UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

ESCUELA DE POSGRADO
MAESTRÍA EN ACUICULTURA

“ACONDICIONAMIENTO GONÁDICO E INDUCCIÓN AL

DESOVE POR “SHOCK” TÉRMICO DE LA OSTRA
PERLÍFERA Pteria sterna (GOULD, 1851) EN
CONDICIONES DE LABORATORIO”

Presentada por:

LUIS MANUEL TREVIÑO ZAMBRANO

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

MAGISTER SCIENTIAE EN ACUICULTURA

Lima - Perú
2018
 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA

ESCUELA DE POSGRADO
MAESTRÍA EN ACUICULTURA

“ACONDICIONAMIENTO GONÁDICO E INDUCCIÓN AL

DESOVE POR “SHOCK” TÉRMICO DE LA OSTRA
PERLIFERA Pteria sterna (Gould, 1851) EN CONDICIONES
DE LABORATORIO”

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

MAGISTER SCIENTIAE

Presentada por:
LUIS MANUEL TREVIÑO ZAMBRANO

Sustentada y aprobada ante el siguiente jurado:

Dra. Patricia Gil Kodaka Mg.Sc. Beatriz Ángeles Escobar

PRESIDENTE PATROCINADORA

Dr. Roberto Retamales González

CO-PATROCINADOR

M.Eng. María Cristina Miglio Toledo Mg.Sc. Jessie Vargas Cárdenas

MIEMBRO MIEMBRO
 I. DEDICATORIA

Dedico este proyecto de tesis a Dios y a mis padres. A Dios porque ha estado conmigo a
cada paso que doy cuidándome y dándome fortaleza para continuar, a mis padres quienes a
lo largo de mi vida han velado por mi bienestar y educación siendo mi apoyo en todo
momento, depositando su entera confianza en cada reto que se me presentaba sin dudar ni
un solo momento de mi inteligencia y capacidad, es por ello que soy lo que soy ahora los
amo con mi vida. También para mis hermanos y familia en general, también dedico este
proyecto a mis hijos y a mi esposa, compañera inseparable de cada jornada, ella represento
gran esfuerzo y tesón en momentos de decline y cansancio. A todos mis amigos, compañeros
y profesores, que a pesar de que estén a larga distancia me han demostrado todo su apoyo.
 II. AGRADECIMIENTOS

Al finalizar mis estudios de postgrado quiero dejar constancia de mi eterno agradecimiento

a las siguientes instituciones y personas.

A PRONABEC organismo peruano de becas al facilitarme y brindarme el apoyo becario de

intercambio cultural. A la Universidad Nacional Agraria La Molina, Escuela de Postgrado y
Maestría en Acuicultura a todas sus autoridades por haberme brindado la oportunidad de
recibirme en sus aulas para alcanzar una profesión superior digna y respetable.
Mi agradecimiento especial.

Al Programa de Ayudas Económicas SENESCYT por su apoyo económico para poder

cumplir con el desarrollo de mi investigación de tesis.
Mg. Sc. Beatriz Elena Angeles Escobar. Directora de mi Tesis, por sus orientaciones en la
elaboración de esta tesis.

Dr. Roberto Retamales González. Co-Asesor. Por la paciencia y tiempo de dedicación en las
correcciones del presente trabajo.

Dr. Jorge Tam Málaga

Biol. María Laura García, Mg.Sc. Vicedecana de la Escuela de Ingeniería en Acuicultura y

Pesquerías. Por su apoyo incondicional durante el presente trabajo.

Mg.Sc. Marjorie Idrovo

Dra. Eulalia Ibarra Mayorga. Por su apoyo incondicional durante el presente trabajo.

Lcdo. Ac. Patricio Panta Vélez, Mg. Sc.

Lcdo. Ac. Alan Emilio García Bermúdez, Mg. Sc.

A la Universidad Técnica de Manabí, carrera de Ingeniería en Acuicultura y Pesquerías, mi

Alma Mater por acogerme una vez más en el desarrollo de mi investigación.

A los Señores miembros del tribunal de Tesis por su espíritu de colaboración.

Finalmente, a cada uno de mis amigos y compañeros por los excelentes momentos.
A la Universidad Nacional Agraria la Molina, particularmente al Departamento de
Acuicultura e industrias pesqueras, por haberme aceptado en el programa de posgrado.
Asimismo, por brindarme el apoyo necesario durante mis estudios
.
 III. INDICE GENERAL

DEDICATORIA

AGRADECIMIENTOS

INDICE GENERAL

ÍNDICE DE FIGURAS

ÍNDICE DE TABLAS

RESUMEN

ABSTRACT

I. INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 1

II. REVISIÓN DE LITERATURA .............................................................................. 4

2.1. Distribución............................................................................................................. 4

2.2. Descripción taxonómica.......................................................................................... 4

2.3. Características de la especie.................................................................................... 5

2.4. Ciclo de vida de Pteria sterna ................................................................................ 6

2.5. Factores exógenos que condicionan la madurez sexual .......................................... 8

2.5.1. Alimentación ................................................................................................. 10

2.5.2. Requerimientos nutricionales ........................................................................ 11

2.6. Influencia de la temperatura en la maduración sexual .......................................... 14

2.7. Condición de indicadores de calidad gonádica de los reproductores ................... 16

2.8. Métodos de inducción al desove ........................................................................... 16

2.9. Desarrollo gonadal ................................................................................................ 17

III. METODOLOGÍA ................................................................................................... 20

3.1. Lugar y periodo experimental ............................................................................... 20

3.2. Etapas experimentales........................................................................................... 20

3.2.1. Etapa pre-experimental .................................................................................. 20

3.2.2. Etapa experimental ........................................................................................ 27

3.2.3. Evaluación de la madurez gonadal de las ostras perlíferas Pteria sterna ..... 30
 3.3. Evaluación de los parámetros morfo-fisiológicos................................................. 31

3.3.1. Parámetros morfo-fisiológicos ...................................................................... 31

3.4. Análisis de la calidad gonadal............................................................................... 33

3.4.1. Inducción al desove por “shock” térmico ...................................................... 34

3.5. Análisis Estadístico de datos ................................................................................. 36

IV. RESULTADOS ....................................................................................................... 37

4.1. Comparación del efecto de cuatro temperaturas (Control 24, 26, 28 y 30°C) en el
acondicionamiento gonádico (madurez sexual, diámetro ovocitario) en condiciones de
laboratorio de la ostra perlífera Pteria sterna. ................................................................. 37

4.1.1. Evaluación de la temperatura y salinidad ...................................................... 37

4.1.2. Madurez sexual .............................................................................................. 38

4.1.3. Diámetro de ovocitos ..................................................................................... 41

4.2. Evaluar el efecto de tres temperaturas de “shock” térmico (15, 17, 21°C) sobre el
desove de la ostra perlífera Pteria sterna, en condiciones de laboratorio ....................... 41

4.2.1. Desove, desarrollo embrionario y larval........................................................ 41

4.3. Calidad gonádica en ostra Pteria sterna, mediante las variaciones en el índice de
condición general, índice gonadosomático, índice de rendimiento muscular, e índice del
manto.42

4.3.1. Índice de condición general ........................................................................... 42

4.3.2. Índice gonadosomático .................................................................................. 44

4.3.3. Índice de rendimiento muscular .................................................................... 45

4.3.4. Índice de manto ............................................................................................. 46

4.3.5. Incremento en peso ........................................................................................ 48

V. DISCUSIÓN ............................................................................................................ 50

5.1. Comparación del efecto de cuatro temperaturas (24, 26, 28 y 30°C) en el

acondicionamiento gonádico (madurez sexual, diámetro ovocitario) en condiciones de
laboratorio de la ostra perlífera Pteria sterna. ................................................................. 50

5.2. Evaluar el efecto de tres temperaturas de “shock” térmico (15, 17, 21°C) sobre el
desove de la ostra perlífera Pteria sterna, en condiciones de laboratorio. ...................... 52
 5.3. Evaluación de la calidad gonádica mediante las variaciones morfo-fisiológicas de
la ostra. ............................................................................................................................. 54

VI. CONCLUSIONES .................................................................................................. 57

VII. RECOMENDACIONES ........................................................................................ 58

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................. 59

IX. ANEXO .................................................................................................................... 78

9.1. ANEXO 1. Preparación del medio de cultivo f/2 de "Guillard" (modificado por
Martinez, 1998) ................................................................................................................ 79

9.2. Anexo 2. Proceso de inclusión en parafina (Humason, 1979; Zúñiga, 1998). ..... 80

9.3. Anexo 3. Tinción de Hematoxilina-Eosina (Humason, 1979 en Zuñiga, 1998)... 81

9.4. Anexo 4. Registro Fotográfico .............................................................................. 82

9.5. Anexo 5. Estimación del desove mediante el conteo de larvas ............................ 84

9.6. Anexo 6. Hoja de registro de datos ....................................................................... 85

 IV. ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Ciclo de vida de P. sterna. Tomado de Helm et al., 2006 ..................................... 7

Figura 2. Factores endógenos y exógenos que influyen en el ciclo reproductivo de moluscos
bivalvos. Tomado de (Gosling, 2003). .................................................................................. 9
Figura 3. Localización geográfica del Laboratorio de moluscos de la Universidad Técnica
de Manabí (Ecuador). .......................................................................................................... 20
Figura 4. Tratamiento de agua de mar para experimentación A: tanques para recepción de
agua de mar, B: filtración de agua con filtro de hilo de algodón de 5 micras, y filtro de
cartucho de 5 micras, C: irradiación de agua con lámpara UV. .......................................... 22
Figura 5. Fase intermedia de cultivo de microalgas A: fase de cultivo en tubo de ensayo y
matraces de 0,5 litro, B: fase de cultivo en garrafones de 4 litros ....................................... 24
Figura 6. Fase de cultivo masivo de microalgas A: Área de cultivo de microalgas de tres
especies (a) Isochrysis galbana, (b) Tetraselmis sp. (c) Chaetoceros gracilis ................... 24
Figura 7. Determinación de la concentración de microalgas............................................... 25
Figura 8. Recolección de organismos, A: localización de Banco natural de ostras P. sterna
frente a la comuna de Chanduy Ecuador, B: muestras de ejemplares de ostras, C: selección
de ejemplares de ostras ........................................................................................................ 26
Figura 9. Transporte de organismos de P. sterna en seco con esponjas húmedas .............. 26
Figura 10. Acondicionamiento de reproductores ostras P. sterna A: distribución de
reproductores en sus respectivas cajas, B: área de acondicionamiento de reproductores ... 28
Figura 11. Suministro de microalgas durante el acondicionamiento de P. sterna .............. 29
Figura 12. Marcaje de reproductores de ostras P. sterna, A: marcaje con pintura no tóxica,
B: distribución de organismos en los tanques de acondicionamiento ................................. 29
Figura 13. Observación y medición del diámetro de ovocitos en fresco de P. sterna ........ 30
Figura 14. Medidas morfológicas tomadas a los ejemplares de concha perlífera P. sterna,
Tomado de Cáceres-Puig (2012) ......................................................................................... 31
Figura 15. Anatomía interna de la ostra perlífera Pteria sterna. A= ano, Re= recto, Ma =
musculo aductor, Co = corazón, Go = gónada, PL = palpos labiales, Bo = boca, Bi = biso.
............................................................................................................................................. 33
Figura 16. Disección de organismos y toma de muestra, (A) Biometría de organismos de P.
sterna, (B, C) disección de organismos experimentales, (D) Toma de muestra de tejido para
histología ............................................................................................................................. 34
Figura 17. Inducción al desove por “shock” térmico a la ostra P. sterna: A) Control horario
de la disminución de la temperatura con hielo; B) Incremento de la temperatura con
calentadores sumergibles. .................................................................................................... 35
Figura 18. Microfotografía de gónada (40X) de P. sterna teñida con hematoxilina-eosina
donde se muestran diferentes estadios de madurez: DES= Desarrollo, MAD= Maduro, DSP=
Desove Parcial. .................................................................................................................... 39
Figura 19. Porcentaje acumulativo de estadios de madurez sexual de hembras y macho de
los diferentes tratamientos de acondicionamiento de P. sterna: DES= Desarrollo, MAD=
Maduro, DSP= Desove Parcial, PSD= Post-desove. ........................................................... 40
Figura 20. Desarrollo embrionario de P. sterna en las primeras 24 horas: (A) óvulo (B)
cigoto; (C) larva D. cp: cuerpo polar; pa: polo animal; pv: polo vegetal ............................ 42
Figura 21. Promedios porcentuales de los índices de condición general (ICG) ( 2ES) de
P. sterna entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento durante la maduración
sexual de 29 días en condiciones de laboratorio.................................................................. 43
Figura 22. Promedios porcentuales de los índices gonadosomático (IGS) ( 2ES) de P.
sterna entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días en
condiciones de laboratorio ................................................................................................... 44
Figura 23. Promedios porcentuales de los índices de rendimiento muscular (IRM) ( 2ES)
de P. sterna entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días en
condiciones de laboratorio ................................................................................................... 46
Figura 24. Promedios porcentuales de los índices de manto (IMA) ( 2ES) de P. sterna
entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días en condiciones de
laboratorio............................................................................................................................ 47
Figura 25. Incremento en peso promedio (g) de P. sterna a diferentes días de los diferentes
tratamientos de temperatura................................................................................................. 49
Figura 26. Recolección y transporte de reproductores de P. sterna .................................... 82
Figura 27. Aclimatación de reproductores de ostras de P. sterna en ambiente natural, A:
muelle de desembarque de personas, B: zona rocosa Punta Napo (Ecuador). .................... 82
Figura 28. Aclimatación y limpieza en laboratorio, A: reproductores de ostra P. sterna, B:
limpieza de organismos, C: aclimatación de organismos en tanques de acondicionamiento
............................................................................................................................................. 83
 V. ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1. Composición de diferentes microalgas, base húmeda, utilizadas en Acuicultura para

moluscos bivalvos (Fogg, 1975) .......................................................................................... 14
Tabla 2. Fase de desarrollo gonádico para Pinctada mazatlanica...................................... 18
Tabla 3. Registro promedio de temperaturas del agua en los diferentes tratamientos de
acondicionamiento de reproductores de Pteria sterna durante el periodo de estudio ......... 37
Tabla 4. Registro promedio de salinidad del agua en los diferentes tratamientos de
acondicionamiento de reproductores de Pteria sterna durante el periodo de estudio ......... 37
Tabla 5. Análisis de varianza del diámetro de ovocitos promedios ( 2ES), en P. sterna
en los diferentes días de acondicionamiento gonádico control: 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C,
30ºC), durante 29 días de estudio. ....................................................................................... 41
Tabla 6. Análisis de varianza de los índices de condición general (ICG) ( 2ES), en P.
sterna entre los diferentes tratamientos de maduración gonadal control: 24°C, (T1) 26°C,
(T2) 28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días de estudio ............................................................... 43
Tabla 7. Análisis de varianza de los índices gonadosomático (IGS) ( 2ES), en P. sterna
entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico Control: 24°C, (T1) 26°C,
(T2) 28°C, (T3) 30ºC), durante 29 días ............................................................................... 45
Tabla 8. Análisis de varianza de los índices de rendimiento muscular (IRM) ( 2ES), en
P. sterna entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico Control: 24°C,
(T1) 26°C, (T2) 28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días .............................................................. 46
Tabla 9. Análisis de varianza de los índices del manto (IMA) ( 2ES), en P. sterna entre
los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico control: 24°C, (T1) 26°C, (T2)
28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días ........................................................................................ 48
Tabla 10. Análisis de varianza de incremento en peso promedio (g) semanal de P. sterna a
diferentes temperaturas de acondicionamiento gonádico durante el periodo de estudio .... 48
 VI. RESUMEN

Se evaluó el efecto de cuatro temperaturas Control: 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C, (T3) 30°C
en el acondicionamiento gonádico (índice morfo-fisiológico) y desove a temperatura
descendente (15, 17 y 21°C) de un plantel de reproductores de ostra perlífera Pteria sterna
seleccionado del ambiente natural en condiciones de laboratorio. Se recolectaron 137
organismos adultos de Pteria sterna de la zona costera de Chanduy (Ecuador) en el mes de
septiembre del 2015, de los cuales 125 fueron utilizados para la presente investigación con
una talla promedio de 7,9 ± 0,8 cm de altura de la concha. La alimentación consistió en una
dieta mixta de microalgas de Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis, y Tetraselmis sp, en
proporción 1:1:1 a una concentración de 150 a 180 mil cel/ml. De los 125 organismos 53 se
usaron para evaluar la calidad gonádica mediante el índice morfo-fisiológico, el estado de
madurez gonadal, diámetro de los ovocitos y sexo mediante análisis histológico. Asimismo
72 organismos fueron destinados a inducción al desove. Los resultados indican que el índice
gonadosomático (IGS) presentó una relación inversa con el índice de rendimiento muscular
(IRM) e índice de manto (IMA) en los diferentes tratamientos de acondicionamiento control
24°C, T1 (26°C), T2 (28°C), T3 (30°C). Los valores más altos de IGS coincidieron con
valores bajos de IRM e IMA en la segunda semana. En cuanto al estadio de madurez se pudo
observar el 25 % de organismos maduros (MAD) en hembras en el T2 y T3 el 50 % de
machos en el T3; el diámetro más grande de ovocitos se observó en el tratamiento de 28°C
(38,72 ± 3,3µm); en cuanto al desove el tratamiento de 28°C (T3) fue el único que respondió
al estímulo de shock térmico, a temperatura descendente de 17°C a los 20 minutos de
exposición, obteniéndose la liberación de gametos.

