UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA
FACULTAD DEAMAZONÍA
AGRONOMÍAPERUANA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO
FACULTAD DE PRODUCCIÓN ANIMAL
DE AGRONOMÍA
PROCEDIMIENTOS OPERACIONALES ESTANDARIZADOS (POE)
DEPARTAMENTO ACADÉMICO
PRÁCTICAS DE PRODUCCIÓN
DEL CURSO ANIMAL
DE BIOQUÍMICA
Lugar: LB-FFB- UNAP- PT- 001- V02. Versión: 2.0 Página 1 de 38
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PROCEDIMIENTOS OPERACIONALES
ESTANDARIZADOS (POE)

NOMBRE DE LA
ASIGNATURA BIOQUÍMICA
PLAN DE CÓDIGO DE LA
POE-T DURACIÓN
ESTUDIOS ASIGNATURA
001 2015 AGRO-10028 2 horas
Versión Nro. Fecha de Revisión Descripción Modificación
REVISIÓN Iniciado por: Ing. Se agregó
HISTÓRICA Versión 2.0 27-feb-2019 Jaime Noriega protocolo de
Ramírez bioseguridad.

IQUITOS – PERÚ
2019

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Autoridades Universitarias:
ALTA DIRECCIÓN

Ing. HEITER VALDERRAMA FREIRE, Dr.

Rector

Lic. Enf. PERLA MAGNOLIA VÁSQUEZ DASILVA, Dra.

Vicerrectora Académica

Blgo. ALBERTO GARCÍA RUIZ, Dr.

Vicerrector de Investigación

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FACULTAD DE AGRONOMIA

Ing. DARVIN NAVARRO TORRES, Dr.

Decano

Ing. VICTORIA REÁTEGUI QUISPE, Dra.

Directora Escuela de Formación Profesional de Agronomía

Ing. JUAN LUIS ROMERO VILLACREZ, [Link].

Secretario Académico

Ing. RAFAEL CHÁVEZ VÁSQUEZ, Dr.

Director del Departamento Académico de Producción Animal

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ELABORADO POR:

______________________________
Ing. Jaime Noriega Ramírez*

*Docente Principal de la Facultad de Agronomía, adscrito al Departamento Académico de

Producción Animal. Con estudios de Maestría en Docencia Universitaria y estudios de
Doctorado en Ambiente y Desarrollo Sostenible en la Escuela de Post Grado “José Torres
Vásquez” - Universidad Nacional de la Amazonía Peruana (UNAP).

REVISADO POR:

___________________________________
Ing. Victoria Reátegui Quispe, Dra.*
*Directora del Departamento Académico de Producción Animal. Directora de Escuela de
Formación Profesional de Agronomía. Docente Principal a Dedicación Exclusiva. Master
Scientiae en Nutrición- Universidad Nacional Agraria La Molina. Doctora en Educación -
Escuela de Post Grado “José Torres Vásquez” - Universidad Nacional de la Amazonía Peruana
(UNAP).

APROBADO POR:

____________________________________
Ing. Darvin Navarro Torres, Dr. *
*Decano de la Facultad de Agronomía. Docente Principal a Dedicación Exclusiva. Máster
Scientiae en Nutrición- Universidad Nacional Agraria La Molina, especializado en nutrición de
animales silvestres a nivel de zoocria o crianza Ex Situ y animales domésticos. Doctor en
Educación - Escuela de Post Grado “José Torres Vásquez” - Universidad Nacional de la
Amazonía Peruana (UNAP).

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1 ANTECEDENTES
Este (POE) describe como llevar a cabo el procedimiento, sobre las prácticas de
laboratorio que realizan los estudiantes de la Facultad de Agronomía de la UNAP,
teniendo en cuenta los procedimientos de seguridad con el propósito de prevenir
accidentes de trabajo, así como también medidas preventivas que se deben aplicar al
estudiante que hace uso de los equipos, materiales y reactivos del laboratorio; para
evitar los peligros en la salud por efecto de la contaminación, quemaduras u otros
accidentes que podrían producirse en el laboratorio.
2 COMPETENCIAS
 Aplica adecuadamente el conocimiento aprendidos en el análisis de las
situaciones problemáticas identificadas en el entorno.
 Estudia los hidratos de carbono, sus funciones y su clasificación.
 Usa teorías, fórmulas y principios de las diferentes sustancias químicas
contenidos en los alimentos, identifica las proteínas, su función y su clasificación.
 Identifica y caracteriza en forma práctica los nutrientes orgánicos contenidos en
los alimentos, identifica las características de los lípidos, sus funciones y su
clasificación.
3. OBJETIVO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN
Este POE tiene el propósito de brindar una guía para el desarrollo del procedimiento en
el desarrollo de las prácticas de laboratorio y están diseñados para el entrenamiento
del estudiante.
Se aplica en el Laboratorio de Bioquímica General adscrito a la Facultad de
Agronomía, cuyas prácticas aseguren la calidad del Laboratorio.
4 RESPONSABILIDADES
Es responsabilidad del docente y el coordinador del Laboratorio asegurar que el
estudiante tenga conocimiento y sea competente en cumplir estos procedimientos.
Es responsabilidad del docente hacer cumplir con las buenas prácticas de laboratorio.
Durante la estancia en el laboratorio el alumno debe ir provisto de bata, gafas de
seguridad, tapabocas, polainas y guantes de látex. La bata, el tapabocas y las polainas
deberán emplearse durante toda la estancia en el laboratorio. Las gafas de seguridad
siempre que se manejen productos peligrosos, se realice siembra de tejidos en cámara
y durante el calentamiento de disoluciones. Los guantes deben utilizarse
obligatoriamente en la manipulación de productos tóxicos o cáusticos y para la
desinfección, siembra y manipulación de material sujeto a estudio o investigación.

