OPTIMIZACIÓN Y VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO DE LA GATIFLOXACINA Y

DEXAMETASONA EN SOLUCIÓN OFTÁLMICA POR HPLC Commented [CC1]: Incluir HPLC

La caratula debe ir por delante

1. ÍNDICE GENERAL

1. ÍNDICE GENERAL.......................................................................................................................... 1
2. INTRODUCCION ........................................................................................................................... 3
3. JUSTIFICACIÓN............................................................................................................................. 3
4. OBJETIVO ..................................................................................................................................... 3
4.1. Objetivo general ..................................................................................................................... 3
4.2. Objetivos específicos ............................................................................................................... 3
5. FUNDAMENTO TEÓRICO ............................................................................................................. 3
7. APLICACIÓN DE LA VALIDACIÓN EN CONTROL DE CALIDAD ..................................................... 15
8. MATERIALES Y MÉTODOS.......................................................................................................... 17
8.1.1. Materiales ......................................................................................................................... 17
8.1.2. Reactivos ........................................................................................................................... 17
8.1.3. Equipos .............................................................................................................................. 18
[Link]. Cromatogratografo liquido HPLC .................................................................................. 18
[Link]. Balanza .......................................................................................................................... 18
[Link]. Instrumentos. ................................................................................................................ 18
[Link]. Columna. ....................................................................................................................... 18
[Link]. Estándar de trabajo ....................................................................................................... 18
[Link]. Excipientes..................................................................................................................... 18
8.1.4. Preparación de soluciones de trabajo ............................................................................... 18
[Link]. Preparación de fase móvil cromatográfica ................................................................... 18
[Link]. Preparación del diluyente ............................................................................................. 19
[Link]. Preparación de la matriz ............................................................................................... 19
[Link]. Preparación de soluciones estándar combinado .......................................................... 19
[Link]. Preparación de soluciones analito combinado y matriz incluida. ................................. 19
[Link]. Preparación de solución de matriz................................................................................ 20
[Link]. Preparacion de soluciones de analito combinado y matriz incluida a diferentes niveles
de preparación .................................................................................................................................. 20
9. Validación del método analítico................................................................................................ 20
9.1.1. Idoneidad del sistema ....................................................................................................... 21
9.1.2. Selectividad ....................................................................................................................... 21
9.1.3. Linealidad .......................................................................................................................... 21
9.1.4. Precisión ............................................................................................................................ 22
[Link]. Repetibilidad del Método.............................................................................................. 22
[Link]. Precisión Intermedia ..................................................................................................... 22
9.1.5. Exactitud............................................................................................................................ 22
9.1.6. Estabilidad de la muestra .................................................................................................. 23
10. RESULTADOS ......................................................................................................................... 23
10.1. Requisitos de aptitud ........................................................................................................ 23
10.1.1. Selectividad - Gatifloxacina ........................................................................................... 2423
10.1.2. Selectividad - Dexametasona ............................................................................................ 24
10.1.3. Linealidad – Gatifloxacina ................................................................................................. 25
10.1.4. Linealidad – Dexamentasona ............................................................................................ 26
10.1.5. Precisión – Gatifloxacina ................................................................................................... 27
10.1.6. Precisión – Dexametasona ................................................................................................ 27
10.1.7. Exactitud – Gatifloxacina ................................................................................................... 28
10.1.8. Exactitud – Dexametasona ................................................................................................ 28
11. Conclusión ............................................................................................................................. 29
12. Recomendaciones ................................................................................................................. 29
13. Bibliografía ............................................................................................................................ 29
17. Anexos ............................................................................................................................... 3029
2. INTRODUCCION Commented [CC2]: Un Glosario de términos técnicos es muy
necesario
El departamento de desarrollo se encarga de la formulación de nuevos productos, entre estos se
encuentra una nueva combinación de dos principios activos; Gatifloxacina (antibiótico quinolonico)
y Dexametasona (corticoide), por lo tanto, es de vital importancia un método analítico de
cuantificación para ambos principios activos, asegurando la calidad del producto. La necesidad
reside en un método unificado para la cuantificación más óptima e idónea recurriendo así un
análisis cromatógrafo por medio del HPLC. Commented [CC3]:
Pueden empezar por las características de estos principios activos
3. JUSTIFICACIÓN tanto en el contexto, internacional, regional y nacional

Al realizar la búsqueda de nuevas referencias bibliográficas para resolver dicha problemática se Mejorar redacción y sustentar más

inicia en una referencia oficial, “Farmacopea de los estados unidos USP-40 NF-35”, para el cual existe Para que sirve su aplicación
la monografía indicada para cuantificación de Dexametasona sodio fosfato en solución oftálmica.

Debido que la combinación descrita no se encuentra como metodología oficial, debe realizarse la
optimización y su posterior validación del método analítico establecido así en la normativa de
Buenas prácticas de laboratorio.

La optimización del método y su pronta validación, requieren conocimientos sobre cromatografía,

en el cual las bases de separación, métodos de cuantificación, etc., se basan en referencias
bibliográficas generales como “Introducción a la HPLC”. (Quattrochi, Andrizzi, & Laba, 1992)

Estableciendo asiasí la necesidad de la validacionvalidación del método analítico para la

cuantificacioncuantificación de Gatifloxacina y Dexametasona en una solución oftálmica. Commented [CC4]: Mejorar redacción:

4. OBJETIVO Por ejemplo donde se desea desarrollar dicha método?

4.1. Objetivo general ¿Cuál es el contexto nacional en su necesidad de implementación

fuera de la validación del método?
 Optimizar y validar el método analítico de la Gatifloxacina y Dexametasona en solución
oftálmica por HPLC.
4.2. Objetivos específicos
 Disminuir el tiempo de retención de la Dexametasona fosfato de sodio partiendo de la
metodología farmacopeica USP-40 NF-35 solución oftálmica
 Incorporar en un mismo método analítico la cuantificación de ambos analitos.
 Verificar la existencia significativa de la interferencia de la matriz del producto.
 Validar la metodología de Gatifloxacina y Dexametasona con todos los parámetros de
fiabiliadad. Commented [CC5]: Los objetivos específicos están redactados
como actividades y no como “objetivos”
5. FUNDAMENTO TEÓRICO CORREGIR TODOS

5.1. Solución oftálmica

La solución oftálmica son preparaciones estériles libres de partículas extrañas los cuales contienen
uno o más fármacos activos y disueltos en agua, cuya finalidad es la aplicación tópica en los ojos y
no irritantes a la córnea. La superficie ocular está formada por diferentes estructuras oculares como
ser:
• La conjuntiva

• La cornea

• La película lagrimal

Las patologías y afecciones que tiene lugar en la superficie del ojo van asociadas en muchos casos
con inflamación de la córnea o la conjuntiva que debe de tratarse para la disminución de dolor,
inflamación y que no afecten a la visión. Commented [CC6]: Fuentes?