PALABRAS CLAVE: Pteria sterna, acondicionamiento gonádico, madurez sexual, shock

térmico, inducción al desove.
 VII. ABSTRACT
The effect of four temperatures was evaluated Control: 24 °C, (T1) 26 °C, (T2) 28 °C, (T3)
30 °C in the gonadic conditioning (morpho-physiological index) and spawning at descending
temperature (15, 17 and 21 °C) of a Pteria sterna oyster reproductive stock selected from
the natural environment under laboratory conditions. 137 adult organisms of Pteria sterna
were collected from the coastal area of Chanduy (Ecuador) in September 2015, of which 125
were used for the present investigation with an average shell height of 7.9 ± 0.8 cm. The
feeding for the oyster consisted of a mixed diet of microalgae of Isochrysis galbana,
Chaetoceros gracilis, and Tetraselmis sp, in a ratio of 1: 1: 1 at a concentration of 150 to
180 thousand cel/ml. Of the 125 organisms 53 were used to evaluate the gonad quality by
means of the morpho-physiological index, the state of gonadal maturity, diameter of the
oocytes and sex by histological analysis. In addition, 72 organisms were destined to induce
spawning. The results indicate that the gonadosomatic index (IGS) presented an inverse
relationship with the muscular performance index (IRM) and the mantle index (IMA) in the
different conditioning treatments control (24 °C), T1 (26 °C), T2 (28 °C), T3 (30 °C). The
highest values of IGS coincided with low values of IRM and IMA in the second week.
Regarding the stage of maturity, 25% of mature organisms (MAD) could be observed in
females in the (T2 and T3) and 50% males (T3); the largest diameter of oocytes was observed
in the treatment of 28 °C (38.72 ± 3.3μm); Regarding spawning, the treatment of 28 °C was
the only one that responded to the stimulus of thermal shock, at a descending temperature of
17 °C at 20 minutes of exposure, obtaining the release of gametes.

KEYWORDS: Pteria sterna, gonadal conditioning, sexual maturity, thermal shock,

spawning induction.
 I. INTRODUCCIÓN

Los moluscos representan en la acuicultura uno de los grupos más importantes desde el punto
de vista productivo y económico, sin embargo algunas especies, como la ostra Pteria sterna,
han sido sobreexplotadas en algunas regiones, siendo necesario el desarrollo y aplicación de
técnicas de cultivo tendientes a su rehabilitación en el medio natural y a su cultivo sostenido
(Sevilla, 1969; Monteforte, 1990; Rangel y Chávez, 1994), para lo cual es indispensable el
estudio de diversos aspectos de su biología. Entre estos, los estudios de reproducción, los
cuales tienen una aplicación directa en actividades de cultivo y en el manejo de poblaciones
naturales (Avellanal et al., 2002).

La reproducción de invertebrados marinos es generalmente controlada por la combinación

de factores endógenos (neurosecreciones) y factores exógenos (Rose et al., 1990). La suma
de dichos factores conlleva a una “coordinación” de los individuos de una población con
respecto a su madurez gonadal, de tal forma que los ciclos reproductivos de diferentes
especies de bivalvos son únicos para cada población, variando de acuerdo con su
localización geográfica (Sastry, 1979).

En general, se asume que la temperatura es el principal modulador de los eventos que ocurren
durante el ciclo reproductivo de bivalvos, mientras que la alimentación regula la duración de
dichos eventos a partir de la cantidad de energía disponible para la gametogénesis (Berg y
Newell, 1986; Luna-González et al., 2000). El patrón de ciclo reproductivo y los cambios
que lo acompañan son afectados por la temperatura dependiendo de la historia térmica de
las especies y de su distribución regional. Sin embargo, existen estudios que muestran que
aumentos en la temperatura del agua dan por resultado necesariamente una mejoría en el
desempeño reproductivo de los bivalvos. En el caso de la Ostrea chilensis, por ejemplo,
temperaturas bajas mostraron ser importantes en estimular tanto la ovogénesis temprana
como la espermatogénesis (Jeffs et al., 2002).

1
La costa ecuatoriana y peruana se caracteriza por tener una gran diversidad de especies de
peces, crustáceos y moluscos marinos, que constituyen recursos importantes tanto en el
mercado nacional como en el internacional. Por otro lado, existe una demanda insatisfecha
en el mercado internacional que convierte al cultivo de invertebrados en una actividad
económica innovadora y con un potencial de alta rentabilidad, capaz de generar empleo y
riqueza en las comunidades costeras. Como es el caso de este molusco estudiado en México
(baja California) donde se logró su cultivo para obtener perlas y el consumo local e
internacional. En el Perú los estudios son muy escasos y fundamentalmente se refieren a
aspectos biológicos y taxonómicos (Kameya et al., 1996).

Las aguas del Ecuador y Perú están consideradas como las más productivas del mundo por
sus altos niveles de productividad primaria y secundaria originado por los afloramientos de
aguas ricas en nutrientes hacia la superficie (Rhyther, 1969). El estuario del río Chone,
ubicado en un área costera tropical de Ecuador, presenta un gran número de especies de
peces, crustáceos y moluscos, que constituyen recursos importantes para la pesca artesanal
y sustento para los habitantes de la zona a nivel local, sin embargo, poco es lo que se conoce
de su biología y posible producción acuícola, sobre todo en lo que refiere a los moluscos
bivalvos (PMRC, 1993). El interés de granjas sobre el cultivo de bivalvos existe en muchos
países y regiones establecidas como: Japón, Chile, Perú, Ecuador, México y la región norte
de Estados Unidos, entre otros (Treviño y Figueroa, 2009), y unos de los factores limitantes
en todas ellas es el abastecimiento sostenido de semilla, el cual es dependiente de las
condiciones reproductivas, siendo necesario un mayor conocimiento que permita su manejo
en especies nativas como la Pteria sterna.

El objetivo principal de este estudio fue evaluar el efecto de la temperatura en el

acondicionamiento gonádico (índice morfo-fisiológico, madurez sexual, desarrollo de
gametos) y desove de un plantel de reproductores de ostra perlífera Pteria sterna
seleccionado del ambiente natural en condiciones de laboratorio.

Los objetivos específicos fueron:

(1) Comparar el efecto de cuatro temperaturas (24, 26, 28 y 30°C) en el
acondicionamiento gonádico (madurez sexual y diámetro ovocitario) en condiciones
de laboratorio de la ostra perlífera Pteria sterna.

2
(2) Evaluar el efecto de tres temperaturas de “shock” térmico (15, 17, 21°C) sobre el
desove de la ostra perlífera Pteria sterna, en condiciones de laboratorio.

(3) Evaluar la calidad gonádica mediante las variaciones en el índice de condición

general, índice gonadosomático, índice de rendimiento muscular, e índice del manto.

3
 II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. Distribución

La ostra perlífera Pteria sterna llamada comúnmente concha perla, perlera o perlífera, es un
bivalvo que habita en la zona infralitoral marina y en manglares (Álamo & Valdivieso 1997),
desde el nivel de la más baja marea hasta 23 m de profundidad (Mora 1990), adherida por
medio de un biso a substratos duros (rocas, corales gorgónidos y estructuras metálicas
sumergidas) o arena gruesa (Monteforte 2005, Ordinola et al., 2010a). Se distribuye desde
California (México) hasta Pimentel (Perú) (Álamo & Valdivieso 1997), con poblaciones
bien identificadas en la costa del Pacífico tropical y subtropical de América, desde el Golfo
de California a Talara, Perú y Ecuador (Keen 1971, Arizpe 1992, Ordinola et al., 2010a).
Excepcionalmente, luego del evento El Niño 1982-83 se han reportado ejemplares de P.
sterna en las bahías de Ancón (Lima) e Independencia (Ica) en Perú, y Mejillones en Chile
(Paredes et al., 1998, Díaz & Ortlieb 1993). Es una especie que puede sobrevivir en aguas
muy turbias, soportando temperaturas menores a 18 °C y mayores a 32 °C, y salinidades
menores a 34.5 ups y mayores a 37 ups, características que le confieren una gran diversidad
de estrategias para permanecer en una zona o extender su distribución geográfica (Araya-
Núñez et al., 1991, del Río Portilla et al., 1992, Monteforte 2005).

2.2. Descripción taxonómica

Descripción taxonómica de la especie de ostra P. sterna de acuerdo con los criterios de Keen
(1971) y Gervis y Sims (1992).

Phylum: Mollusca

Clase: Bivalvia

Subclase: Pteriomorphia (Suzuki, 1985)

Orden: Pterioida (Suzuki, 1985)

4
 Familia: Pteriidae

Género: Pteria (Scopoli, 1977)

Especie: P. sterna (Gould, 1851)

2.3. Características de la especie

La superficie externa de la concha de los moluscos de la familia Pteriidae es de color café y

púrpura intenso, ya sea uniforme o con radios muy delgados de tonalidad más pálida y la
superficie interna nacarada con reflejos azulados. Su concha de forma variable es delgada,
oblicuamente ovalada y con una orejuela posterior prolongada en una expansión alar
puntiaguda más o menos alargada. La aurícula anterior es grande y triangular, el margen
ventral de la valva izquierda es más grande y convexo que el de la derecha. La superficie
externa de la concha P. sterna es rugosa y cuando no está desgastada, está cubierta por
espinas o escamas radiales aplanadas, largas y fuertemente imbricadas cerca del borde
ventral de la concha y la región umbonal ocasionalmente. Su charnela es débil, con una o
dos protuberancias pequeñas bajo el umbo, parte posterior con un proceso camelado bajo y
una foseta correspondiente (Poutiers, 1995). La concha en ejemplares juveniles es más larga
que alta, con la orejuela posterior angosta y prolongada, cambiando en ejemplares grandes a
una forma a veces tan alta como larga con la orejuela posterior relativamente más corta
(Keen, 1971; Fischer et al., 1995)

La ostra P. sterna presenta una concha ovalada, de color café por fuera y nacarada por dentro,
posee una extensión en la charnela en forma de ala, la cual es más larga en la parte anterior,
característica que le da el nombre a la especie (pterion, en griego significa ala); presenta una
longitud máxima registrada de 120 mm (Saucedo-Lastra, 1995).

La principal particularidad de los Pteriidae es el patrón de biomineralización que presenta la

cara interna de la concha en forma de un compuesto conocido bajo el nombre de nácar o
aragonita. Este es uno de los raros compuestos biominerales que se conocen en la naturaleza.
En los Pteriidae, la aragonita se cristaliza sobre una matriz de origen proteico, con un patrón
prismático estrechamente tabular, lo cual le confiere el brillo especial que posee la cara
interna de la concha y de las perlas que forman estas especies (Tsujii, 1960; Wada, 1962).

5
El color del nácar en las especies de ostras presenta características particulares con respecto
a otras ostras perleras del mundo. En Pinctada mazatlanica se encuentra comúnmente como
dominante el plateado grisáceo a obscuro con tonos secundarios en verde esmeralda y
tornasol. Pteria sterna presenta mayor variación; los colores dominantes son también tonos
de gris-plateado, pero existe gran diversidad de tonos secundarios: cobrizo, verde, azul,
púrpura, rosado, etc. Estos colores se encuentran principalmente en la banda marginal de
cara interna de la concha, que puede ser relativamente ancha en algunos individuos, y en las
perlas que ambas especies producen. P. mazatlanica y P. sterna son bentónicas; habitan
fondos rocosos y de arena gruesa a profundidades entre 2 m y 50 m. Los bancos más densos
se localizan entre 5 m y 20 m de profundidad. Su alimentación es de tipo filtrador,
aparentemente con un cierto grado de selectividad por alimento (Rangel y Chávez, 1994).

En el estado de Baja California en México-Bahía de La Paz (México), la especie alcanza la

madurez sexual a partir de una talla de 40 mm de altura de la concha, la cual corresponde a
unos 17 meses de vida (Saucedo y Monteforte, 1997). Contrariamente, la especie llega a la
madurez sexual a los 49 mm de altura (machos) y 56 mm de altura (hembras) en la Bahía de
Acapulco, la cual se alcanza a los 6–7 meses de edad (Serna-Gallo, 2011).

2.4. Ciclo de vida de Pteria sterna

La fecundación, así como el desarrollo pelágico embrionario y larval de P. sterna ocurren

en la columna de agua como se observa en la. Su ciclo de vida, al igual que el de la mayoría
de los bivalvos, está dividido en diferentes etapas e inicia con la unión de un óvulo y un
esperma, formando un zigoto del cual se desarrolla más adelante un embrión que atraviesa
por una primera, segunda y tercera división celular, que ocurren aproximadamente a los 26,
33 y 55 minutos, respectivamente; mientras que la cuarta división se presenta alrededor de
los 70 minutos después de la fecundación (Serrano-Guzmán y Salinas-Ordáz, 1993). Los
siguientes estadios secuenciales del desarrollo embrionario son mórula, blástula y gástrula,
fases que tienen una duración promedio de 1–3 horas, 4–5 horas y 6–12 horas,
respectivamente (Serrano-Guzmán y Salinas-Ordáz, 1993). En tiempo total promedio
requerido para que la especie complete su desarrollo embrionario es aproximadamente de
22–24 horas desde la fecundación hasta la aparición de larvas trocóforas ciliadas, a una
temperatura media de 28 °C (Serrano-Guzmán y Salinas-Ordáz, 1993; Araya-Núñez et al.,

6
1995). Sin embargo, el tiempo de desarrollo hasta larva trocófora varía de acuerdo con la
temperatura de cultivo, oscilando entre 24 y 25 horas después de la fecundación.

