E. P.

AGRONOMIA-OXAPAMPA, UNDAC
MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA 2018

PRACTICA N° 2

MICROSCOPIO

Uso correcto del microscopio binocular compuesto

INTRODUCCIÓN.
El Microscopio es aquel instrumento diseñado especialmente para poder apreciar elementos muy pequeños y
que obviamente resultan prácticamente imperceptibles para la visión humana.
El tipo de microscopio más común que se creó fue el óptico, el cual consiste en una o varias lentes las cuales
permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona gracias a la refracción. Algunos otros tipos
son: microscopio simple, compuesto, de fluorescencia, de luz ultravioleta, en campo oscuro, petrográfico, de
contraste de fase, de luz polarizada, confocal, electrónico, electrónico de transmisión, electrónico de barrido, de
iones de campo, de sonda de barrido, de fuerza atómica, de efecto túnel, virtual y antimateria.

Los dos principios fundamentales de la microscopía son el poder de resolución y el aumento o magnificación.

Resolución. La resolución del microscopio, es la capacidad que tiene un microscopio de poder distinguir dos
objetos que se encuentran muy unidos uno al otro. Esto depende de varios aspectos.

La capacidad de aumento y resolución del microscopio depende del tipo de luz que se emplea.

Partes de un microscopio óptico compuesto.

La mayoría de los microscopios compuestos tienen los mismos componentes básicos. Sin embargo, la
disposición de muchos de esos componentes varía según el modelo y la marca, así como, la posibilidad de
presentar otras piezas que son opcionales.
La mayoría de microscopios actuales están constituidos por tres componentes fundamentales:
 La óptica (conjunto de lentes).
 La mecánica (soportes del sistema óptico, iluminación y otras funciones).
 El sistema de iluminación.

Componente óptico.
Componente Función
Oculares Aumenta la imagen real proyectada por el objetivo tantas veces como indique el número
inscrito en ellos. Se encuentra situado en la parte superior del tubo. Los oculares son
intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. En uno de los oculares
(generalmente el izquierdo) se encuentra un anillo de Dioptrías, que sirve para ajustar la
visión binocular.
Objetivos Conjunto de lentes que producen imágenes de la muestra aumentadas 4, 10, 40 o 100 veces,
según se indique en los mismos. Se disponen en una pieza giratoria denominada revólver. Se
distinguen dos clases de objetivos: Los secos y los de inmersión; al primer tipo pertenecen
los objetivos de aumento débil o mediano (5x, 10x, y 40x; donde x = aumentos). Los de
inmersión son los de mayor aumento (100) con mayor poder de resolución.

Componente mecánico.
Componente Función
Base Parte inferior en la cual se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es
rectangular.
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Brazo o Porción central de la cual se debe tomar el microscopio, en forma de C.

columna
Revólver Parte giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revólver,
los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo.
Platina Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a observar.
Presenta un orificio central para permitir el paso de la luz y sobre la cual se coloca la muestra
que se va a observar.
Carro Sistema de 2 pinzas ubicado encima de la platina, que sirve para desplazar la muestra en el
mecánico eje X y el eje Y (izquierda – derecha y adelante – atrás, respectivamente), mediante una serie
de perillas ubicadas en el costado de la platina.
Tubo o cabezal Cilindro que soporta los oculares en la parte superior y en la parte inferior se ubica el revólver.
El cabezal puede ser monocular o binocular. En estos últimos, se encuentra una escala de
ajuste interpupilar.
Tornillo Sirve para localizar la imagen, se acciona por medio de dos tornillos de cremallera que se
macrométrico encuentran a ambos lados del microscopio (Enfoque grueso).
Tornillo Se utiliza para dar el enfoque adecuado a la imagen localizada con el tornillo macrométrico.
micrométrico Es de extraordinaria precisión y por lo tanto muy delicado. Una vez enfocada la imagen con
el lente de menor aumento solo se debe usar el tomillo micrométrico para cambiar de
aumentos y dar la nitidez necesaria a la imagen (Enfoque fino).

