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Microscopía Metenamina Kit de Plateado Según Gomori: para La Detección de Estructuras Argentafiles en Tejido Histológico

Este documento describe un procedimiento de tinción histológica para detectar estructuras argentafines en tejido. El procedimiento involucra oxidar los glicoles en el tejido con ácido peryódico y luego reducirlos a aldehídos que se unen a la plata. La plata da un color negro a las estructuras y el oro intensifica la tinción. Las estructuras se visualizan en colores oscuros mientras el fondo se contra-tiñe en verde.
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Microscopía Metenamina Kit de Plateado Según Gomori: para La Detección de Estructuras Argentafiles en Tejido Histológico

Este documento describe un procedimiento de tinción histológica para detectar estructuras argentafines en tejido. El procedimiento involucra oxidar los glicoles en el tejido con ácido peryódico y luego reducirlos a aldehídos que se unen a la plata. La plata da un color negro a las estructuras y el oro intensifica la tinción. Las estructuras se visualizan en colores oscuros mientras el fondo se contra-tiñe en verde.
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1.00820.

0001 Técnica
Tinción en la cubeta de tinción
Desparafinar de forma habitual los preparados histológicos y rehidratar en serie
Microscopía descendente de alcohol.
No utilizar pinzas de metal, y tampoco permitir el contacto de otros objetos
metálicos con los preparados.
Metenamina kit de plateado Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
indicados.
según Gomori
Portaobjetos con preparado histológico
para la detección de estructuras argentafiles Agua destilada 2 minutos
en tejido histológico Reactivo 1 (solución de ácido peryódico) 10 minutos
Agua destilada aprox. 30 segundos
Producto sanitario para diagnóstico in vitro Agua destilada aprox. 30 segundos
Agua destilada aprox. 30 segundos
Solución de nitrato de plata/borato de metenamina 35 - 45 minutos
El presente “Metenamina kit de plateado según Gomori - para la detección de
recién preparada a 55 - 57 °C*
estructuras argentafiles en tejido histológico” es utilizado para el diagnóstico ce-
lular en la medicina humana y se emplea en el examen histológico de muestras Agua destilada aprox. 30 segundos
de origen humano. Se trata de un kit de tinción que, junto con otros materiales
de diagnóstico in vitro pertenecientes a nuestra cartera, hace evaluables deter- Agua destilada aprox. 30 segundos
minadas para el diagnóstico estructuras de destino (mediante fijación, inclusión, Agua destilada aprox. 30 segundos
tinción, contratinción, montaje) en material de examen histológico, como pueden
ser cortes histológicos p. ej. del riñón, del hígado o del pulmón. Reactivo 4 (solución de cloruro de oro) 1 minuto
Agua destilada aprox. 30 segundos
Principio
Para la representación de membranas basales, infecciones micóticas en el tejido Reactivo 5 (solución de tiosulfato sódico) 2 minutos
u otras estructuras histológicas argentafines se utiliza con frecuencia la reacción Agua corriente del grifo 3 minutos
de ácido peryódico-Schiff (PAS).
Sin embargo, el plateado de metenamina según Gomori proporciona una mejor y Agua destilada aprox. 30 segundos
más contrastada visualización de las estructuras de destino.
Reactivo 6 (verde luz SF en solución) 2 - 3 minutos
En esto, los 1,2-glicoles en el tejido son oxidados en el primer paso por el ácido
peryódico para convertirse en aldehídos. Después, los aldehídos son reducidos Agua destilada aprox. 30 segundos
a través de la incubación con una solución de borato de metenamina y nitrato de Etanol 70 % 1 minuto
plata. Y posteriormente, estos aldehídos son las sustancias responsables de la
reducción de los iones plata a plata metálica. Etanol 96 % 1 minuto
Esta plata aparece en color negro.
La posterior aplicación de cloruro de oro intensifica la tinción de las estructuras Etanol 100 % 1 minuto
argentafines y reduce al mismo tiempo la tinción de fondo. Etanol 100 % 1 minuto
A través de la fijación y el lavado con solución de tiosulfato sódico se eliminan
los complejos sobrantes de plata y oro. Las estructuras de destino son repre- Xileno o Neo-Clear ®
5 minutos
sentadas en color pardo oscuro a negro, mientras que las demás estructuras
celulares son contrateñidas con verde luz SF. Xileno o Neo-Clear® 5 minutos
Montar con Neo-Mount® los preparados humedecidos con Neo-Clear®, o
Material de las muestras los preparados humedecidos con xileno con p. ej. Entellan® Nuevo y cubre-