La larva trocófora posee tres bandas de cilios y un flagelo en posición apical, los mismos
que le dan movilidad en la columna de agua entre 12 y 24 horas que dura esta fase. Al término
de ésta última, se forma una estructura que encierra completamente el cuerpo y los órganos
elementales (Rose y Baker, 1994; Doroudi y Southgate, 2003). Al final del estadío trocófora,
en la región central aparecen pequeñas marcas que generarán la típica concha en forma “D”
del primer estadio véliger (o de charnela recta) tal como se observa en la (Fig. 1). El término
véliger D es la segunda fase larvaria y adopta su nombre de una estructura llamada velum
que le permite alimentarse, respirar y mantenerse en la columna de agua mediante
movimientos natatorios helicoidales (Araya-Núñez et al., 1995; Martínez-Fernández et al.,
2003). Hasta este momento, el desarrollo es sostenido por las reservas endógenas vitelinas
(lípidos principalmente) (Gallager y Mann, 1986b; Gallager et al., 1986).

Figura 1. Ciclo de vida de P. sterna. Tomado de Helm et al., 2006

7
 2.5. Factores exógenos que condicionan la madurez sexual

El metabolismo de los bivalvos es considerablemente influenciado por la temperatura del

agua y la disponibilidad de alimento, lo cual tiene especial relevancia en su ciclo gonádico
y reproductivo. Mediante el control de estos parámetros, es posible ampliar
considerablemente la temporada en la cual se dispone de reproductores sexualmente
maduros en las poblaciones naturales (Loosanoff y Davis, 1963; Malouf, 1970; Dupuy et al.,
1977).

El ciclo reproductivo en bivalvos está determinado genéticamente y es controlado por

factores exógenos (temperatura, alimento, salinidad, fotoperiodo) y endógenos (regulación
neuronal hormonal) (Fig. 2) (Saucedo, 1995), siendo la temperatura un importante factor
ambiental que regula la maduración gonadal en bivalvos (Sastry, 1979), así como los
aspectos energéticos ya que la producción de gametos y el tiempo para su madurez depende
en gran medida de la energía derivada de la disponibilidad de alimento (Barber y Blake,
1981; Jaramillo et al., 1993). Después de alcanzar cierto estado fisiológico, en un organismo
expuesto a condiciones ambientales necesarias se inicia el crecimiento de la gónada y la
gametogénesis. En la coordinación de los procesos fisiológicos y los eventos reproductivos
es probable que la actividad neuroendocrina juegue un papel muy importante, produciendo
una respuesta reproductiva de acuerdo con ciertas condiciones ambientales (Bayne, 1976;
Giese y Pearse, 1979; Lubet, 1981; Barber y Blake, 2006; Román et al., 2002; Saucedo y
Southgate, 2008).

8
 Figura 2. Factores endógenos y exógenos que influyen en el ciclo reproductivo de
moluscos bivalvos. Tomado de (Gosling, 2003).

La Pteria sterna es una especie que puede sobrevivir en aguas muy turbias, soportando
temperaturas menores a 18 °C y mayores a 32 °C, y salinidades menores a 34.5 ups y
mayores a 37 ups, características que le confieren una gran diversidad de estrategias para
permanecer en una zona o extender su distribución geográfica (Araya-Núñez et al. 1991, del
Río-Portilla et al. 1992, Monteforte 2005).

a) Luz (fotoperiodo)

El efecto del fotoperiodo, es decir, el de horas de luz, incide también como parámetro para
condicionar el desarrollo gonadal. Recientes estudios realizados en especies de Pectínidos
muestran que el aumento de horas de luz lleva asociado la movilización de las reservas desde
el tejido somático a las gónadas. En otras especies, como C. gigas, experiencias realizadas
en las que se combina la modificación de temperatura con el fotoperiodo, simulando
condiciones diferentes a las naturales implica un claro desarrollo de los productos sexuales
y la consecución de puestas en periodos diferentes del natural (Walne, 1976).

9
 2.5.1. Alimentación

Numerosos estudios han sido enfocados a analizar el efecto de las dietas y sus diferentes
componentes nutricionales tanto sobre la maduración gonadal como sobre el desarrollo
larval en los bivalvos. Trabajos realizados para mejorar el acondicionamiento de
reproductores de Argopecten purpuratus han demostrado que una dieta mixta de microalgas
y enriquecida en lípidos insaturados permite mejorar los resultados en la maduración y
porcentajes de desove (Martinez et al., 2000a).

Con respecto a las dietas de acondicionamiento Nodipecten. nodosus, Gómez y Villaláz

(1991) utilizaron Tetraselmis chuii a una concentración de 100.000 cel/ml; Rupp y Poli
(1994) suministraron una dosis de 100,000 a 150,000 cel/ml de por lo menos dos cepas entre
Isochrysis, Chaetoceros gracilis, Ch. calcitrans y Tetraselmis. tetratele. Rupp et al. (1997)
utilizaron como dieta una mezcla de Tetraselmis. Isochrysis, Chaetoceros gracilis y
Thalassiosira pseudonana suministrada continuamente. De la Roche (1997) alimentó con
una dosis de 300.000 cel/ml de Chaetoceros sp., Tetraselmis sp. y Nannochloropsis sp. De
la Roche et al. (2002) suministraron Isochrysis, Ch. gracilis 1:1 en dosis de 70,000-80,000
cel/individuo/día obteniendo 91% de individuos desovados.

El número de especies de microalgas que actualmente se emplean como alimento vivo para
bivalvos son alrededor de 50, y de éstas, al menos 10 pertenecen a la familia
Bacillariophyceae se cultivan para alimentar a los bivalvos en forma comercial Helm et al.
(2006). Existe una serie de atributos clave para su elección, basados en su morfología y
composición, ya que deben ser adecuadas para la ingesta y aprovechamiento (Haven, 1965;
Epifanio, 1975). La mayoría son células nanoplanctónicas, es decir, con un tamaño entre 2
y 20 mm, y además deben ser de fácil digestión (Helm et al., 2006).

Entre las microalgas identificadas como alimento de buena calidad para el cultivo de
bivalvos, se encuentran Isochrysis galbana, Isochrysis sp, Pavlova lutheri, Tetraselmis
suecica, Pseudoisochrysis paradoxa, Chaetoceros calcitrans y Skeletonema costatum
(Persoone y Claus, 1980). Estas especies pueden variar significativamente en su valor
nutricional en función de las condiciones de cultivo (Brown et al., 1997). Esto podría tener
efecto positivo por la posibilidad de modificar la calidad nutritiva de una determinada
especie, manipulando las condiciones de luz, nutrientes, etc., pero al mismo tiempo aumenta

10
la complejidad para mantener una misma calidad a lo largo de todo el proceso de
alimentación de los bivalvos (Pernet et al., 2005; Milke et al., 2004, 2006; Uriarte et al.,
2001).

Mazón-Suástegui (1987) describió las técnicas utilizadas para el acondicionamiento

gonádico e inducción al desove de reproductores de P. mazatlanica en condiciones de
laboratorio, como un mecanismo confiable para la obtención de larvas. Al mismo tiempo,
evaluó la eficiencia de cinco dietas microalgales en el crecimiento de la especie, sugiriendo
algunos métodos para su cultivo. Las dietas seleccionadas para este estudio fueron cinco:
cuatro se componen de Isochrysis galbana (cepa Tahitiana) y Tetrase1imis solas y
combinadas y una quinta constituida por fitoplancton de La Ensenada de La Paz, B.C.S.,
México cuya especie dominante en un 99% fue Oscillatoria sp, todas ellas cultivadas en el
laboratorio.

2.5.2. Requerimientos nutricionales

a) Lípidos como fuente de energética para el desarrollo gonadal

Los lípidos constituyen elementos muy importantes para la maduración gonadal de ostras.
El requerimiento de grasas ha sido determinado en base a la composición lipídica del tejido
de los moluscos bivalvos. Este análisis ha dado como resultado una alta proporción de ácidos
grasos no saturados, entre ellos de 20 átomos de carbono y con 5 dobles enlaces, y de 22
átomos de carbono y con 6 dobles enlaces. Estos datos aumentan considerablemente durante
la época del desarrollo sexual (Chu y Dupuy, 1980). No se ha determinado con exactitud el
papel que desempeñan los ácidos grasos no saturados en el desarrollo sexual de los moluscos,
pero su importancia se basa en la cantidad de energía necesaria durante esta fase de vida de
las ostras, ya que casi toda la energía producida por la ingestión de alimento es destinada a
la maduración gonadal (Webb, Chu, 1981).

b) Carbohidratos y su influencia en la maduración de ostiones

En los moluscos el glicógeno constituye la mayor reserva de carbohidratos. A nivel de

adultos el glicógeno puede llegar a constituir el 40 – 50 % del peso del tejido seco. La
cantidad de hidratos de carbono en la dieta varía entre 30 – 50 % según la composición de

11
las algas utilizadas como alimento (Bayne, 1977). No se ha determinado aún, las cantidades
de carbohidratos necesarios durante el proceso de maduración sexual de los moluscos. Pero,
la importancia de estos elementos parece ser mayor que los lípidos, proteínas y
micronutrientes para el desarrollo sexual.

c) Ciclo de almacenamiento y empleo de energía en moluscos bivalvos

La idea de que existía una relación entre la variación de la concentración de determinados

nutrientes en los denominados tejidos de reserva de los moluscos bivalvos y su estadio de
desarrollo sexual ha sido objeto de numerosos estudios. Las primeras observaciones fueron
realizadas en ostras por, poniendo en evidencia una caída del contenido de glucógeno en el
momento de la madurez gonadal (Ferran, 1991).

Hoy en día se conoce que cuando se habla de ciclo reproductivo de cualquier tipo de
moluscos bivalvos se está hablando de dos procesos diferentes, pero íntimamente
conectados: el ciclo gametogénico y el ciclo del tejido de reserva. El ciclo gametogénico
comprende, en general, el proceso de desarrollo de gametos femeninos (oogénesis) y
masculino (espermatogénesis), pudiéndose incluirse en él también la puesta de dichos
gametos y la fecundación. El ciclo del tejido de reserva incluye los procesos de síntesis y
acumulación de reservas energéticas (fundamentalmente lípidos, glúcidos y proteínas) en
diferentes tejidos del molusco, así como su posterior movilización desde estos tejidos para
ser utilizados en el desarrollo de los gametos, principalmente femenino, paro también
masculino. Así pues, como ambos procesos están íntimamente conectados, y no se podría
entender el ciclo reproductivo de ningún molusco bivalvo si faltase algunos de estos dos
componentes (Cáceres-Puig et al., 2007).

El desarrollo de los gametos es un proceso energéticamente costoso que depende

fuertemente de la movilización de nutriente para su cumplimiento. Estos nutrientes pueden
ser aportados por alimento recientemente ingerido, o pueden provenir de reservas
acumuladas durante el periodo de reposo reproductivo (Gabbott, 1983). Se ha demostrado
que tanto el músculo como la glándula digestiva son tejidos que cumplen la función de
reservorios energéticos (Taylor y Venn, 1979; Barber y Blake, 1981; Martínez, 1991).
Cuando los requerimientos metabólicos para la gametogénesis son satisfechos por
macromoléculas musculares, pueden verse afectadas las reservas de glucógeno, lípidos y

12
proteínas de este tejido y su actividad contráctil. Barber y Blake (1985) mostraron que previo
al inicio de la gametogénesis de Argopecten irradians concentricus, el metabolismo se basa
en lípidos. En los estadios iniciales de la gametogénesis se catabolizan carbohidratos, y a
medida que maduran los gametos y comienza el desove, la energía se obtiene principalmente
de la degradación de proteínas.

d) Aporte nutricional del fitoplancton para moluscos bivalvos

Es conocido que las algas constituyen la principal fuente alimenticia para moluscos bivalvos,
partiendo de que estos organismos son filtradores. Desde el punto de vista nutricional existen
diferencias entre las diferentes especies de algas. El fitoplancton que sirve como alimento
de ostiones y ostras debe reunir características nutricionales para las diferentes etapas de
desarrollo de los moluscos. Es así que los requerimientos durante la fase larvaria son
diferentes a los necesarios para la maduración sexual de los organismos (Webb y Chu, 1981).

Existen factores muy importantes fuera del criterio del valor nutricional en lo referente a la
constitución misma del fitoplancton como es: proteínas, carbohidratos, grasas, vitamina. El
elevado valor nutritivo de las algas como alimento de moluscos está relacionada también a
los siguientes aspectos: tamaño de la célula, ausencia de la pared celular gruesa, eliminación
de substancias no toxicas (metabolitos) (Ukeles, 1970) y composición química. Así mismos
existen especies de algas que sirven de alimento para larvas y acondicionamiento de
reproductores, cuyo valor nutritivo se traduce en excelentes resultados, como es el caso de
Isochrysis galbana y Thalassiosira pseudonana que parecen poseer un micronutriente en
elevadas cantidades esenciales para el crecimiento y desarrollo gonadal (Tabla 1) (Fogg,
1975). La asimilación y eficiencia de absorción de la ración de algas dada a los moluscos
están en función a la temperatura y a la cantidad de alimento suministrado (Epifanio, 1981).
Parece existir una relación constante de absorción, ya que los ostiones incrementan la
filtración cuando son sometidos a bajas concentraciones de algas, decreciendo el ritmo de
filtración a mayores concentraciones algales, este experimento fue realizado con C. virginica
(Epifanio, 1981).

La cantidad de microalgas consumidas está asociada con la temperatura, observándose

mayor consumo con rangos mayores de temperatura (27- 29 ºC); sin embargo, el crecimiento
y el desarrollo gonadal se encuentra relacionado directamente a ambos factores, ración

13
alimenticia y temperatura (Epifanio y Ewart, 1977). Por esta razón es recomendable la
utilización de diversos tipos de algas para la alimentación de ostiones y moluscos en general,
ya sea durante su etapa larvaria, juvenil o adulta (maduración sexual), teniendo como
resultados organismos más vigorosos, crecimiento y desarrollo gonadal acelerado que
aquellos alimentado con solo una especie de alga (Loosanoff y Murray, 1974; Walne, 1974;
Fogg, 1975; Epifanio y Mootz, 1976; Mann y Ryther, 1977), (Tabla 1).

Tabla 1. Composición de diferentes microalgas, base húmeda, utilizadas en

Acuicultura para moluscos bivalvos (Fogg, 1975)
Especie Proteína % H. Carbono % Grasas %
Tetraselmis sp. 1.42 0.41 0.70
Dunaliella sp. 1.43 0.80 0.15
Nanochrysis sp. 0.94 0.59 0.22
Chaetoceros sp. 1.12 0.22 0.21
Skeletonema sp. 1.38 0.79 0.17
Phaeodactylum sp. 0.88 0.64 0.17
Isochrysis sp. 17.6 23 5

No se han determinado con exactitud los requerimientos dietéticos para el

acondicionamiento de reproductores de ostras, pero la dieta a ser dosificada debe ser rica en
hidratos de carbono y lípidos, para la elaboración de glicógeno. Se establece también el
requerimiento de ácidos grasos no saturados y aminoácidos esenciales durante este proceso,
sin haberse llegado a establecer cuáles son los ácidos grasos y aminoácidos esenciales para
la maduración sexual de estos organismos (Webb y Chu, 1981).