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INTRODUCCIÓN
La Bioquímica es la ciencia que se ocupa del estudio de las diversas moléculas,
reacciones químicas y procesos que ocurren en las células y los microorganismos
vivientes.
Una buena parte de la bioquímica y la nutrición se encarga del estudio de los diversos
aspectos de los compuestos químicos, por lo tanto, hay una relación íntima entre estas
dos ciencias.
La nutrición es la ciencia que versa sobre la composición y los aspectos químicos de
los alimentos y sobre la manera en la que el organismo utiliza los nutrientes
contenidos en la dieta. Se ocupa pues, de los cambios en los requerimientos dietéticos
que se registra en las distintas situaciones fisiológicas y patológicas, así como de las
enfermedades causadas por deficiencias o excesos en la ingesta de nutrientes.
Uno de los pre-requisitos indispensables para conservar la salud en los seres vivos, es
la ingesta dietética óptima de cierto número de compuestos químicos, siendo los
principales las vitaminas, ciertos aminoácidos y ácidos grasos, varios minerales y
agua, teniendo en cuenta también la utilización adecuada en la dieta de los
carbohidratos.
Para comprender mejor estos conocimientos, es necesario realizar experimentos de
laboratorio, para lo cual se ha visto por conveniente elaborar la presente guía de
práctica que tiene por finalidad promover en el estudiante los conocimientos básicos
del curso teórico relacionados con la práctica.
Del mismo modo permitirá conocer los fenómenos bioquímicos, las reacciones y las
estructuras de los hidratos de carbono y de las macromoléculas, características de los
organismo vivos, la separación de aminoácidos de hidrolizados de proteínas, así como
el efecto de las configuraciones ópticas y el poder rotatorio de los hidratos de carbono
y de los aminoácidos, determinar también la especificidad de la acción enzimática, la
fermentación alcohólica de las hexosas, donde un extracto de levaduras libres de
células es capaz de fermentar la glucosa con producción de alcohol.
El autor.

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INSTRUCCIONES GENERALES
1. Después de cada clase teórica, se efectuará una práctica de laboratorio
para que el alumno comprenda mejor el desarrollo del curso, para lo cual
el profesor señalará los temas que el alumno deberá estudiar con
anterioridad a las clases prácticas.
2. El alumno debe asistir al laboratorio portando su respectivo mandil
blanco.
3. El alumno debe contar con un cuaderno de prácticas en el cual anotará
todos los resultados de los experimentos y que corresponderá a una
calificación.
4. Se demostrará puntualidad en el horario establecido.
5. Los materiales, reactivos e instrumentos con los cuales se trabajará,
deben ser utilizados adecuadamente y con mucha responsabilidad.
6. Se justificarán las faltas previa presentación de algún documento de
sustento.
7. Durante la ejecución de la práctica, se requiere orden, atención y mucha
dedicación.
8. Los alumnos formarán grupos de cinco o seis estudiantes como máximo
de acuerdo al orden alfabético o por afinidades y ocuparán siempre la
misma mesa que fue asignada al empezar.
9. Al final cada una de las prácticas de laboratorio, cada grupo, por orden
de mesa y prácticas desarrolladas y así rotativamente, presentarán un
informe y realizarán una exposición con la debida revisión bibliográfica.
10. Para la presentación de los informes de prácticas deberán considerar:
- Título de la práctica
- Objetivos
- Introducción
- Revisión de literatura
- Materiales y reactivos
- Procedimiento experimental
- Resultados
- Conclusiones
- Recomendaciones
- Referencias bibliográficas.

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5. PROCEDIMIENTO DE PRÁCTICAS DEL CURSO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 01
I. TÍTULO:
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LOS
HIDRATOS DE CARBONO O GLÚCIDOS.
II. OBJETIVO:
- Determinar las reacciones de reconocimiento de los Hidratos de
Carbono o Glúcidos.

III. INTRODUCCIÓN

Los Hidratos de Carbono o Glúcidos son compuestos ternarios formados por

Carbono, Hidrógeno y Oxígeno. Son de gran importancia para la alimentación
del hombre y de los animales, su oxidación origina el calor y la energía
necesarios para las funciones del organismo.

Biológicamente son compuestos primarios bioquímicos que se forman en los

vegetales durante la fotosíntesis. En las células animales, los carbohidratos en
forma de Glucosa y Glucógeno sirven como fuente importante de energía para
las actividades vitales.
Los carbohidratos se encuentran principalmente en el reino vegetal formando
los constituyentes de las células, como sustancias de reserva (almidón de trigo
y maíz, fécula de tubérculos) o sostén (celulosa). En los animales se
encuentran en los humores de los organismos (sangre y linfa)
Químicamente se definen como derivados Aldehídicos o Cetónicos de
alcoholes superiores polivalentes (con más de un grupo hidroxilo) o sustancias
que por hidrólisis pueden generar estos derivados.
Los ácidos concentrados y calientes producen la deshidratación de los
monosacáridos:
a. Pentosa + ([Link].) ---------- Furfural + 3H2O
b. Hexosa + (Ac. Conc.) --------- 5-Hidroximetil Furfural + 3H2O
Las Pentosas por desidratación producen furfural que es volátil y las Hexosas
5-Hidroximetil Furfural, que no es volátil.

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Los Oligosacáridos y Polisacáridos primero se hidrolizan hasta monosacáridos

y finalmente se deshidratan.
En presencia del Ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado, varios compuestos
fenólicos como el Alfa-naftol, Resorcinol, Orcinol y Phloroglucinol, se
condensan con el Furfural o el Hidroximetil Furfural dando compuestos
coloreados de estructura no bien establecida. Estos productos de
condensación coloreadas sirven para caracterizar los monosacáridos.
Los Glúcidos se dividen en cuatro grupos:
1. Monosacáridos. – Son aquellos que no pueden ser hidrolizados en
moléculas más simples, se subdividen de acuerdo al número de átomos
de carbono que poseen en: diosas, triosas, tetraosas, pentosas,
hexosas, heptosas y según contengan grupos aldehídicos o cetónicos,
en aldosas o cetosas.
2. Disacáridos.- Son aquellos que al ser hidrolizados producen dos
moléculas del mismo o diferentes monosacáridos.
3. Oligosacáridos.- Por hidrólisis dan de dos a diez moléculas de
monosacáridos.
4. Polisacáridos.- Por hidrólisis dan más de diez moléculas de
monosacáridos. De acuerdo a los monosacáridos que se obtengan por
hidrólisis se designan a los polisacáridos como hexosasanas,
pentosanas y polisacáridos mixtos (homopolisacáridos o
heteropolisacáridos)

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos
 Tubos de  Soluciones de: Glucosa al 1%, Lactosa al 1%,  Fuente de
ensayo Maltosa al 1%, Xilosa al 1%, Arabinosa al 1%, calor
 Vasos de Almidón Soluble al 1%
precipitado  Solución alcohólica de Alfa-naftol al 1% (reactivo
 Pinzas de Molish)
 Tiras de papel  Ácido Sulfúrico concentrado (H2SO4)
filtro  Ácido Clorhídrico concentrado (HCl)
 Reactivo de Bial
 Phloroglucinol
 Resorcinol

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. REACCIÓN DE MOLISH. (Prueba general cualitativa para

carbohidratos)
Procedimiento
Añadir dos gotas de la solución alcohólica de Alfa-naftol a tubos de
prueba conteniendo 1 0 2 ml. De las siguientes soluciones: Xilosa al 1%,
Glucosa al 1%, Maltosa al 1%, Almidón soluble al 1%. Mezclar bien,
inclinar el tubo y adicionar 3 ml de H2SO4 concentrado por las paredes
del tubo, para formar una capa por debajo de la solución azucarada. Si
se forma un anillo violeta en la interfase de los dos líquidos indica la
presencia de carbohidratos.

