onco, M.; Sauka, D.; Pérez, M.; Benintende, G. 2015. Larvas de Cydia pomonella como fuente
de aislamiento de Bacillus thuringiensis. III Congreso Argentino de Microbiología
Agrícola y Ambiental. Buenos Aires.

55
Cepas nativas de Bacillus thuringiensis con actividad nematicida
Native strains of Bacillus thuringiensis with nematicidal activity

Diego Sauka1,2*, Mariano Maestro1, Melisa Pérez1,2, María Inés Onco1,2, Nanci López1,2 y
Graciela Benintende1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).
*[Link]@[Link]

La horticultura es una actividad de gran relevancia, tanto económica como social. Es

afectada por diversas plagas (enfermedades, malezas, artrópodos), siendo los nematodos
endoparásitos una de las que produce daños más importantes al sector. Las larvas de estos
nematodos son de hábito subterráneo y se alimentan de las raíces de plantas. Si bien en
nuestro país la información existente sobre los efectos dañinos causados por nematodos es
fragmentada y relacionada con situaciones puntuales, esta pone en evidencia los perjuicios
económicos de estos nematodos sobre la actividad. Meloidogyne spp. y Nacobbus aberrans
ocasionan importantes daños en la producción de tomate y papa en Argentina, a la vez que
se presentan como plagas de numerosas especies cultivadas por su carácter polifitófago. La
rotación de cultivos, la enmienda orgánica y la aplicación de nematicidas químicos son las
principales tácticas que se emplean para su control. El pensar que la solución para estas
plagas esté basada solamente en ellas sería un desacierto. Se debe implementar una
estrategia donde distintas tácticas de control (cultural, físico-mecánico, fitotécnico, químico
racional y biológico) se amalgamen para lograr, tanto la reducción poblacional esperada como
para impedir el avance a regiones no deseadas. Por ello, sería de gran utilidad disponer de
una herramienta complementaria o alternativa para el control de nematodos endoparásitos
que carezca de efectos no deseados sobre el ambiente. En este contexto, el desarrollo de un
bionematicida bacteriano que contengan a Bacillus thuringiensis como ingrediente activo
suena muy atractivo.
Si bien esta bacteria es reconocida principalmente por su actividad insecticida para
diversas plagas, se han descripto en bibliografía la existencia de ciertas cepas que presentan
actividad nematicida. Su mecanismo de acción principal es ejercido a través de la ingestión
de proteínas Cry específicas que resultan en intoxicación, daño intestinal y la consecuente
muerte del nematodo. La -exotoxina que pueden producir algunas cepas, un metabolito
termoestable con actividad tóxica inespecífica para insectos y células de mamíferos, que

56
actuaría inhibiendo la RNA polimerasa por competencia con el ATP por sitios de unión,
también ha sido asociado con dicha actividad.
El objetivo general del presente trabajo fue seleccionar cepas nativas de B. thuringiensis
con actividad nematicida. Larvas del nematodo de vida libre Panagrellus redivivus fueron
utilizadas como modelo para la evaluación de la actividad nematicida de B. thuringiensis,
debido a que su cría en laboratorio es simple y de bajo costo. Las cepas de B. thuringiensis
en estudio fueron cultivadas sobre placas de agar BM hasta esporulación completa. A
continuación, unas 5000 larvas de P. redivivus se dispersaron sobre la placa que contenía la
cepa para estudiar. Todo este procedimiento se realizó al menos por duplicado. Se calculó el
porcentaje de mortalidad contando las primeras 20 a 50 larvas observadas bajo microscopio
óptico (100 x) después de 24 h de incubación a 25 ºC. Se analizaron 54 cepas nativas
pertenecientes a la colección del IMYZA-INTA. Por una parte, se utilizó la cepa HD-1 de
B. thuringiensis serovar kurstaki como control negativo y placas de agar BM solo con
nematodos como control de viabilidad. Se obtuvieron 52 cepas que no mostraron actividad o
demostraron una mortalidad ≤25 %, 1 entre 25-75 %, 1 mayor al 75 %. Por otra parte, la
mortalidad natural en los controles nunca superó el 5 %. Dentro del primer grupo (mortalidad
≤ 25 %), no se hallaron diferencias significativas entre los distintos tratamientos y la mortalidad
del control negativo (cepa HD-1: sin actividad nematicida). Esto mismo denotaría cierta
actividad nematicida basal cuando P. redivivus es expuesto a concentraciones elevadas de
B. thuringiensis. Por una parte, las cepas nativas INTA H48-5 (productora de -exotoxina) y
Mo14-4 (catalogada con anterioridad como “no tóxica” para insectos) presentaron mayor
actividad nematicida sobre P. redivivus con mortalidades del 53,7±1,3 % y 98,7±0,7 %
respectivamente.
Por otro lado, se realizaron ensayos de quimiotaxis entre las cepas nematicidas de
B. thuringiensis seleccionadas, y entre estas y la cepa HD-1. Las cepas para evaluar se
cultivaron durante 24 h a 29 ºC sobre extremos opuestos de placas de agar nutritivo. Entre
medio de ambas se dispensó una alícuota con alta concentración de P. redivivus. Tras 24 h
de incubación a temperatura ambiente se calcularon índices de quimiotaxis (IQ) con el objeto
de observar si P. redivivus presentaba movimiento preferencial hacia alguna de las cepas
nematicidas estudiadas. Se obtuvieron para los enfrentamientos entre HD-1 e INTA Mo14-4,
y HD-1 e INTA H48-5 valores de IQ de 0,79 para ambos casos. Por un lado, estos resultados
sugieren que los nematodos prefirieron a las cepas nematicidas como fuente alimenticia.
Posiblemente INTA Mo14-4 e INTA H48-5 producirían algún tipo de atractante que no
produzca HD-1. Por otro lado, cuando se enfrentaron ambas cepas nematicidas, P. redivivus

57
eligió indistintamente a una u otra cepa como alimento. Esto se pudo ver reflejado en el valor
de IQ de prácticamente 0 (IQ= -0,07) obtenido.
De acuerdo con nuestro conocimiento, estos estudios representan los primeros reportes
de cepas nativas de B. thuringiensis con actividad nematicida. La evaluación exitosa de la
misma frente a nemátodos endoparásitos será determinante en cuanto a la posibilidad de la
inclusión de alguna de las cepas seleccionadas como ingrediente activo de un bionematicida.

Publicaciones
Sauka, D.; Maestro, M.; Benintende, G. 2016. Primer reporte de cepas argentinas de
Bacillus thuringiensis con actividad nematicida. XXIII Congreso Latinoamericano de
Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología. Rosario, Santa Fe.

58
Aislamiento, selección y estudio de hongos con capacidad nematicida
para ser empleados como agentes de control biológico de nematodos
plaga
Isolation, selection and study of fungi with nematicidal activity to be employed as
biological control agents for nematode pests

Mariano Maestro

Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola

(IMyZA). [Link]@[Link]

Los nematodos fitoparásitos dañan las raíces y modifican sus funciones limitando la
absorción de agua y nutrientes causando un desarrollo inadecuado de la planta y aumentando
su vulnerabilidad frente a virus, bacterias y hongos. La coocurrencia con estos patógenos
hace que el daño causado por nematodos sea con frecuencia subestimado, pero se lo estima
entre el 10 y 15 % de la producción agrícola mundial, e incluso más en cultivos de invernáculo.
Estas plagas pueden ser manejadas por medios químicos y culturales. Sin embargo, las
alternativas culturales no son practicables en muchos casos, y se recurre a los químicos. Para
ser efectivos, los nematicidas químicos deben inyectarse en el suelo y ser tóxicos a bajas
concentraciones, lo que presenta un desafío con respecto a su permanencia y efectos en la
salud y el ambiente. El Oxamyl (Vydate®), por ejemplo, puede ser aplicado en el suelo o en
las hojas, y se transloca a las raíces, lo que lo hace adecuado como nematicida. Sin embargo,
es altamente tóxico y esta clasificado como “Altamente Peligroso” por la Organización Mundial
de la Salud, junto con el Fenamiphos (Rubicon®), el Cadusafos (Rugby®) y el Carbofuran
(Furadan®); estos están prohibidos o restringidos en EE. UU. y en la Unión Europea. Esto no
pretende ser una lista del estado de los nematicidas químicos, sino ilustrar los actuales
parámetros de bioseguridad de estos destinos de exportación de la producción agrícola
argentina. Adicionalmente, con casi tres millones de hectáreas de agricultura orgánica,
nuestro país es el segundo productor mundial después de Australia, y el sector esta creciendo
rápidamente impulsado por la demanda internacional centrada principalmente en los países
desarrollados. Es necesario, por lo tanto, desarrollar estrategias adecuadas para el manejo
de plagas que permitan al país afianzarse en este mercado.
Entre las alternativas, el biocontrol es una de las menos exploradas y con mayor
potencial de desarrollo. Actualmente diversos países están estudiando el uso de hongos
nematófagos como agentes de control, principalmente Arthrobotrys spp. Estos son hongos del