2.6. Influencia de la temperatura en la maduración sexual

La estimulación física comprende cambios de temperatura con diversas variantes de

intensidad, duración y periodicidad. Existen numerosas referencias al respecto de este
método de inducción; se reportan cambios cíclicos de 18 a 29°C para Crassostrea gigas
(Helm y Millican, 1977), incremento de 19 a 30°C para C. virgínica (Dupuy et al., 1977),
de 23 a 30°C para Rangia cuneata (Chanley, 1965), hasta 30°C y posterior disminución para
Argopecten irradians (Sastry, 1963), de 20 a 25°C para Argopecten gibbus (Costello et al.,
1973), hasta 27-30°C para A. irradians ( Castagna y Duggan, 1971) e incremento de 10-15
a 24- 27°C para Pinctada martensii (Takashi, 1979). Dentro de esta categoría de
estimulación también se incluyen el shock eléctrico y la estimulación mecánica o manual.

14
De acuerdo a Rupp y Poli (1994) la inducción al desove de N. nodosus puede también
lograrse mediante exposición de los reproductores a altas concentraciones de microalgas,
seguido por el aumento gradual de temperatura del agua, previamente irradiada con luz
ultravioleta. Mediante estos procedimientos, los ovocitos que se obtienen son fecundados y
transferidos a tanques de cultivo larvario y en aproximadamente 24 horas alcanzan el estadio
de larva véliger “D”, con una talla aproximada de 100 μm.

Saucedo y Monteforte (1997) estudiaron el ciclo reproductivo Pteria sterna en organismos

de cultivo, en el Mérito, Bahía de la Paz, México, estableciendo un ciclo asincrónico, con
dos épocas de desove, febrero y mayo, con temperaturas de 22 °C y 23 °C respectivamente,
y una proporción de género de 0.38 H: 1 M. Las tallas de los organismos estudiados (41.1
mm a 90 mm) se consideran medianas, lo que sugiere que puede ocurrir una reversión del
género en organismos de tallas mayores de 55 mm. Sin embargo, los autores no obtuvieron,
evidencia suficiente para concluir que esta población sea hermafrodita protándrica.

Díaz y Buckle (1996) estudiaron el ciclo reproductivo Pteria sterna en Bahía de los Ángeles,
Golfo de California, México, en organismos de dos a catorce meses de edad, determinando
que existen dos épocas de desove masivo poblacional, una en diciembre-febrero (14 °C) y
otra en agosto (20 °C) y una proporción de géneros de 1.19 H: 1 M. Los autores observaron
ejemplares hermafroditas, por lo que, en esa localidad y condiciones, la especie se ha
considerado hermafrodita asincrónica, es decir, que puede madurar inicialmente de modo
indistinto, como macho o hembra.

Del Río-Portilla (1991) determinó el efecto de la temperatura (20, 25 y 30 °C) y la

concentración de alimento con el alga Chaetoceros sp, en el crecimiento de la ostra perlera
P. sterna en laboratorio, encontrando una temperatura de 30°C y una concentración del 8%
de alimento como óptimos para el crecimiento de la especie.

En cuanto al tiempo de acondicionamiento, Mazón–Suástegui (1988) realizó sus

experimentos de acondicionamiento gonádico, maduración y desove de P. sterna en periodo
de 60, 90 y 120 días, mientras que Avilés- Quevedo y Mazón-Suástegui (1989) lo hicieron
en periodo de 110 días con la misma especie. En ambos casos se reportan desoves en

15
diferentes meses del año (Abril, Septiembre, Octubre y Noviembre) y una eficiencia del 40
al 100 %, de individuos desovados de ambos sexos.

2.7. Condición de indicadores de calidad gonádica de los reproductores

Los índices de condición más comunes que se han utilizado en moluscos bivalvos evalúan
los cambios en la biomasa del organismo entero o de un tejido particular sobre el conjunto
de actividades fisiológicas de dichos organismos, incluyendo su crecimiento, nutrición,
reproducción, y metabolismo, y también se emplean para detectar la presencia de
contaminantes o enfermedades y su efecto (Brown y Hartwick, 1988; Crosby y Gale, 1990;
Mason y Nell, 1995; Baghurst y Michell, 2002). Lo anterior se determina debido a que los
cambios en estos índices reflejan déficits energéticos asociados a estrés ambiental,
transferencia de energía entre la gónada y tejidos somáticos, o bien a la pérdida de energía
acumulada durante el desove y liberación de gametos. De estos índices, quizá el más
utilizado es el índice de condición (IC) –llamado índice de condición general (ICG), en este
estudio–, que es el más sencillo y práctico para determinar el cambio en la biomasa húmeda
o seca de la masa visceral, incluyendo el tejido gonádico, con el fin de monitorear la
actividad reproductiva de los organismos (Okumus y Stirling, 1998; Mladineo et al., 2007).

2.8. Métodos de inducción al desove

La inducción al desove es el método por el cual se obtienen los óvulos y espermatozoides

necesarios para realizar la fertilización. Existen diversos métodos para inducir el desove en
los moluscos bivalvos, que de acuerdo con Takashi (1979) pueden tipificarse como:

a) Estímulos físicos

Consiste en “shock” térmico y la estimulación mecánica o manual

b) Estimulación química.

La estimulación química implica la adición de compuestos químicos en solución, a manera

de baños o inyecciones en la cavidad visceral y en la gónada

16
 c) Estimulación biológica.

Loosanoff y (Davis, 1963) y Chanley (1965), reportan el uso corriente de una suspensión
diluida de espermatozoides de la especie en cuestión, como complemento a la estimulación
térmica, en los trabajos de inducción al desove de varias especies de bivalvos.

2.9. Desarrollo gonadal

Para determinar el estado de madurez y grados de desarrollo de la gónada de los organismos,

se contabilizaron el número de hembras y machos sexualmente indiferenciados, siguiendo
el esquema de clasificación propuesto por García Domínguez et al. (1996) para ostras
perleras. Mediante este se divide el ciclo reproductivo en cinco estadios: (1) (Indiferenciado
o inactivo, (2) desarrollo activo, (3) madurez, (4) desove parcial y (5) post-desove o
reabsorción de gametos (Tabla 2).

17
Tabla 2. Fase de desarrollo gonádico para Pinctada mazatlanica
Estadio 1: Indiferenciado
Sin evidencia de desarrollo gonádico, no es posible distinguir el género, los
folículos se encuentran colapsados y el tejido conectivo ocupa todos los espacios
entre los folículos vacíos presencia de fagocitos.
Estadio 2: Desarrollo
Macho Hembra
Los folículos se presentan en
diferentes estadios de desarrollo
localizados entre el tejido conectivo. Los folículos son visibles y dentro de
Dentro de los folículos se encuentra una estos los ovocitos incrementan en
cantidad variable de células germinales, tamaño y número, los cuales se
como espermatocitos 1 y 2, los cuales encuentran libres en el lumen. El tejido
proliferan rápidamente, así como conectivo disminuye. El desarrollo de los
gametos maduros. Los espermatozoides ovocitos comienza con células
se encuentran depositados en una densa hemisféricas, pegadas a las paredes de
masa en el lumen de los folículos. El los folículos. Después se presentan
área de tejido conectivo entre los células esféricas más grandes (52 µm
folículos decrece, ya que los folículos de diámetro, en promedio). La madurez se
incrementan su área como resultado la aproxima.
acumulación de esperma.
Estadio 3: Madurez
Los folículos se encuentran distendidos, La madurez ovárica se caracteriza por la
ocupados por densos espermatozoides. presencia de folículos distendidos y llenos
Los espermatocitos y espermatidas se de ovocitos maduros de forma poligonal,
encuentran restringidos en una gruesa algunos de los cuales se encuentran
capa sobre las paredes foliculares. Casi adheridos a las paredes foliculares por
todo el tejido conectivo presente entre "tallos" delgados. De poco a nada de tejido
los folículos es remplazado por folículos conectivo se encuentra presente entre
llenos de espermatozoides. folículos.
Estadio 4: Desove parcial
Durante este estadio reproductivo, los Algunos folículos contienen ovocitos,
espermatozoides han sido expulsados al otros se encuentran vacíos. Marcadas
ambiente. Los folículos se encuentran reducción en el número de ovocitos
parcialmente vacíos y sus paredes rotas. grandes que se encontraban libres en el
Marcado decremento en el número de lumen. Poco tejido conectivo está presente.
espermatozoides que llenaban el lumen. Algunas paredes foliculares se presentan
rotas.
Estadio 5: Post-desove o reabsorción de gametos
Folículos colapsados, decreciendo en el Los folículos se encuentran vacíos, a
área; los espermatozoides presentes son excepción de pocos ovocitos libres sin
fagocitados. Sin evidencia de que la desovar presente en el lumen, los cuales
espermatogénesis activa se esté son fagocitados. Las paredes foliculares se
llevando a cabo. restablecen.

Fuente: García Domínguez et al. (1996).

18
 a) Factores que influyen en la reproducción y el desove de moluscos bivalvos

Los trabajos de Sastry y Blake (1971) y Blake y Sastry (1979) fueron pioneros en el efecto
de los factores que regulan la reproducción en los pectínidos. El ciclo reproductor es una
respuesta a los factores ambientales genéticamente controlada. Después de alcanzar cierto
estado fisiológico, en un organismo expuesto a las condiciones ambientales necesarias se
inicia el crecimiento de la gónada y la gametogénesis. En la coordinación de los procesos
fisiológicos y los eventos reproductivos es probable que la actividad neuroendocrina juegue
un papel muy importante, produciendo una respuesta reproductiva de acuerdo con ciertas
condiciones ambientales. Hay varios factores que afectan los eventos sucesivos del ciclo
reproductivo como factores exógenos y factores endógenos.

19
 III. METODOLOGÍA

3.1. Lugar y periodo experimental

El trabajo de maduración de Pteria sterna en condiciones controladas se llevó a cabo en las

instalaciones del laboratorio de moluscos de Acuicultura, de la Universidad Técnica de
Manabí (Ecuador) con coordenadas Latitud 0°36'32.94"S Longitud 80°25'09.74"O (Fig. 3).
Tuvo una duración de 7 meses desde septiembre del 2015 a marzo del 2016.

Figura 3. Localización geográfica del Laboratorio de moluscos de la Universidad Técnica

de Manabí (Ecuador).

3.2. Etapas experimentales

La investigación se realizó en dos etapas:

3.2.1. Etapa pre-experimental

Consideró el tratamiento de agua marina, la producción de tres especies de microalgas para

la alimentación de los organismos en experimentación y la recolección y aclimatación de
Petria sterna al sistema de recirculación.

20
21
 a) Tratamiento de agua de mar

La captación de agua de mar proveniente del Estuario del Rio Chone, utilizada en la
experimentación se realizó mediante sedimentación, filtración e irradiada con luz
ultravioleta y cloración se bombeo (con una bomba de 2 Hp marca Lx® Swimming Pool
Pump, modelo 200-1) a 5 tanques plásticos de PVC de 5 toneladas de capacidad cada uno y
se dejó sedimentar por tres días. Luego se filtró previamente con un filtro de hilo de algodón
de 5 micras y un filtro de cartucho de 5 micras. Siendo luego irradiada con una lámpara UV
(marca Sterilight silver, modelo S5Q-PA), cada 30 minutos, posteriormente se le adicionó
10 gramos de cloro por tonelada de agua y se dejó hasta el siguiente día con aireación. Antes
de utilizar el agua se neutralizó el residuo de cloro con 2 gramos de tiosulfato de sodio por
tonelada (Fig.4).

A B

Figura 4. Tratamiento de agua de mar para experimentación A: tanques para recepción de

agua de mar, B: filtración de agua con filtro de hilo de algodón de 5 micras, y filtro de
cartucho de 5 micras, C: irradiación de agua con lámpara UV.

22
 b) Producción de alimento vivo

El cultivo de microalgas se realizó en el laboratorio de algas de Acuicultura de la

Universidad Técnica de Manabí. Las especies cultivadas fueron: Isochrysis galbana,
Tetraselmis sp. y Chaetoceros gracilis. El medio de cultivo utilizado fue el f /2 de Guillard
modificado por Martínez (1998) (ver Anexo 1). El cultivo en el laboratorio se realizó a
pequeña escala en tubos de ensayo, luego en matraces de medio litro hasta la fase de garrafón
de 4 litros y posteriormente se realizó el cultivo masivo en tanques de una tonelada (1000
litros) en ambiente exterior.

1) Fase de cultivo inicial

Las cepas de microalgas fueron obtenidas del Centro Nacional de Acuicultura e

Investigaciones Marinas CENAIM ESPOL mantenidas en medio líquido contenidas en tubo
de ensayo de 10 ml a una concentración de cuatro millones de células por ml, luego el
concentrado de microalga fue colocado en matraces de medio litro, proporcionándoles
nutrientes, condiciones de iluminación constante de 30.000 lux y temperatura (20 ± 1°C),
factores necesarios para su crecimiento.

2) Fase de cultivo intermedio

El medio de cultivo utilizado fue el f /2 de Guillard modificado por Martínez (1998). En esta
fase el cultivo de microalgas se desarrolló en matraces de 0,5 litros hasta garrafones de 4
litros de capacidad, se le agregó (50 y 1000 ml) de concentrado de microalga y se le adicionó
2 ml de las soluciones de los nutrientes por cada litro de agua de mar esterilizada. El periodo
de cultivo fue de 6 a 7 días hasta pasar al área de cultivo masivo. El tipo de cultivo fue el
semicontinuo. Se mantuvo condiciones de iluminación con lamparas fluorescente, aireación
y temperatura constante de 22 ºC, salinidad de 30 ups. (Fig. 5).

23
 A B

Figura 5. Fase intermedia de cultivo de microalgas A: fase de cultivo en tubo de ensayo y

matraces de 0,5 litro, B: fase de cultivo en garrafones de 4 litros

3) Fase de cultivo masivo

Para la producción de microalgas a escala masiva se utilizaron 6 tanques plásticos de color

blanco de 1000 litros de capacidad, los cuales contenían agua de mar filtrada e irradiada con
lámpara UV. Posteriormente en 200 litros de agua tratada se adicionó como inóculo dos
garrafones de 4 litros de microalgas, a una concentración de 8 a 10 millones de células por
ml, se fertilizó con 10 gramos de fertilizante comercial (fórmula N 20%; P 5%; K 10%), así
mismo se incrementó el volumen de agua con 200 litros todos los días y se le adicionó 10
gramos de fertilizante, dependiendo de la concentración de células por ml hasta obtener una
tonelada. El tipo de cultivo fue semicontinuo, manteniéndose en los tanques de producción
en condiciones de iluminación, y aireación constante (Fig. 6).

A
a
b
c

Figura 6. Fase de cultivo masivo de microalgas A: Área de cultivo de microalgas de tres

especies (a) Isochrysis galbana, (b) Tetraselmis sp. (c) Chaetoceros gracilis

24
 c) Determinación de la concentración celular del cultivo de microalgas

Se realizó un conteo directo en una cámara de Neubauer.

