UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y

BIOQUÍMICA

Tesis para optar el Título Profesional de Químico

Farmacéutico y Bioquímico

TESISTAS:

Bach. Ramírez Heredia Rosa Candelaria

Bach. Soto Macetas Rudy Wider

ASESOR:

Dra. Q.F Heddy Teresa Morales Quispe

LIMA- PERÚ
2018

i
“EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL DE LAS
HOJAS DE MOLLE (Schinus molle L.) FRENTE A CEPAS DE
Escherichia coli” IN VITRO

ii
 DEDICATORIA

A mis padres, por ayudarme a seguir adelante, por su comprensión e infinito amor.
A mis hijos, por ser la luz de mi vida, el motivo y motor de esta travesía.
A mis familiares y amigos, por su apoyo incondicional y hacer posible este
momento.

Rosa Ramírez

A Dios, por permitir culminar mi carrera.

A mis padres y familia entera, por ser ejemplo de perseverancia y constancia.
A mi asesora, por su apoyo incondicional en la formación de mi carrera.

Rudy Soto

iii
 AGRADECIMIENTOS

A Dios.

A la Universidad Inca Garcilaso de la Vega, Alma Mater, en cuyas aulas se forman

grandes profesionales para el desarrollo del país.
A la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, donde adquirimos
conocimientos de excelentes docentes para mi desarrollo profesional.

A nuestra asesora Dra. Q.F Heddy Teresa Morales Quispe, por su apoyo,
dedicación, experiencia y capacidad para guiarnos en el desarrollo de esta tesis.

A la Mg. Hilda Moroni, docente del Dpto. de Microbiología de la Facultad de la

Universidad Nacional Mayor de San Marcos, por su orientación desinteresada.

A los docentes de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas de la

Universidad Inca Garcilaso de la Vega, que con sus consejos acertados aportaron
al presente estudio.

Al personal del Laboratorio de la especialidad de Ciencias Farmacéuticas y

Bioquímica, por su disposición y paciencia durante la ejecución del proyecto.

Rosa y Rudy

iv
 INDICE GENERAL

DEDICATORIA........................................................................................................................................... iii
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................................ iv
INDICE GENERAL ...................................................................................................................................... v
ÍNDICE DE TABLAS ................................................................................................................................. vii
ÍNDICE DE FIGURAS .............................................................................................................................. viii
RESUMEN .................................................................................................................................................. xi
ABSTRACT ................................................................................................................................................ xii
INTRODUCCIÓN......................................................................................................................................... 1
CAPÍTULO I ................................................................................................................................................. 3
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ....................................................................................................... 3
1.1 Realidad problemática.......................................................................................................................... 3
1.2. Formulación del problema .................................................................................................................. 4
1.2.1. Problema general ....................................................................................................... 4
1.2.2. Problemas específicos ................................................................................................ 4
1.3. Objetivos de la investigación............................................................................................................... 4
1.3.1. Objetivo general .......................................................................................................... 4
1.3.2. Objetivos específicos .................................................................................................. 4
1.4. Justificación e importancia del estudio ................................................................................................ 5
CAPÍTULO II ............................................................................................................................................... 7
MARCO TEÓRICO ...................................................................................................................................... 7
2.1. Antecedentes de la investigación: ........................................................................................................ 7
2.1.1. Antecedentes nacionales: ........................................................................................... 7
2.1.2. Antecedentes internacionales ................................................................................... 11
2.2. Bases teóricas ................................................................................................................................... 15
2.2.1. Generalidades de molle (Schinus molle L). .............................................................. 15
2.2.2. Aceites Esenciales:................................................................................................... 20
2.2.3. Metabolitos secundarios volátiles reconocidos en el aceite esencial ........................ 29
2.2.4. Métodos de obtención de aceites esenciales ........................................................... 31
2.2.5. Métodos de análisis de calidad de los aceites esenciales ........................................ 36
2.2.6. Actividad antibacteriana in vitro ................................................................................ 38
2.2.7. Generalidades del Ciprofloxacino ............................................................................. 46
2.3. Formulación de hipótesis .................................................................................................................. 50
2.3.1. Hipótesis general: ..................................................................................................... 50
2.3.2. Hipótesis específicas: ............................................................................................... 50
2.4. Variables........................................................................................................................................... 50
2.5. Marco conceptual.............................................................................................................................. 51
2.5.1. Definición de términos básicos ................................................................................. 51
CAPÍTULO III ............................................................................................................................................ 54
METODOLOGÍA ....................................................................................................................................... 54
v
 3.1. Tipo de investigación ........................................................................................................................ 54
3.2. Diseño .............................................................................................................................................. 54
3.3. Población y muestra .......................................................................................................................... 54
3.5 Técnicas e instrumentos de recolección de datos ................................................................................ 56
3.6. Procedimiento experimental .............................................................................................................. 56
3.7 Obtención del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) ...................... 57
3.8. Actividad antibacteriana.................................................................................................................... 60
3.8.1. Obtención del microorganismo ................................................................................. 60
3.8.2. Reactivación de la cepa bacteriana .......................................................................... 60
3.8.3. Preparación del inóculo bacteriano .......................................................................... 60
3.8.4. Preparación de la sustancia vegetal para el estudio ................................................. 60
3.8.5. Preparación de los discos de sensibilidad ................................................................ 61
3.8.6. Sensibilidad antibacteriana por el Método de disco difusión. ................................... 61
3.8.7. Sembrado del inóculo bacteriano ............................................................................. 62
3.8.8. Aplicación de los discos en las placas inoculadas .................................................... 62
3.8.9. Incubación: ............................................................................................................... 63
3.8.10. Lectura del efecto antibacteriano del aceite esencial de las hojas de molle
(Shinus molle L.). ................................................................................................................ 63
PRESENTACIÓN Y ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS........................................................................ 65
4.1. Procesamiento de los datos................................................................................................................ 65
4.2. Análisis Cromatográfico (GC-FID). .................................................................................................. 66
4.2.1. Metabolitos volátiles secundarios del aceite esencial de las hojas de molle (Shinus
molle). ................................................................................................................................. 66
4.2.2 Importancia de los metabolitos volátiles hallados ...................................................... 67
4.3. Actividad antibacteriana del aceite esencial de las hojas de molle ..................................................... 68
4.4. Presentación y análisis de los resultados estadísticos ......................................................................... 70
4.4.1. Datos estadísticos .................................................................................................... 71
4.2 Prueba de Hipótesis ................................................................................................... 76
4.4.3 Análisis por Kruskal-Wallis: comparación de tres o más grupos a las 24, 48 y 72
horas................................................................................................................................... 78
4.4.4 Estadísticos descriptivos del análisis de Kruskal-Wallis a las 24 horas ..................... 79
4.4.5 Prueba de Kruskal-Wallis entre las muestras en estudio ........................................... 82
4.4.6 Grado de sensibilidad según Duraffourd – Lapraz..................................................... 82
4.5 Discusión de resultados ...................................................................................................................... 83
CAPÍTULO V ............................................................................................................................................. 86
5.1. Conclusiones..................................................................................................................................... 86
5.2. Recomendaciones ............................................................................................................................. 87
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................................................... 88
ANEXOS .................................................................................................................................................. 100