59
suelo, con capacidad de capturar y digerir nematodos. En condiciones naturales, establecen
simbiosis con las plantas, colonizando la rizósfera y protegiendo las raíces de parásitos a la
vez que los usan como fuente de nutrientes. El objetivo de esta línea de investigación fue
seleccionar variedades de hongos con buena respuesta nematicida, capaces de colonizar el
suelo rápidamente, que puedan producirse a bajo costo, y que resistan el almacenamiento
durante un tiempo suficiente como para ser nematicidas viables.
Arthrobotrys oligospora posee estas características. Se obtuvieron 30 aislamientos de
A. oligospora a partir de muestras de suelo de huertas orgánicas de las provincias de Buenos
Aires y Córdoba. Estas fueron incorporadas al cepario del Laboratorio de Hongos
Entomopatógenos del IMYZA y evaluadas con respecto a los criterios mencionados.
Los objetivos cumplidos se resumen a continuación:
-Se establecieron crías de los nematodos Panagrellus redivivus y Meloidogyne javanica
para su uso en bioensayos.
-Se seleccionó un aislamiento nativo (AO3.10) con capacidad de reducir en 24 h hasta
el 90 % de poblaciones de nematodos in vitro. Esta mortalidad y velocidad de respuesta son
fundamentales para prevenir el daño a la raíz.
-Se evaluaron diversos sustratos sólidos y líquidos, y se desarrolló un medio de cultivo
apto para producción en fermentador. Este emplea sacarosa como fuente de carbono y
subproductos del extrusado de maíz como fuente de aminoácidos y vitaminas, además de
macro y micronutrientes adicionales. Su importancia radica en que el medio líquido es más
económico y fácilmente escalable que otras alternativas, y estos ingredientes no son
particularmente costosos. Esto soluciona una de las limitantes más frecuentes en el uso de
hongos como biocontroladores, que es el costo de producción.
-Se evaluó a AO3.10 respecto a su capacidad de colonización y permanencia en el
suelo, siendo reaislado exitosamente un mes después de inoculado. Se probó su capacidad
de persistir frente a estrés abiótico físico (movimiento del suelo) e hídrico (falta de irrigación).
Dado que A. oligospora se reproduce tanto mediante esporas como de fragmentos de micelio,
el movimiento del suelo no solo no lo afectó negativamente, sino que favoreció su dispersión.
El hongo fue reaislado con éxito dentro del período ensayado (luego de dos semanas sin riego
a 25 ˚C).
-Se evaluó la estabilidad de un formulado experimental de AO3.10. Permaneció viable
y mantuvo su capacidad nematicida y colonizadora durante tres meses a temperatura
ambiente, y al menos durante un año conservado a 6 ˚C. Este conocimiento es fundamental
para su almacenamiento y distribución, previo a su uso en el campo.

60
 Queda pendiente para su realización en un futuro cercano, la evaluación en el campo
de la capacidad del aislamiento AO3.10 para reducir el daño causado por nematodos. Se
estudiarán sus efectos en cultivos de invernáculo de producción orgánica (tomates), debido a
su importancia comercial y a que las condiciones relativamente estables de humedad y
temperatura permiten obtener resultados consistentes.

Publicaciones
Angulo Lewylle, M.; Maestro, M.; Comerio, R.; Lecuona, R. Aislamiento de hongos
nematófagos para el control de parásitos intestinales de rumiantes. XIII Congreso
Argentino de Micología, XXIII Jornadas Argentinas de Micología y 1.a Reunión de la
Asociación Micológica Carlos Spegazzini. Buenos Aires.
Maestro, M. 2016. Hongos nematófagos: una alternativa sostenible para el biocontrol de
nematodos plaga. II Taller sobre Microorganismos destinados al Biocontrol de Plagas y
Enfermedades. Rosario, Sanata Fe.
Maestro, M.; Lecuona, R. 2016. Evaluación de la capacidad predatoria de cinco aislamientos
nativos del hongo nematófago Arthrobotrys oligospora. XXIII Congreso Latinoamericano
de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología. Rosario, Santa Fe,
Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA PNAIyAV 1130034. Desarrollo de procesos para la transformación de biomasa
en Bioenergía. 2013-2018.

61
Aislamiento y selección de cepas de Escovopsis sp. virulentas contra
Leucoagaricus gongylophorus para el control de hormigas cortadoras
Isolation and selection of virulent strains of Escovopsis sp. against
Leucoagaricus gongylophorus for the control of leafcutting ants

Julieta Beatriz Posadas1 y Leonardo Udrea2

1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Agronomía. *[Link]@[Link]

Entre las I+D que se vienen realizando en la búsqueda de nuevas tecnologías para el
control de hormigas, el control biológico juega un importante papel, en particular, el control
microbiano mediante el uso de microorganismos benéficos que enferman y controlan a los
artrópodos. En la presente línea de investigación, iniciada en 2017, se plantea un interesante
enfoque que es destruir el propio alimento de las hormigas, el hongo Basidiomycete
Leucoagaricus gongylophorus que cultivan en sus nidos. Este basidiomicete presenta un
enemigo natural específico, un hongo del género Escovopsis. Este micoparásito se nutre de
los tejidos del hongo cultivado reduciendo su biomasa y provocando cambios de
comportamiento durante el forrajeo y una menor tasa reproductiva de la colonia, ocasionando
la disminución del tamaño del hormiguero. Para utilizar efectivamente Escovopsis como un
agente de biocontrol es necesario evaluar la actividad antagonista de diferentes aislamientos
contra el cultivar fúngico, ya que el impacto negativo en la sobrevivencia de la colonia variará
de acuerdo a las características propias de cada aislamiento de Escovopsis sp. El objetivo del
presente trabajo fue aislar y posteriormente seleccionar cepas de Escovopsis sp. virulentas
contra L. gongylophorus para ser incluidas en una estrategia de control microbiano de
hormigas cortadoras.
Durante los meses de enero, febrero, marzo y abril de 2017 se colectaron “hongueras”.
En una primera etapa, se monitorearon y marcaron 20 hormigueros de Acromyrmex lundi en
el predio de INTA Castelar y posteriormente se colectaron las “hongueras” con hormigas y se
llevaron a laboratorio, donde se dispusieron en pequeños hormigueros artificiales. Los
hormigueros fueron alimentados y mantenidos en condiciones de laboratorio a fin de poder
tomar muestras a diario. Se tomaron muestras de L. gongylophorus de los hormigueros
estresados al momento de la colecta y luego una vez por semana. Bajo microscopio
estereoscópico y cabina de flujo laminar se tomó una porción del hongo con un ansa y se
colocó en placas de Petri con PDA más el agregado de cloranfenicol. Las placas se incubaron

62
en estufa a 25 ºC durante 5 días. Los hongos crecidos se observaron bajo microscopio óptico
y se compararon con claves. Se obtuvieron 9 aislamientos de Escovopsis sp. Estos fueron
liofilizados y conservados en la micoteca del Laboratorio de Hongos Entomopatógenos de
IMYZA, INTA Castelar.
A partir de estos aislamientos, se comenzó a trabajar en la selección del aislamiento de
Escovopsis sp. más virulento contra un aislamiento de L. gongylophorus obtenido de una
colonia de Acromyrmex lundi. Se realizaron ensayos duales en placa de Petri. Se prepararon
suspensiones de cada aislamiento fúngico y se ajustaron a 1x107 conidios/ml en cámara de
Neubauer. En placas de Petri conteniendo agar papa glucosado (APG) se sembraron 0,02 ml
con ansa calibrada. Primero en un lado de la placa se sembró L. gongylophorus, y tres días
después Escovopsis sp. en el lado opuesto de la placa. Además, se realizaron controles donde
se sembró cada hongo por separado en el centro de la placa. Para cada tratamiento se
realizaron 10 repeticiones. Se midió diariamente el crecimiento radial y se anotó la fecha de
inicio de la esporulación. Además, se comparó el radio de Escovopsis sp. hacia ambos lados
de la placa (RL y R, hacia el lado donde se sembró el basidiomycete y hacia el lado opuesto
respectivamente) a fin de corroborar si el crecimiento es dirigido hacia L. gongylophorus. Tres
de los 9 aislamientos evaluados presentaron una elevada virulencia. Se observó un
crecimiento dirigido hacia el sitio de la placa donde se inoculó el basidiomycete (promedio
R= 22 mm y RL= 60 mm) y además la esporulación en estos tres aislamientos fue mucho más
rápida que en el testigo (promedio de 3 días para los cultivos duales y 7 días para el testigo).
La mayor esporulación se presento principalmente sobre L. gongylophorus. Con estos tres
aislamientos se continuará trabajando. Se realizarán ensayos donde se evaluará en
microcultivos la formación de ganchos y trampas a fin de poder correlacionar la presencia y
abundancia de dichas estructuras con la virulencia del aislamiento, y de esta manera se
seleccionarán los más virulentos para incluirlos en una estrategia de control microbiano de
hormigas cortadoras.

Publicaciones
Udrea, L.; Posadas, J.B. 2018. Virulencia de cepas de Escovopsis sp. sobre un aislamiento
de Leucoagaricus gongylophorus obtenido de hongueras de Acromyrmex lundi. IV
Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental, 11-13 de abril de 2018. Mar
del Plata, Buenos Aires, Argentina.
Gomez, D.G.; Udrea, L.; Mini, J.I.; Posadas, J.B. 2018. Aislamiento de cepas de Escovopsis
sp. a partir de hongueras de Acromyrmex lundi colectadas en el campo. X Congreso
Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de 2018. Mendoza, Argentina.