Se tomaron 100 ml del cultivo, los cuales fueron colocados en un vaso de precipitados de
200 ml, se tomó 1 ml con una pipeta volumétrica, el cual fue colocado en un tubo de ensayo
añadiéndole 2 gotas de lugol, se agitó y posteriormente, con la ayuda de una pipeta Pasteur
fue tomada una muestra con la cual se llenó la cámara de Neubauer.

Dependiendo de la concentración celular se realizaron 1 o más diluciones de la muestra, con

el fin de facilitar el conteo, el cual se realizó en las 4 cuadriculas externas de la cámara
calculándose el promedio y el resultado se multiplicó por un factor de 10000 y por la dilución
efectuada. El resultado obtenido representa la concentración de células por ml. Los conteos
se realizaron por triplicado (Fig. 7). Con un microscopio óptico Olympus BX53 utilizando
el objetivo de 40x para su conteo.

Figura 7. Determinación de la concentración de microalgas

d) Obtención y transporte de individuos de Pteria sterna

Los ejemplares de Pteria sterna utilizados en el presente estudio fueron recolectados a través
de buceo semiautónomo de banco natural de Ecuador frente a la comunidad de Chanduy con
coordenadas Latitud 2°24'41.0"S Longitud 80°41'02.7"W (Fig. 8). La recolección de los
organismos se hizo en el mes de septiembre del 2015 por pescadores artesanales, a una
profundidad de 12 brazas. Un total de 137 organismos adultos fueron colectados con una
talla promedio de (7,9 ± 0,8 cm) de altura de la concha de los cuales 125 fueron utilizados
para la presente investigación, el resto de organismos se utilizó para reposición. Se utilizó
una embarcación de fibra de vidrio de 7 metros de largo con un motor Johnson de 75 HP.

25
 A B

Figura 8. Recolección de organismos, A: localización de Banco natural de ostras P. sterna

frente a la comuna de Chanduy Ecuador, B: muestras de ejemplares de ostras, C: selección
de ejemplares de ostras

Los organismos seleccionados fueron transportados por tierra al Laboratorio de Acuicultura

de la Universidad Técnica de Manabí sobre esponjas húmedas y humedeciéndolas cada 2
horas con agua de mar (Fig.9). El traslado se realizó en horas de la noche para evitar la
desecación de los organismos a las altas temperaturas. El tiempo de traslado duró 16 horas
la talla promedio de los organismos de P. sterna fue de 79 mm de longitud de la concha.

Figura 9. Transporte de organismos de P. sterna en seco con esponjas húmedas

26
 e) Aclimatación y limpieza

Los organismos, al llegar al laboratorio de Acuicultura, fueron colocados en aparejos de

cultivo denominado linternas de 5 piso con una dimensión de 40 cm de diámetro por 20 cm
de alto entre piso que fueron utilizadas para su aclimatación. Las linternas fueron colocadas
en el ambiente natural sujetas a las estructuras del muelle de desembarque del Cantón San
Vicente (Provincia de Manabí, Ecuador), cerca del lugar del experimento y se mantuvieron
allí por dos días. Luego de dicho periodo fueron trasladada al laboratorio de moluscos, donde
se les retiró el sedimento y epibiontes, luego fueron colocados en sus respectivos tanques de
acondicionamiento gonádico a temperatura ambiente de 24°C y salinidad de 30 ups (ver
Anexo. 4).

3.2.2. Etapa experimental

Esta etapa considera el acondicionamiento de los reproductores, la madurez gonadal y la

inducción al desove.

a) Acondicionamiento y manejo experimental de reproductores de ostras Pteria

sterna

Para este experimento se utilizaron calentadores sumergibles de acuario de 300 W

(Aquarium Heater) para mantener la temperatura de (control 24°C), (T1) 26°C, (T2) 28°C y
(T3) 30°C respectivamente y un sistema de aireación continuo, utilizando un blower de 2,5
HP. Se colocaron 30 organismos en cajas de plástico de 60 cm x 40 cm, a una densidad de
0.8 organismos por metro cuadrado en cada caja. Las cajas estaban perforadas y se colocaron
suspendidas dentro de los tanques, para evitar que estén en contacto con el fondo y poder
realizar el respectivo sifoneo de las heces y pseudoheces. Los organismos fueron
alimentados desde el inicio hasta el final de experimento de forma continua con una dieta
mixta de microalgas Isochrysis galbana, Tetraselmis sp y Chaetoceros gracilis en
proporción 1:1:1 empleando una concentración de 150.000- 180.000 cel/ml (Fig. 10)

27
 A B

Figura 10. Acondicionamiento de reproductores ostras P. sterna A: distribución de

reproductores en sus respectivas cajas, B: área de acondicionamiento de reproductores

b) Control de parámetros físicos

Para el control de la temperatura durante el periodo de acondicionamiento de los

reproductores de ostras Pteria sterna se utilizó un termómetro de mercurio de 0 a 100 °C
registrándose una vez al día a la misma hora por la mañana en cada tanque de los diferentes
tratamientos. La temperatura se mantuvo en control: 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C, (T3) 30°C

Para el control de la salinidad se utilizó un refractómetro marca VEE GEE de medición de 0

a 50 ups, la salinidad se registró una vez al día a la misma hora por la mañana en cada tanque
de los diferentes tratamientos durante el periodo de estudio. Se mantuvo la salinidad a 30
ups.

c) Suministro de microalgas

Las tres especies de microalgas (Isochrysis galbana, Tetraselmis sp y Chaetoceros gracilis)

entregadas como alimento fueron mezclada en un solo tanque de capacidad de dos toneladas
a una concentración final de 150.000- 180.000 cel/ml, y se suministró un flujo continuo de
25 ml por minuto a cada tanque de acondicionamiento durante el periodo de maduración
manteniendo proporción de 1:1:1 (Fig. 11). El conteo se realizó dos veces al día dentro del
tanque y a la salida.

28
 Mezcla de Suministro de
microalagas microalgas

Figura 11. Suministro de microalgas durante el acondicionamiento de P. sterna

d) Marcaje de los organismos de ostra P. sterna

Los reproductores de ostras de P. sterna, una vez retirados los epibiontes, fueron marcados
con pintura no tóxica para facilitar su identificación y determinar si hubo crecimiento en
peso o longitud durante el experimento (Fig. 12).

A B

Figura 12. Marcaje de reproductores de ostras P. sterna, A: marcaje con pintura no tóxica,
B: distribución de organismos en los tanques de acondicionamiento

e) Tratamiento térmico para inducir a la madurez gonadal

Los organismos fueron sometidos a cuatro tratamientos térmicos para estimular la maduración
de los gametos en el acondicionamiento gonádico, en el tanque control se mantuvo la
temperatura ambiente durante todo el periodo de estudio: Control 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C,
y (T3) 30°C. El control (24°C) mantuvo la temperatura constante a lo largo del experimento, en
tanto los demás tratamientos (T1, T2, T3) incrementaron gradualmente la temperatura a razón

29
de 2 grados centígrados cada dos días hasta alcanzar el valor meta, lo cual fue mantenido por 29
días a las temperaturas indicadas. En cada tratamiento se conservaron las mismas características
de calidad de agua, aireación constante y salinidad de 30 ups. La toma de decisión de incrementar
la temperatura a razón de 2 °C en los diferentes tratamientos en un periodo de dos días se dio
tomando en cuenta que la Pteria sterna en algunas regiones es capaz de tolerar un amplio rango
de temperatura en ambiente natural para alcanzar la madurez sexual y el desove Márquez et al.
(2000).

3.2.3. Evaluación de la madurez gonadal de las ostras perlíferas Pteria sterna

Para la evaluación de la madurez gonadal se sacrificaron tres organismos por tratamiento

cada 7 días de las ostras perlíferas acondicionadas a los diferentes tratamientos. Con la
muestra de gónadas en fresco se realizó un frotis, que consistió en tomar una pequeña porción
de gónada y colocarla sobre un cubre objeto, se le añadió 2 gotas de agua y se cubrió con un
portaobjeto, observando el tipo de gametos (masculino o femenino). Para las mediciones del
diámetro de los ovocitos (30 por cada hembra) se obtuvo fotos digitalizadas con una cámara
instalada al microscopio óptico Olympus BX53 con contraste de fase con sistema de captura
de imagen digital (20x y 40x) las cuales fueron posteriormente analizadas con el programa
ImageJ (Fig. 13). Cuando los ovocitos presentaron un diámetro promedio de (39 a 40 μm)
se realizó la inducción al desove.

10 X 40 X

10 X
Figura 13. Observación y medición del diámetro de ovocitos en fresco de P. sterna
30
 3.3. Evaluación de los parámetros morfo-fisiológicos

Para evaluar el crecimiento de los organismos a las diferentes temperaturas de

acondicionamiento, así como para la determinación del índice morfo-fisiológico, índice de
condición general, índice gonadosomático, índice de rendimiento muscular e índice de
manto se sacrificaron tres organismos por cada tratamiento.

Para la medición del crecimiento se evaluaron las siguientes medidas morfométricas:

longitud total, altura y espesor de los organismos, en milímetros (mm), con un grado de
precisión de 0,01 mm utilizando un calibrador Vernier (Fig. 14), el peso total se lo obtuvo
en gramos (g) con un grado de precisión de 0,01 g utilizando una balanza electrónica marca
CASIO.

Figura 14. Medidas morfológicas tomadas a los ejemplares de concha perlífera P. sterna,
Tomado de Cáceres-Puig (2012)

3.3.1. Parámetros morfo-fisiológicos

Los organismos recolectados en cada muestreo fueron medidos con vernier (± 0.1 mm) para
registrar la altura de la concha y pesados en fresco con todo y concha en una balanza (± 0.1
g). Se realizó el marcaje individual de los organismos individual, para determinar si durante
el experimento se presentó un incremento en peso, el resultado obtenido se calculó con la
fórmula propuesta por Cho et al. (1985).

31
 IPIP: (Xo- Xf / Xo) *100

Dónde:
IPIP = Índice de Proporción de Incremento en Peso (%)
Xo = Peso individual inicial
Xf = Peso individual final

Posteriormente, los organismos fueron diseccionados para extraer la gónada, glándula

digestiva, músculo aductor y manto (Fig.15). De cada tejido se registró el peso húmedo (±
0.1 g) y los datos se emplearon para calcular los siguientes índices, tomados y modificados
de Arellano-Martínez et al. (2004) para Nodipecten subnodosus. Una vez que se calcularon
estos índices, se tomó una porción de la gónada para fijación en solución Davidson por 48
horas para análisis histológico.

 Índice de condición general (ICG) = MV / CO × 100

 Índice gonadosomático (IGS) = GO / MV ×100
 Índice de rendimiento muscular (IRM) = MU / MV × 100
 Índice de manto (IMA) = MA / MV × 100

Dónde:
MV = Peso de la masa visceral (g);
CO = Peso del organismo con concha (g);
MU = Peso del músculo aductor (g);
GO = Peso de la gónada (g);
MA = Peso del manto (g)

32
 Figura 15. Anatomía interna de la ostra perlífera Pteria sterna. A= ano, Re= recto, Ma =
musculo aductor, Co = corazón, Go = gónada, PL = palpos labiales, Bo = boca, Bi = biso.

3.4. Análisis de la calidad gonadal

Para el análisis histológico se sacrificaron cinco organismos aleatoriamente luego de la

extracción, y posteriormente tres organismos cada 7 días para cada tratamiento de
acondicionamiento. Se tomaron muestras de gónadas, glándula digestiva, musculo aductor
y manto para calcular los índices morfo-fisiológico de cada tratamiento, luego se tomó el
10% de la muestra de gónada y se observó al microscopio para la medición del diámetro de
los ovocitos y análisis histológico (Fig. 16). De acuerdo con el análisis histológico realizado
a los primeros cinco organismos de Pteria sterna los resultados mostraron que estos se
encontraban en estadio de desarrollo tanto macho como hembra no se pudo observar
organismos en estado de madurez.

33
 A B

C D

Figura 16. Disección de organismos y toma de muestra, (A) Biometría de organismos de P.

sterna, (B, C) disección de organismos experimentales, (D) Toma de muestra de tejido
para histología

Se siguió el método convencional propuesto por Zuñiga (1998). Las muestras de gónadas
previamente fijadas en formol al 10% fueron deshidratadas en alcoholes de graduación
ascendente (70 a 100%), incluidas en xilol y posterior embebidas en Paraplast-TX®. Se
efectuaron cortes a 8 µm en micrótomo de rotación (marca Leika modelo 820 con adaptador
de cuchilla descartable de alto perfil) teñidas con hematoxilina-eosina, las laminillas se
observaron bajo el microscopio óptico Olympus BX53 con contraste de fase con sistema de
captura de imagen digital, (20x y 40x) para su análisis posterior y estos a su vez analizados
con el programa ImageJ, para la determinación del sexo y los estadios de madurez (Zuñiga
(1998), (ver Anexos. 2 y 3).

3.4.1. Inducción al desove por “shock” térmico

Después de cuatro semanas de acondicionamiento, a los reproductores sexualmente maduros

se les realizó una estimulación física en el traslado de 6 organismos por 30 minutos a envases
plásticos de 30 litros con agua de mar filtrada a 1 μm a una salinidad de 30 ups y a una
temperatura gradual de 15, 17, 21°C. Pasado este tiempo nuevamente fueron colocadas las
ostras a la temperatura de acondicionamiento inicial. Se realizaron tres réplicas de cada uno

34
de los tratamientos de acondicionamiento (Fig. 17). El proceso se repitió por 3 veces hasta
obtener el desove. La temperatura fue medida de forma continua durante el proceso. Los
organismos estuvieron sin alimentación durante el proceso de inducción al desove para evitar
la formación de heces y pseudoheces que puedan contaminar los ovocitos. Finalmente se
determinó a que temperatura se logró obtener desove de los diferentes tratamientos.

A A

Figura 17. Inducción al desove por “shock” térmico a la ostra P. sterna: A) Control horario
de la disminución de la temperatura con hielo; B) Incremento de la temperatura con
calentadores sumergibles.

Luego de realizar el desove y obtener la liberación de los gametos los espermios mostraron
una tonalidad lechosa, los reproductores de ostras fueron retirados de las cubetas de desove
y colocados en los respectivos tanques de acondicionamiento, posteriormente se realizó el
tamizado de los óvulos con un tamiz de 100 μm, con la finalidad de eliminar las heces y
otros residuos orgánicos. Luego estos óvulos fueron colocados en un beaker de 1000 ml se
completó el volumen con agua de mar tratada, posterior se tomó una muestra con una pipeta
automática de 0,5 ml la cual fue y colocada la muestra en una cámara de Sedgewick Rafter
para el conteo de individuo. Los óvulos fueron colocados en un tanque de 200 litros de

35
capacidad, se utilizó agua de mar filtrada a 1 μm y esterilizada con lámpara UV se
mantuvieron a 24 °C de temperatura (ver Anexo. 5).

3.5. Análisis Estadístico de datos

Se realizó la prueba Kolmogorov-Smirnov, para detectar la normalidad y homocedasticidad

de varianzas y así definir el tipo de pruebas estadísticas a utilizar ya sea paramétricas o no
paramétricas. Una vez confirmado anterior, se aplicaron ANOVAS de una vía para detectar
diferencias significativas en los indicadores antes mencionados. En el caso de que existieran
diferencias significativas se utilizó una prueba post hoc de Tukey modificado por Kramer
para determinar diferencias específicas en los indicadores entre los diferentes tratamientos.
Para el análisis estadístico de la data se utilizaron los programas Minitab16®, SPSS®
Statistics 21. El nivel de significancia se fijó en α = 0.05 para todos los análisis.