Es importante considerar la toxicidad del fármaco, la elección de los agentes amortiguadores y

conservadores la esterilización y el envase apropiado. De esta manera las soluciones oftálmicas Commented [CC7]: COOREGIR REDACCIÓN
deben ser isotónicas, estériles y de preferencia tener un pH cercano al líquido lagrimal, que es de
7.0 – 7.4 Commented [CC8]: FUENTES?

La solución oftálmica de consistencia en gotas para los ojos como ser: la Dexametasona y la
Gatiflaxacina puede ser usada para reducir el enrojecimiento, ardor, e inflamación.

La Dexametasona, que es un potente glucocorticoide sintético con acciones que se asemejan a las
de las hormonas esteroides. Este actúa como antiinflamatorio e inmunosupresor el cual alivia la
inflamación (hinchazón, calor, enrojecimiento y dolor).

Indicaciones terapéuticas de la Dexametasona, este disminuye la irritación, enrojecimiento, ardor

y la inflamación en los ojos, todos síntomas provocados por productos químicos, calor, radiación,
infecciones, alergias, o cuerpos extraños en los ojos, en ocasiones es utilizada después de una cirugía
en los ojos.

La Gatifloxacina, es un antibiótico sintético del grupo de las quinolonas de tercera generación

indicado para el tratamiento de infecciones de microrganismos causadas por bacterias.

La solución oftálmica gatifloxacina indicada para el tratamiento de la conjuntivitis bacteriana.

Debido a su amplio espectro antibacteriano, las fluoroquinolonas oftálmicas son ampliamente
utilizadas para tratar la queratitis bacteriana y minimizar el riesgo de endoftalmitis postoperatoria. Commented [CC9]: NO EXISTE UNA REDACCIÓN CLARA Y QUE
MUESTRE UNA CRONOLOGÍA DE EXPLICACION
Fuente: (Intercambiables, 2007)
CADA PARRAFO DEBE TENER FUENTE, NUNCA SE COLOCA AL FINAL
5.2. Información Fisicoquímica DE??
5.2.1. Dexametasona Fosfato de Sodio
Commented [CC10]: NO PUEDEN EMPEZAR UN SUBTITULO
CON UNA FIGURA EMPEZAR SIEMPRE CON TEXTO MENCIONANDO
LA FIGURA

NOMBRE DE LA FIGURA
FUENTE?
Peso molecular: 516.40 g/mol

Acción terapéutica: Antiinflamatorio corticosteroide

Características Organolépticas:

Aspecto Polvo cristalino

Color Blanco a casi blanco
Olor Inodoro
Sabor Característico
Solubilidad:

Soluble Agua, Hidróxido de sodio

Poco Soluble Cloruro de metileno
Insoluble Etanol, ácido clorhídrico

Punto de fusión: 233-235ºC

pH a 25ºC : 7,99
Higroscopicidad: Muy higroscópico

5.2.2. Gatifloxacina sesquihidratada

.6H2O

Peso molecular: 483.394 g/mol

Acción terapéutica: antibiótico

Características Organolépticas:

Aspecto Polvo cristalino

Color Blanco a amarillo claro
Olor Inodoro
Sabor amargo
Solubilidad:

Soluble Hidróxido de sodio 0.1N

Poco Soluble Metanol, ácido clorhídrico 0.1N
y agua
Insoluble Cloruro de metileno y acetona

Punto de fusión : 183.5ºC

 Punto de ebullición : 607ºC
Densidad : 1.386 c/cc
pH a 25ºC : 6.5-8.5
Higroscopicidad : Higroscopicidad moderada Commented [CC11]: ELABORAR TABLAS CON NUMERACION Y
TITULOS INCLUYENDO FUENTES
5.2.3. Edetato Di sodico Y CADA TABLA DEBE TENER TEXTO NO PUEDEN QUEDAR
“SUELTAS” SIN MENCIONARSE EN EL TEXTO.
SUSTANCIA INCOPATIBILIDAD CONCENTRACION ESTRUCTURA
DE USO % Commented [CC12]: Agregar texto en la tabla y fuentes
Hialuronato de Sn incompatibilidades variable
REDACCION REVISAR
sodio

Edetato disodico Se comporta como un

ácido débil,
desplazando el
hidróxido de carbona
a partir de carbonatos 0.005-0.1
y reacciona con
metales para formar
hidrogeno. Es
incompatible con
agentes oxidantes
fuertes, bases fuertes,
iones metálicos y
aleaciones de
metales.
Ácido bórico Forma complejos
quelantes solubles
con di y trivalentes
iones metálicos en
condiciones alcalinas y
acidas; al mezclar Variable
vigorosamente con
polietienglicol forma
geles solubles en
agua, también
reaccionan con el
óxido de hierro y se
decolora. Aumenta la
velocidad de
degradación de
penicilinas en
soluciones neutras y
soluciones acuosas.
Borato de sodio Es incompatible con 0.03-1
sales alcaloides
 Glicerina La glicerina puede
explotar si se mezcla
con agentes fuertes
tales como trióxido de
cromo, clorato de ≤30
potasio o
permanganato de
potasio. El color negro
de la glicerina ocurre
en presencia de luz, o
en contacto con oxido
de cinc o nitrato de
bismuto básico
Cloruro de sodio Agentes oxidantes
fuertes. Soluciones < 0.9
acuosas de cloruro de NaCl
sodio son corrosivas
para hierro y
reaccionan con plata,
plomo y mercurio.
Disminuye la
viscosiddviscosidad de
carbomero y
soluciones de
hidroxietilcelulosa o
hidroxipropilcelulosa
Agua para El gu puede Formatted: Highlight
inyeccioninyección reaccionar
vilentamente con los
metales alcalinos y sus variable
oxidos, como el oxido
cálcico y magnesio.
Tambien raccionan
con sales anhidras
para formar hidratos
de carias
composiciones

5.3. CROMATOGRAFÍA:

La cromatografía es un método, usado primariamente para la separación de los componentes de

una muestra, en la cual los componentes se distribuyen en dos fases, una de las cuales es
estacionaria, mientras la otra se mueve. La fase estacionaria puede ser un sólido, un líquido retenido
sobre un sólido o un gel. La fase estacionaria puede estar extendida como una capa o distribuida
como una película, etc.
Los componentes que tienen mayor afinidad por la fase estacionaria son más retenidos en el sistema
que aquellos que son distribuídos en la fase móvil. Commented [CC13]: VER COMENTARIO ARRIBA SOBRE
FUENTES
(Quattrochi, Andrizzi, & Laba, 1992)
REVISAR REDACCION
Por tanto la modalidad de cromatográfica empleada en el presente trabajo es cromatografía
líquida de alta performance (HPLC) correspondiente a la cromatografía liquido-solido (LSC) de fase Commented [CC14]: ESPAÑOL
reversa donde :

a) LA FASE ESTACIONARIA: Es solida de naturaliza apolar (COLUMNA C18 es de silicagel con

una cubierta por d 18 átomos de carbono forma de relleno) este por un mecanismos de
retencion por adsorcion separa a los analitos Gatifloxacina y Dexametasona fosfato en
funcion a la polaridad de los mismos.

b) LA FASE MOVIL: Es mezcla liquida de solventes polares constituída por :

 SOLUCION BUFFER 40% (1,36g de fosfato monobásico de potasio solubilizados
en 400 mL de agua ultrapurificada) actuando como currier y mejora la asimetria
de los picos de los analitos Gatifloxacina y Dexamentasona.
 MODIFICADOR ORGÂNICO: METANOL 60% ayuda a mejorar la selectividad .