objetos.
Como material de partida se usan cortes de tejido incluidos en parafina (cortes
de parafina con 3 - 5 µm de espesor).
* La solución de nitrato de plata/borato de metenamina, junto con el preparado
a teñir, se coloca en el baño de agua precalentado a 55 - 57 °C y se tiñe
Reactivos constantemente a esta temperatura durante 35 - 45 minutos hasta alcanzar la
Art. 1.00820.0001 intensidad deseada.
Metenamina kit de plateado según Gomori
para la detección de estructuras argentafiles en tejido histológico Los preparados histológicos pueden ser montados y almacenados con medios
Componentes del envase: de montaje anhidros (p. ej. Entellan® Nuevo, Neo-Mount®) y cubreobjetos des-
El kit de tinción contiene pués de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y la clarificación con
xileno o Neo-Clear®.
Reactivo 1: Solución de ácido peryódico 100 ml
Reactivo 2: Solución de nitrato de plata 3 x 100 ml Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se
Reactivo 3: Comprimidos de borato de metenamina 10 unidades recomienda el uso de aceite de inmersión.
Reactivo 4: Solución de cloruro de oro 100 ml
Reactivo 5: Solución de tiosulfato sódico 100 ml Resultado
Reactivo 6: Verde luz SF en solución 100 ml Hongos pardo oscuro a negro
Membranas pardo oscuro a negro
Preparación de las muestras Fondo verde
La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado.
Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología. Localización de errores
Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepa- Las técnicas de plateado pueden ser difíciles y precisan un especial esmero
ración, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el durante la realización.
empleo.
Tinción débil o tinción con demasiado poco contraste
Desparafinar de forma típica los cortes y rehidratar.
El color de los depósitos de plata puede ser intensificado aún más a través de la
aplicación de solución de cloruro de oro. A través de la formación de un complejo
Preparación del reactivo plata-oro, la tinción inespecífica del fondo es minimizada, mientras que el nitrato
Preparación de la solución de nitrato de plata/borato de metenamina de plata sobrante es eliminado por lavado mediante la solución de tiosulfato
Utilizar solamente soluciones recién preparadas. sódico.
Disolver 1 comprimido de borato de metenamina (reactivo 3) en 30 ml de solu-
ción de nitrato de plata (reactivo 2) a temperatura ambiente. Contratinción
El comprimido debe estar completamente disuelto en la solución de nitrato de Si bien la contratinción con verde luz sólo es una opción, la matriz celular que
plata. rodea las estructuras teñidas de plata es representada de forma más distinguible
A continuación, la solución estará lista para ser empleada. y, por consiguiente, se hace visible con mayor claridad, cosa que puede facilitar
La reacción comienza sólo al alcanzarse una temperatura de 55 - 57 °C en el diagnóstico.
baño de agua. Sin embargo, la solución debería ser empleada inmediatamen-
te, y desechada después de su uso. Notas técnicas
Importante: Para preparar la solución argéntica usar sólo recipientes de vidrio El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de
o de plástico limpios. diagnóstico médico.
No poner en contacto objetos metálicos (p. ej. soportes de porta- Si se utilizan aparatos automáticos de tinción, deberán tenerse en cuenta las
objetos o pinzas) con la solución de nitrato de plata/borato de instrucciones de operación del fabricante, tanto del aparato como del software.
metenamina. Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.
Diagnóstico Componentes principales del producto
Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas Art. 1.00820.0001
y cualificadas. Reactivo 1
Deberán emplearse terminologías vigentes.
H5IO6 10 g/l
Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos.
1 l = 1,0 kg
Cada aplicación debería implicar controles adecuados (p. ej. ISOSLIDE®
Metenamina, art. 1.02473.0001) para descartar resultados erróneos. Reactivo 2
AgNO3 2,5 g/l
Almacenamiento 1 l = 1,0 kg
Guardar el Metenamina kit de plateado según Gomori - para la detección de
estructuras argentafiles en tejido histológico de +15 °C a +25 °C. Reactivo 3
Na2HPO4 x 10 H2O 23,8 g/l
Estabilidad C6H12N4 71,40 g/l
El Metenamina kit de plateado según Gomori - para la detección de estructuras
Reactivo 4
argentafiles en tejido histológico puede usarse hasta la fecha de caducidad
indicada. AuCl3 1 g/l
1 l = 1,0 kg
Después de abrir el frasco por primera vez, el contenido almacenado entre +15 °C