Sistema de iluminación.
Componente Función
Condensador Es un sistema de lentes convergentes entre la fuente de luz y la platina. Estos lentes
concentran los rayos luminosos sobre la preparación (condensador de abertura).
Filtro Es un disco de vidrio mate o de diferente color que se puede ubicar en la parte inferior del
diafragma y sobre un anillo transportable; este filtro permite seleccionar la longitud de onda
de luz a emplear.
Foco o fuente Proporciona la luz necesaria para la observación de la muestra. Esta puede ser o bien espejos,
emisora de luz Lámparas o bombillas. Si emplea espejos los cóncavos se usan cuando la luz requerida es
menor (con lentes de 4x, 10x y 40x) y el espejo plano para mayor iluminación.
Diafragma Está formado por un conjunto de láminas falciformes las cuales por medio de una palanca
(Iris) lateral se pueden cerrar concéntricamente regulando la cantidad de luz proveniente del
condensador.

Cuidados que se deben tener con el microscopio.

Para que este equipo funcione adecuadamente y se pueda obtener el mayor provecho de él, se deben tener en
cuenta algunas medidas antes, durante y después de su uso. Solo de esta manera puede conservarse para usos
posteriores:
 Cuando transporte el microscopio, sujételo siempre con las dos manos (por la base y por la columna).
 Sitúe el microscopio a unos 10cm., de la orilla de la mesa de trabajo.
 Para cambiar de objetivo, utilice la rosca estriada del revólver, no lo haga tirando de los objetivos, pues de
esta manera se desajustan los sistemas de lentes y la propiedad parafocal (propiedad de mantener más o
menos enfocada y en el mismo campo focal la muestra, al cambiar de objetivo).
 No use demasiado aceite de inmersión. Solo bastará una pequeña gota para realizar la observación.
 Asegúrese siempre de haber limpiado el lente de inmersión después de usarlo, con papel especial para
lentes. Si no se limpia el lente después del uso del aceite, queda un residuo pegajoso que reduce la eficiencia
del lente y puede permitir el crecimiento de hongos.
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 Cuando ya no se vaya a utilizar el microscopio o se desee cambiar de muestra, debe colocarse en el objetivo
de menor aumento en posición de enfoque y la platina abajo.
 Nunca retire la preparación con el objetivo de inmersión en posición de enfoque.
 Aprenda a mirar por el microscopio con los dos ojos abiertos.
 No desarme ninguna parte del microscopio para limpiarlo, esto solo lo hace personal capacitado.
 Evite tocar con los dedos los lentes del microscopio. Evite emplear el microscopio si usted tiene pestañina
puesta, ya que esta se acumula en los oculares reduciendo su eficacia y en cuyo caso deberá emplear los
capuchones protectores de oculares.
 Nunca deje placas montadas en el microscopio en posición de observación.
 Encienda la bombilla únicamente en el momento de hacer las observaciones.
 Al momento de apagar definitivamente el microscopio: Coloque el objetivo de menor aumento en posición
de enfoque, retire la muestra, limpie el objetivo de inmersión con papel especial o gasa y alcohol
isopropílico sin frotar el lente; seque de inmediato el lente con otro papel, baje completamente la platina,
ubique en “cero” la perilla de intensidad de luz, apague el interruptor de la fuente y desconecte del toma
corriente. Deje enfriar el bombillo dejando el microscopio en la mesa, para que el responsable del equipo
lo revise y lo guarde en el sitio adecuado y nunca enrolle el cable sobre el microscopio.
 Cubra el microscopio con el forro protector.

Pasos para la observación de muestras bajo el microscopio compuesto.

1. Coloque la preparación a observar (portaobjeto con la muestra), sobre la platina y sujétela con las pinzas
del carro. Compruebe previamente que el objetivo de menor aumento está en posición de enfoque.