La proporcion selecionada se debe a que el modificador orgânico mejora acortando el

tiempo de retencion de los analitos Gatifloxacina y mas que todo a la Dexametasona fosfato
debido a que la fuerza de elucion del metanol arrastra a la dexametasona que es de alta
polaridade .

c) Los SOLUTOS son los analitos Gatifloxacina y Dexametasona que seran separados y
retenidos segun su polaridad :
 Gatifloxacina: sera el primero en eluir con la fase movil mediante una reaccion de
puentes de hidrogeno formada por el agua y moléculas de oxigeno presente en la
estrutura siendo corto el tiempo de retencion del analito.
 Dexametasona: la alta apolaridad le da el anillo alifatico logrando ser retenido en la
fese estacionaria con un mayor tiempo por fuerzas de vander waals teniendo um
 mayor tiempo de retencion con la fase estacionaria . Commented [CC15]: LA REDACCION NO ES CORRECTA

POR FAVOR NO COPIAR TEXTOS SE DEBE REDACTAR INCLUYENDO

FUENTES

5.4. INSTRUMENTACION: Commented [CC16]: TITULO DE LA FIGURA

El notorio avance que la cromatografia liquida moderna ha experimentado en los ultimos años , en FUENTE

especial en lo referente al desarrollo de nuevas fases estacionarias, ha permitido al analista acceder TEXTO QUE HAGA REFERENCIA A LA FIGURA
a un nivel instrumental de alta precision, compuesto por bombas que permiten entregar( en un solo
instrumento) caudales muy estables que varian entre el microlitro y varios mililitros, detectores con
celdas intercambiables en las cuales el volumen puede escogerse, generalmente, entre 1 y 12µL,
valvulas accionadas por microprocesadores que permiten direccionar la fase movil para automatizar
procesos, integradores versatiles conectados a una computadora que puede permitir no solo el
contrl global de uno o mas equipos cromatograficos sino la libre manipulacion y almacenamito de
datos, generacion de reportes e incluso el desarrollo automatico de metodos.

(Quattrochi, Andrizzi, & Laba, 1992) Commented [CC17]: Fuente después de terminar el parrafo

DESCRIPCION:

En el presente trabajo se utilizo para la parte experimental el equipo HPLC JASCO AUTOMATICO LC-
4000, ¿??? el cual esta compuesto por una amplia gama de modulos los cuales son: Commented [CC18]: procedencia
 Commented [CC19]: Tiitulo de la figura, deben estar
enumeradas y con fuente mencionándose el número de Fig. en el
texto

Donde el funcionamiento y conexión a cada módulo es la siguiente, por acción de una bomba, se
hace pasar una mezcla de compuestos o analitos en un sistema disolvente comúnmente conocido
como fase móvil. La fase móvil pasa a través de una columna cromatográfica, que contiene la fase
estacionaria a un flujo especificado. La separación de los compuestos ocurre en base a la interacción
de éstos con la fase móvil y la fase estacionaria.
 Commented [CC20]: Igual que el anterior caso, la figura debe
mencionarse en el texto y con título, fuente y demás.

PARTES HPLC JASCO AUTOMATICO LC- 4000 :

a) RESERVORIO DE LA FASE MOVIL: Que suelen ser botellas de vidrio y tubos de teflón
provistos de aditamentos indispensables para eliminar los gases disueltos y partículas que
pudiera tener la fase móvil. El reservorio se encuentra en la CABINA DEL DISOLVENTE.
b) BOMBA: HPLC JASCO AUTOMATICO LC- 4000 serie PU-4180 ofrecen precisión de caudal
con RSD de mejor que 0.05% (difícil lograr con comercialmente disponible zapatillas). Las
bombas PU-4180 operar a presiones de hasta 70 MPa, diseñado principalmente para su uso
con RHPLC para columnas core-shell o micro similar materiales de embalaje, así como de
trabajo a presiones comúnmente usadas para HPLC convencional. Las bombas analíticas
PU-4180 puede configurarse tanto para gradiente simple de bomba como para múltiple
operación de gradiente de la bomba. La única bomba cuaternaria El módulo de gradiente
ofrece una excelente formación de gradiente para hasta cuatro solventes. La válvula de
disolvente de 4 vías recientemente diseñada para el cambio de los cuatro solventes se
sincroniza con la operación del control del motor de la bomba - adaptación de ciclo variable
optimiza la entrega según la resolución del gradiente y el flujo tarifa. Este modo de gradiente
cuaternario altamente eficiente puede se aplicará a un amplio rango de velocidad de flujo
de flujo bajo a alto tasas. Dos y tres módulos de gradiente binario o ternario de bomba con
desgasificador integrado opcional disponible para ciclo rápido formación de gradiente de
alta resolución; el tiempo de respuesta es superior al sistema de gradiente cuaternario de
una sola bomba.
 Mezcla de solventes: La mezcla de gradiente multi-bomba se realiza usando una velocidad
variable Mezclador dinámico con un rango de mezcla de pequeño volumen cámaras que
incorporan un micro-agitador para proporcionar la el volumen muerto más pequeño
posible, ofreciendo una mayor mezcla Eficiencias para todos los solventes HPLC.
Desgasificación de solvente: El módulo de desgasificador de vacío en línea utiliza un nuevo
Teflon Membrana AF con un volumen de retención de solo 400μL (por línea de disolvente);
esto ofrece un reemplazo de solvente muy rápido con desperdicio mínimo. A pesar de su
pequeño tamaño, el nuevo desgasificador ofrece una desgasificación más efectiva y estable
que una mayor modelos de generaciones anteriores. Un desgasificador para preparativos-
HPLC también está [Link] la entrega de solvente a través de todo el flujo analítico.
c) INYECTOR: Son válvulas dosificadores que permiten regular la aplicación de la muestra el
HPLC JASCO AUTOMATICO LC – 4000 el modelo es El AS-4050 es un muestreador
automático de 60 muestras para usar con HPLC convencional con opciones para volúmenes
de inyección analíticos y semipreparativos
d) HORNO DE COLUMNA: HPLC JASCO AUTOMATICO LC – 4000 tiene un modelo CO-4061.
Para requisitos simples el CO-4061 apilable se puede usar con longitudes de columna de
hasta 200 mm (o hasta 300 mm con una extensión opcional). El modelo CO-4061 tipo de
hornos se puede equipar con un opcional unidad de recalentamiento de microvolúmenes
para precalentamiento la fase móvil antes de la columna para mejorar la resolución y el pico
forma.
e) COLUMNA: Contiene a las partículas de la fase estacionaria el que empleamos en el
presente trabajo es C18 de marca Fenomenex 4.6 x30cm , L1 ,5µ, 100Å, empleada para la
separación de solutos apolares.
El cual ayuda a:
 Gran estabilidad de pH para una larga vida útil de la columna y flexibilidad de
métodos
 Escalabilidad fácil del método de LC rápido a purificación preparativa y a granel
f) DETECTOR: Responderán a una propiedad de la fase móvil. HPLC JASCO AUTOMATICO LC –
4000 la serie MD-4010 está diseñado para alta sensibilidad y alto espectro y tiempo
resolución. El detector MD-4010 PDA ofrece la máxima sensibilidad de detección,
equivalente a un solo detector de longitud de onda. Fabricación uso de un elemento
fotométrico de 1024 elementos diodo ar rayarreglo de diodos, la medida de 190nm a 900nm
con una resolución de 1nm y tasa de adquisición de espectro rápido de hasta a 100
espectros / seg. Separaciones RHPLC. El MD-4010 es equipado con una lámpara de mercurio
interna para calibración automática de longitud de onda.
g) ESTACION DE DATOS COMPUTARIZADOS- CROMATOGRAMAS: Es indispensable para
registrar los cambios en alguna propiedad en función del tiempo. La representación
graficagráfica de estos registros se llama cromatogramacromatógrama. En estos registros
aparece una serie de picos simétricos sobre el eje de los tiempos para la identificación
cuantitativa.
 (JASCO INTERNATIONAL CO.) Formatted: Highlight