y +25 °C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada.
Reactivo 5
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.
Na2S2O3 20 g/l
La solución de nitrato de plata/borato de metenamina debería ser utilizada inme- 1 l = 1,01 kg
diatamente, y desechada después de su uso.
Reactivo 6
Capacidad C.I. 42095 5 g/l
El envase es suficiente para hasta 50 aplicaciones. CH3COOH 2,1 g/l
1 l = 1,0 kg
Notas sobre el empleo
Solamente para uso profesional. Otros productos de IVD
Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado. Art. 100361 ISOSLIDE® Reticulina Preparados de control 25 tests
Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y ase- con tejido de referencia para la detección
guramiento de la calidad. de fibras reticulares en histología
Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar. Art. 100380 ISOSLIDE® Hierro Preparados de control 25 tests
con tejido de referencia para la detección
Protección contra infecciones de hierro libre en tejido histológico
Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuer- Art. 100408 ISOSLIDE® PAS Preparados de control 25 tests
do con las directivas de laboratorio. con tejido de referencia para la detección
de polisacáridos en tejido histológico
Indicaciones para la eliminación de residuos Art. 100425 ISOSLIDE® Azul alciano Preparados de control 25 tests
con tejido de referencia para la detección
El envase y posibles preparados de control restantes deberán ser eliminados de de mucosustancias en tejido histológico
acuerdo con las directivas válidas respecto a la eliminación de residuos.
Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como Art. 102472 ISOSLIDE® Warthin-Starry Preparados de control 25 tests
desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de con tejido de referencia para la detecciòn
residuos. Podrá pedirse información sobre los procedimientos de eliminación de Helicobacter pylori y Spirochaetes en tejido
bajo el Quick Link “Hints for Disposal of Microscopy Products” en histológico
[Link]. Dentro de la UE tiene validez el REGLAMENTO Art. 102560 ISOSLIDE® AFB Preparados de control 25 tests
(CE) Nº 1272/2008 sobre la clasificación, el etiquetado y el envasado de sustan- con tejido de referencia para la detección de
cias y mezclas, por el que se modifican y derogan las Directivas 67/548/CEE y micobaterias en tejido histológico
1999/45/CE y se modifica el Reglamento (CE) Nº 1907/2006. Art. 102561 ISOSLIDE® Rojo Congo Preparados de control 25 tests
con tejido de referencia para la detección de
Reactivos auxiliares estructuras amiloides en tejido histológico
Art. 100579 DPX nuevo 500 ml
medio de montaje anhidro Literatura
para microscopía 1. Romeis - Mikroskopische Technik, Editors: Mulisch, Maria, Welsch, Ulrich,
Art. 100974 Etanol desnaturalizado con aprox. 1 l, 2,5 l 2015, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
1 % de metiletilcetona 2. Theory and Practice of Histological Techniques, John D Bancroft and Marilyn
para análisis EMSURE® Gamble, 6th Edition
Art. 102473 ISOSLIDE® Metenamina Preparados de control 25 tests 3. Conn’s Biological Stains: A Handbook of Dyes, Stains and Fluorochromes for
con tejido de referencia para la detección de Use in Biology and Medicine, 10th Edition, (ed. Horobin, R.W. and Kiernan,
estructuras argentafines en tejido histológico J.A). Bios, 2002
Art. 103699 Aceite de inmersión según ISO 8036 frasco gotero de
para microscopía 100 ml
Art. 104699 Aceite de inmersión frasco gotero de
para microscopía 100 ml, 100 ml,
500 ml
Art. 107960 Entellan® 500 ml
medio de montaje rápido
para microscopía
Art. 107961 Entellan® Nuevo 100 ml, 500 ml,
medio de montaje rápido 1l
para microscopía
Art. 108298 Xileno (mezcla de isómeros) 4l
para histología Consult instructions Manufacturer Catalog number Batch code
Art. 109016 Neo-Mount® frasco gotero de for use
medio de montaje anhidro 100 ml, 500 ml
para microscopía
Art. 109843 Neo-Clear® (sustituto de xileno) 5l
para microscopía Caution, consult Use by Temperature
accompanying documents YYYY-MM-DD limitation
Clasificación de substancias peligrosas
Art. 1.00820.0001
Status: 2018-01-26
Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta y las
indicaciones en la ficha de datos de seguridad.
Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany
La ficha de seguridad está disponible en el sitio web y a solicitud.
Tel. +49(0)6151 72-2440
[Link]

EMD Millipore Corporation, 290 Concord Road, Billerica,


MA 01821, USA, Tel. +1-978-715-4321

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