2. Realice el enfoque de la muestra, iniciando SIEMPRE por el objetivo de menor aumento (4x o 5x,
dependiendo del fabricante del microscopio), así:
 Gire el tornillo macrométrico para realizar el enfoque grueso de la preparación (observación de la
imagen).
 Cuando observe la imagen, realice el enfoque fino girando el tornillo micrométrico, hasta lograr total
claridad de la imagen.
 Si es necesario, mejore la iluminación de la preparación girando la perilla reguladora de voltaje.
 Mueva los oculares lateralmente, para ajustar la visión a su distancia interpupilar.
 Ajuste la visión binocular con el anillo de dioptrías de la siguiente forma: Mire con el ojo derecho por
el ocular respectivo, cubriendo el ocular izquierdo y enfocando con el tornillo micrométrico lo mejor
posible (enfoque fino). Ahora ajuste el ocular izquierdo, así: Cubra el ocular derecho, mire con el ojo
izquierdo por el respectivo ocular y enfoque con el anillo de dioptrías (no con el tornillo micrométrico).

3. Coloque el objetivo 10x en posición de enfoque, girando el revólver suavemente, NO girando de los mismos
oculares, pues estos se desajustan y la observación no va a ser adecuada. En este paso, solo haga uso del
tornillo micrométrico para aclarar la imagen, NO use el tornillo macrométrico.

4. Continúe con el objetivo 40x, colocándolo en posición de enfoque y suba ligeramente el condensador. La
imagen debe estar casi enfocada (afine con el tornillo micrométrico); si la imagen no está enfocada,
devuélvase al objetivo de menor aumento y repita la operación completa.

5. Empleo del objetivo de inmersión (100x):

 Gire el revólver hacia el objetivo de inmersión, dejándolo a medio camino entre éste y el de 40x.
 Coloque una gota de aceite de inmersión sobre el punto de luz (recuerde que el condensador debe estar
en la parte alta).
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 Termine de girar suavemente el revólver hasta que el objetivo de inmersión quede en posición de
enfoque.
 Enfoque la preparación cuidadosamente con el tornillo micrométrico; esta preparación debe estar casi
enfocada si ha realizado un enfoque cuidadoso con el objetivo 40x. De no ser así, inicie el enfoque de
la preparación desde el objetivo de menor aumento, para evitar rayar el objetivo de inmersión.
Recuerde que la distancia desde el lente frontal del objetivo de inmersión a la preparación es mínima,
por ello el riesgo de accidente es ahora máximo.
 Una vez haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación ya no puede volver a enfocar el objetivo
40x, pues lo mancharía de aceite. Por lo tanto, si desea enfocar otro campo, debe retirar el objetivo de
inmersión, girando el revólver hacia el objetivo de menor aumento y seleccionar otro campo,
empezando a enfocar este último.
 Finalizada la observación y antes de retirar la preparación, baje la platina y coloque el objetivo de
menor aumento en posición de enfoque. Nunca retire la preparación con el objetivo de inmersión en
posición de enfoque.
 Retire la preparación y limpie el objetivo de inmersión cuidadosamente empleando papel especial para
óptica. Compruebe que el objetivo de 40x también este limpio.

OBJETIVOS.
 Reconocer cada una de las partes que componen el microscopio óptico y la función que cumplen en el
equipo.
 Desarrollar en los estudiantes habilidades para la utilización correcta del microscopio compuesto,
enfatizando en las recomendaciones necesarias para lograr un mayor tiempo de vida útil del equipo.
 Capacitar a los estudiantes en la observación correcta de las muestras llevadas a microscopía y el reporte
adecuado de las mismas.

MATERIALES Y EQUIPOS.
 1 microscopio binocular compuesto.
 4 portaobjetos.
 4 cubreobjetos.
 Aceite de inmersión.
 5 placas portaobjetos preparadas (bacterias, hongos, algas, nematodos, protozoos).
 Papel para óptica.
 Toallas desechables.

METODOLOGÍA PARA LA OBSERVACIÓN.

1. Observar los portaobjetos preparados siguiendo los pasos para observar muestras bajo microscopio
compuesto, dibujar lo observado y anotar el aumento utilizado.

BIBLIOGRAFÍA.
Brook T. 1991. Biología de los microorganismos. 6ta ed. Omega S.A. Barcelona.
Rojas-Triviño A. 2011. Conceptos y práctica de Microbiología General. Universidad Nacional de Colombia.
CÓDIGO: P-MV-OM-10.002.002
Tortora G; Funke B; Case C. 2007. Introducción a la microbiología. Ed. Médica Panamericana. Madrid, España.