6. VALIDACION DE METODOS ANALITICOS

Para el desarrollo químico-farmacéutico de un nuevo medicamento es imprescindible la utilización

de un método analítico que permita cuantificar el ingrediente activo de la formulación. Para la
obtención de resultados precisos y exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecido.
La validación del método analítico se realiza con, equipo calificado, instrumentos analíticos
calibrados, material de vidrio calibrado, reactivo de grado HPLC y estándares de trabajo trazados a
un estándar USP.
En una validación deben considerarse los siguientes parámetros:

SELECTIVIDAD: Es la capacidad del método analítico para medir y/o identificar simultáneamente los
analitos de interés (gatifloxacina y dexametasona), de forma inequívoca en presencia de otras
sustancias interferentes (matriz, productos de degradaciondegradación) que puedan estar
presentes en la muestra.

Una interferencia es aquella sustancia que causa un error sistemático en la determinación del
analito que puede distorsionar la señal del analito de interés, evitando su posible identificación, o
provocar un error sistemático, ya sea constante o proporcional (es decir, dependiente de la
concentración de analito en la muestra. Commented [CC21]: Fuente?
 Formatted: Highlight
Formatted: Highlight

Efecto de un error sistemático provocado por una interferencia Commented [CC22]: Seguir los comentarios de arriba
referente a figuras y tablas

LINEALIDAD: Se refiere a la proporcionalidad entre la concentración de los analitos y su respuesta. Formatted: Highlight
Para su determinación se prepara una serie de muestras de al menos cinco concentraciones Formatted: Left, Tab stops: 3.07", Centered + 5.38", Left
diferentes (80%, 90%, 100%, 110%, 120%) de un estándar más la matriz los cuales se inyectan por
duplicado y se determina la curva de regresión. Commented [CC23]: Fuente?

Commented [CC24]: Numerar ecuaciones y también nombrar

en el texto

PRECISION: La precisión es una medida del grado de reproducibilidad o de repetíbilidadrepetibilidad

del procedimiento analítico en condiciones normales de operación. Una medida común de la
variabilidad es la desviación estándar de las mediciones, desviación estándar relativa (RSD) o
coeficiente de variación. Commented [CC25]: Fuente

Commented [CC26]: Numerar ecuaciones y también nombrar

en el texto

En este caso la precisión debe medirse en condiciones repetitivas (mismo analista, mismo día,
mismo instrumento) y en condiciones reproducibles (diferente analista, diferente día, diferente
instrumento) pero en el mismo laboratorio.
El criterio de aceptación puede ser variable así la USP indica en general una RSD del sistema no más
de 2%, inyectando 6 muestras (principio activo y matriz)
EXACTITUD: La exactitud del procedimiento analítico es la diferencia entre los resultados de la
prueba obtenidos y el valor verdadero. En términos estadísticos, la exactitud está relacionada con
el sesgo de una estimación. Cuanto menor es el sesgo más exacto es una estimación. Commented [CC27]: Fuente?

Matemáticamente se expresa:

Recuperación:

X = valor promedio
◯ = valor verdadero Commented [CC28]: Cual es cuál? Corregir y seguir
recomendación de ecuaciones

ROBUSTEZ: La robustez de un método analítico corresponde a los estudios que indican el grado de
confiabilidad del análisis ante cambios de variables comunes. Estos cambios pueden ser ligeras
diferencias operativas, de quipo, analistas, fuente de columnas, etc. Frecuentemente este estudio
se realiza retrospectivamente a partir de los resultados históricos obtenidos en diferentes
condiciones. Es evidente que el método debe ser robusto frente a cambios de analistas o
instrumentos pero no necesariamente debe serlo frente a todos los cambios que se estudien.
(Quattrochi, Andrizzi, & Laba, 1992, págs. 303-321)

(FARMACOPEA USP, 2018, pág. 1952 VOL 1) Commented [CC29]: Cada párrafo debe tener fuente aún se
repita
7. APLICACIÓN DE LA VALIDACIÓN EN CONTROL DE CALIDAD
Validar consiste en establecer una evidencia documentada que permita asegurar la consistencia de
un procedimiento, a partir del cual se pueda obtener un producto que satisfaga de manera
consistente las especificaciones de calidad predeterminadas por el productor. Validar las técnicas
analíticas como en nuestro caso la dexametasona fosfato de sodio y gatifloxacina, permite conocer
si las mismas son apropiadas para el análisis del analito a identificar y/o cuantificar, además de
brindar información acerca de la precisión y exactitud inherente al método en estudio.
La validación de los métodos analíticos empleados en el control de calidad es un requisito
indispensable dentro de las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), cuyo cumplimiento es un factor
decisivo para garantizar la calidad de los productos o procesos controlados por estos métodos. Para
proceder a la validación de una técnica analítica debe conocerse si esta es confiable y aplicable, con
el objetivo de lograr la identificación y/o cuantificación del analito, debiendo ser ubicada en una de
las cuatro categorías siguientes.
a) Métodos cuantitativos para la determinación del compuesto activo como materia
prima o en formulaciones farmacéuticas.
b) Métodos cuantitativos para la determinación de impurezas.
 c) Métodos de identificación.
d) Métodos para determinar el imite de impurezas. Una vez ubicada la técnica en una
de estas categorías podremos conocer cuáles son los parámetros que deben ser
medidos para realizar la validación.