Preguntas:
a. Explique el resultado de la reacción de Molish
b. ¿Qué grupo de sustancias dan positiva la prueba de Molish?
c. ¿Con qué otros compuestos se puede caracterizar a los
monosacáridos?

2. REACCIÓN DE SELIVANOV. (Esta reacción se usa para la

diferenciación de Hexosas entre sí)
Procedimiento
En un tubo de ensayo poner 5 ml de Fructuosa al 1% y agregue 1 ml de
ácido clorhídrico concentrado, luego poner a ebullición y agregar una
pequeña cantidad de Resorcinol, calentar hasta la aparición de una
coloración rojiza. Controlar el tiempo y repetir con la Glucosa.

Preguntas:
a. ¿Cuál tubo dio reacción más rápida?
b. ¿Esta prueba se podría usar para diferenciar Fructuosa de
Sacarosa? Explique
c. Escriba la fórmula del 5-Hidroximetil Furfural

3. REACCIÓN DE BIAL (Prueba para Pentosas)

Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 3 ml de reactivo de Bial, poner a
ebullición, agregar 3 gotas de solución Arabinosa, la aparición de una
coloración verde nos indica positiva (Orcinol)
Preguntas:
a. ¿Qué contiene el reactivo de Bial? Explique el resultado de la
reacción.
b. Escriba la fórmula del Furfural.

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4. REACCIÓN DE TOLLENS (REACCIÓN DE PHLOROGLUCINOL) –

Prueba para Pentosas
Procedimiento
En un tubo de prueba poner 2 ml de Xilosa y agregar 2 ml de HCl
concentrado. Luego agregar una pequeña cantidad de Phloroglucinol.
Se calienta hasta la aparición de una coloración pardo violeta.

Pregunta:
a. Escriba la fórmula del Phloroglucinol

5. REACCIÓN DEL ACETATO DE ANILINA (Esta reacción se utiliza

para diferenciar Pentosas de Hexosas o Pentosas de Hoxonasas)
Procedimiento
Colocar en un tubo de ensayo 2 ml de Glucosa y en otro 2 ml de Xilosa.
Luego agregar 2 ml de HCl en cada uno de los tubos. Se calienta en
baño María a 100°C. Se coloca un pedazo de papel filtro mojado con
una solución de Acetato de Anilina sobre la boca del tubo.

Preguntas:
a. ¿Es posible lograr la diferenciación entre Pentosas y Hexosas
haciendo uso de esta prueba? Explique
b. ¿Cuál tubo dio reacción positiva?

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PRÁCTICA N° 02

I. TÍTULO:
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LOS
HIDRATOS DE CARBONO REDUCTORES
II. OBJETIVO:
- Determinar las reacciones de reconocimiento de los Hidratos de
Carbono Reductores.

III. INTRODUCCIÓN

Los azúcares cuya molécula contiene un grupo carbonilo (Aldehídico o

Cetónico) libre, se denominan reductores.
Estos azúcares en un medio alcalino y en caliente tienen una capacidad de
oxidarse, reduciendo a su vez las sales de óxido Cúprico (valencia +2) a sales
de óxido Cuproso (valencia +1); las sales de Plata (Ag+) hasta Plata metálica
(Ag0); las sales de Óxido de Bismuto, hasta Bismuto Metálico. Estos
carbohidratos entre los que están la Glucosa, Maltosa, Celobiosa y Lactosa, se
clasifican en ocasiones como azúcares reductores. Los carbohidratos como la
sacarosa, los cuales no son oxidadas con facilidad debido a que sus átomos de
carbono anómeros están fijos en un enlace glucosídico, no reducen a los iones
metálicos y por consiguiente se clasifican como azúcares no reductores.
Las soluciones alcalinas de Cobre (Ejemplo: Reactivo de Fehling, Reactivo de
Benedict), se han utilizado durante mucho tiempo para detectar la presencia de
azúcares reductores.
IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Soluciones de: Glucosa al 2%, Sulfato de  Cocina
 Vasos de precipitado Cobre al 2.5%, Solución de Sacarosa al eléctrica
 Pipetas 5%.
 Probetas  Hidróxido de Sodio al 5%, Reactivo de
Fehling, Reactivo de Benedict, Reactivo de
Nylander

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. REACCIÓN DE TROMMER
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 2 ml de Glucosa al 2% y agregar 1
ml de Sulfato de Cobre al 2.5%, luego 2 ml de solución de
Hidróxido de Sodio al 5% se obtiene una solución azul y, al hervir
se forma un precipitado rojo amarillo.

2. REACCIÓN DE FEHLING
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 5 ml de Reactivo de Fehling y
hervir, en un segundo tubo colocar 5 ml de Glucosa al 2%,
mezclar el contenido de los tubos aparece un precipitado amarillo
rojizo que cambia a rojo.

3. REACCIÓN DE BENEDICT
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 5 ml del Reactivo de Benedict y
agregar 10 gotas de Glucosa al 2%, hervir en baño María por 5
minutos y enfriar, cuando está frío se nota un precipitado amarillo
rojizo, se obtiene abundante precipitado en cuanto se aumente el
volumen de glucosa, precipitado rojo.

4. REACCIÓN DE NYLANDER
Procedimiento
En un tubo de ensayo poner 2 ml de Reactivo de Nylander,
agregar 10 ml de la solución de Glucosa al 2%, mezclar y hervir,
dejar el tubo durante 5 minutos hirviendo, se nota un precipitado
negro, anote los resultados.

5. AUSENCIA DEL PODER REDUCTOR DE LA SACAROSA

Procedimiento
Repetir las reacciones de Fehling, Benedict, Nylander;
reemplazando la Glucosa por la Sacarosa.
Anote los resultados

6. INVESTIGACIÓN DE LOS AZÚCARES REDUCTORES DE LA

ORINA
Procedimiento
A 5 ml del Reactivo de Benedict agregar 0.5 ml de orina, mezclar
y calentar en baño María por 5 minutos, enfriar y observar.

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PRÁCTICA N° 03

I. TÍTULO:
FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA DE LAS HEXOSAS
(GLUCOSA, SACAROSA, MALTOSA)
II. OBJETIVO:
- Determinar la fermentación alcohólica de las hexosas (glucosa,
sacarosa, maltosa)

III. INTRODUCCIÓN

La fermentación es un proceso complejo de descomposición de los hidratos de

carbono bajo la acción de las enzimas producidas por diferentes
microorganismos. En la mayoría de los casos este proceso va acompañado
con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2, H2, etc.)