63
Control de hormigas cortadoras con hongos entomopatógenos y aceites
esenciales de plantas aromáticas
Control of leaf-cutting ants using entomopathogenic fungi and essential oils of aromatic
plants

Diego Gustavo Gómez1, Julieta Beatriz Posadas1*, Jorge Ignacio Mini1, Valeria Rosselot2
y Esteban Rubio3
1InstitutoNacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola
(IMyZA). 2Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Recursos Biológicos
(IRB). 3Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria
(EEA) Área Metropolitana Buenos Aires (AMBA). *[Link]@[Link]

Las hormigas cortadoras de los géneros Atta y Acromyrmex son insectos sociales que
se comportan como plagas herbívoras en agricultura y silvicultura. Han adquirido gran
notoriedad por los daños que causan en diferentes países y tienen una gran incidencia en la
pérdida de productividad de las plantaciones a nivel comercial, por ser insectos que se han
adaptado a los ambientes modificados por el hombre. El control se realiza a través del
tratamiento con compuestos químicos, los cuales además de generar resistencia en los
insectos pueden tener efectos desfavorables sobre los microorganismos. Por tales motivos,
resulta fundamental el empleo de técnicas menos contaminantes para su control, tal como el
control microbiano con hongos entomopatógenos. El uso de insecticidas botánicos, tales
como los aceites esenciales, también constituye una útil herramienta para el control de esta
plaga. Con el objetivo final de implementar una estrategia de control de hormigas combinando
el uso de hongos entomopatógenos con aceites esenciales que resulten atractantes, se
aislaron y seleccionaron cepas de hongos entomopatógenos y se evaluó en el laboratorio el
efecto de aceites esenciales de plantas aromáticas sobre colonias de hormigas cortadoras.
Desde el mes de enero hasta septiembre de 2017 se tomaron un total de 12 muestras
de suelo de la zona del cultivo de frutillas de AMBA y 6 muestras en zonas próximas a este.
Las muestras se llevaron al laboratorio para su procesamiento. Se diluyeron en agua destilada
estéril y se agitaron en shaker por 2 horas. Luego se sembraron en diferentes medios de
cultivo, los cuales se incubaron a 27 ºC. Se logró obtener un aislamiento de Beauveria
bassiana (Bb 381) y 2 de Metarhizium anisopliae (Ma 88 y Ma 89). Estos fueron liofilizados y
conservados en la micoteca del Laboratorio de Hongos Entomopatógenos de IMYZA, INTA
Castelar. A partir de estos aislamientos y de dos cepas previamente seleccionadas en el LHE
para el control de hormigas cortadoras (Bb 99 y Bb 361) se realizaron formulaciones
granuladas con la adición de un atrayente a base de naranja y se realizaron las primeras

64
pruebas en hormigueros presentes en el AMBA. Se seleccionaron 18 hormigueros (3 por cada
tratamiento), se marcaron y monitorearon. Posteriormente, por una parte, se colocaron 100
gramos de cada formulado en las bocas de los hormigueros y se monitoreó actividad durante
15 días. Para analizar los datos, se tomaron las mediciones de actividad de los hormigueros
como datos cualitativos binomiales (activo/inactivo) y se calculó la proporción de hormigueros
inactivos con respecto al total. Estos datos fueron analizados mediante un test de hipótesis
para proporciones (Z). Cada tratamiento fue comparado con el testigo. La actividad disminuyó
notablemente para los hormigueros tratados con las dos cepas seleccionadas anteriormente
(Bb 99 y Bb 361), observándose una inactivación del 70 %. Los nuevos aislamientos no
mostraron diferencias significativas con el testigo.
Por otra parte, y con el fin de evaluar el efecto de los aceites esenciales, provistos por
el Instituto de Recursos Biológicos de INTA Castelar, de eucalipto (Eucalyptus globulus) y de
menta inglesa (Mentha piperita) sobre 3 subcolonias de Atta sexdens, se llevó a cabo un
bioensayo en laboratorio. El día previo al ensayo se separaron 3 “hongueras” de colonias
distintas sin incluir a las reinas y a cada una se le conectó una arena de forrajeo. Se tiñeron
granos de arroz con distintas coloraciones para poder diferenciar los tratamientos y fueron
embebidos con 3 concentraciones de ambos aceites en hexano (20, 10, 5 % v/v). Se colocaron
9 granos de arroz por cada tratamiento más un control (arroz embebido solo en solvente) en
la arena de forrajeo distribuidos al azar, en forma de grilla y se evaluó visualmente el efecto
en el acarreo durante 2 horas. Se realizaron 3 réplicas para cada aceite. Al final del ensayo
se contó el número de granos en la arena de forrajeo y se calculó el porcentaje de rechazo de
acuerdo a la cantidad de arroz que no fue acarreado. Los datos se analizaron mediante un
análisis de comparación de proporciones (Test Z). El aceite esencial de menta presentó mayor
actividad repelente en todas las concentraciones evaluadas con respecto al de eucalipto,
observándose que al 20 % v/v hubo un 100 % de rechazo. Para el eucalipto, este valor fue
del 33,3 % a igual concentración. Se continuará evaluando aceites esenciales en el
laboratorio, a fin de hallar alguno con actividad atrayente, que pueda ser empleado de manera
combinada con hongos entomopatógenos en una estrategia integrada de control de hormigas
cortadoras.

Publicaciones
Gómez, D.G.; Posadas, J.B.; Rosselot, V. 2018. Evaluación del efecto de los aceites
esenciales de menta y eucalipto sobre colonias experimentales de hormigas cortadoras
de la especie Atta sexdens. X Congreso Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de
2018. Mendoza. Argentina.

65
Módulo: Control genético y
comportamental

66
Mejoramiento del éxito de apareamiento luego del tratamiento con
metopreno en machos de Anastrepha fraterculus (Diptera: Tephritidae):
valor adaptativo y mecanismos de acción
Male sexual enhancement after methoprene treatment in Anastrepha fraterculus
(Diptera: Tephritidae)

Guillermo Enrique Bachmann1,2*, Francisco Devescovi1,2, Ana Laura Nussenbaum1,2, Jorge

Luis Cladera1, Patricia Carina Fernández2,3, María Teresa Vera2,4 y Diego Fernando
Segura1,2.
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E.A. Favret”. 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Instituto Nacional de Tecnología
Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Delta del Paraná. 4Universidad
Nacional de Tucumán (UNT). Facultad de Agronomía y Zootecnia. *guillebachmann@[Link]

En el marco de la Actividad: 32035 "Estudio del efecto del metopreno sobre la tasa de
liberación de feromona sexual en machos de A. fraterculus y la fecundidad de las hembras"
del proyecto PNPV 1135033, se estudiaron los factores que afectan el comportamiento sexual
de los machos de Anastrepha fraterculus y los mecanismos asociados utilizando un
compuesto químico análogo de la hormona juvenil, el metopreno. Bajo el marco de la Técnica
del Insecto Estéril se ha explorado el uso del metopreno para disminuir el tiempo necesario
para alcanzar la madurez sexual del macho, reduciendo así los costos de mantenimiento de
los individuos antes de ser liberados. Dado que el metopreno provoca aceleración de la
maduración sexual en muchas especies de tefrítidos, en este trabajo se investigó si el
tratamiento con metopreno provoca en los machos una mayor aceptación por parte de las
hembras. Se analizó el perfil feromonal y el comportamiento de llamado sexual de los machos
tratados con este compuesto. Por último, mediante la estimación de variables de fecundidad
y fertilidad se evaluó el valor reproductivo asociado a este evento de selección sexual. El
objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del tratamiento con metopreno sobre el éxito de
apareamiento de los machos dilucidando los mecanismos subyacentes y evaluar si la
preferencia de las hembras por machos tratados con metopreno se debe a un beneficio directo
relacionado con la fecundidad o fertilidad. Para determinar si el tratamiento con metopreno
sobre los machos provoca mayor aceptación de los mismos por parte de las hembras se
realizaron experimentos comportamentales en los que machos fueron ofrecidos
individualmente junto a machos no tratados, a una hembra virgen, sexualmente madura.
El tratamiento con metopreno se realizó durante el primer día posemergencia de los
adultos, mediante la aplicación (topicado) de 1 μl una solución de metopreno disuelto en