Es importante validar los procesos para conocerlos, reducir las causas de variabilidad que pueden
ser causantes de accidentes, para establecer controles en los factores de riesgos identificados,
prevenir fallas potenciales por medio de un diagnóstico temprano, unificar los procedimientos de
trabajo y estandarizar la manera de hacer las cosas en forma segura; también sirve para hacer un
balance entre la teoría y la práctica y para asegurar consistencia de las variables del proceso a lo
largo del tiempo
Como se observa en la Fig. 4, una validación inicia con la recopilación de datos que se obtiene en el
proceso, la revisión de evaluaciones de riesgo revisadas en el pasado, materias primas e insumos
utilizados y una serie de procedimientos y entrenamientos a los trabajadores.

Fig. 4 Ciclo de vida de validación Commented [CC30]: Fuente?

Una vez recopilada la información, se elaboraran los protocolos en donde se definen objetivos
específicos de las evaluaciones a realizar, responsabilidades de cada una de las áreas involucradas,
establecer las variables de interés que se quiere monitorear
Una vez concluido lo anterior se procede con la validación realizando una evaluación de una muestra
representativa, en esta fase se recopilan las muestras de la variables que se desean medir y se
realizan los análisis o cálculos necesarios
Finalmente con los resultados obtenidos por el proceso anterior se hacen las recomendaciones
respectivas, las conclusiones y las recomendaciones, que después de cumplir un plan de acción se
cierran y se procede a declarar el proceso como validado Fig. 5.
 Fig. 5 Secuencia de ejecución de validación Commented [CC31]: Fuente?

Fig. 5 Secuencia de ejecución de validación

8. MATERIALES Y MÉTODOS
8.1.1. Materiales
Antes de iniciar las pruebas de los analitos en estudio, verificamos que el material volumétrico a
utilizar este calibrado y cuente con su respectivo certificado (matraz aforado de 25 ml, 10 mL pipeta
aforada de 5 mL, 1 mL, Probeta 1000 mL, 500 mL), también se utilizó una espátula acero inoxidable, Commented [CC32]: Corregir todo el documento a unidades
del Sistema internacional, incluyendo tablas, figuras y ecuaciones
filtro jeringa nylon 0.45 µm y Filtro membrana nylon de 0.45 µm.
8.1.2. Reactivos
Los reactivos utilizados sonfueron: agua purificada, agua grado H.P.L.C., metanol grado H.P.L.C. y
fosfato monobásico de potasio p.a.
8.1.3. Equipos
[Link]. Cromatogratfografo liquido HPLC
Se utilizó un cromatógrafo líquido de alta performance eficacia (HPLC), de modelo Jasco LC-4000
equipado con un Autosampler (AS-4050) Pump (PU-4180) Column Over (CO-4061) PDA Detector
(MD-4010) Valve/Event (LC-Net II/A0C), calificado en fecha de enero de 2018.
[Link]. Balanza
Una balanza analítica Sartorius de 4 dígitos de 0,1mg de sensibilidad, calibrada en fecha diciembre
de 2017 por IBMETRO, con una vigencia de 6 meses.
[Link]. Instrumentos.
Se utilizaron instrumentos de laboratorio como bombas de vacío de marca Thomas, Ultrapurificador
marca Rephile, sonicador de marca Branson.
[Link]. Columna.
Trabajamos con una columna fenomenex Luna 4,6 mm x 30 cm rellena con material L1 5µ 100 Å,
de acuerdo a las características y condiciones de los analitos en estudio. Commented [CC33]: Mejorar explicación de esta parte

[Link]. Estándar de trabajo

Se realizó la trazabilidad de la materia prima de Dexametasona sodio fosfato con respecto a un
estándar USP hallando una pureza 99.7% con una incertidumbre de 5%.
De igual manera se realizó la trazabilidad de Gatifloxacina sesquihidrato de una materia prima con
respecto de un estándar USP hallando la pureza de 99,5% y una incertidumbre de 5%.
[Link]. Excipientes
Las materias primas fueron obtenidas de proveedores certificados y de especificaciones aprobadas.
8.1.4. Preparación de soluciones de trabajo
[Link]. Preparación de fase móvil cromatográfica
Se pesó 1,36g de fosfato monobásico de potasio p.a. en una balanza analítica Sartorius , dicha
pesada se transfirió a un vaso de precipitado de 1000 mL de capacidad, se agregó una cantidad de
400 mL de agua ultrapurificada medida con una probeta y disolviendo la sal con la ayuda de un
agitador magnético. A dicha solución se agregó también una cantidad de 600 mL de Metanol
metanol (grado HPLC). Se aseguró la homogeneidad de la solución con la ayuda de un agitador
magnético.
Una vez mezclada la fase móvil se filtró a través de un filtro de 0,45µm de diámetro de poro y una
bomba de vacío conectada a un kit de filtración de vidrio.
Se desgasificó por un medio adecuado de sonicación durante 5min.
Preparada la fase móvil se conectó al cromatógrafo para su pronto análisis.
La preparación de la fase móvil
[Link]. Preparación del diluyente
La preparación de estándar y muestras requieren de una solución diluyente que según
requerimiento de cada diadía, esta solución diluyente es la misma fase móvil.
[Link]. Preparación de la matriz
Por tema de confidencialidad interna, no se puede describir la formula cuali- cuantitativa.
[Link]. Preparación de soluciones estándar combinado
Durante la optimización y la validación del método, se prepararon soluciones de estándar de
trabajo, descrito a continuación:
Se pesó 75 mg estándar de trabajo de Gatifloxacina y se transfirió a un matraz de 25 mL y se disolvió
con 7 mL de fase móvil. Además agregar al mismo matraz 27,42 mg de Dexametasona Fosfato sódico
equivalente a 25 mg de Dexametasona fosfato, se llenó hasta el cuello del matraz con fase móvil, y
se sonico hasta disolución total, posterior se enfrió y se llevó a volumen con fase móvil.
De la solución anterior (solución madre) se transfirió exactamente una alícuota de 1mL con pipeta
volumétrica a un matraz aforado de 10 mL, llevar a volumen con fase móvil, mezclar y filtrar la
muestra con filtro nylon 0.45 μum.
Concentración final:
300 ug/mL Gatifloxacina
100 ug/mL Dexametasona fosfato

[Link]. Preparación de soluciones analito combinado y matriz incluida.