La fermentación conduce, al fin y al cabo, a la formación de productos tales

como alcohol etílico, ácido láctico, etc. Según los tipos de microorganismos y
de los productos finales se distinguen varias formas de fermentación:
- La fermentación alcohólica, se utiliza en la industria con el fin de
obtener alcohol etílico.
Ejemplo:

Fermentación
C6H12O6 -------------------- 2 CH3 – CH2 – OH + 2 CO2Ȋ
Glucosa (enzimas) Etanol
(Alcohol etílico)

- La fermentación láctica, en la industria alimenticia se utiliza para la

obtención de diferentes productos lácteos y en la ganadería en el
proceso de ensilaje.
Ejemplo:

C6H12O6 -------------------- 2 CH3 – CHOH – COOH

Glucosa Ácido láctico

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A la fermentación alcohólica se someten solamente las Hexosas a

diferencia de otros monosacáridos, por ejemplo las Pentosas. Esto
se aprovecha para distinguir las Hexosas de las Pentosas.

La Maltosa y la Sacarosa se fermentan fácilmente con las levaduras,

mientras que la Lactosa no se fermenta.

En las levaduras están presentes las enzimas Maltasa y Sacarasa,

pero no tienen la enzima Lactasa.

La Lactosa bajo la acción de las bacterias que la desdoblan, pueden

someterse a la fermentación alcohólica, láctica y butírica.

Los disacáridos son aquellos carbohidratos que al ser hidrolizados se

desdoblan en dos moléculas de monosacáridos.
Ejemplo:

Sacarosa + H2O ----- Glucosa + Fructuosa

Maltosa + H2O ----- Glucosa + Glucosa
Lactosa + H2O ----- Glucosa + Galactosa

Esta hidrólisis puede realizarse por acción de ácidos relativamente

fuertes o por enzimas específicas (Maltasa, Lactasa y Sucrasa o
Invertasa).

La Sacarosa o Sucrasa, se encuentra muy difundida entre los

vegetales, especialmente en la caña de azúcar y la remolacha; en el
intestino delgado de los seres humanos y animales es desdoblada
por la enzima Sacarasa o Invertasa secretada por el jugo intestinal,
por hidrólisis da una mezcla de azúcares que tiene poder rotatorio
levógiro por lo cual se llama azúcar invertido, no reductora, ni forma
osasonas.

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IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  3 pastillas de levadura de cerveza  Termómetro
 Corchos pequeños  Glucosa, Maltosa, Sacarosa al 5%  Cocina
 Mortero y pilón  Azul de timol al 1% eléctrica
 Vasos de precipitado de 100 ml  Ácido Clorhídrico al 1%
y 600 ml  Reactivo de Fehling
 Agua de caño  Hidróxido de Sodio al 10%
 Papel filtro  Ácido Sulfúrico concentrado
 Papel de tornasol  Agua destilada

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA DE LAS HEXOSAS

Procedimiento
En un tubo de ensayo poner una pastilla de levadura de cerveza bien
molida y llenar el tubo con solución de glucosa, tapar el tubo con un
corcho y colocarlo en un vaso conteniendo agua tibias (37°C); después
de algún tiempo se va ebullir gas que se dirige a un extremo del tubo
desplazando a la solución. Repetir el experimento con las soluciones
de Maltosa y Sacarosa.

2. HIDRÓLISIS DE LOS DISACÁRIDOS Y POLISACÁRIDOS

Procedimiento
La hidrólisis ácida de los Disacáridos y Polisacáridos los divide en los
azúcares que los constituyen, apareciendo el poder reductor del que
carecía como polisacárido.
Inversión de la Sacarosa
A 3 ml de solución de Scarosa al 5% agregar 1 o 2 gotas de azul de
timol al 0.1% y gota a gota el HCl al 1% hasta obtener una solución
rosado-naranja. Hervir durante 30 segundos, agregar un volumen igual
del reactico de Fehling, hervir, aparece un precipitado amarillo-rojizo,
que cambia a rojo.

3. HIDRÓLISIS DE LA CELULOSA
Procedimiento
Triturar en un mortero un pedazo de papel de filtro con 3 ml de ácido
sulfúrico concentrado hasta obtener un líquido espeso, vertirlo en agua
hasta completar 15 ml, hervir durante algunos minutos, neutralizar con
hidróxido de sodio al 10% (probar con papel de tornasol). Con 1 cc de
esta solución neutralizada, hacer la reacción de Fehling.

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PRÁCTICA N° 04

I. TÍTULO:
POLISACÁRIDOS
II. OBJETIVO:
- Reconocer la presencia de polisacáridos a través de la prueba del
Yodo.

III. INTRODUCCIÓN
Los polisacáridos son hidratos de carbono de elevado peso molecular que
mediante la hidrólisis con enzimas específicas o ácidos se desdoblan en gran
número de restos de monosacáridos y/o derivados sencillos.
La D-Glucosa es la unidad monosacárida predominante en los polisacáridos;
también encontramos la D-Manosa, la D-Fructuosa, D- y L- Galactosa, la D-
Xilosa y la D-Arabinosa.
El homopolisacárido más común de la Glucosa en las plantas y los hongos, se
denomina ALMIDÓN y en los animales se llama GLUCÓGENO.
En las células vegetales el almidón se encuentra como una mezcla de
AMILOSA y AMILOPECTINA.
El almidón en el curso de la hidrólisis da una serie de productos intermedios,
las DEXTRINAS, luego el Disacárido la Maltosa y finalmente el monosacárido
la Glucosa.
Esquema de la hidrólisis ácida del almidón:

ALMIDÓN
HCl diluido, t° = 100°C, duración 1 minuto

AMILODEXTRINAS + I2 ---------- Coloración violeta azul

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Almidón al 1%  Cocina
 Agua de caño  Dextrina al 1% eléctrica
 Lugol
 Reactivo de Benedict
 HCl concentrado

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. PRUEBA DEL YODO

Se sabe que algunos polisacáridos dan con el Yodo ciertos colores que
son característicos. En el caso del almidón y del glucógeno, se cree
que el color producido se debe a un complejo de adsorción en el cual
los iones Yodo (I), absorben a la molécula de polisacárido.
Una teoría más reciente considera que las cadenas que constituyen las
moléculas del polisacárido tienen forma espiral, y que el complejo se
formaría teniendo un átomo de Yodo en el centro de cada una de esas
espiras. El color dependerá entonces de la longitud de la cadena
normal (no ramificada) que interviene en la formación del complejo. Así
la amilosa, que es el componente lineal del almidón es de color azul
oscuro, la amilopectina (componente ramificado) de color morado; el
glucógeno de color pardo y las dextrinas dan colores variables de
acuerdo al tamaño de la molécula.