67
acetona con una concentración de 5 µg/µl sobre el tórax de cada macho. Luego se realizaron
ensayos de apareamiento consistentes en arenas experimentales, cada una conteniendo un
macho tratado, un macho control (no tratado) y una hembra. Se analizaron un total de 300
arenas experimentales. A su vez, para determinar si las hembras de A. fraterculus obtienen
un beneficio directo cuando se aparean con machos tratados con metopreno, se comparó la
fecundidad (número de huevos) y la fertilidad (porcentaje de eclosión de esos huevos) entre
hembras apareadas con machos tratados y hembras apareadas con machos no tratados. Para
ello se identificó a las hembras según el tipo de macho con el que se aparearon y se las colocó
en frascos, en grupos de a 3 (respetando el tratamiento). A partir de ese momento (día 10-12
posemergencia), aproximadamente cada 2 días y durante 4 semanas, cada grupo de hembras
fue provisto con una unidad de oviposición que simula una fruta en donde las hembras
depositan sus huevos. Por un lado, tras 24 horas las unidades de oviposición se retiraron de
los frascos y se recuperaron los huevos. Estos fueron incubados y tras 4 días se realizó el
conteo de huevos (fecundidad) y el registro de eclosión (fertilidad). El tratamiento con
metopreno sobre los machos incrementó su éxito de apareamiento. A su vez, los machos
tratados con metopreno liberaron mayor cantidad de feromona sexual durante el cortejo. Por
otro lado, no se evidenció un aumento en la tasa de llamado sexual. Por lo tanto, el mecanismo
por el cual los machos tratados con metopreno alteran su fisiología provocando que sean
preferidos por las hembras parece estar relacionado con un aumento en la producción de
feromona y se encontraría desacoplado del mecanismo que desencadena el llamado sexual
en esta especie. Con respecto al valor reproductivo asociado al evento de selección sexual,
no se registró mayor fecundidad ni fertilidad para hembras apareadas con machos tratados
con metopreno. Por lo tanto, la preferencia de las hembras por machos tratados no puede ser
explicada en términos adaptativos sobre un aumento de fecundidad o fertilidad. Otras
variables asociadas al fitness directo de las hembras, como la longevidad y el período
refractario (tiempo que transcurre hasta una siguiente cópula) deberían ser consideradas en
futuros estudios. Además, para las hembras podrían existir beneficios del tipo indirecto
(rasgos de historia de vida de la descendencia) que no se consideraron en el presente estudio.
Los resultados de este trabajo tienen importantes implicancias para el manejo de esta especie
plaga a través del uso de la Técnica del Insecto Estéril, contribuyendo al mejoramiento del
macho estéril y a la comprensión de este fenómeno biológico.

68
Publicaciones
Bachmann, G.E. 2016. Identificación de compuestos naturales que afectan el éxito copulatorio
en machos de la mosca Sudamericana de la fruta, Anastrepha fraterculus (Diptera:
Tephritidae). Tesis Doctoral, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA.
Bachmann, G.E.; Devescovi, F.; Nussenbaum, A.L.; Cladera, J.L.; Fernández, P.C.; Vera,
M.T.; Teal, P.E.A.; Segura, D.F. 2017. Male sexual enhancement after methoprene
treatment in Anastrepha fraterculus (Diptera: Tephritidae): a sustained response that
does not fade away after sexual maturation. Journal of Insect Physiology.
[Link]

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

PICT 2013-0054. Estudio de interacciones entre moscas de los frutos (Tephritidae) y especies
hospedadoras, parasíticas, competidoras y simbiontes, como herramienta para desarrollar
estrategias no contaminantes de control de esta plaga de la agricultura argentina. 2015-2017.
PIP 2014-2016. Interacciones entre moscas plaga de los frutos de la familia Tephritidae y sus
especies hospedadoras, parasíticas, competidoras o simbiontes: implicancias sobre el
desarrollo de estrategias de control no contaminantes. 2015-2018.

69
Mejoramiento del éxito de apareamiento luego de la exposición a
volátiles de guayaba en Anastrepha fraterculus (Diptera: Tephritidae):
valor adaptativo y mecanismos de acción
Male sexual enhancement after methoprene treatment in Anastrepha fraterculus
(Diptera: Tephritidae)

Guillermo Enrique Bachmann1,2*, Silvina Anahí Belliard1,2, Francisco Devescovi1,2, María

Laura Juárez2,3, María Josefina Ruíz2,4, María Teresa Vera2,3, Jorge Luis Cladera1, Patricia
Carina Fernández2,5 y Diego Fernando Segura1,2
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E.A. Favret”. 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Universidad Nacional de Tucumán
(UNT). Facultad de Agronomía y Zootecnia. 4Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres
(EEAOC). 5Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental
Agropecuaria (EEA) Delta del Paraná. *guillebachmann@[Link]

En el marco de la actividad 32037 "Estudio de la respuesta de las hembras de

A. fraterculus a mezclas artificiales de compuestos provenientes de guayaba", reformulada
luego como la actividad 37827 del PNPV 1135033, se estudiaron los factores que afectan al
comportamiento sexual de los machos de Anastrepha fraterculus y a los mecanismos
asociados utilizando el fruto de la guayaba. La exposición a los olores que emite la guayaba
provoca un mejoramiento del éxito de apareamiento de los machos (mayor aceptación por
parte de las hembras). En este trabajo se investigaron los mecanismos asociados a este
fenómeno, considerando la comunicación química, visual y acústica entre sexos. Por último,
mediante la estimación de variables de fecundidad y fertilidad se evaluó el valor reproductivo
asociado a este caso de selección sexual. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de
la exposición a volátiles de guayaba sobre el éxito de apareamiento de los machos dilucidando
los mecanismos subyacentes y evaluar si la preferencia de las hembras por machos tratados
con metopreno se debe a un beneficio directo relacionado con la fecundidad o fertilidad. Para
determinar si la exposición a guayaba provoca mayor aceptación de los machos por parte de
las hembras se realizaron experimentos comportamentales. La exposición a los volátiles de
guayaba se realizó entre los días 2 y 6 posemergencia de los adultos. Luego se realizaron
ensayos de apareamiento en arenas experimentales, cada una conteniendo un macho
expuesto, un macho control (no expuesto) y una hembra. Se analizaron un total de 300 arenas
experimentales. A su vez, se comparó la fecundidad y la fertilidad entre hembras apareadas
con machos expuestos y hembras apareadas con machos no expuestos. Para ello se identificó
a las hembras según el tipo de macho con el que se aparearon y se las colocó en frascos, en

70
grupos de a 3 (respetando el tratamiento). A partir de ese momento (día 10-12
postemergencia), aproximadamente cada 2 días y durante 4 semanas, cada grupo de
hembras fue provisto con una unidad de oviposición que simula una fruta en donde las
hembras depositan sus huevos. Tras 24 horas las unidades de oviposición se retiraron de los
frascos y se recuperaron los huevos. Estos fueron incubados y después de 4 días se realizó
el conteo de huevos (fecundidad) y el registro de eclosión (fertilidad). La exposición a volátiles
sobre los machos incrementó su éxito de apareamiento. Los machos expuestos a la guayaba
liberaron mayor cantidad de feromona y realizaron el comportamiento de llamado sexual más
frecuentemente. Por lo tanto, la preferencia de las hembras por machos expuestos a guayaba
puede ser explicado mediante una mayor actividad de cortejo por parte del macho. A su vez,
las hembras apareadas con los machos expuestos a guayaba presentaron mayor fecundidad
con respecto a las hembras apareadas con machos no expuestos. Por lo tanto, la preferencia
de las hembras por machos expuestos puede explicarse en términos adaptativos basados en
un aumento de fecundidad. Los machos durante la cópula, además de esperma, pueden
transferir a las hembras compuestos bioactivos como hormona juvenil que estimulan la
maduración de oocitos. Por un lado, si la presencia de guayaba disparó en los machos un
aumento de la actividad sexual mediado por un incremento de la producción de hormona
juvenil, entonces este compuesto también podría haberse transferido a las hembras en
mayores cantidades que para machos no expuestos. Por otro lado, otras variables asociadas
al fitness directo de las hembras, como la longevidad y el período refractario (tiempo que
transcurre hasta una siguiente cópula) deberían ser consideradas en futuros estudios.
Además, para las hembras podrían existir beneficios del tipo indirecto (rasgos de historia de
vida de la descendencia) que no se consideraron en el presente estudio. Los resultados de
este trabajo tienen importantes implicancias para el manejo de esta especie plaga a través
del uso de la Técnica del Insecto Estéril, contribuyendo al mejoramiento del macho estéril y a
la comprensión de este fenómeno biológico.

Publicaciones
Bachmann, G. 2016. Identificación de compuestos naturales que afectan el éxito copulatorio
en machos de la mosca Sudamericana de la fruta, Anastrepha fraterculus (Diptera:
Tephritidae). Tesis Doctoral, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA.
Bachmann, G.; Segura, D.; Devescovi, F.; Juárez, M.; Ruiz, M.; Vera, M.; Cladera, J.; Teal,
P.; Fernández, P. 2015. Male sexual behaviour and pheromone emission is enhanced
by exposure to guava fruit volatiles in Anastrepha fraterculus. PLOS ONE. doi:
10.1371/[Link].0124250.

71
Bachmann, G.; Vera, M.; Teal, P.; Ruiz, M.; Juárez, M.; Cladera, J.; Segura, D.; Fernández,
P. 2014. Role of guava volatiles on Anastrepha fraterculus male sexual display and
pheromone release. 9th International Symposium on Fruit Flies of Economic Importance
(ISFFEI), 12-16 de junio de 2014. Bangkok, Tailandia.
Segura, D.F.; Bachmann, G.E.; Kalinová, B.; Břízová, R.; Hoskovec, M.; Vera, M.; Fernández,
P. 2015. Respuesta electrofisiológica en antenas de hembras de Anastrepha fraterculus
(Wiedemann) frente a compuestos feromonales y extractos cuticulares de machos
expuestos a guayaba. IX Congreso Argentino de Entomología, 19-22 de mayo de 2015.
Posadas, Misiones, Argentina.
Bachmann, G.E.; Kalinova, B.; Brizova, R.; Hoskovec, M.; Fernández, P.C.; Vera, M.T.;
Segura, D.F. 2016. Guava volatiles enhance the sexual behavior of Sudamerican fruit
fly (Diptera: Tephritidae) males with no evident changes in their pheromone and cuticle
chemical profiles. 32nd Annual meeting of International Society of Chemical Ecology. Foz
de Iguazú, Brasil. .
Belliard, S.A.; Bachmann, G.E.; Ruíz, J.; Valladares, G.; Vera, M.T.; Fernández, P.C.; Cladera,
J.L.; Segura, D.F. 2018. Efecto de la exposición a extractos de guayaba sobre el éxito
copulatorio en Anastrepha fraterculus. X Congreso Argentino de Entomología. 21-24 de
mayo de 2018. Mendoza, Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

PICT 2013-0054. Estudio de interacciones entre moscas de los frutos (Tephritidae) y especies
hospedadoras, parasíticas, competidoras y simbiontes, como herramienta para desarrollar
estrategias no contaminantes de control de esta plaga de la agricultura argentina. 2015-2017.
PIP 2014-2016. Interacciones entre moscas plaga de los frutos de la familia Tephritidae y sus
especies hospedadoras, parasíticas, competidoras o simbiontes: implicancias sobre el
desarrollo de estrategias de control no contaminantes. 2015-2018.