Durante la optimización y la validación del método, se prepararon soluciones de estándar de trabajo
con placebo cargado, descrito a continuación:
Se pesó 75 mg estándar de trabajo de Gatifloxacina y se transfirió a un matraz de 25 mL y se disolvió
con 7 mL de fase móvil. Además agregar al mismo matraz 27,42 mg de Dexametasona Fosfato sódico
equivalente a 25 mg de Dexametasona fosfato. También se añadió 5 mL de matriz preparada según
formulación del producto. seSe llenó hasta el cuello del matraz con fase móvil, y se sónico hasta
disolución total, posterior se enfrió y se llevó a volumen con fase móvil.
De la solución anterior (solución madre) se transfirió exactamente una alícuota de 1 mL con pipeta
volumétrica a un matraz aforado de 10 mL, llevar a volumen con fase móvil, mezclar y filtrar la
muestra con filtro nylon 0.45 um.
Concentración final:
300 ug/mL Gatifloxacina
100 ug/mL Dexametasona fosfato
 [Link]. Preparación de solución de matriz
Se añadió 5 mL de matriz a un matraz de 25 mL, se disolvió y llevó a volumen con fase móvil (sol.
madre).
De la solución anterior (solución madre) se transfirió exactamente una alícuota de 1mL con pipeta
volumétrica a un matraz aforado de 10 mL, llevar a volumen con fase móvil, mezclar y filtrar la
muestra con filtro nylon 0.45 um.
[Link]. PreparacionPreparación de soluciones de analito combinado y matriz incluida a
diferentes niveles de preparación
Se pesó las cantidades de la tabla XXX de Gatifloxacina en un matraz aforado de 25ml, y se disolvió
con 7 mL de Fase fase móvil. También se agregó al mismo matraz Dexametasona fosfato. También
se añadió 5mL de matriz preparada según formulación del producto. Se llenó hasta el cuello del
matraz con fase móvil, y se sónico hasta disolución total, posterior se enfrió y se llevó a volumen
con fase móvil.
De la solución anterior (solución madre) se transfirió exactamente una alícuota de 1mL con pipeta
volumétrica a un matraz aforado de 10mL, llevar a volumen con fase móvil, mezclar y filtrar la
muestra con filtro nylon 0.45um. Commented [CC34]: REVISAR REDACCIÓN

Tabla. 1 Commented [CC35]: TODAS LAS TABLASDEBEN SEGUIR UN

ORDEN CRONOLÓGICO REVISAR TODO EL DOCUMENTO
Cantidad de
Cantidad pesadas (mg) de Conc. matriz
Nivel
Principio Activo (µg/ml)
(ml) Commented [CC36]: UNIDADES?

80 % 60 240 5
90 % 67,5 270 5
Gatifloxacina 100 % 75 300 5
110 % 82,5 330 5
120 % 90 360 5
80 % 20 80 5
90 % 22,5 90 5
Dexametasona fosfato 100 % 25 100 5
110 % 27,5 110 5
120 % 30 120 5

9. Validación del método analítico

Establecida la metodología analítica posterior a la optimización del método, se procedió a validar
con los respectivos parámetros de fiabilidad incluyendo La aptitud del sistema para cada día de
trabajo.
Los parámetros de fiabilidad que serán evaluados durante la validación para un método indicador
de contenido en una especialidad farmacéutica que son las gotas oftálmicas, se realizó la validación
de la siguiente manera:
9.1.1. Idoneidad del sistema
Cada día al inicio de la validación se realizó la aptitud del sistema cromatográfico realizando la
programación del HPLC Jasco LC 4000 con los parámetros de la metodología establecida posterior a
la optimización. Y se inició el sistema cromatográfico purgando previamente el sistema, posterior a
este se realizó la adecuación de todo el sistema con la fase móvil preparada, hasta la estabilización
de la línea base y la presión de la bomba.
Se realizó la preparación de una solución de estándar combinado, se inyecto 5 veces repetidas, una
vez adecuado el equipo.
Se analizó la variabilidad de las áreas con el coeficiente de variación de las respuestas del estándar.
9.1.2. Selectividad
Una vez realizada la aptitud del sistema inmediatamente se inició con las corridas cromatográficas
de la selectividad, para lo cual se analizaron de la siguiente manera:
 se preparó una solución estándar combinado de trabajo combinado Commented [CC37]: MEJORAR REDACCIÓN

 se preparó 6 soluciones independientes de analito combinado.

 se preparó 6 soluciones independientes de analito combinado y matriz incluida.
 se preparó una solución de matriz.
Cada una de las soluciones se inyecto de manera individual y se registroregistró las áreas
correspondientes a cada solución.
Además se realizó el análisis estadístico con las siguientes pruebas:
 Pruebas de normalidad del analito.
 Pruebas de normalidad del analito y matriz.
 Pruebas de homogeneidad de varianzas de F de Snedecor.
 Prueba de t de Student.

9.1.3. Linealidad
Para la determinación de linealidad se determinó un rango de trabajo establecido de acuerdo a la
especificación de control de calidad que oscila de 90-110%, este rango se disminuyó y se incrementó
un 10% es decir de 80%-120%.
Este análisis de proporcionalidad, se analizó a partir de soluciones preparadas a 5 niveles de
concentración 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, con respecto a la concentración nominal.
Una vez realizada la aptitud del sistema se inició con las inyecciones en el cromatógrafo, cada una
se realizó por duplicado.
Se registró las áreas y posterior se realizó el análisis estadístico con las siguientes pruebas:
 Test de proporcionalidad
 Test de la pendiente
 Test de la ordenada al origen
 Análisis de las residuales
 Homogeneidad de las varianzas
 Análisis de varianzas (ANOVA)
 Hipérbolas de confianza

9.1.4. Precisión
[Link]. Repetibilidad del Método
Se realizó la prueba de variabilidad del método preparando 6 soluciones independientes de analito
combinado y matriz, una solución estándar combinado.

Se determinó el porcentaje de rendimiento y se determinó la variabilidad a través del coeficiente

de variación.
[Link]. Precisión Intermedia
Para observar la variabilidad del método entre analistas y días se realizorealizó una matriz para
evaluar dicha precisión, en el cual consiste de la siguiente manera:
Día 1 Día 2 Commented [CC38]: TITULOS Y NUMERACION DE TABLAS
MENCIONANDOSE EN EL TEXTO
Preparación de 2 soluciones
Preparación de soluciones de
Analista 1 de analito combinado y
analito combinado y matriz.
matriz.
Preparación de 2 soluciones
Preparación de soluciones de
Analista 2 de analito combinado y
analito combinado y matriz.
matriz.

De igual manera se evalúa a través del coeficiente de variación.