36
 IV. RESULTADOS

4.1. Comparación del efecto de cuatro temperaturas (Control 24, 26, 28 y 30 °C) en
el acondicionamiento gonádico (madurez sexual, diámetro ovocitario) en
condiciones de laboratorio de la ostra perlífera Pteria sterna.

4.1.1. Evaluación de la temperatura y salinidad

Los resultados muestran pequeñas variaciones diarias de temperatura del agua en los
diferentes tratamientos durante el periodo de estudio. En el control (24°C), tratamiento T1
(26°C), y tratamiento T3 (30°C) se registraron variaciones de ± 0,3 °C, en tanto el T2 (28°C)
presentó una variación de ± 0,25 °C (Tabla. 3). No se registró variación de salinidad en los
diferentes tratamientos dado que mantuvo un valor constante de 30 ups (Tabla .4).

Tabla 3. Registro promedio de temperaturas del agua en los diferentes tratamientos de

acondicionamiento de reproductores de Pteria sterna durante el periodo de estudio

TEMPERATURAS
Control 24°C T1 (26°C) T2 (28°C) T3 (30°C)
(± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
24,0 ± 0,6 26,0 ± 0,3 28,0 ± 0,3 29,8 ± 0,3

Tabla 4. Registro promedio de salinidad del agua en los diferentes tratamientos de

acondicionamiento de reproductores de Pteria sterna durante el periodo de estudio

SALINIDAD ups
Control 24°C T1 (26°C) T2 (28°C) T3 (30°C)
30 30 30 30

37
 4.1.2. Madurez sexual

Empleando la clasificación del ciclo gonádico propuesto por García Domínguez et al (1996)
durante el periodo de estudio de acondicionamiento gonádico de la ostra Pteria sterna se
pudo observar organismos en estado de desarrollo (DES), maduro (MAD) y desove parcial
(DSP), no se pudo observar organismos en post-desove (PSD) en ninguno de los tratamientos
(Fig. 18). En los ejemplares hembra el control (24°C) y T3 (30°C), se presentaron tres
estadios mencionados, siendo que en el control (24°C) los valores fueron de 2 y 17%, y en
el segundo de T3 (30°C) fue de 2 y 17%. En los tratamientos T1 (26°C) y T2 (28°C) sólo
fue posible observar el estadio maduro.

En los ejemplares macho, de forma similar a las hembras, se presentaron los tres estadios de
madurez: desarrollo, maduro y desove parcial. A la temperatura del T1 (26°C) y T2 (28°C),
se presentaron valores altos de estadio maduro. En el T1 (26°C) los valores fueron de 6 y
50%, y en T2 (28°C) de 5 y 42 %, respectivamente. En el control (24°C) y T3 (30°C) fue
posible observar bajo número de organismos en estadio maduro (Fig. 19)

38
Figura 18. Microfotografía de gónada (40X) de P. sterna teñida con hematoxilina-eosina
donde se muestran diferentes estadios de madurez: DES= Desarrollo, MAD= Maduro,
DSP= Desove Parcial.

39
Figura 19. Porcentaje acumulativo de estadios de madurez sexual de hembras y macho de
los diferentes tratamientos de acondicionamiento de P. sterna: DES= Desarrollo, MAD=
Maduro, DSP= Desove Parcial, PSD= Post-desove.

40
 4.1.3. Diámetro de ovocitos

El diámetro promedio de ovocitos durante el periodo de estudio presentó valores entre 28,47
± 3,5 y 38,72 ± 3,3 µm con diferencias significativas entre los tratamientos (P<0.05) (Tabla
5). Los menores valores para el control (24°C) se observaron en la tercera semana 28,47 ±
3,5 µm, en tanto los mayores estuvieron en la segunda semana 33,04 ± 3,7 µm. En el T1
(26°C) se observó una disminución del diámetro promedio desde la primera semana
alcanzando el menor valor la cuarta semana con 29,76 ± 3,8 µm. El T2 (28ºC) presentó los
valores más altos durante todo el periodo de acondicionamiento gonádico alcanzando un
valor máximo en la segunda semana 38,72 ± 3,3 µm, y disminuyendo en las semanas
posteriores. El T3 (30°C) tuvo un incremento de diámetro promedio entre la primera y la
tercera semana con una pequeña disminución en la cuarta semana, sin embargo, sus valores
se mantuvieron entre las 31,0 ± 3,8 y 33,95 ± 4,0 µm.

Tabla 5. Análisis de varianza del diámetro de ovocitos promedios ( ± 2ES), en P. sterna

en los diferentes días de acondicionamiento gonádico control: 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C,
30ºC), durante 29 días de estudio.

Tratamientos de N. de Día 7 Día 14 Día 21 Día 29

acondicionamiento ovocitos (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
Control (24°C) 25 30,57 ± 4,0b 33,04 ± 3,7b 28,47 ± 3,5b 30,99 ± 2,8ac
Tratamiento (26°C) 25 34,24 ± 4,1a 30,15 ± 3,2c 31,33 ± 4,4a 29,76 ± 3,8c

Tratamiento (28°C) 25 36,79 ± 4,0a 38,72 ± 3,3a 33,99 ± 3,2a 34,47 ± 3,3a
Tratamiento (30°C) 25 31,0 ± 3,8b 30,07 ± 3,3c 33,95 ± 4,0a 32,80 ± 3,2ab
Letras diferentes en columnas indican diferencias significativas, P<0.05.

4.2. Evaluar el efecto de tres temperaturas de “shock” térmico (15, 17, 21°C) sobre
el desove de la ostra perlífera Pteria sterna, en condiciones de laboratorio

4.2.1. Desove, desarrollo embrionario y larval

De los 4 tratamientos donde los organismos de P. sterna produjeron desoves, tanto machos
como hembras, solo se pudo observar respuesta positiva en dos de tres réplicas en el T2

41
(28ºC). Este tratamiento fue el único que respondió al estímulo de shock térmico, de
temperatura descendente a 17°C a los 20 minutos de exposición, obteniéndose la liberación
de gametos. El tamaño promedio de los óvulos fue 43,08 ± 0,69 μm (Fig. 20). La fertilización
ocurrió aproximadamente 25 minutos luego del contacto entre los gametos, donde se pudo
apreciar la formación del primer cuerpo polar a 28°C. La formación de larvas trocóforas
activas ocurrió entre 10-12 h. Luego de transcurrido 23 a 24 horas se observaron las primeras
larvas D, con una altura y longitud de la valva de 37,69 ± 1,52 μm y 47,31 ± 0,82 μm a 28°C.
En cuanto al promedio de larvas obtenidas el valor más alto se observó en el T2 réplica dos
con 556,000 ± 11,52 y el valor más bajo en la réplica uno del T2 con 500,000 ± 10,95 larvas
por 1000 ml. Las larvas fueron colocadas en tanque de 500 litros a 24° C con agua de mar
tratada,
tratada, filtrada
filtrada con
con filtro
filtro de
de hilo
hilo de algodón aa 55 μm,
de algodón μm, clorinada
clorinada ee irradiada
irradiada con
con lámpara
lámpara UV.
UV.

A B cp C
D
pa

pv

Figura 20. Desarrollo embrionario de P. sterna en las primeras 24 horas: (A) óvulo (B)
cigoto; (C) larva D. cp: cuerpo polar; pa: polo animal; pv: polo vegetal

4.3. Calidad gonádica en ostra Pteria sterna, mediante las variaciones en el índice de
condición general, índice gonadosomático, índice de rendimiento muscular, e índice
del manto.

4.3.1. Índice de condición general

El análisis de varianza de los índices de condición general (ICG), en P. sterna mostró que
hubo diferencias significativas entre los diferentes tratamientos (26, 28, 30°C) (P<0.05) en
los 29 días de acondicionamiento. El control 24°C no presentó diferencia significativa
(P>0.05) (Tabla 6, Fig. 21). El control (24°C) presentó valores casi constantes 20,46 ± 5,7 -
23,41 ± 3,9 a partir de la primera y segunda semana, disminuyendo a la cuarta semana 20,44
± 2,5 siendo de menor incremento entre todos los tratamientos. El T2 (28°C) y el T3 (30°C),
presentaron valores más altos con incremento entre 30,98 ± 3 y 31,92 ± 5,5 a partir de la

42
tercera semana, disminuyendo en la cuarta semana 21,77 ± 5,4 y 20,30 ± 2 estos tratamientos
fueron los de mayor incremento entre todos los tratamientos. El T1 (26°C) presentó valores
altos 27,10 ± 2,5 y 27,20 ± 0,7 las primeras dos semanas disminuyendo en las semanas
posteriores.

Figura 21. Promedios porcentuales de los índices de condición general (ICG) ( ± 2ES) de
P. sterna entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento durante la maduración
sexual de 29 días en condiciones de laboratorio
Tabla 6. Análisis de varianza de los índices de condición general (ICG) ( ± 2ES), en P.
sterna entre los diferentes tratamientos de maduración gonadal control: 24°C, (T1) 26°C,
(T2) 28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días de estudio

Tratamientos de N. Día 7 Día 14 Día 21 Día 29

acondicionamiento Org (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
Control (24°C) 3 20,46 ± 5,7a 23,41 ± 3,9a 22,25 ± 1,8a 20,44 ± 2,5a
Tratamiento (26°C) 3 27,10 ± 2,5a 27,20 ± 0,7a 23,43 ± 2,1b 19,65 ± 1,2b
Tratamiento (28°C) 3 21,80 ± 1,5ab 30,98 ± 3a 21,04 ± 3,7b 21,77 ± 5,4ab
Tratamiento (30°C) 3 17,79 ± 2,2b 31,92 ± 5,5a 23,35 ± 2,7ab 20,30 ± 2b
Letras diferentes en filas indican diferencias significativas, P<0.05.

43
 4.3.2. Índice gonadosomático

El análisis de varianza del índice gonadosomático (IGS), en P. sterna mostró que hubo
diferencias significativas entre los diferentes tratamientos control (24°C), T1 (26°C), T2
(28°C) (P<0.05) en los días de acondicionamiento. El T3 (30 °C) no presentó diferencias
significativas (P>0.05) (Tabla 7, Fig. 22). El T1 (26°C) presentó valores bajos a partir de la
primera y segunda semana 9,84 ± 1,9 – 9,69 ± 0,3 incrementando su valor la cuarta semana
14,51 ± 1,1 siendo de menores valores entre todos los demás tratamientos. El control (24°C)
y el T2 (28°C) presentaron valores altos a partir de la segunda semana 14,28 ± 1,6 y 17,26
± 0,9 respectivamente, disminuyendo a partir de la cuarta semana 11,54 ± 1,3 y 13,54 ± 0,2
solo estos tratamientos presentaron disminución del IGS entre todos los tratamientos. El T3
(30°C) presentó valores constantes de incremento 12,65 ± 1,5 – 14,67 ± 1,7- 13,93 ± 2,5 y
15,37 ± 2,2 durante el acondicionamiento a diferencia de los demás tratamientos que
presentaron variaciones de incremento y disminución en las semanas posteriores.

Figura 22. Promedios porcentuales de los índices gonadosomático (IGS) ( ± 2ES) de P.

sterna entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días en
condiciones de laboratorio

44
Tabla 7. Análisis de varianza de los índices gonadosomático (IGS) ( ± 2ES), en P. sterna
entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico Control: 24°C, (T1) 26°C,
(T2) 28°C, (T3) 30ºC), durante 29 días

Tratamientos de N. Día 7 Día 14 Día 21 Día 29

acondicionamiento Org (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
Control (24°C) 3 11,87 ± 1,7ab 14,28 ± 1,6a 9,41 ± 0,9b 11,54 ± 1,3ab
Tratamiento (26°C) 3 9,84 ± 1,9b 9,69 ± 0,3b 13,69 ± 0,2a 14,51 ± 1,1a
Tratamiento (28°C) 3 9,20 ± 1,6c 17,26 ± 0,9a 14,59 ± 0,5b 13,54 ± 0,2b
Tratamiento (30°C) 3 12,65 ± 1,5a 14,67 ± 1,7a 13,96 ± 2,5a 15,37 ± 2,2a
Letras diferentes en filas indican diferencias significativas, P<0.05.

4.3.3. Índice de rendimiento muscular

El análisis de varianza de los índices de rendimiento muscular (IRM), en P. sterna mostró

diferencias significativas entre los diferentes tratamientos control: 24°C, (T1) 26°C, (T2)
28°C, (T3) 30°C) (P<0.05) en los 29 días de acondicionamiento gonádico (Tabla 8 y Fig.
23). El tratamiento T1 y T2 presentaron bajos valores 11,85 ± 0,6 y 13,28 ± 1,4 en la segunda
semana, incrementándose a la tercera semana 23,14 ± 4,3 y 19,61 ± 2,2 siendo estos
tratamientos los de mayor incremento entre todos los demás tratamientos. El control (24°C)
y el T3 (30°C), presentaron tendencias y valores similares con incremento entre 12,17 ± 0,5
a 22,78 ± 1,3 y 12,17 ± 0,5 a 22,95 ± 3,7 a partir de la segunda semana respectivamente.

45
 Figura 23. Promedios porcentuales de los índices de rendimiento muscular (IRM) ( ±
2ES) de P. sterna entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días
en condiciones de laboratorio

Tabla 8. Análisis de varianza de los índices de rendimiento muscular (IRM) ( ± 2ES), en

P. sterna entre los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico Control: 24°C,
(T1) 26°C, (T2) 28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días

Tratamientos de N. Día 7 Día 14 Día 21 Día 29

acondicionamiento Org (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
Control (24°C) 3 14,79 ± 0,9b 12,17 ± 0,5b 22,78 ± 1,3a 23,57 ± 3,4a
Tratamiento (26°C) 3 18,02 ± 2,1ab 11,85 ± 0,6b 23,14 ± 4,3a 22,60 ± 1,5a
Tratamiento (28°C) 3 16,92 ± 0,7ab 13,28 ± 1,4b 19,61 ± 2,2a 22,23 ± 3,6a
Tratamiento (30°C) 3 16,78 ±1,2bc 12,17 ± 0,5c 22,95 ± 3,7a 21,23 ± 1,8ab
Letras diferentes en filas indican diferencias significativas, P<0.05.

4.3.4. Índice de manto

El análisis de varianza del índice de manto (IMA), en P. sterna mostró que no hubo
diferencias significativas entre tres tratamientos (control, 26, 28°C) (P>0.05) en los días de
46
acondicionamiento gonádico, sin embargo, el T3 (30°C) si presentó diferencia significativa
durante el periodo de estudio (P<0.05) con respecto a los otros tratamientos (Tabla 9 y Fig.
24). El control (24°C) y el T3 (30°C), presentaron valores más altos de 19,00 ± 0,5 y 18,64
± 1,3 a partir de la primera semana, disminuyendo en las semanas posteriores 14,98 ± 3,3 y
12,57 ± 1,4 siendo los de mayor incremento entre todos los demás tratamientos. El T2
(28°C), presentó valores bajos casi constantes de incremento de 12,61 ± 1,0 a 12,51 ± 1,2 a
partir de la segunda y tercera semana, alcanzando su mayor valor la cuarta semana 17,06 ±
4,3 este tratamiento fue el que presentó el menor incremento en comparación con los demás
tratamientos.