Procedimiento
1. Tome dos tubos de prueba. Márquelos con las letras “A” y “D”
(almidón y dextrina). Coloque en el tubo A, 2 cc de la solución de
almidón al 1%. En el tubo “D”, 2 cc de dextrina al 1% añada a cada
tubo dos gotas de lugol.
Caliente ahora el líquido de ambos, hasta que el color producido
desaparezca, pero sin calentar excesivamente. Enfríe ahora ambos
al chorro de agua fría. Observe y dibuje.

2. Poder reductor: Tome 2 tubos de prueba y ponga en cada uno 2

cc del reactivo de Benedict. A uno de los tubos añada 0.5 cc de
Dextrosa al 1%. Al otro añada 0.5 cc de almidón al 1%. Ponga
ambos en baño María durante 5 minutos. Observe y dibuje.

3. Hidrólisis ácida: Coloque en un tubo de prueba 10 cc de almidón

al 1%. Agregue 15 gotas de HCl concentrado; caliente a ebullición.
Tome cada minuto 1 cc del hidrolizado y póngalo en tubo de prueba
y añada una gota de lugol. Esta operación se repite hasta que no
haya ningún cambio de coloración al agregar el lugol.

Observe la serie de colores en los tubos. Dibuje. Realice ahora la

prueba de Benedict con el hidrolizado restante. Dibuje.

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PRÁCTICA N° 05

I. TÍTULO:
REACCIONES DE COLORACIÓN DE LAS PROTEÍNAS
II. OBJETIVO:
- Identificar las reacciones de coloración de las proteínas.

III. INTRODUCCIÓN

Las proteínas son polipéptidos de elevado peso molecular o complejos que se encuentran
en todas las células vivas: en la sangre, leche, huevos y en toda clase de semillas y
pólenes.
Están constituidos en su mayor parte por aminoácidos. La proteína es un principio
nutritivo que siempre contiene C, H, O y N; pero además suele tener S y muchas veces P.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Sulfato de Cobre al 1%,  Cocina
 Clara de huevo  Hidróxido de Sodio al 40%. eléctrica
 Agua de caño  Ninhydrina al 0.2%
 Agua destilada  Ácido Nítrico concentrado
 Papel filtro  Reactivo de Millon
 Orina  Ácido Sulfosalicílico al 20%
 Reactivo de Esbach
 Sulfato de Amonio

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. REACCIÓN DE BIURET
La reacción de Biuret es una reacción muy general de las proteínas, es
característica del enlace peptídico de los aminoácidos y de la función
amida.
Procedimiento
En un tubo de prueba poner 3 ml de clara de huevo (seis veces su
volumen de agua), luego agregar 1 ml de Hidróxido de Sodio al 40%.
Mezclar y agregar gota a gota una solución de Sulfato de Cobre al 1%,
agitar; durante la adición del Sulfato de Cobre, aparece una coloración
que varía del rojo al violeta más o menos oscuro.

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2. REACCIÓN DE NINHYDRINA
La reacción permite determinar todos los aminoácidos que presentan
un grupo carboxilo y un grupo amino libres. Es una reacción general de
todas las proteínas y de los aminoácidos libres con excepción de la
Prolina e Hidroxiprolina.
Procedimiento
A 1 ml de la clara de huevo diluida, agregar 1 ml de una solución de
Ninhydrina al 0.2%. Hervir, aparece una coloración azul.

3. REACCIÓN XANTOPROTEICA
Esta reacción caracteriza a ciertos grupos aromáticos de los
aminoácidos y de las proteínas.
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 3 ml de clara de huevo diluida. Agregar 1
ml de Ácido Nítrico concentrado, aparece un precipitado blanco. Hervir
durante 1 minuto: el precipitado cambia a amarillo y se disuelve
parcialmente dando una coloración amarilla, enfriar con agua y agregar
gota a gota Hidróxido de Sodio al 40%. El color cambia a anaranjado.

4. REACCIÓN DE MILLON
Esta reacción caracteriza al Grupo Fenólico.
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar 3 ml de clara de huevo diluida. Agregar 1
ml del reactivo de Millon, se forma un precipitado blanco, si se calienta
el tubo con cuidado, el precipitado cambia a rojo o bien se disuelve,
dando una solución roja.

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

PRECIPITACIÓN POR LAS SALES DE METALES PESADOS

Las proteínas, sobre todo en medio alcalino, son precipitadas por las sales de
metales pesados.

1. PRECIPITACIÓN POR EL NITRATO DE MERCURIO

Procedimiento
Poner en un tubo de ensayo colocar 3 ml de clara de huevo diluida.
Agregar algunas gotas del reactivo de Millon, aparece un precipitado
blanco.

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2. PRECIPITACIÓN POR EL ÁCIDO SULFOSALICÍLICO

Procedimiento
Poner en un tubo de ensayo colocar 3 ml de clara de huevo diluida,
luego agregar 1 a 2 gotas de solución de Ácido Sulfosalicílico al 20%,
se forma un precipitado blanco.

3. PRECIPITACIÓN POR EL REACTIVO DE ESBACH

Procedimiento
Poner en un tubo de ensayo colocar 3 ml de clara de huevo diluida,
luego agregar una cantidad igual del reactivo de Esbach. Aparece un
precipitado amarillo.

4. PRECIPITACIONES DE LAS PROTEÍNAS DE LA CLARA DE HUEVO

POR EL SULFATO DE AMONIO SATINADO
Procedimiento
Colocar una pequeña cantidad de cristales de Sulfato de Amonio en el
fondo de un tubo de ensayo. Agregar sobre los cristales 5 ml de clara
de huevo diluida, agitar hasta la disolución de los cristales de la sal;
continuar la adición de Sulfato de Amonio hasta que quede una
pequeña porción no disuelta. Poner en reposo durante 10 minutos y
verificar que la solución esté saturada. Filtrar, redisolver el precipitado
por la adición de agua destilada sobre el papel filtro y hacer la reacción
de Biuret.

5. INVESTIGACIÓN DE PROTEÍNAS EN LA ORINA

Procedimiento
En un tubo de ensayo poner 2 ml de orina y agregar luego la misma
cantidad del reactivo de Esbach. Mezclar invirtiendo el tubo unas 15
veces sin agitar. Observar la aparición o ausencia de precipitado.

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PRÁCTICA N° 06

I. TÍTULO:
ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA LECHE
PROTEÍNAS DE LA LECHE
II. OBJETIVOS:
- Desarrollar el análisis cualitativo de los componentes de la leche.
- Reconocer las proteínas de la leche.