9.1.5. Exactitud
Para determinar que el método determina valores exactos, se realiza en el rango establecido de
linealidad, solo a 3 niveles de concentración 80%, 100% y 120% con respecto a la concentración
nominal y cada solución por duplicado.
Una vez realizada la aptitud del sistema se inició con las inyecciones en el cromatógrafo, cada una
se realizó por duplicado.
Se registró las áreas y posterior se realizó el análisis estadístico con las siguientes pruebas:
  Homogeneidad de varianzas
 t de Student

9.1.6. Estabilidad de la muestra
Se realiza un estudio de estabilidad a la muestra para demostrar que en un tiempo prudente que la
solución da la misma respuesta analítica. En lo cual se preparó una solución estándar y una solución
de analito combinado y se realizó la inyección el cromatógrafo por triplicado en los siguientes
tiempos. Commented [CC39]: TITULOS Y NUMERACION DE TABLAS
MENCIONANDOSE EN EL TEXTO
N° Tiempo h
1 0
2 6
3 11
4 24
10. RESULTADOS Commented [CC40]: SOLO SERA RESULTADOS
O
10.1. Requisitos de aptitud RESULTADOS Y DISCUSION?

Una vez establecidos las condiciones cromatográfica y verificar que el equipo es apto para realizar
el análisis se preparó una solución del estándar de trabajo combinado de Gatifloxacina y
Dexametasona Sodio fosfato al 100% de la concentración nominal, se inyecto 5 veces repetidas y se
determinó el coeficiente de variación de las áreas correspondientes, de ambos días que se realizó
la validación.

Tabla XXX Tratamiento estadístico aptitud día 1 Gatifloxacina

Coeficiente de 0,673
variación

Tabla XXX Tratamiento estadístico aptitud día 2 Gatifloxacina

Coef de variación 0,774 Formatted: Highlight

Tabla XXX Tratamiento estadístico aptitud día 1 Dexametasona

Coef de variación 0,38 Formatted: Highlight

Tabla XXX Tratamiento estadístico aptitud día 2 Dexametasona

Coef de variación 0,543 Formatted: Highlight

Estableciendo un valor de especificación para la Repetibilidad de no mayor a 2%, cumpliendo todos
los análisis.
10.1.1. Selectividad - Gatifloxacina
Una vez establecida la aptitud del sistema, se realizó la preparación de 1 solución estándar de
trabajo, además de 6 soluciones independientes de analito sin interferencias, 6 soluciones
independientes de analito con placebo cargado y una solución de solo matriz de acuerdo a los
componentes interferentes.

El análisis estadístico de la comparación de medias de los analitos, requiere un estudio de la media

para el tipo de aplicación de t-Student

 Test de hipótesis

H0: µ1=µ2

Hi: µ1ǂµ2

 Regla de decisión

Ho: texp < ttab "No existe diferencia significativa"

Hi: texp > ttab "Existe diferencia significativa"
 Prueba estadística

tExp 1,309

tTab (0.05;6;6) 2,228

 Conclusión Commented [CC41]: Las conclusiones van al final

Al ser el texp menor al ttab se acepta la hipótesis nula concluyendo que no existe diferencia
significativa entre la media del analito y la media del analito y matriz. Por consiguinte el método es
selectivo con la capacidad de analizar de manera inequívoca a la Gatifloxacina frente a los
interferentes. Commented [CC42]: Debe mencionarse la redacción como
discusión de acuerdo a resultados REDACTAR NUEVAMENTE
10.1.2. Selectividad - Dexametasona
Una vez establecida la aptitud del sistema, se realizó la preparación de 1 solución estándar de
trabajo, además de 6 soluciones independientes de analito sin interferencias, 6 soluciones
independientes de analito con placebo cargado y una solución de solo matriz de acuerdo a los
componentes interferentes.

El análisis estadístico de la comparación de medias de los analitos, requiere un estudio de varianzas

para el tipo de aplicación de aplicación de t-Student

 Test de hipótesis

H0: µ1=µ2

Hi: µ1ǂµ2

 Regla de decisión
Ho: texp < ttab "No existe diferencia significativa"
Hi: texp > ttab "Existe diferencia significativa"
 Prueba estadística

tExp 1,309

tTab (0.05;6;6) 2,180

 Conclusión

Al ser el texp menor al ttab se acepta la hipótesis nula concluyendo que no existe diferencia
significativa entre la media del analito y la media del analito y matriz. Por consiguiente el método es
selectivo con la capacidad de analizar de manera inequívoca a la Dexametasona frente a los
interferentes. Commented [CC43]: Seguir las recomendaciones previas
Formatted: Highlight
10.1.3. Linealidad – Gatifloxacina
Se demostró la linealidad y la proporcionalidad, de acuerdo a la preparación establecida, se aprobó
el estudio través de un análisis de varianza, de la linealidad en un test de proporcionalidad y una
falta de ajuste.
Análisis de la regresión
 Test de hipótesis

H0: La regresión es estadísticamente representativa

Hi: La regresión no es estadísticamente representativa

 Regla de decisión

Ho: Fexp ˃ Ftab

Hi: Fexp ≤ Ftab
 Prueba estadística

FExp 2928,1

FTab 4,38

 Conclusión

Al ser el Fexp mayor al Ftab se acepta la hipótesis nula concluyendo que l regresión es estadísticamente
representativa. Por consiguinteconsiguiente el método es lineal con la capacidad de proporcionar
resultados directamente prporcionlesproporcionales a la concetrcionconcentración. Commented [CC44]: Seguir las recomendaciones previas

Falta de ajuste
 Test de hipótesis

H0: La regresión es estadísticamente representativa

Hi: La regresión no es estadísticamente representativa

  Regla de decisión

Ho: Fexp ≤ Ftab

Hi: Fexp ˃ Ftab
 Prueba estadística

FExp 2,78

FTab 3,28

 Conclusión

Al ser el Fexp menor al Ftab se acepta la hipótesis nula concluyendo que la falta de ajuste. Por
consiguiente el error en el ajuste con la recta de proporcionalidad no es significativa.

Con el análisis estadístico se concluye que el método es lineal para el análisis de la Gatifloxacina. Commented [CC45]: Seguir las recomendaciones previas

10.1.4. Linealidad – Dexamentasona Formatted: Highlight

Se demostró la linealidad y la proporcionalidad, de acuerdo a la preparación establecida, se

aprobó el estudio través de un análisis de varianza, de la linealidad en un test de proporcionalidad
y una falta de ajuste.
Análisis de la regresión
 Test de hipótesis

H0: La regresión es estadísticamente representativa

Hi: La regresión no es estadísticamente representativa

 Regla de decisión

Ho: Fexp ˃ Ftab

Hi: Fexp ≤ Ftab
 Prueba estadística

FExp 2921,99

FTab 4,38

 Conclusión

Al ser el Fexp mayor al Ftab se acepta la hipótesis nula concluyendo que l regresión es estadísticamente
representativa. Por consiguinte el método es lineal con la capacidad de proporcionar resultados
directamente prporcionles a la concetrcion. Commented [CC46]: Seguir las recomendaciones previas
Formatted: Highlight
Falta de ajuste
 Test de hipótesis

H0: La regresión es estadísticamente representativa

Hi: La regresión no es estadísticamente representativa

 Regla de decisión

Ho: Fexp ≤ Ftab

Hi: Fexp ˃ Ftab
 Prueba estadística

FExp 2,07

FTab 3,28

 Conclusión

Al ser el Fexp menor al Ftab se acepta la hipótesis nula concluyendo que la falta de ajuste. Por
consiguiente el error en el ajuste con la recta de proporcionalidad no es significativa.