Figura 24. Promedios porcentuales de los índices de manto (IMA) ( ± 2ES) de P. sterna
entre los diferentes tratamientos durante la maduración sexual de 29 días en condiciones de
laboratorio

47
Tabla 9. Análisis de varianza de los índices del manto (IMA) ( ± 2ES), en P. sterna entre
los diferentes tratamientos de acondicionamiento gonádico control: 24°C, (T1) 26°C, (T2)
28°C, (T3) 30ºC, durante 29 días

Tratamientos de N. Día 7 Día 14 Día 21 Día 29

acondicionamiento Org (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES) (± 2ES)
Control (24°C) 3 19,00 ± 0,5a 14,98 ± 3,3a 17,26 ± 2,5a 13,25 ± 2,1a
Tratamiento (26°C) 3 12,03 ± 1,2a 13,27 ± 1,6a 16,14 ± 1,7a 14,98 ± 1,9a
Tratamiento (28°C) 3 16,60 ± 1,5a 12,61 ± 1,0a 12,51 ± 1,2a 17,06 ± 4,3a
Tratamiento (30°C) 3 18,64 ± 1,3a 12,57 ± 1,4b 13,94 ± 1,7ab 15,85 ± 3,0ab
Letras diferentes en filas indican diferencias significativas, P<0.05.

4.3.5. Incremento en peso

El análisis de varianza de incremento en peso (g) durante el acondicionamiento a la

maduración sexual mostró diferencias significativas entre los diferentes tratamientos
(control (24); 26, 28, 30°C) (P<0.05) (Tabla 10 y Fig. 25). El control (24°C) presentó valores
casi constantes de incremento (0,91-0,94 ± 0,2 g) en las tres primeras semanas,
disminuyendo en la cuarta semana (0,88 g), siendo el de menor incremento entre todos los
tratamientos. El T1 (26°C) y el T3 (30°C), presentaron tendencias y valores similares con
incremento entre 1,06 ± 0,3 a 1,14 ± 0,3 g y 0,99 ± 0,1 a 1,14 ± 0,1, respectivamente. El T2
(28°C) presentó valores de incremento de 1,23 ± 0,3 y 1,31 ± 0,2 g con diferencias
significativas con los otros tratamientos.

Tabla 10. Análisis de varianza de incremento en peso promedio (g) semanal de P. sterna a
diferentes temperaturas de acondicionamiento gonádico durante el periodo de estudio

Días de N. Control 26ºC 28ºC 30ºC

Org 24°C (± 2ES) (± 2ES) (±2ES)
acondicionamiento
(± 2ES)
Día 7 18 0,91 ± 0,2b 1,06 ± 0,3b 1,23 ± 0,3a 0,99 ± 0,1a
Día 14 18 0,93 ± 0,2c 1,14 ± 0,3ab 1,25 ± 0,3a 1,03 ± 0,2bc
Día 21 18 0,94 ± 0,2c 1,08 ± 0,2bc 1,30 ± 0,2a 1,14 ± 0,1b
Día 29 18 0,88 ± 0,2c 1,08 ± 0,2b 1,31 ± 0,2a 1,13 ± 0,1b
Letras diferentes en filas indican diferencias significativas, P<0.05.

48
 1,4

1,3

Incremento en peso (g)

1,2

1,1

1,0

0,9

0,8
7 14 21 29 7 14 21 2 9 7 14 2 1 29 7 14 21 29
a a a a
D i D ia Dia D ia D i D ia D ia D ia D i D ia D ia D ia Di Dia D ia Dia

Tratamientos
°C ºC ºC ºC
24 26 28 30
r ol T- T- T-
t
C on

Figura 25. Incremento en peso promedio (g) de P. sterna a diferentes días de los diferentes
tratamientos de temperatura

49
 V. DISCUSIÓN

5.1. Comparación del efecto de cuatro temperaturas (24, 26, 28 y 30°C) en el

acondicionamiento gonádico (madurez sexual, diámetro ovocitario) en condiciones
de laboratorio de la ostra perlífera Pteria sterna.

En este estudio el sistema de acondicionamiento de reproductores resulto adecuado para el

fin propuesto, los grupos experimentales se mantuvieron a una temperatura constante de 24,
26, 28, 30 °C para todos los tratamientos de acondicionamiento, estas temperaturas
constantes parecen haber favorecido el desarrollo gonádico de los reproductores de ostras
Pteria sterna, por lo que se considera que 30 días es un periodo razonable para detectar
cambios mínimos en el desarrollo y composición de la gónada y otros tejidos. Esto concuerda
con los tiempos sugeridos para otros bivalvos madurados en cautiverio, como A. purpuratus
(Avendaño y Le Pennec 1996, 1997), A. ventricosus (Luna-González 1997), y C. gigas
(Baltazar et al., 1999), en donde ha sido posible obtener organismos con gónadas en estadios
de madurez en periodos de tiempo relativamente cortos. Este trabajo se enfocó
principalmente en comparar el efecto de diferentes temperaturas en el acondicionamiento
gonádico, relacionado a la madurez sexual y diámetro de ovocitos.

Experiencias realizadas por Navarro et al. (2000) indican que la temperatura y la dieta son
factores ambientales que juegan un papel importante en el ciclo reproductivo de bivalvos
por tanto la variación de estos factores influye directamente en el proceso de obtención y
almacenaje de la energía necesaria para realizar dicho ciclo (Sastry 1979) siendo la energía
generalmente almacenada en carbohidratos, lípidos y proteínas y cuando el alimento
ingerido excede los requerimientos básicos de mantenimiento se inicia la gametogénesis
(Barber y Blake 1981).

Durante el periodo de acondicionamiento, para la maduración sexual de la ostra P. sterna, a

diferentes temperaturas, es posible observar en el análisis histológico organismos en estadios
de desarrollo (DES), maduro (MAD), y desove parcial (DSP), en los diferentes tratamientos,

50
no siendo posible observar organismos en post-desove en ninguno de los tratamientos.
Asimismo trabajos realizados por varios autores indican que el desarrollo de la gónada y la
movilización de reservas de los tejidos somáticos a la gónada, pudiera ser atribuible a la
temperatura del agua, que es uno de los factores más relevantes en el proceso de maduración
sexual y juega un papel clave en la regulación de numerosos procesos fisiológicos
involucrados en la reproducción de los moluscos de las familias Bivalvia (Bayne, 1977),
Mytilidae (Seed, 1976), Ostreidae (Andrews, 1979), Veneridae (Mackie, 1984), Pectinidae
(Román et al., 2002; Barber y Blake, 2006), y Pteriidae (Saucedo y Southgate, 2008).

Trabajos realizados por varios autores han logrado obtener maduración gonádica de
moluscos en condiciones controladas de laboratorio, manteniendo temperaturas estables y
suministrando una dieta de alimento adecuada. La idea de maduración de organismos a
temperatura estable se basa en el supuesto de evitar que parte de la energía destinada a la
reproducción se desvíe a procesos de compensaciones fisiológicas, lo cual sucede cuando la
temperatura es variable o desfavorable. Un ejemplo es la almeja N. subnodosus la cual siendo
sometida a temperaturas constantes de 24 °C y a un suministro continuo de microalgas,
presentó madurez gonádica (Villavicencio, 1997). También, se han obtenido organismos
reproductivamente maduros e incluso con desoves prematuros al emplear dichas
temperaturas estables (Sicard-González et al., 2006).

Es importante mencionar que las temperaturas del agua seleccionadas en este estudio control
24°C; T1 (26°C); T2 (28°C); T3 (30°C) se encuentran dentro del intervalo de distribución
natural de la especie P. sterna (19 a 30°C) (Mazón-Suástegui y Avilés-Quevedo, 1988;
Araya-Nuñez et al., 1991, 1995; Saucedo y Monteforte, 1997a). Esta selección de
temperatura se estableció de esta forma para identificar la temperatura óptima para la
maduración de P. sterna, particularmente para controlar la reproducción y la producción de
semilla en condiciones de laboratorio (Gómez-Robles et al., 2013).

Con respecto al diámetro de los ovocitos, se detectaron diferentes tamaños de ovocitos en

los tratamientos y el control en las primeras dos semanas, con una tendencia a estandarizarse
hacia el final del experimento; el T2 (28°C) registró la talla más grande de ovocitos con
38,72 ± 3,31 µm seguido del T3 (30 °C) con 33,95 ± 3,98 µm. El diámetro de los ovocitos
mantuvo una relación directa con el estadio de madurez donde se observó un mayor número
de organismos es estado maduro, tanto en machos como en hembras. Esto sugiere que

51
temperaturas constantes seguidas de un régimen de alimentación adecuado favorecen la
madurez sexual y por ende incrementa el diámetro de los ovocitos. Durante el periodo de
estudio las medidas del diámetro de los ovocitos encontradas en los diferentes tratamientos
están sobre la talla máxima reportada por Vite-García y Saucedo (2008) para la especie P.
sterna (31 µm).

5.2. Evaluar el efecto de tres temperaturas de “shock” térmico (15, 17, 21°C) sobre
el desove de la ostra perlífera Pteria sterna, en condiciones de laboratorio.

Durante el periodo de estudio de inducción al desove los organismos acondicionados a

diferentes temperaturas fueron sometidos a tres estímulos térmicos de temperatura
descendente (15, 17, 21°C). Dicha inducción fue realizada a partir del día 29 cuando los
organismos mostraban madurez suficiente para inducir al desove, basados en el análisis
histológico. En el presente trabajo se pudo obtener desove a una temperatura de
acondicionamiento de 28°C y una temperatura descendente de 17 °C la cual se mantuvo
durante 20 minutos hasta que ocurrió la emisión de gametos. Este resultado es similar a
trabajos realizado con respecto a la influencia de la temperatura en el desove de bivalvos en
experimentos de laboratorio, donde se observó que los estímulos térmicos son un disparador
del desove en ostras perleras maduras (P. sterna y P. mazatlanica) (Rangel- Davalos et al.,
2000; Hernández-Olalde, 2001), menciona que la P. sterna mantenidas a una temperatura de
28°C y posterior se realizó un descenso de la temperatura a 22,8 °C donde inicia el desove,
el periodo de desove está directamente relacionado con el descenso de la temperatura del
agua.

Cabe recalcar que, de acuerdo con el análisis histológico realizado a las ostras, tanto el
estadio de madurez sexual como el diámetro de ovocito los organismos eran adecuados para
el desove en todos los tratamientos, sin embargo, no se obtuvo la respuesta esperada. Es
posible que en los tratamientos que no presentaron respuesta al desove se deba a la
temperatura a la cual fueron sometidos los organismos durante el experimento o el tiempo
de acondicionamiento, o alimentación y manejo que pudo influir en obtener una respuesta
positiva en los demás tratamientos y por ende estos factores limitarían un adecuado
almacenamiento de reservas de nutrientes y movilización de reservas hacia la gónada. Sin
embargo, se pudo observar una relación inversa entre el índice gonadosomático y el índice
de rendimiento muscular las primeras dos semanas donde al parecerse dio una movilización

52
de reservas hacia la gónada y por ende pudo haber ocurrido un desove. Trabajos similares
son reportados por (Liu et al., 2008) para las especies Placopecten magellanicus, A.
irradians, P. maximus, entre otros, donde el ciclo de almacenamiento y uso de reservas
energéticas para sustentar la gametogénesis en moluscos bivalvos son atribuidos al
almacenamiento y movilización de reservas energéticas entre el músculo aductor y gónada
durante la maduración sexual.

En cuanto al desarrollo embrionario de la ostra perlífera Pteria sterna durante el presente

trabajo se observó en el T2 (28°C) un alto número de larvas 556,000 ± 11,52 por litro. Sin
embargo, durante el desove se pudo observar un alto número de individuos en liberación de
gametos, pero al final se obtuvo un bajo número de huevos fertilizados y posterior se pudo
observar el 100% de mortalidad de larvas. Asimismo, como se mencionó anterior mente solo
uno de los tratamientos respondió positivamente al desove a pesar de que de acuerdo a los
análisis histológicos se encontraban potencialmente maduros en los diferentes tratamientos.
Sería recomendable evaluar diferentes concentraciones de microalgas y un mayor tiempo de
acondicionamiento a la madurez gonádica a 28°C para la obtención de un mayor número de
huevos fertilizados y por ende un mayor número de larvas de P. sterna en trabajos
posteriores. El presente trabajo tuvo resultados similares a los publicados por algunos autores
que mencionan que el desarrollo embrionario y larvario de P. mazatlanica y P. sterna
presentan un bajo número de huevos fertilizados en condiciones de laboratorio (Araya-
Núñez et al., 1991, 1995; Martínez-Fernández et al., 2003, 2004; Saucedo et al., 2007), en
dichos trabajos, realizados en México, se reportan bajas tasas de supervivencia larvaria
(<2%) de un total de 184000 larvas, esta respuesta también se presenta en otras especies de
ostras perleras, como P. fucata (Dharmaraj et al., 1987; Victor et al., 1995), P. maxima (Rose
y Baker, 1994; Taylor, 1999) y P. margaritifera (Southgate y Beer, 1997; Doroudi et al.,
1999).

La madreperla Pinctada mazatlanica y la ostra perlífera P. sterna son especies que

aparentemente se encuentran sujetas a ciclos reproductivos distintos en el tiempo; para la
primera de ellas ocurre, desde la gametogénesis al desove, principalmente en los meses
cálidos del año (abril a octubre en promedio) cuando la temperatura del agua oscila entre los
23 a 30 ºC, por lo que se dice que tiene una afinidad tropical (Sevilla, 1969; Arizmendi-
Castillo, 1996; García - Domínguez, 1996; Saucedo y Monteforte, 1997). Por su parte, P.
sterna presenta desoves continuos a lo largo de todo el año, aunque con mayor intensidad en

53
los meses fríos del año (noviembre a febrero) con temperaturas de 17 a 24 ºC. (Hernández-
Díaz, 1993; Arizmendi-Castillo, 1996; Saucedo y Monteforte, 1997). La temperatura
empleada para inducir el desove en el presente experimento (17 °C) se encontraría en el
límite inferior de dicho rango.

5.3. Evaluación de la calidad gonádica mediante las variaciones morfo-fisiológicas

de la ostra.

En el presente trabajo de determinación de índices morfo-fisiológicos en P. sterna el índice

gonadosomático (IGS) presentó una relación inversa entre el índice de rendimiento muscular
(IRM) e índice de manto (IMA) en los diferentes tratamientos control (24°C), T1 (26°C), T2
(28°C), T3 (30°C), en la segunda semana durante el acondicionamiento de los reproductores.
Los valores más altos de IGS coincidieron con valores bajos de IRM e índice de manto IMA
en la segunda semana. Es importante aclarar que el IGS empleado en este estudio es solo un
indicador parcial de la calidad de la gónada, debido a que a diferencia de los moluscos
pectínidos donde la gónada está presente como órgano discreto, en P. sterna ésta se
desarrolla difusamente como parte de la masa visceral a medida que el animal va madurando.
Similar a lo descrito por diversos autores que mencionan que la determinación de índices
morfo-fisiológicos está comúnmente relacionado con el ciclo de almacenamiento y uso de
reservas energéticas destinadas al uso de la gametogénesis en moluscos bivalvos, se observa
en los resultados obtenidos que exhiben un patrón inverso. Esto es consistente con lo
reportado para ciertas especies de importancia comercial, como Argopecten circularis
(Villalejo-Fuerte y Ceballos-Vázquez, 1996), Nodipecten subnodosus (Arellano-Martínez et
al., 2004), Ruditapes decussatus (Ojea et al., 2004), C. gigas (Dridi et al., 2007), Modiolus
barbatus (Mladineo et al., 2007) y Fluvia mutica (Liu et al., 2008), entre otros. También se
ha reportado que algunas especies (e.g. Placopecten magellanicus, A. irradians, P. maximus,
entre otros) que exhiben un patrón inverso entre el índice gonadosomático (IGS) y el índice
de rendimiento muscular (IRM), atribuido al almacenamiento y movilización de reservas
energéticas entre el músculo aductor y gónada durante la gametogénesis (Robinson et al.,
1981; Barber y Blake, 2006).

