Módulo 3: Diagnóstico y
tratamiento
3.2
Diagnós,co
Pruebas bioquímicas
para identificación de V. cholerae
Lineamientos para la
Vigilancia por
Laboratorio de
Enfermedad Diarreica
Aguda Bacteriana.
DGE-InDRE/RNLSP
(2013)
Diagrama de flujo para la búsqueda de Vibrio spp
Diagrama de flujo Hisopo rectal
(Cary-Blair)
para búsqueda de 6-8 h 36+1°C
Vibrio spp Agua Peptonada
Alcalina (APA)
6-8 h 36+1°C
Vibrio
cholerae
Agar TCBS Vibrio
parahaemoly/cus
18-24 h 36+1°C
Colonias sacarosa positivo Colonias sacarosa negativo
(amarillas): (verdes):
Pruebas bioquímicas: Pruebas bioquímicas con 1% de
CP, CArg, MIO, TSI, LIA. NaCl:
Tubo de BAB CP, CArg, MIO, TSI, LIA.
Caldo nutritivo con 1, 3, 6, 8 y
10 % de NaCl. Tubo de BAB
18-24 h 36+1°C 18-24 h 36+1°C
Prueba de oxidasa e Prueba de oxidasa e
Interpretación de resultados Interpretación de resultados
Clasificación
de
V.
cholerae
NO USO DE
PRUEBAS RÁPIDAS
Lineamientos
para
la
Vigilancia
por
Laboratorio
de
Enfermedad
Diarreica
Aguda
Bacteriana
DGE-‐InDRE–RNLSP
2013
Toma, manejo
Etapas del y envío dede
proceso muestras
análisis
para coprocultivo
ETAPA ETAPA
ETAPA POST-
PRE-ANALÍTICA ANALÍTICA ANALÍTICA
¾ Solicitud del ¾ Método de ¾ Almacenamient
análisis o de las muestras.
examen
¾ Disposición
¾ Preparación del segura de las
¾ Aseguramiento muestras
paciente
analizadas.
de la calidad
¾ Toma de ¾ Informe de
muestra resultados
¾ Revisión
sistemática
¾ Transporte ¾ Formato
uniforme
Commission on Laboratory Accreditation
College of American Pathologists (CAP), 2005.
Toma de muestra
Cuando hacer la Cuando el paciente está en un proceso diarreico.
toma de muestra: Tan pronto como sea posible después de iniciar la enfermedad
(preferentemente dentro de los primeros cuatro días).
Antes de empezar tratamiento antimicrobiano.
Qué cantidad de Hisopo rectal
muestra Hisopo fecal (a partir de la deposición fresca en medio de
transporte)
Medio de Medio de transporte Cary Blair.
transporte
Almacenamiento de El almacenamiento de elección es en refrigeración.
la muestra después Se pueden transportar y manejar las muestras a temperatura
de la toma. ambiente por tiempos prolongados.
Transporte Sellar los tubos para prevenir pérdidas de humedad.
Colocarlos en contenedores impermeables.
Solicitud del examen
Formato de solicitud
• Datos generales del paciente
• Dirección del paciente
• Datos del médico solicitante
• Tipo de muestra
• Examen que solicita
Preparación del
paciente
Explicar en forma clara el procedimiento para la toma
de la muestra.
La toma de la muestra debe ser antes de iniciar el
tratamiento con antibióticos.
Toma de muestra
Hisopo rectal
Humedezca el hisopo en el medio de transporte.
Inserte el hisopo en el esfínter rectal (2 a 3 cm) y rote
suavemente.
Saque y examine el hisopo para asegurar que hay algo de
materia fecal en la superficie.
Coloque el hisopo en el medio de transporte y tape.
La cantidad de hisopos que se tomen depende de la cantidad de
placas que se requieran sembrar.
Toma de muestra
Hisopo fecal
Colecte la deposición de los pacientes en contenedores limpios sin
residuos de desinfectantes o detergentes y con tapón de rosca.
No debe colectar las deposiciones de cómodos debido a que ellos
pueden contener residuos de desinfectantes o ser fuente de
contaminación.
Las deposiciones deben refrigerarse y procesarse dentro de las dos
primeras horas después de la colección.
Las deposiciones que no se puedan procesar dentro del tiempo
establecido se deben colocar en medio de transporte.
Medio de transporte
• Cary-Blair (1ª elección)
• Amies
• Stuart
• Salina con glicerol (excepto para Vibrio
cholerae)
• APA (sólo para Vibrio cholerae y únicamente si
no hay otra alternativa)
Medio de transporte
Cary Blair
Se usa para transportar muchos patógenos entéricos: Shigella, Vibrio
cholerae, Salmonella, Escherichia coli
Es un medio de consistencia semisólida fácil de transportar.
El medio de cultivo puede almacenarse a temperatura ambiente y por más de
un año después de su preparación.
Debido a su valor de pH elevado es el medio de elección para el transporte y
preservación de Vibrio cholerae.
Criterios de aceptación
y rechazo
Sólo se aceptan las muestras colectadas en
contenedores apropiados y sin contaminación.
No se procesarán muestras sin etiqueta,
ilegibles o etiquetadas en forma inapropiada.
No se procesarán las muestras con solicitudes
mal llenadas o ilegibles.
Se hará notificación de las muestras o
solicitudes rechazadas.
Fuentes de variación con
respecto a la muestra
• Conservación de la muestra
• Exposición a la luz
• Temperatura de embalaje
• Transporte
Transporte de la
muestra
1. Intrahospitalario o Intrainstitucional
1. Sección de toma de muestra al laboratorio (ambulatorio).
2. Sala de hospitalización al laboratorio.
2. Desde otro laboratorio o institución
3. Desde el domicilio del paciente
Transporte de la
muestra
• El remitente debe hacer seguimiento del
transporte de las muestras al laboratorio
• Tiempo
• Temperatura
• Seguridad
Capacidad diagnóstica instalada (RNLSP)
ü Bole/n
Caminando
a
la
Excelencia:
Concordancia
de
resultados
y
cumplimiento
con
el
envío
de
cepas
para
Referencia
ü Programa
de
Evaluación
Externa
del
Desempeño:
Evaluación
de
la
competencia
técnica
mediante
el
envío
de
dos
paneles
de
eficiencia
al
año
Capacidad instalada
(RNLSP)
• Laboratorios de la RNLSP
§ Los 31 LESP tienen la capacidad de identificar Vibrio cholerae
hasta serotipo
§ El porcentaje de concordancia de los 31 LESP obtenido en el
último panel de evaluación del desempeño en 2013 fue de 100%
§ Diez LESP están en fase de implementación para la determinación
de toxigenicidad por PCR
Capacidad instalada (InDRE)
§ Confirmación de serotipo de los • En
2012
se
realizó
la
capacitación
a
aislamientos de Vibrio cholerae que nivel
nacional
para
la
determinación
realiza la RNLSP de
toxigenicidad
por
PCR
en
cepas
§ Determinación de toxigenicidad por de
Vibrio
cholerae
01
métodos moleculares en cepas de
V. cholerae 01 identificadas por la • Actualmente
InDRE
acompaña
y
RNLSP asesora
técnicamente
para
la
§ Determinación de perfiles de implementación
de
la
técnica
sensibilidad y resistencia a los molecular
para
toxigenicidad
a
la
antibióticos RNLSP
§ Realización de perfiles
electroforéticos por campos
pulsados para determinación de
similitud clonal