72
Estudio del efecto de bacterias del tracto digestivo sobre el éxito
copulatorio del macho de Anastrepha fraterculus
Effect of gut bacteria on the mating success of Anastrepha fraterculus males

Julieta Salgueiro1, Silvia Beatriz Lanzavecchia1, Guillermo Enrique Bachmann1,2, Fabián

Horacio Milla1, María Teresa Vera3, Patricia Fernández2,4 y Diego Fernando Segura1,2*.
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E. A. Favret”. 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Universidad Nacional de Tucumán
(UNT). Facultad de Agronomía y Zootecnia. 4Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA).
Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Delta del Paraná. *[Link]@[Link]

Como parte de una caracterización funcional de las bacterias intestinales de

Anastrepha fraterculus, en esta actividad se procedió a estudiar la diversidad de bacterias en
muestras silvestres y muestras de laboratorio, así como a obtener aislamientos de ambos
orígenes que pudieran ser utilizados en bioensayos que arrojaran información sobre el rol que
bacterias específicas tienen sobre la biología de la plaga. Sobre la hipótesis que la comunidad
microbiana intestinal de moscas silvestres se modifica durante la adaptación al laboratorio o
domesticación, planteamos los siguientes objetivos: 1) comparar la diversidad bacteriana
intestinal entre moscas de laboratorio y silvestres; 2) comparar dicha comunidad entre
insectos en proceso de domesticación e insectos de laboratorio; 3) estudiar si el efecto de la
domesticación depende del sexo y de los días y de la alimentación del hospedador. Se
colectaron insectos de la cría de laboratorio (Lab) y silvestres (Wild) de ubajay
(Hexachlamys edulis) y feijoa (Feijoa sellowiana), denominados WU y F0. Por una parte, con
F0 se estableció una cría de laboratorio durante 6 generaciones (F1-F6). Al día 1 de
emergencia se diseccionaron 15 machos y 15 hembras (sin alimentar) de cada origen Lab y
F0, F1, F3, F6 conformando 3 réplicas de 5 intestinos cada una. El procedimiento se repitió
con adultos de 30 días (alimentados). Por otra parte, los adultos WU fueron capturados en
trampas y luego diseccionados de la misma forma. La identificación genética de las bacterias
intestinales se realizó por secuenciación masiva de amplicones de la región V3-V4 del gen
ribosomal 16S (Illumina MiSeq). Se encontró que los perfiles microbiológicos provenientes de
insectos Wild y Lab difieren significativamente. Los primeros presentan grupos de
Proteobacterias no detectadas en Lab. A partir del análisis de las comunidades en distintas
generaciones (F1-F6), se detectó que la F6 es la única cuya comunidad bacteriana intestinal
no difiere significativamente de insectos Lab. F1 y F3 muestran mayor diversidad alfa y difieren
estadísticamente de insectos Lab. Finalmente, no se encontraron diferencias significativas
entre las comunidades bacterianas intestinales de machos y hembras. Se destaca la

73
dominancia del género Wolbachia en moscas de 1 día (sin alimentar) y Enterobacter a los 15
y 30 días (alimentados) independientemente del tratamiento. La domesticación de
A. fraterculus afecta su diversidad bacteriana intestinal y el perfil resultante depende de los
días y alimentación del hospedador. A partir de las diferencias encontradas entre los perfiles
microbianos de moscas Lab, Wild y en proceso de adaptación al laboratorio se planteó como
objetivo conformar un cepario con aislamientos obtenidos de dichos orígenes. Se colectaron
machos adultos de A. fraterculus de 3 orígenes diferentes; laboratorio (LL), captura silvestre
(WW) y adultos derivados de fruta de guayaba infestada (WL), es decir que emergieron de
guayaba, pero recibieron dieta de laboratorio en su estado adulto. Se realizaron las
disecciones conformando pooles de 5 intestinos, 3 réplicas por origen. Los aislamientos
bacterianos se seleccionaron según las características morfológicas de sus colonias y se
identificaron mediante Colony-PCR y la secuenciación del gen 16S rRNA. Dos aislamientos
llamados WW1.13 y LL1.14, identificados como Enterobacter, se probaron como probióticos.
Las bacterias se cultivaron en LB (cultivos W y L, respectivamente) y la mitad del volumen de
cada cultivo se sometió a autoclave (cultivos Wa y La, respectivamente). Los huevos de
A. fraterculus se transfirieron a medio larval artificial sometidos a diferentes tratamientos de
LB-probiótico añadiendo: L, La, W, Wa, y medio LB (medio sin bacterias) y un control negativo
utilizando dieta de las larvas sin medio LB (D). Variables registradas: % de eclosión de huevos,
% de pupación en el día 10 después de la siembra, % de recuperación de pupas de huevos,
peso de pupa. Obtuvimos un total de 168 aislamientos bacterianos de intestinos de LL, WW y
WL. Los géneros más representativos fueron identificados como Enterococcus sp.,
Providencia sp. y Enterobacter sp. obtenidos de WL; Kluyvera sp., Pseudomona sp.,
Klebsiella sp., Enterobacter sp. de LL; y Serratia sp., Enterococcus sp., Citrobacter sp.,
Erwinia, Pantoea sp., Kluyvera sp., Enterobacter sp en WW. Con base en los grupos
taxonómicos identificados, observamos la mayor riqueza de bacterias intestinales cultivables
en WW y la más baja en LL. El resultado del ensayo probiótico mostró una falta de diferencias
significativas entre los orígenes para todas las variables registradas. No obstante, el
porcentaje de recuperación de pupas de huevo mostró una tendencia a valores más altos en
La y W en comparación con los otros tratamientos, y al mismo tiempo exhibió un bajo % de
pupación al décimo día. Aunque no se detectaron efectos significativos, se estableció un
bioensayo probiótico consolidado.

74
Publicaciones
Salgueiro, J.; Nussenbaum. A.; Juárez, M.; Vera, M.; Bourtzis, K.; Cladera, J; Lanzavecchia,
S.; Segura, D. 2018. Cultivable gut bacteria from Anastrepha fraterculus.
10th International Symposium on Fruit Flies of Economic Importance. Tapachula,
Chiapas, México.
Salgueiro, J.; Pimper, L.; Segura, D.; Cladera, J.; Tsiamis, G.; Lanzavecchia, S. 2018. Impact
of domestication of wild Anastrepha fraterculus on the gut bacterial community.
10th International Symposium on Fruit Flies of Economic Importance. Tapachula,
Chiapas, México.
Segura, D.; Salgueiro, J.; Pimper, L.; Tsiamis, G.; Cladera, J.L.; Lanzavecchia, S. 2018.
Domesticando moscas y bacterias. Congreso Argentino de Entomología. Mendoza,
Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA-IAEA Nº 17041. Bacteria associated to Anastrepha fraterculus
(Diptera: Tephritidae): characterization and effect on sterile males sexual competitiveness.
2012-2017.
PICT 2013-0054. Estudio de interacciones entre moscas de los frutos (Tephritidae) y especies
hospedadoras, parasíticas, competidoras y simbiontes, como herramienta para desarrollar
estrategias no contaminantes de control de esta plaga de la agricultura argentina. 2015-2017.
PIP 2014-2016. Interacciones entre moscas plaga de los frutos de la familia Tephritidae y sus
especies hospedadoras, parasíticas, competidoras o simbiontes: implicancias sobre el
desarrollo de estrategias de control no contaminantes. 2015-2018.