III. INTRODUCCIÓN

El análisis cualitativo de la leche, se refiere a sus propiedades físicas, químicas y

bacteriológicas.
La leche es un líquido de color blanco o cremoso y tiene un sabor ligeramente dulce,
agradable al paladar. Ninguna mezcla artificial de sus componentes, aunque se
mezclasen en las proporciones correctas, daría lugar a un líquido semejante.
Su principal constituyente es el agua y contiene además, grasa, azúcar, sales,
compuestos nitrogenados, enzimas y vitaminas, junto con otros componentes.
Las principales proteínas de la leche son: la caseína, las lactoalbúminas, las
lactoglobulinas y las lipoproteínas.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Leche  Cocina
 Agua destilada  Ácido Acético al 1% eléctrica
 Papel filtro  Hidróxido de Sodio al 5%
 Solución de Ninhydrina
 Cloruro de Sodio
 Hidróxido de Sodio al 40%
 Sulfato de Cobre al 1%
 Acetato de Plomo
 Sulfato Cúprico al 3%

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. PRECIPITACIÓN Y AISLAMIENTO DE LA CASEÍNA

La caseína de la leche puede ser aislada por acción de los ácidos sobre
la leche. La caseína es insoluble en agua, pero se disuelve fácilmente en
soluciones de álcalis. Al separar la caseína de la leche, se queda el
suero, que contiene lactoalbúminas, lactosa y sales minerales.
Procedimiento
Se mide 25 ml de leche y luego se completa en la probeta a 100 ml con
agua destilada, luego se añade gota a gota Ácido Acético al 1% hasta
que deje de separarse el precipitado blanco en forma de capas de
caseína que arrastre consigo la grasa. El ácido se debe añadir con
mucho cuidado, pues la caseína se disuelve muy fácilmente con un
exceso de ácido. Filtrar y lavar el precipitado en el papel de filtro con
agua 2 a 3 veces. El precipitado y el filtrado se guardan. A una pequeña
cantidad de precipitado, caseína con grasa, se agrega una solución de
Hidróxido de Sodio al 5%. La caseína se disuelve, las grasas se quedan
en suspensión. El líquido se filtra a través de un papel filtro empapado
en agua. La grasa se detiene en el papel de filtro. A 1 ml de filtrado
agregar 1 ml de la solución de Ninhydrina, aparece una coloración que
varía del azul al violeta.

2. AISLAMIENTO DE LAS LACTOALBÚMINAS Y LAS

LACTOGLOBULINAS
Procedimiento
A 5 ml del primer filtrado que tiene reacción ácida (debido al Ácido
Acético) se mezcla con 5 ml de una solución saturada de Cloruro de
Sodio (1 en 1) y se hierve. Se precipitan las lactoalbúminas y las
lactoglobulinas, se filtra, el precipitado se lava y se disuelve con agua
destilada. A 3 ml de la solución se le agrega 1 ml de Hidróxido de Sodio
al 40%, mezclar y agregar gota a gota Sulfato de Cobre al 1%, observar
si la reacción de Biuret es positiva.

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3. DESNATURALIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS DE LA LECHE POR

LAS SALES DE METALES PESADOS
Procedimiento
En un tubo de ensayo se vierte 4 ml de solución de Acetato de Plomo y
en otro 4 ml de Sulfato Cúprico al 3%. A ambos tubos de ensayo se
añade 2 ml de leche, las proteínas precipitan. En esta propiedad se basa
la utilización de la leche como antídoto en el caso de intoxicación por
sales de metales pesados.

4. REACCIÓN DE RECONOCIMIENTO DE LA LACTOSA

Procedimiento
A 5 ml de filtrado desproteinizado se agrega 5 ml de reactivo de
Osazonas, se mezcla y se hierve al baño María por 30 minutos,
aparecen cristales, observar al microscopio y dibujar.

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PRÁCTICA N° 07

I. TÍTULO:
TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
II. OBJETIVO:
- Conocer el procedimiento de aplicación de las técnicas
cromatográficas.

III. INTRODUCCIÓN

La cromatografía, es una técnica que permite separar los diferentes componentes de una
mezcla por afinidad diferencial de los componentes de la fase estacionaria por la fase
móvil. La fase estacionaria generalmente es un sólido pero puede ser un líquido. La fase
móvil generalmente es un líquido pero puede ser un gas.
La cromatografía puede clasificarse en:
a. De adsorción
b. De reparto
c. De cambio de ion
d. De penetrabilidad
e. De afinidad

ESQUEMA DE LA TÉCNICA CROMATOGRÁFICA DE REPARTO SOBRE PAPEL

Fase del solvente

---------------------------------------------------------------

.
h

_______________________________________
Origen . Solvente
. (Fase acuosa)
.

Ej. Xilosa o Leucina (Fase orgánica)

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Lugar: LB-FFB- UNAP- PT- 001- V02. Versión: 2.0 Página 28 de 38
Iniciado por: Jaime Noriega Ramírez
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CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
Descrita por primera vez por el botánico ruso TSWEET en 1906, no se
generalizó su uso hasta 1930. Se realiza en columna, que se llena de un
adsorbente adecuado.
Las sustancias se separan mediante la elusión con diferentes disolventes, de
acuerdo con su secuencia de adsorción.
Los adsorbentes más utilizados, en orden decreciente de actividad son:
albúmina, carbón vegetal, magnesio, sílice, almidón y carbonato de calcio.
Los disolventes más utilizados, en orden creciente de polaridad son: éter de
petróleo, tetra cloruro de carbono, éter, acetona, benceno, metanol y agua.
IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Carbonato de Calcio  Estufa
 Hojas cortadas en pedazos  Solución de Ninhydrina
 Papel filtro
 Papel
 Luna de reloj

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
Fundamento
El principio de la Cromatografía de Adsorción puede demostrarse
mediante la separación de pigmentos vegetales, los pigmentos son
extraídos del material vegetal mediante solventes orgánicos y como
material de adsorción capilar el Carbonato de Calcio, los pigmentos
vegetales aparecen como diversas bandas sobre la tiza.
Procedimiento
Cortar las hojas en pequeños pedazos y extraer luego los pigmentos
moliendo las hojas en un mortero con acetona, procurando que el líquido
obtenido sea lo más concentrado posible, filtrar y colocar 5 ml del líquido
verde oscuro en un vaso de precipitado, colocando una tiza
verticalmente en el centro.

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Después de una hora, haga un diagrama de la separación e identifique

las bandas por su color.