En los laboratorios de cultivo de moluscos se emplean generalmente microalgas como

alimento vivo, el cual incluyen diversas especies entre las que destacan los flagelados
Isochrysis spp. y Pavlova spp., así como las diatomeas del género Chaetoceros (Helm,

54
2006). Estas cepas son relevantes para las larvas por su tamaño pequeño, que facilita la
ingestión y digestión (Martínez-Fernández y Southgate, 2007), y por sus perfiles
nutricionales balanceados (Brown et al., 1989), particularmente de ácidos grasos altamente
insaturados (Ehteshami et al., 2011). Combinaciones de algunas de estas microalgas han
dado resultados positivos en el cultivo de larvas de P. margaritifera (Martínez-Fernández y
Southgate, 2007), P. maxima (Rose y Baker, 1994) y P. mazatlanica (Saucedo et al., 2007;
Ojeda-Ramírez et al., 2008). De hecho, en P. margaritifera se ha observado una relación
directa entre la concentración de alimento (mezcla de I. galbana y Ch. calcitrans a
concentraciones de 18×103 células. ml-1) y el desarrollo gonádico y diferenciación de células
germinales (Etheshami et al., 2011). En este estudio, las microalgas Isochrysis galbana,
Tetraselmis sp. y Chaetoceros gracilis fueron proporcionadas en una proporción de 1:1:1 a
una concentración de 150 a 180 mil células por ml para satisfacer los requerimientos
nutricionales de las ostras perlíferas Pteria sterna, durante el acondicionamiento gonádico.
Aunque existe a la fecha un cierto grado de conocimiento sobre los requerimientos
nutricionales de ciertas especies de bivalvos de las familias Pectinidae, Ostreidae y Mitylidae
(ver revisión de Knauer y Southgate, 1997 y Brown et al., 1989), para otras especies de la
familia Pteriidae, para P. sterna, se desconocen casi por completo estos requerimientos,
particularmente la ración diaria de alimento requerida para animales mantenidos en
laboratorio.

La utilización de una mezcla combinada de microalgas de I. galbana, Tetraselmis sp. y Ch.

gracilis, durante el acondicionamiento gonádico ha sido una estrategia útil para optimizar el
cultivo de diversas especies de moluscos bivalvos, particularmente con el fin de obtener
mejores resultados en las etapas de acondicionamiento gonádico para maduración de
reproductores en el laboratorio (Knauer y Southgate, 1997; Helm, 2006). Algunos autores
indican que la cantidad y calidad de alimento suministrado juega un papel fundamental en
el incremento en peso y acumulación de reservas energéticas en los gametos para mejorar su
condición fisiológica y asegurar el éxito de las subsiguientes etapas de desarrollo
embrionario y larvario (Langdon y Waldock, 1981; Langdon y Siegfried, 1984; Gallager et
al., 1986).

Con relación al valor nutricional que las microalgas ofrecen depende de la naturaleza y
composición de sus constituyentes bioquímicos (Taylor et al 1997) ya que con su capacidad
fotosintética produce nutrientes que los organismos como bivalvos no pueden sintetizar tal

55
es el caso de los ácidos grasos y las vitaminas (Medina y Cordero 1997), siendo por lo tanto
dicho valor altamente influenciado por la composición de ácidos grasos específicamente los
ácidos grasos insaturados del grupo omega 3 los cuales juegan un papel importante ya que
son esenciales para la nutrición de organismos marinos (Kaplan et al, 1986; Benemann, 1992
Millan, 1997). Considerando que todos los organismos muestreados presentaron desarrollo
de gametos y un nivel de madurez sexual adecuado para la inducción por shock térmico, se
podría considerar que la combinación de diferentes especies de microalgas habría
proporcionado los requerimientos nutritivos requeridos para esta experiencia. Sin embargo,
debido a que solo un tratamiento llego a completar el desove, sería recomendable evaluar
diferentes concentraciones de estas microalgas o la adición de otras que pudieran mejorar la
respuesta al desove de P. sterna en experiencias posteriores.

56
 VI. CONCLUSIONES

 Bajo condiciones experimentales los mejores indicadores de calidad gonádica

durante el acondicionamiento se observaron en las ostras perlíferas del tratamiento
de T2 (28°C) 17,26 ± 0,9 y T3 (30°C) 15,37 ± 2,2 presentando valores altos de
estadios de madurez.

 En cuanto a la madurez sexual de Pteria sterna, durante el acondicionamiento

gonádico los mejores indicadores se registraron en hembras en los tratamientos T1
(26°C), T2 (28°C) y T3 (30°C) donde fue posible observar mayor número de
organismos en estadio de madurez del 25% y en machos el T1 (26°C) presentó
valores altos del 50 %.

 El mayor diámetro promedio de los ovocitos se registró en el tratamiento T2 (28°C)

con un valor de 38,72 ± 3,31 µm de acuerdo con el análisis histológico realizado.

 Bajo las condiciones experimentales, de inducción al desove de la ostra perlífera P.

sterna la temperatura de acondicionamiento de 28°C y de “shock” térmico de 17°C
fue adecuada para inducir la liberación de gametos.

57
 VII. RECOMENDACIONES

 Se recomienda que los organismos recolectados y seleccionados para el

acondicionamiento a la madurez sean aclimatados por un periodo no menor a 4 días
en condiciones naturales cerca del área de estudio, ya que el estrés es uno de los
principales factores que afectan directamente a los organismos al llevarlos a
condiciones controladas.

 Se recomienda el transporte de los organismos por la noche en seco con esponjas

húmedas y humedeciéndolas cada hora durante el trayecto.

 Se recomienda continuar con trabajos acerca de la viabilidad de las larvas

provenientes de organismos acondicionados a la madurez, en cuanto al asentamiento
y supervivencia de las larvas que son las etapas críticas en un laboratorio, para llevar
acabo repoblamiento de la especie en bancos naturales y realizar sistemas de cultivos
y engorde.

 Se recomienda que la temperatura del agua durante el acondicionamiento gonádico

para Pteria sterna no sea mayor a 28 ºC ya que a dicha temperatura se puede obtener
organismos maduros y obtener la liberación de los gametos.

 Se recomienda evaluar un tiempo de acondicionamiento mayor a 29 días en

condiciones de laboratorio para la obtención de un mayor número de organismos en
estadios de madurez.

58
 VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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78 pp.

77
IX. ANEXO

78
9.1. ANEXO 1. Preparación del medio de cultivo f/2 de "Guillard" (modificado por
Martinez, 1998)

REACTIVOS
Macronutrientes Cantidad
Nitrato de sodio 75 g
Fosfato de Sodio monobásico 5g
Disolver los reactivos en agua destilada (solución de trabajo), aforando a 1000 ml. Utilizar 1ml
de la solución de trabajo por litro de agua de mar.

REACTIVOS
Micronutrientes Cantidad
Soluciones "stock" de metales traza:
Sulfato cúprico 0,98 g
Sulfato de Zinc 2,20 g
Cloruro de Cobalto 1,00 g
Cloruro de manganeso 1,80 g
Molibdato de Sodio 0,63 g
* Disolver en 90 ml de agua destilada cada uno de los metales traza por separado.
Cloruro Férrico 3,15 g
EDTA Disódico 4,36 g

Disolver los últimos dos reactivos juntos con 1 ml de cada una de las soluciones "stock" en agua
destilad, aforando a 1000ml (solución de trabajo). Utilizar 1 ml de solución por litro de agua de
mar.
REACTIVOS
Vitaminas Concentración
Hidroxocobalamina 10,000 mcg
Piridoxina 50 mg
Tiamina 100 mg
Para preparar la solución de trabajo, se disuelve 1 Ampolleta de Bedoyecta Tri@ en un litro de
agua destilada. Utilizar 0,5 ml de la solución de trabajo por litro de agua de mar, agregándola al
momento de la siembra.

REACTIVOS
Silicatos Cantidad
Metasilicatos de sodio 30 g

Para preparar la solución de trabajo, disolver en agua destilada, aforando a 1000 ml. Utilizando 1
ml de la solución de trabajo por cada litro de agua de mar. Utilizar solo en el caso del cultivo de
diatomeas.

79
9.2. Anexo 2. Proceso de inclusión en parafina (Humason, 1979; Zúñiga, 1998).

(1) Toma de muestra

Fijación Formol al (10%)
Agua 1 hora
(2) Inclusión en Paraplast.
Deshidratación Tiempo
Alcohol 40% (1) 1 hora
Alcohol 40 % (2) 1 hora
Alcohol 50 % (1) 1 hora
Alcohol 50 % (2) 1 hora
Alcohol 70 % (1) 1 hora
Alcohol 70 % (2) 1 hora
Alcohol 90 % (1) 1 hora
Alcohol 90 % (2) 1 hora
Alcohol 100 % (1) 1 hora
Alcohol 100% (2) 1 hora
Aclaramiento
Xilol 1 1 hora
Xilol 2 1 hora
Inclusión
Parafina 1 hora

80
9.3. Anexo 3. Tinción de Hematoxilina-Eosina (Humason, 1979 en Zuñiga, 1998).

Proceso de Tinsión de gónada de Pteria sterna

Desparafinación Tiempo
Xilol 15 minutos
Hidratación
Alcohol 100% 5 minutos
Alcohol 90 % 5 minutos
Alcohol 80 % 5 minutos
Agua destilada 5 minutos
Tinción
Hematoxilina 1,5 minutos
Agua destilada 5 minutos
Eosina 30 segundo
Deshidratación
Alcohol 80 % (1) 1 minuto
Alcohol 80 % (2) 1 minuto
Alcohol 90 % (1) 1 minuto
Alcohol 90 % (2) 1 minuto
Alcohol 100 % (1) 1 minuto
Alcohol 100 % (2) 1 minuto
Aclaramiento
Xilol 2 minutos

81
9.4. Anexo 4. Registro Fotográfico

Figura 26. Recolección y transporte de reproductores de P. sterna

A B

Figura 27. Aclimatación de reproductores de ostras de P. sterna en ambiente natural, A:

muelle de desembarque de personas, B: zona rocosa Punta Napo (Ecuador).

82
 A B

Figura 28. Aclimatación y limpieza en laboratorio, A: reproductores de ostra P. sterna, B:

limpieza de organismos, C: aclimatación de organismos en tanques de acondicionamiento

83
 9.5. Anexo 5. Estimación del desove mediante el conteo de larvas

Se utilizó el método empleado por Castagna y Kraeuter (1981), el cual consiste en:

Lavar y tamizar los huevos o las larvas (que son recogidos de las cubetas de desove), los
cuales son transferidos a un beaker de 1000 ml.

1. Completar el volumen hasta la marca de nivel con agua de mar filtrada

2. Utilizar una pipeta automática de 0,5 ml y mientras se agita el contenido con un émbolo
perforado tomar tres muestras replicadas desde el beaker. Asegurarse de que los huevos
o larvas se distribuyen de manera uniforme en la columna de agua durante el muestreo
3. Transferir las muestras a una cámara Sedwig rafter para el conteo de individuos
4. Contar los huevos o larvas en cada muestra usando un microscopio binocular
5. Realizar el conteo del número total de huevos o larvas de acuerdo con la siguiente
fórmula:

NHD = 1000 ml/0.5 ml*N

Dónde:

NHD = Número de larvas trocóforas

Volumen de la muestra = 0.5 ml.
Volumen total del Cilindro = 1000 ml.
N = Número de larvas en la sub-muestra (promedio de tres conteos)

84
9.6. Anexo 6. Hoja de registro de datos
Hoja 1

Hoja de Registro de Acondicionamiento Gonádico

Registro diario de (Temperatura)
Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:
Registros diarios de Temperatura de los diferentes tratamientos durante el acondicionamiento,
Grupo control 24°C, Tratamiento 26°C, Tratamiento 28°C y Tratamiento 30°C.

Fecha: Control (24°C) Tratamiento (26 °C) Tratamiento (28 °C) Tratamiento (30 °C)
d.1
d.2
d.3
d.4
d.5
d.6
d.7
d.8
d.9
d.10
d.11
d.12
d.13
d.14
d.15
d.16
d.17
d.18
d.19
d.20
d.21
d.22
d.23
d.24
d.25
d.26
d.27
d.28

85
 Hoja 2

Hoja de Registro de Tratamientos ((control 24°C), 26, 28, 30°C)

Registro Semanal (Ganancia en Peso)
Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:
Registros semanales de la ganancia en Peso durante el periodo de estudio, de
acondicionamiento Gonádico.
N° Longitud Total (mm) Altura (mm) Espesor (mm) Peso Total (g)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

86
 Hoja 3

Hoja de Registro (Índice morfo-fisiológico)

Registro Semanal Grupo ((Control 24 °C) 26, 28, 30°C)
Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:
Datos biométricos semanales de organismos adultos de P. sterna. Longitud o eje
antero-posterior L (mm) Peso del organismo con concha CO. (g) Peso de la masa
visceral MV. (g) Peso del músculo aductor MU. (g) Peso de la gónada GO. (g) Peso
del manto MA. (g)
N° L (mm) CO. (g) MV. (g) MU. (g) GO. (g) MA. (g)
1
2
3
4
5
6
7

87
 Hoja 4

Hoja de Registro de Inducción al Desove

Registro de (Numero de Larvas Trocoforas)
Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:
Datos de números de larvas trocoforas de los diferentes tratamientos de
acondicionamiento ((Control 24°C), 26, 28, 30) (Replicas 1,2,3) Vs Temperatura del
Desove 15°C, 17°C, 21°C
Control Tratamiento Tratamiento Tratamiento
Temperatura 24 °C (26 °C) (28 °C) (30 °C)
Descendente
R: 1 R: 2 R: 3 R: 1 R: 2 R: 3 R: 1 R: 2 R: 3 R: 1 R: 2 R: 3

15°C

17°C

21°C

88
 Hoja 5

Registro Semanal (Diámetro de ovocitos)

Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:

Registro semanal del Diámetro (µm) de los ovocitos de los diferentes

tratamientos durante el acondicionamiento Gonádico.
Control Tratamiento Tratamiento
24°C 26ºC 28ºC Tratamiento 30ºC

Nº Diámetro Diámetro Diámetro Diámetro

(µm) (µm) (µm) (µm)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25

89
 Hoja 6

Registro final de estadios de madurez ((Control 24 °C) 26, 28, 30°C)

Proyecto de ostra perlífera Pteria sterna
Fecha:
Datos de estadios de madurez organismos adultos de Pteria sterna . Desarrollo (DES), maduro
(MAD), deove parcial (DSP), post-desove (PSD).
Semana 4 Control 26°C 28°C 30°C
N°
Organismos DES MAD DSP PSD DES MAD DSP PSD DES MAD DSP PSD DES MAD DSP PSD
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

90