75
Estudio genético y funcional de las bacterias intestinales de larvas de
Anastrepha fraterculus
Gut bacteria associated to Anastrepha fraterculus larvae: genetic and functional
characterization

Julieta Salgueiro1*, Silvia Beatriz Lanzavecchia1,2, Ana Laura Nussenbaum1,2 y Diego

Fernando Segura1,2
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E.A. Favret”. 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). *salgueirojuliet@[Link]

En el marco de la actividad 37691, del proyecto PNPV 1135033, se inició la

caracterización de la microbiota intestinal asociada a las larvas de Anastrepha fraterculus.
Con este objetivo, se seleccionaron 2 regiones, Concordia (ubicada al noreste) y Horco Molle
(ubicada al noroeste) junto con 2 especies frutales, durazno (Prunus persica) y guayaba
(Psidium guajava). En cada región, se muestrearon al azar 6 árboles de cada especie frutal;
y dentro de cada árbol se colectaron 5 frutas. De esta manera, la muestra contó con un total
de 120 muestras (2 regiones x 2 hospederos x 6 árboles x 5 frutas). Al concretar el muestreo
se tomó 1 fruta extra por árbol, exceptuando 3 árboles (DC4, DT4, GC3) en los que solo
tomamos 5 frutas debido a la baja cantidad de larvas encontradas. Dichas muestras extra
sumaron 20 frutos más a los mencionados 120, cerrando en un total de 140 muestras. La fruta
fue luego transportada al IGEAF, CICVyA (INTA), donde fue disecada en su totalidad. Para
cada muestra se registró el número de larvas de A. fraterculus y Ceratitis capitata, las cuales
fueron identificadas sobre la base de sus espiráculos posteriores. En todos los casos, se midió
y registró el peso y pH de cada fruto. Tomando 5 larvas de A. fraterculus por fruto, se procedió
a la disección y extracción de los intestinos larvales en condiciones de esterilidad conformando
140 muestras, cada una de 5 intestinos larvales. Sobre cada muestra, se procedió a la
extracción de ADN siguiendo métodos estándar (Baruffi con modificaciones). Tras corroborar
que la cantidad de ADN extraído superara los niveles minimos requeridos, las muestras se
enviaron a la Universidad de Patras, donde en colaboración con el Dr. George Tsiamis, se
procedió a la amplificación de las regiones variables V3 y V4 del gen 16S rRNA mediante PCR
usando los primers Miseq 341F (CCTACGGGNGGCWGCAG) y 805R
(GACTACHVGGGTATCTAATCC). Posteriormente se realizó el Indexado y una vez
conformada la library se envió a secuenciar por Illumina MiSeq.

76
Proyectos con los que se cofinanció la actividad
Proyecto INTA-IAEA Nº 17041. Bacteria associated to Anastrepha fraterculus (Diptera:
Tephritidae): characterization and effect on sterile males sexual competitiveness. 2012-2017.

77
Estudios de las señales químicas en el sitio de oviposición en el picudo
del algodonero: su efecto disuasorio de nuevas infestaciones
Chemical signals associated to the oviposition site in the cotton boll weevil: deterrent
effect to re-infestation

Ana Laura Nussenbaum1,2*, Guillermo Enrique Bachmann1,2, Patricia Fernández2,3, María

Teresa Vera2,4 y Diego Fernando Segura1,2
1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E. A. Favret”. 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). 3Instituto Nacional de Tecnología
Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Delta del Paraná. 4Universidad
Nacional de Tucumán (UNT). Facultad de Agronomía y Zootecnia. *ananussen@[Link]

El picudo del algodonero, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae),

es considerado una de las plagas más importantes del algodón en América. Los daños son
ocasionados por los adultos al alimentarse y oviponer dentro de los órganos reproductivos de
la planta produciendo un alto porcentaje de abscisión de estos y grandes pérdidas al momento
de la cosecha. En Argentina, el picudo fue hallado por primera vez en 1993 con una rápida
dispersión en las provincias de mayor producción algodonera, perjudicando principalmente a
pequeños y medianos agricultores. Estudios previos mostraron que las hembras de este
insecto oviponen preferencialmente en pimpollos no infestados, lo que sugirie la posibilidad
de que las hembras reconozcan la infestación previa. El objetivo principal de esta actividad es
estudiar compuestos químicos liberados por el picudo del algodonero que afectan su
comportamiento (semioquímicos), y pueden ser utilizados en el manejo de esta plaga. En
particular, se busca obtener compuestos que reduzcan el daño ocasionado en los pimpollos
de algodón mediante el uso de la feromona depositada por las hembras de A. grandis durante
la oviposición, ODP (del inglés oviposition deterrent pheromone). Recientemente, se avanzó
en el estudio del comportamiento de rechazo de pimpollos previamente infestados por parte
de las hembras de A. grandis siguiendo dos posibles aproximaciones. Una aproximación
directa donde se estudió la preferencia de las hembras de A. grandis hacia pimpollos sanos e
infestados en laboratorio, y una indirecta donde fueron estudiadas las distribuciones de
oviposiciones en muestras de pimpollos obtenidas en campo. Además, fueron evaluados los
costos, en término del fitness de la descendencia, asociados con múltiples oviposiciones en
los pimpollos. Los resultados obtenidos sugieren que las hembras son capaces de reconocer
pimpollos previamente infestados, rechazando esta condición para su oviposición en el
laboratorio. En los estudios de campo, se encontró que las distribuciones de las oviposiciones
en los pimpollos obtenidos del suelo mostraron un patrón uniforme, lo que sugirie que en el

78
campo se respeta este comportamiento de evitación de pimpollos con infestación previa.
Respecto a los costos asociados a oviponer en pimpollos previamente infestados, se encontró
que existe una disminución significativa del peso a mayor número de oviposiciones en un
mismo pimpollo. También se observó una tendencia a producir hembras a medida que el
número de oviposiciones, y por lo tanto la competencia, aumenta. Por último, fue estudiado el
momento en que se produce la eliminación de las larvas y se observó que en la mayoría de
los pimpollos se encontraba una sola larva del último estadio larval (larva 3), indicando que la
eliminación ocurre entre larva 1 y larva 2, antes de mudar al último estadio larval. Las
conclusiones obtenidas hasta el momento apoyan la existencia de una ODP, que
probablemente es reconocida por receptores gustativos (de contacto) o a corta distancia por
receptores olfativos, y permite a las hembras reconocer pimpollos con oviposiciones previas
y rechazar ese pimpollo como sitio de oviposición. Este comportamiento disuasivo resultaría
en un efecto positivo en el fitness de la hembra.

Publicaciones
Nussenbaum, A.L.; Devescovi, F.; Fogar, M.N.; Salerno, J.C.; Cladera, J.L.; Lecuona, R.E.;
Segura, D.F. 2018. Discrimination of infested cotton squares by females of Anthonomus
grandis. Journal of Pest Science 91 (1): 107–119.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto IAEA-INTA 19265. Fruit preference and acceptance by Anastrepha fraterculus:
baseline information to improve the implementation of SIT to control this pest. 2015-2019.

79
Bases genéticas y moleculares de la determinación del sexo en
Anastrepha fraterculus en apoyo al desarrollo e implementación de la
Técnica del Insecto Estéril
Genetic and molecular bases of sex determination of Anastrepha fraterculus in support
of the development and implementation of the Sterile Insect Technique

María Cecilia Giardini1*, Fabián Horacio Milla1, Jorge Luis Cladera1 y Silvia Beatriz
Lanzavecchia1
1Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética “E. A. Favret”.
*[Link]@[Link]

La mosca sudamericana de la fruta, Anastrepha fraterculus (Diptera: Tephritidae), es

una plaga de frutales de importancia económica en nuestro país. Se distribuye en zonas de
clima subtropical a templado afectando la producción frutihortícola de la región del NEA, NOA
y Cuyo, y región Pampeana. Actualmente solo se utilizan productos químicos para su control.
La presente línea de trabajo tuvo como objetivo general contribuir con el desarrollo de
estrategias no contaminantes para controlar esta plaga mediante herramientas citogenéticas
y moleculares. Nos propusimos realizar una caracterización profunda de los cromosomas de
esta especie con énfasis en los cromosomas sexuales, incluyendo regiones genómicas
presentes solo en machos y asociadas a los factores determinantes de la masculinidad.
También planeamos identificar características diagnósticas que distingan líneas de laboratorio
de individuos silvestres. Primeramente, realizamos un screening citogenético con el fin de
determinar la presencia de variabilidad en los cromosomas sexuales en muestras de la cría
experimental de A. fraterculus mantenida en nuestro laboratorio y poblaciones silvestres
(Tucumán, Entre Ríos, Misiones, La Rioja, Buenos Aires). Se analizaron preparados de
cromosomas mitóticos obtenidos de ganglio cerebral de larvas en estadio 3, se tiñeron con
DAPI y se observaron al microscopio (1000x). Luego del análisis de 100 preparados de
individuos de laboratorio y 20 muestras de cada población silvestre pudimos determinar la
existencia de dos variantes de cromosomas X (X1 y X2) y dos variantes de cromosomas Y (Y5
e Y6). El cromosoma X1 es submetacéntrico grande, con una banda DAPI+/CMA- en los
extremos de ambos brazos. La variante X2 es aproximadamente un 25 % mayor que la
variante 1, debido a la presencia de un satélite en el extremo del brazo corto; este satélite
presenta una tinción positiva con DAPI y negativa con cromomicina A3. Además, esta variante,
retiene la banda positiva de DAPI en el extremo proximal del cromosoma, sin observarse la
del extremo distal. El cromosoma Y5 es metacéntrico y es el cromosoma de menor tamaño