2. CROMATOGRAFÍA DE REPARTO SOBRE PAPEL Y FUNDAMENTO

Fundamento
Se basa en la diferencia de coeficientes de reparto de las sustancias entre
una fase orgánica y una fase acuosa.
La cromatografía de reparto puede realizarse utilizando como soporte:
papel, capa fina o columna.
La cromatografía en papel puede ser ascendente o descendente y se utiliza
en Bioquímica para separar aminoácidos, azúcares, péptidos, nucleótidos y
otros metabolitos de bajo peso molecular.
Procedimiento
En una tira de papel de aproximadamente 3 cm de ancho, y a 3 cm del
borde inferior, trazar una línea a lápiz y en el centro colocar una gota de la
muestra a separar.
En una probeta se echa una pequeña cantidad del solvente, que al
vaporizarse satura la cámara y evita que se seque el papel, dejar libremente
la tira de papel y tapar con una luna de reloj, luego que el solvente ha
recorrido unos 25 cm, se seca en la estufa (marcar con lápiz la altura
alcanzada H), y se hace el revelado rociando finalmente la tira de papel con
una solución de Ninhydrina; aparecen manchas violetas, marcar el centro
de la mancha y medir la altura alcanzada (h).
Rf = H
h

Rf = factor de retención, es la razón entre la distancia que ha migrado un

compuesto (H) y la distancia recorrida por el solvente (h).

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PRÁCTICA N° 08

I. TÍTULO:
LÍPIDOS
II. OBJETIVO:
- Determinar la presencia de lípidos en diferentes experimentos.

III. INTRODUCCIÓN

Los lípidos son un conjunto de biomoléculas orgánicas, cuya característica fundamental

es de ser insolubles en agua y solubles en los disolventes orgánicos, como éter,
cloroformo, alcohol, acetona, sulfuro de carbono, tetracloruro de carbono.
La mayoría de ellos contienen ácidos grasos o son derivados de estos. En general, el
ácido graso esterifica un alcohol. Este alcohol muy a menudo es el GLICEROL.
Los lípidos suelen ser moléculas de número relativamente alto de átomos de carbono.
Algunos lípidos poseen átomos de fósforo, nitrógeno o azufre.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos

 Tubos de ensayo  Aceite de oliva  Cocina
 Gradilla  Hidróxido de sodio al 10% eléctrica
 Bisulfato de potasio pulverizado
 Éter
 Hidróxido de sodio alcohólico al 10%
 Lugol
 Engrudo de almidón
 Cloruro de Bario al 10%
 Cloruro de Sodio

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. ESTABILIZACIÓN DE UNA EMULSIÓN
Procedimiento
En un tubo de ensayo poner 0.5 ml de aceite de oliva. Llenar casi completamente el
tubo con agua y agitar fuertemente.

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En un segundo tubo a la misma cantidad de aceite (0.5 ml) agregar 1 ml de hidróxido

de sodio al 10% y llenar casi completamente el tubo con agua, agitar. Dejar en reposo
en la gradilla por 10 minutos.
El líquido contenido en el primer tubo se separará rápidamente en una capa de agua y
una capa de aceite. En el segundo tubo persiste una emulsión de aspecto lechoso.
¿Qué compuesto ha formado el hidróxido de sodio con el ácido oleico libre del aceite
de oliva?
¿Por qué la emulsión es estable en el segundo tubo?

2. PREPARACIÓN DE LA ACROLEINA (Deshidratación de la glicerina o glicerol)

Procedimiento
En un tubo de ensayo seco, poner una o dos gotas de aceite de oliva. Agregar una
pequeña cantidad de bisulfato de potasio pulverizado y calentar en la hornilla. El
bisulfato funde con producción humo blanco que tiene olor característico irritante a las
vías respiratorias.

CH2OH CH2

Calor
CHOH ------------------ CH + 2H2O
KHSO4

CH2OH CHO
Glicerol Acroleína

3. SAPONIFICACIÓN DE LA TRIOLEÍNA
Procedimiento
En un Matraz de Erlenmeyer pequeño, seco, poner 2 ml de aceite de oliva y agregar 4
ml de éter, después 10 ml de hidróxido de sodio alcohólico al 10%. Tapar y agitar
durante 10 minutos manteniendo cerrado el frasco. Dejar en reposo por 10 minutos
aproximadamente, hasta la aparición de grumos que floculan por formación del oleato
sódico insoluble en el éter.
Disolver algunos grumos en agua y guardar.

¿En qué solventes es soluble el oleato sódico?

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4. PROPIEDADES DE UN JABÓN (Oleato de Sodio)

Procedimiento
Repartir en tres tubos de ensayo la solución de jabón preparado en el ejercicio
anterior. Al primer tubo agregar gota a gota el ácido acético concentrado hasta la
aparición de un precipitado blanco. En un segundo tubo agregar una solución de
Cloruro de Bario al 10% hasta la aparición de un abundante precipitado. En el tercer
tubo agregar un volumen igual de solución saturada de Cloruro de Sodio, se obtiene
también un precipitado.
Las precipitaciones son de naturaleza diferentes. En el primer caso se ha acidificado
la solución y se ha transformado al jabón soluble en ácidos grasos insolubles. En el
segundo caso se ha transformado el jabón sódico soluble en jabón de Bario soluble.
En el tercer caso se ha precipitado el jabón sódico por la presencia de un exceso de
electrolitos.

¿Qué es un jabón?

5. FIJACIÓN DEL YODO SOBRE EL ÁCIDO OLEICO

Procedimiento
En un tubo de ensayo poner aproximadamente 5 ml de aceite de oliva, agregar 10
gotas de lugol, agitar, la mezcla es rojiza, calentar la coloración, cambia a amarillo.
Cuando la coloración roja ha desaparecido por completo, enfriar y agregar algunas
gotas de engrudo de almidón.

No se observa coloración; si se agrega un exceso de lugol aparece una coloración

azul.
Explique lo ocurrido.

Explique qué es saponificación

Defina Acroleina y Trioleina
¿Qué tipo de jabones se produce en la industrialización? Describa cada uno.

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PRÁCTICA N° 09

I. TÍTULO:
EL COLESTEROL
II. OBJETIVOS:
- Establecer la importancia del colesterol en el organismo.
- Explicar la importancia del colesterol en el metabolismo humano y su
relación con diversas patologías.