Con el análisis estadístico se concluye que el método es lineal para el analisis de Dexametasona Commented [CC47]: Seguir las recomendaciones previas

10.1.5. Precisión – Gatifloxacina

Repetibilidad del método

Como se indicó en materiales y métodos a partir de las soluciones se determinó la variabilidad, a

través del coeficiente de variación.

El coeficiente de variación para 6 muestras se aceptó no mayor a 3, 88 y un valor experimental de

1,96. Siendo el valor experimental menor al valor de referencia cumple la variabilidad del método.
Por lo tanto se concluye que el método no aporta variabilidad significativa dentro del análisis de una
muestra.

Precisión Intermedia

Para determinar la variabilidad aportada por varios analistas, diferentes días de análisis, se
estableció un coeficiente de variación no mayor al 2 % donde el coeficiente de variación del estudio
de 2 analistas, 2 días experimentalmente reporta un valor de 1,80. Reportando que la variación
estudiada en diferentes días, diferentes analistas, no es significativo para el método.

Concluyendo que el método es Preciso para el análisis de Gatifloxacina. Commented [CC48]: Seguir las recomendaciones previas
Formatted: Highlight
10.1.6. Precisión – Dexametasona
Repetibilidad del método

Como se indicó en materiales y métodos a partir de las soluciones se determinó la variabilidad, a

través del coeficiente de variación.

El coeficiente de variación para 6 muestras se aceptó no mayor a 3, 88 y un valor experimental de

1,41. Siendo el valor experimental menor al valor de referencia cumple la variabilidad del método.
Por lo tanto se concluye que el método no aporta variabilidad significativa dentro del análisis de una
muestra. Commented [CC49]: Seguir las recomendaciones previas

Precisión Intermedia

Para determinar la variabilidad aportada por varios analistas, diferentes días de análisis, se
estableció un coeficiente de variación no mayor al 2 % donde el coeficiente de variación del estudio
de 2 analistas, 2 días experimentalmente reporta un valor de 1,397. Reportando que la variación
estudiada en diferentes días, diferentes analistas, no es significativo para el método.

Concluyendo que el método es Preciso para el análisis de Dexametasona. Commented [CC50]: Seguir las recomendaciones previas
Formatted: Highlight
10.1.7. Exactitud – Gatifloxacina
Formatted: Highlight
En la determinaciondeterminación que el metodométodo analítico produce resultados exactos, se
realizorealizó por medio del porcentaje de recuperación realizando un t de Student, determinando:

 Test de hipótesis

H0: %R═ 100%

Hi: %R≠ 100%

 Regla de decisión

Ho: texp < ttab "No existe diferencia significativa"

Hi: texp > ttab "Existe diferencia significativa"
 Prueba estadística

tExp 1,059

tTab (0.05;6;6) 2,201

 Conclusión

Al ser el texp menor al ttab se acepta la hipótesis nula concluyendo que no existe diferencia
significativa entre la media del % de recuperación y 100%. Por consiguiente el método es exacto con
la capacidad de analizar datos reales en la cuantificación de Gatifloxacina. Commented [CC51]: Seguir las recomendaciones previas

10.1.8. Exactitud – Dexametasona

En la determinación que el método analítico produce resultados exactos, se realizó por medio del
porcentaje de recuperación realizando un t de Student, determinando:

 Test de hipótesis

H0: %R═ 100%

Hi: %R≠ 100%

 Regla de decisión

Ho: texp < ttab "No existe diferencia significativa"

Hi: texp > ttab "Existe diferencia significativa"
 Prueba estadística

tExp 0,586

tTab (0.05;6;6) 2,201

 Conclusión

Al ser el texp menor al ttab se acepta la hipótesis nula concluyendo que no existe diferencia
significativa entre la media del % de recuperación y 100%. Por consiguiente el método es exacto con
la capacidad de analizar datos reales en la cuantificación de Dexametasona. Commented [CC52]: Seguir las recomendaciones previas

11. Conclusión
De acuerdo a los resultados obtenidos, se concluye que:

- El método analítico optimizado a partir de una referencia oficial por cromatografía liquida
de alta resolución, se considera valido de acuerdo a los parámetros de fiabilidad; que
analiza de manera inequívoca a los analitos frente a los interferentes (matriz del producto
farmaceutico), proporciona resultados proporcionales, precisos y exactos dentro de un
rango establecido, para la cuantificación de Desametasona y Gatifloxacina en una solución
oftálmica. Commented [CC53]: Las conclusiones deben estar de acuerdo
a sus objetivos específicos respondiendo a cada uno de elllos
12. Recomendaciones
El método analítico presente seguirá siendo válido y proporcionara resultados confiables, en cuanto
se cumpla las siguientes rcomendacionesrecomendaciones:

- No modificar el método analítico

- Cumplir buenas prácticas de laboratorio
- Realizar el análisis en condiciones óptimas del laboratorio (calibración, calificación, etc.)

Durante la validación se detectó cuidados para el buen desempeño del método:

- No almacenar las soluciones por un tiempo excesivo de la estabilidad demostrada que es 24

horas.
- No almacenar masmás de un diadía la fase móvil, debido a la alta concentración de metanol
y la volatilidad del mismo, cambiara la proporción de la fase móvil, por consiguiente
irreproducibilidad de los tiempos de retencionretención.
- Tener buenas políticas de conservación y uso de columnas cromatografías, para la
preservación y evitar la contaminación del mismo. Esto incluye lavado, buena adecuación
del mismo, correcta instalación al cromatógrafo.
- Personal calificado para el análisis en cromztografiacromatografía.

13. Bibliografía
14. Bibliografia.
15. Intercambiables, S. C. (2007, Agosto 03). CATALOGO de medicamentos genéricos
intercambiables para farmacias y público en general al 3 de agosto de 2007. Retrieved from
[Link]
16. SSA. (2007, Agosto 3). Catalogo de Medicamentos Genericos Intecambiables para Farmacias
en General .

17. Anexos Commented [CC54]: Mencionar los anexos en el texto del

documento el mismo debe estar bien enumerado e identificado
para evitar confusiones

NO ENCONTRADO CALCULOS DE LOS CROMATOGRAMAS EN EL

METODO Y DONDE LOS RESULTADOS DEBEN SER DISCUTIDOS Y
SOPORTADOS TANTO EXPERIMENTALMENTE Y CON FUENTES DE
REFERENCIA