80
descripto hasta el momento, con bandas DAPI+/CMA+ en cada uno de sus extremos. Por
último, la variante Y6 es submetacéntrica, de mayor tamaño, y presenta una banda
DAPI+/CMA- en el extremo proximal. La configuración de cromosomas sexuales más
comúnmente encontrada en las poblaciones argentinas es X1Y5 (95 % en poblaciones
silvestres; 75 % en la cepa de laboratorio); no se detectaron combinaciones X 2X2 ni X2Y6. En
función de estos resultados se decidió obtener líneas de A. fraterculus portadoras de la
configuración observada en alta frecuencia X1Y5 para estudios posteriores, relacionados con
regiones genómicas asociadas al cromosoma Y, y otras portadoras de las variantes poco
frecuentes X2 e Y6 para estudiar su viabilidad y parámetros biológicos. A partir de la línea X1Y5
se realizaron extracciones de ADN total de machos y hembras (pooles de 5 individuos) y se
analizaron los patrones de bandas mediante la técnica de AFLP (Amplified Fragment Lengh
Polymorphism) en busca de bandas exclusivas de machos. Para ello se utilizaron
2 combinaciones de enzimas, EcoRI-MseI y PstI-MseI y 10 combinaciones de
oligonucleótidos. Se identificaron un promedio de 18 fragmentos amplificados/combinación de
tamaños desde 100 a 400 pb. Se obtuvo un total de 181 bandas nítidas, claras y reproducibles
con un 77 % correspondiente a fragmentos polimórficos, sin embargo, ningún polimorfismo
estuvo relacionado con el sexo. Estos resultados evidencian la dificultad que presentan las
regiones específicas del cromosoma Y para poder ser amplificadas mediante este tipo de
tecnologías posiblemente por la amplitud de las regiones y por su naturaleza altamente
heterocromatínica. Alternativamente al método molecular se pusieron a punto las técnicas de
GISH (Genomic in situ Hibridization) y de CGH (Comparative Genomic Hibridization) para
analizar la naturaleza de las diferencias existentes en los cromosomas sexuales de
A. fraterculus. Estas técnicas de hibridación in situ permitieron obtener las primeras evidencias
de localización de regiones compartidas entre los cromosomas X e Y como así también
delimitar regiones exclusivas del cromosoma Y. Estos estudios se realizaron utilizando
preparados de individuos portadores de las configuraciones más frecuentes (X 1Y5/X1X1),
posteriormente la misma técnica se utilizará en individuos portadores de las configuraciones
X1Y6 y X1X2 para continuar profundizando los conocimientos y realizar hipótesis sobre el origen
y la evolución de los cromosomas sexuales de la especie. En forma paralela a estas técnicas
actualmente se esta trabajando en la puesta a punto la técnica de microdisección para obtener
secuencias específicas del cromosoma Y. Esta técnica involucra la disección de cromosomas
Y completos a partir de preparados de cromosomas mitóticos y luego su amplificación
mediante DOP PCR. Este material será posteriormente usado para técnicas citogenéticas de
hibridación in situ como así también para ser secuenciado. Para continuar con esta actividad
se presentó un proyecto de intercambio binacional (Alemania-Argentina) y una beca con un

81
grupo referente en citogenética molecular. Las actividades desarrolladas forman parte de una
tesis doctoral y constituyen una línea de investigación de importancia para el grupo de trabajo.
Consideramos que los resultados obtenidos hasta el momento representan aportes valiosos
sobre aspectos genéticos y citogenéticos de esta plaga de importancia económica para
nuestro país y generan herramientas potencialmente útiles para el desarrollo de cepas de
laboratorio de referencia para la implementación de la Técnica del Insecto Estéril (TIE) en
apoyo a medidas desarrolladas por el PROCEM (Programa Nacional de Control y Erradicación
de moscas de la fruta) SENASA en las regiones del territorio más afectas por esta especie
plaga.

Publicaciones:
Cladera, J.L.; Vilardi, J.; Juri, M.; Paulin, L.; Giardini, M.; Gómez Cendra, P.; Segura, D.;
Lanzavecchia, S.B. 2014. Genetics and biology of Anastrepha fraterculus: research
supporting the use of the sterile insect technique (SIT) to control this pest in Argentina.
BMC Genetics 15 (Suppl 2):S12.
Giardini, M.C.; Milla, F.H.; Lanzavecchia, S.; Nieves, M.; Cladera, J.L. 2015. Sex
chromosomes in mitotic and polytene tissues of Anastrepha fraterculus (Diptera,
Tephritidae) from Argentina: a review. Zookeys 540: 83-94.
Giardini, M.; Gariou-Papalexiou, A.; Augustinos, A.; Drosopoulou, E.; Lanzavecchia, S.;
Cladera, J.; Caceres, C.; Bourtzis, K.; Mavragani-Tsipidou, P.; Zacharopoulou, A. 2016.
Cytogenetic Analysis of the South American Fruit Fly Anastrepha fraterculus (Diptera:
Tephritidae) Species Complex: Construction of Detailed Photographic Polytene
Chromosome Maps of the Argentinian Af. sp.1 Member. PlosONE 11(6): e0157192.
doi:10.1371
Giardini, M.C.; Milla, F.H.; Nieves, M.; Cladera, J.L.; Lanzavecchia, S.B. 2016. Cytogenetic
characterization of sexual chromosomes in the Y-short Anastrepha fraterculus strain.
21st ICC (International Chromosome Conference), 10-13 de julio de 2016. Foz de Iguazú,
Brasil.
Giardini, C. 2016. Anastrepha fraterculus cytogenetics. (Comunicación Oral). 9TWWH 9.ª
Reunión del Grupo de Trabajo en Moscas de la Fruta del Hemisferio Occidental, 16-21
de octubre de 2016. Buenos Aires, Argentina.
Giardini, C.; Gariou-Papalexiou, A.; Augustinos, A.; Drosopoulou, E.; Lanzavecchia, S.;
Cladera, J.; Caceres, C.; Bourtzis, K.; Mavragani-Tsipidou, P.; Zacharopoulou, A. 2016.
Contribution of cytogenetics to phylogenetic relationships inference among closely
related taxa: the cytogenetic analysis of the Argentinian Af. sp.1 member of the

82
 Anastrepha fraterculus complex. 9TWWH. 9ª Reunión del Grupo de Trabajo en Moscas
de la Fruta del Hemisferio Occidental, 16-21 de octubre de 2016. Buenos Aires,
Argentina.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA-IAEA Nº 18822. Evaluation of genetic and biotechnological tools for the
development of an Anastrepha fraterculus sexing strain in Argentina. 2015-2020.
PICT 2012-0704. Desarrollo y aplicación de marcadores moleculares hiper- variables en
apoyo a la implementación de la TIE para la mosca sudamericana de la fruta, Anastrepha
fraterculus, en Argentina. 2014-2016.

83
Efecto de rayos X sobre el cariotipo y el esperma de Tuta absoluta
(Lepidoptera: Gelechiidae)
The effect of X-rays on the karyotype and sperm of Tuta absoluta (Lepidoptera:
Gelechiidae)

Leonela Carabajal Paladino1, Cynthia Lorena Cagnotti2 y Silvia Noemí López2*

1Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética. 2Instituto Nacional de
Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola. (IMyZA).
*[Link]@[Link]

La polilla del tomate, Tuta absoluta (Meyrick 1917) (Lepidoptera:Gelechiidae), es una

plaga originaria de Sudamérica. Se encuentra distribuida en la mayor parte de las zonas
productoras de tomate (Solanum lycopersicum Linnaeus) del mundo causando importantes
daños. Dentro de los métodos utilizados para el control de plagas, se encuentra la técnica del
insecto estéril que utiliza radiaciones ionizantes. Una variación de esta es la esterilidad
heredada (EH). Con el objeto de desarrollar esta técnica es indispensable entender su
genética y su biología.
En esta actividad se analizó el cariotipo y el tipo de cambios cromosómicos provocados
por la irradiación de los individuos en el estado de pupa. Asimismo, y dado que los machos
de lepidópteros producen dos tipos diferentes de esperma (paraespermatozoides apirenos y
euespermatozoides) se analizó la morfología espermática y la proporción de esperma en
individuos salvajes e irradiados con rayos X. Finalmente se estudió la morfología del esperma
eupireno en la bursa copulatrix de hembras apareadas con machos irradiados y no irradiados.
El número cromosómico diploide de T. absoluta es 2n = 58, incluyendo el par de cromosomas
sexuales: ZZ en machos y WZ en hembras, que constituyen los elementos de mayor tamaño
en el complemento. La irradiación de pupas en un irradiador de rayos X con una dosis de 200
Gy generó diferentes reordenamientos cromosómicos incluyendo translocaciones y
fragmentaciones, resultando en alteraciones en el número cromosómico. El análisis de los
paquetes de espermatozoides de T. absoluta reveló un marcado polimorfismo entre los
paquetes de esperma apireno y eupireno. La irradiación de los individuos con dosis de 100,
150, 200 y 250 Gy no tuvo un efecto significativo sobre la proporción de esperma
apireno:eupireno. Sin embargo, los machos irradiados con 300 Gy produjeron una cantidad
significativamente mayor de espermatozoides apirenos que los no irradiados. Todas las dosis
de radiación provocaron deformaciones en la morfología de los paquetes de esperma
eupireno. Estos paquetes deformes podrían ser utilizados como bioindicadores durante el

84
proceso de monitoreo llevado a cabo en los programas de EH luego de la liberación de
machos irradiados. Los espermatozoides eupirenos deformes fueron transferidos a las bursae
copulatrices de las hembras durante la cópula. Los machos tratados con 200 Gy transfirieron
a las hembras con las que copularon una cantidad mayor de espermatozoides deformes que
los individuos no irradiados. Estos resultados explicarían la disminución de la fertilidad
observada en estudios previos en hembras de la polilla cruzadas con machos irradiados con
200 Gy.
Los resultados aquí presentados proveen información esencial sobre la citología de
T. absoluta, la cual es necesaria para evaluar la calidad de los insectos liberados y para un
mejor entendimiento y aplicación de EH contra esta especie de importancia económica
mundial.