III. INTRODUCCIÓN

El colesterol, químicamente 3-Hidroxi-5,6-Colesteno. Se encuentra ampliamente

distribuido en todas las células del organismo, pero especialmente en el tejido nervioso,
particularmente en la sustancia blanca del encéfalo, pero también se encuentra en la
sangre, la bilis, heces, esperma y lanolina.
A menudo se encuentra combinado con ácidos grasos como Ester de colesterillo, y es el
compuesto precursor de todos los esteroides sintetizados en el cuerpo. Existe en mayor
cantidad en las grasas animales, pero en menor cantidad en los vegetales.
Entre los alimentos especialmente ricos en colesterol están los huevos, los productos
lácteos como la mantequilla, queso y la nata, y en la mayoría de las carnes.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos
 Tubo de ensayo  Cloroformo
 Mortero y pilón  Extracto de colesterol
 Cerebro  Ácido sulfúrico
 Placa Petri  Ácido acético
 Papel filtro  Anhídrido acético

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. AISLAMIENTO DEL COLESTEROL DEL TEJIDO NERVIOSO
Procedimiento
Tres (3) gramos de cerebro desmenuzado, se trituran
cuidadosamente en un mortero con 6 gramos de yeso. La masa
espesa obtenida se aplica en una lámina de vidrio en una capa fina y

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se seca, cuando la masa está seca se separa de la placa y en un

mortero seco se tritura convirtiéndola en polvo. El polvo se traslada
en un tubo de ensayo al que se agrega 10 ml de cloroformo, se agita
cuidadosamente durante 5 minutos y se filtra.
El filtrado obtenido se usa para las reacciones del reconocimiento del
colesterol.
2. REACCIONES COLOREADAS DEL COLESTEROL
Principio del método
Bajo la acción de agentes deshidratantes el colesterol se transforma
en un hidrocarburo con dobles enlaces conjugados. El colesterileno,
que al interaccionarse con el ácido sulfúrico y el anhídrido acético, da
complejos coloreados.
¿Qué otros compuestos dan también reacciones positivas?

3. REACCIÓN DEL ÁCIDO SULFÚRICO. REACCIÓN DE SCHIFF

Procedimiento
En un tubo de ensayo seco, se vierte 1 ml de extracto del colesterol
en cloroformo y, con cuidado por la pared se hace destilar 1 ml de
ácido sulfúrico concentrado. En el contacto de los líquidos se observa
la aparición de un anillo color rojo.

4. REACCIÓN CON EL ÁCIDO SULFÚRICO. REACCIÓN DE

SALKOWSKY
Procedimiento
En un tubo de ensayo seco, se vierte 1 ml de extracto de colesterol
en cloroformo y 1 ml de ácido sulfúrico. Lo líquidos se mezclan
agitando el tubo de ensayo. Al separarse las capas el extracto
superior de cloroformo resulta coloreado de rojo y el inferior de un
color rojo amarillento con fluorescencia verde. Si el extracto inferior
del líquido se le añade 1 ml de ácido acético glacial aparece una
coloración rojo rosada, mientras que la fluorescencia se mantiene.

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5. REACCIÓN CON EL ANHÍDRIDO ACÉTICO Y ÁCIDO SULFÚRICO

Reacción de Libermann-Burkhardt
Procedimiento
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de extracto de colesterol en
cloroformo, se añaden 10 gotas de anhídrido acético, 2 gotas de
ácido sulfúrico y se mezcla todo cuidadosamente. El líquido adquiere
primero una coloración roja, luego azul violeta y por último verde.

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PRÁCTICA N° 10

I. TÍTULO:
LA BILIS
II. OBJETIVOS:
- Comprender la importancia de las sales biliares en la fisiología de nuestro
cuerpo.

III. INTRODUCCIÓN

La Bilis es un líquido amarillo dorado secretado por el hígado con pH entre 7 y

8.5
Interviene en la digestión de las grasas y en la absorción de los productos
químicos.
Los componentes característicos de la bilis son:

Pigmentos biliares: Biliverdina

Bilicianina
Bilirrubina

Ácidos biliares: Ácido cólico

Ácido desoxicólico

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Reactivos
 Tubos de ensayo  Bilis diluida
 Flor de azufre  Sacarosa
 Agua  Ácido sulfúrico concentrado
 Ácido nítrico concentrado.
 Lugol

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. REACCIÓN DE PETTENKOFER
Procedimiento
En un tubo de ensayo poner 5 ml de bilis diluida y un poco de sacarosa, agitar
para disolver y agregar 2 ml de ácido sulfúrico concentrado, por las paredes del
tubo mezclar con precaución, se ve aparecer gradualmente una coloración
púrpura.
En presencia del ácido sulfúrico, la sacarosa es transformada en furfural y al
condensarse con las sales biliares, da un compuesto de color púrpura.

2. REACCIÓN DE HAY
Procedimiento
Tomar dos tubos de ensayo. En uno de los tubos poner 10 ml de bilis diluida,
en el otro poner 10 ml de agua, agregar en la superficie libre de los líquidos
pequeñas cantidades de flor de azufre.
Observe y explique lo ocurrido en ambos tubos.

3. REACCIÓN DE GEMLING
Procedimiento
Poner en un tubo de ensayo 3 ml de ácido nítrico concentrado. Con una pipeta
agregar con precaución 3 ml de bilis diluida. Agitar suavemente, aparece una
serie de anillos coloreados.
Observar, dibujar y explicar lo ocurrido.

4. REACCIÓN DE LUGOL
Procedimiento
A 2 ml de bilis no diluida agregar 1 ml de lugol, aparece una coloración verde.
Explique los resultados.

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6 MECANISMOS DE EVALUACIÓN
Puntualidad y asistencia 10 %

Exámenes 30 %

Informes 40 %

Exposición 20 %

MEDIDAS DE SEGURIDAD
 Nunca comience el trabajo en el Laboratorio de Bioquímica sin el permiso del
docente.
 Para el trabajo utilice los materiales de protección personal indicados por el
docente.
 Utilice las herramientas y materiales de laboratorio con mucho cuidado.

8 DISPOSICIÓN DE DESECHOS BIOLOGICOS Y QUIMICOS

Se aplica todo lo contemplado en el POE 001-V1-2018-UNAP de manejo de residuos
biológicos y químicos en los laboratorios de la FA.
9 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. CHECHETLIN, A. Prácticas de bioquímica del ganado y aves de corral. Editorial

Mair Moscú. Pág. 343.
2. Díaz, Vargas, M. K. 2012. Manual de Bioseguridad del INS. Instituto Nacional de
Salud INS. (Gestión Humana).Colombia. 53p.
3. GOMEZ, H. (2009). Carbohidratos. México. Revisado, 2018.
[Link]
4. LATHAM, M. (2002). Nutrición humana en el mundo en desarrollo- Capítulo 9.
Macronutrientes: carbohidratos, grasas y proteínas. Roma. Revisado, 2018.
[Link]

5. MURRAY, R. (1988). Bioquímica de Harper. Undécima Edición. Editorial El

Manual Moderno S.A de C.V. México. Pág 713.

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