Publicaciones
Carabajal Paladino, L.Z.; Ferrari, M.E.; Lauría, J.P.; Cagnotti, C.L.; López, S.N. 2016. Impact
of X-rays on cytological traits of Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae). Florida
Entomologist. 99: 43-53.
Lauría, J.P.; Carabajal Paladino, L.Z.; Cagnotti, C.; Cladera, J.L.; López, S.N. 2013. Análisis
del esperma eupireno transferido por Tuta absoluta (Lepidoptera) durante la cópula. XLII
Congreso Argentino de Genética, III Reunión Regional SAG-NOA, 20-23 de octubre de
2013. Salta, Argentina.
Cagnotti, C.L.; Carabajal, L.Z.; López, S.N. 2014. Development of the sterile insect technique
to control the tomato moth Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae). Final Research
Coordination Meeting on Increasing the Efficiency of Lepidoptera SIT by Enhanced
Quality Control. IAEA (International Atomic Energy Agency). 02-07 de junio de 2016.
Kelowna, Canadá.

Proyectos con los que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA-IAEA Nº 16332. Development of the Sterile Insect Technique to control the
tomato moth, Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) (financiado por la Agencia
Internacional de Energía Atómica). 2010-2014.

85
Efecto de la radiación gamma sobre parámetros biológicos de la polilla
del tomate Tuta absoluta
Effect of gamma radiation on biological parameters of the tomato moth Tuta absoluta

María Verónica Yusef 1*, Silvia Noemi López 2, Severino Carlos Michelin3, Herlinda Luciana
Britos1 y Antonio Solis1
1Comisión Nacional de Energía Atómica (CNEA). Laboratorio de Control de plagas. 2Instituto Nacional
de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola (IMyZA).
3Autoridad Regulatoria Nuclear (ARN). Laboratorio de Radiopatología. *mvyusef@[Link]

La polilla del tomate, Tuta absoluta (Meyrick 1917) (Lepidoptera: Gelechiidae), es una
plaga originaria de Sudamérica. Se encuentra distribuida en la mayor parte de las zonas
productoras de tomate (Solanum lycopersicum Linnaeus) del mundo causando importantes
daños. Dentro de los métodos utilizados para el control de plagas, se encuentra la técnica del
insecto estéril que utiliza radiaciones ionizantes. Una variación de esta es la esterilidad
heredada. Los machos de lepidópteros producen dos tipos diferentes de esperma,
paraespermatozoides apirenos y euespermatozoides. El objetivo del trabajo fue primeramente
establecer la cría de T. absoluta para realizar los bioensayos. Posteriormente establecer el
tipo y frecuencia de las alteraciones morfológicas del esperma de machos irradiados con rayos
gamma en estado de pupa y de su descendencia F1 y finalmente poner a punto el
acondicionamiento del material para su irradiación como adulto.
Se comenzó la cría de T. absoluta con ejemplares provenientes del Insectario de
Investigaciones para Lucha Biológica del INTA Castelar en las instalaciones de la CNEA con
el fin de obtener pupas para realizar los diferentes bioensayos. Se analizaron el tipo y
frecuencia de alteraciones morfológicas en los paquetes de esperma eupireno en individuos
machos de la generación Fo, irradiados en el estado de pupa madura con 130 Gy (dosis que
induce esterilidad heredada determinada en trabajos anteriores) y en no irradiados, como
controles. Luego de la irradiación de las pupas y una vez emergidos los adultos, bajo
estereomicroscopio se realizó la extracción y disgregación de los testículos. Se analizó la
morfología de los paquetes de esperma eupireno. Como control positivo de alteraciones
morfológicas se utilizaron pupas irradiadas con 180 Gy. También se determinó el tipo y
frecuencia de las alteraciones morfológicas inducidas en los euespermatozoides individuales
en machos de la generación Fo, irradiados con 130 Gy en estado de pupa. Se utilizaron pupas
irradiadas con 180 Gy como control positivo de alteración y no irradiados como controles. Una
vez emergidos los adultos se realizó la extracción y disgregación de los testículos y de los

86
paquetes. El preparado se tiñó con el colorante fluorescente DAPI y se observó la morfología
del esperma con microscopio de epifluorescencia. Se realizaron los estudios de transferencia
de esperma de individuos machos irradiados. Para ello se irradiaron pupas masculinas con
dosis de 0, 130 y 180 Gy y se cruzaron con hembras sin irradiar. Las parejas copulando fueron
interrumpidas a 1,5 horas y se colocaron, aún unidas, en microtubos tipo Eppendorf de 1,5 ml
en freezer a -20 °C para su preservación. Posteriormente se realizaron ensayos sobre
individuos F1 descendientes de machos F0 irradiados como pupas con dosis de 0 y 130 Gy,
cruzados con hembras sin irradiar siguiendo la metodología descripta anteriormente para los
individuos F0.
Para mejorar la eficiencia en la obtención de insectos para ser utilizados en la técnica
del insecto estéril se esta llevando a cabo la puesta a punto para el acondicionamiento de
adultos fríos para su posterior irradiación. Para ello pupas de T. absoluta separadas por sexo
se acondicionan en bandejas plásticas y se colocaron en condiciones controladas de T: 24±1
°C, HR: 60±1 % y 14:10 (L:O) hasta la emergencia de los adultos. Posteriormente se enfrían
y se irradian con 150 Gy y tasa de dosis de 34 Gy/min en la Planta de Irradiación Semi
Industrial (PISI) del Centro Atómico Ezeiza (CAE), con una fuente de cobalto 60 (60 Co),
utilizando dosímetros de alanina. Se observó en los individuos irradiados F0 y en su
descendencia F1, una notoria desorganización de los núcleos del esperma, un aumento en la
proporción de euespermatozoides anormales siendo mayor en los irradiados con mayor dosis
respecto del control. Con respecto a la transferencia de esperma se observó que los individuos
irradiados transfieren menos esperma eupireno que los controles sin irradiar. Considerando
los resultados obtenidos en los ensayos, la identificación de paquetes eupireno deformes
podría ser utilizada para monitorear la presencia de machos irradiados ulteriormente a la
liberación en el campo y evaluar la efectividad de la EH para esta plaga.

Publicaciones
Yusef, M.V.; Viscarret, M.M.; Michelin, S.C.; Britos, H.L.; Solis, A.; Pawlak, S.E.; López, S.N.
2014. Determinación del rango de dosis de radiación gamma para generar esterilidad
heredada en la polilla del tomate Tuta absoluta (Meyrick, 1917) (Lepidoptera:
Gelechiidae). XL Reunión Anual de la Asociación Argentina de Tecnología Nuclear
(AATN), 01-05 de diciembre de 2014. Buenos Aires, Argentina.
Yusef, M.V.; Viscarret, M.; Michelin, S.C.; Britos, H.L.; Solís, A.; Pawlak, S.E.; López, S.N.
2015. Generación de Esterilidad Heredada en la polilla del tomate Tuta absoluta
(Meyrick 1917) (Lepidoptera: Gelechiidae) utilizando radiación gamma. IX Congreso
Argentino de Entomología, 19-22 de mayo de 2015. Posadas, Misiones, Argentina.

87
Yusef, M.V.; López, S.N.; Michelin, S.C.; Britos, H.L.; Solis, A.; Pawlak, S.E.; Malter Terrada,
M. 2015. Alteraciones morfológicas en paquetes de esperma eupireno en la polilla del
tomate Tuta absoluta (Meyrick, 1917) (Lepidoptera: Gelechiidae) por efecto de la
radiación gamma. XLII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Tecnología Nuclear
(AATN), 30 de noviembre al 4 de diciembre de 2015. Buenos aires, Argentina.
Yusef, M. V., Viscarret, M., López, S.N., Michelin, S., Britos, H., Solis, A., Pawlak, E. and M.
Malter Terrada. 2017. Gamma Radiation Dose to Generate Inherited Sterility in Tomato
Leaf Miner Tuta absoluta (Meyrick, 1917) (Lepidoptera: Gelechiidae). Third FAO–IAEA
International Conference on Area-wide Management of Insect Pests: Integrating the
Sterile Insect and Related Nuclear and Other Techniques, 22-26 de mayo de 2017.
Viena, Austria.
Yusef, M.V.; López, S.N.; Michelin, S.C.; Britos, H.L.; Solis, A.; Malter Terrada, M.; Pawlak,
E.S. 2018. Efecto de la Radiación Gamma sobre la Morfología de los
Euespermatozoides de Machos de la Polilla del Tomate Tuta absoluta (Meyrick, 1917)
(Lepidoptera: Gelechiidae). X Congreso Argentino de Entomología, 21-24 de mayo de
2018. Mendoza, Mendoza, Argentina.

Proyecto con el que se cofinanció la actividad

Proyecto INTA-IAEA Nº 16332. Development of the Sterile Insect Technique to control the
tomato moth, Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) (financiado por la Agencia
Internacional de Energía Atómica). 2010-2014.

88