vi
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1: Compuestos químicos del aceite esencial de Schinus molle L. (Molle). ___________________ 27
Tabla 2: Operacionalización de las variables. __________________________________________ 51
Tabla 3: Tiempos de retención e identificación de los metabolitos secundarios aislados por GCFID del aceite
esencial de Shinus molle L. (molle) ______________________________________________________ 66
Tabla 4: Resultados de lecturas de los halos de inhibición en mm de los cinco grupos de estudio en diferentes
tiempos.___________________________________________________________________________ 72
Tabla 5:Prueba de Shapiro-Wilk ________________________________________________________ 78
Tabla 6: Análisis de Kruskal-Wallis a las 24 horas __________________________________________ 79
Tabla 7: Análisis de Kruskal-Wallis a las 48 horas __________________________________________ 80
Tabla 8: Análisis de Kruskal-Wallis a las 72 horas __________________________________________ 81
Tabla 9: Efecto antibacteriano del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.), concentración:
100 %, 50 % y al 25 % en cepas de Scherichia coli (ATCC® 25922™), según la según escala de Duraffourd y
Lapraz. ____________________________________________________________________________ 83

vii
 ÍNDICE DE FIGURAS
Figura N° 1: Descripción botánica de Schinus- Molle. (Kasimala, 2010) ......................................19
Figura 2: Estructura química del ácido gálico (A) y (B) elágico. ................................................................24
Figura 3: Estructura de base de datos de taninos condensados ...............................................................24
Figura 4: Estructura del flavonoide .........................................................................................................25
Figura 5: Glucósido de esterol y Sitosterol. ......................................................................................26
Figura 6: Estructura molecular de los componentes volátiles más comunes del aceite esencial de Shinus
molle (molle). .........................................................................................................................................30
Figura 7: Instalación de la destilación hidráulicaInstalación de la destilación hidráulica .........................32
Figura 8: Montaje de la formación de vapor de agua ..............................................................................33
Figura 9: Extracción asistida por microondas. .........................................................................................34
Figura 10: : Técnica de extracción de grasa. ............................................................................................ 34
Figura 11: Los diferentes tipos de extracción de disolventes volátiles ......................................................35
Figura 12: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™),
frente al aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), concentración al 25% con un halo de
inhibición de Medio de 9mm (escala de Duraffourd-Lapraz.....................................................................68
Figura 13: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™),
frente al aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), concentración de 50% con un halo de
inhibición de Medio de 14mm (escala de Duraffourd-Lapra ....................................................................69
Figura 14: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™),
frente al aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), al 100% con un halo de inhibición promedio
de 29mm (escala de Duraffourd-Lapraz). ................................................................................................69
Figura 15: Elaboración propia ............................................................................................................70
Figura 16: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™),
frente al control negativo: agua destilada con un halo de inhibición de 0mm / 6 mm incluyen el disco de
sensibilidad en las mediciones. (Escala de Duraffourd-............................................................................70
Figura 17: Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las 24 horas de
incubación a 37°C. ..................................................................................................................................73
Figura 18: Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las 48 horas de
incubación a 37°C. ..................................................................................................................................74
Figura 19:Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las 72 horas de
incubación a 37°C ...................................................................................................................................75
Figura 20: : Pruebas de normalidad Kolmogorov - Smirnov y Shapiro – wilk de las muestras en estudio
obtenido de SPSS® ..................................................................................................................................77
Figura 21: Kruskal-Wallis de muestras independientes............................................................................82
Figura 22:Árbol, hojas y flores de Schínus molle L. (Molle). .................................................................. 108
Figura N° 23: Figura 23: Metabolitos secundarios, Alcaloides. ......................................................... 110
Figura 24: Metabolitos secundarios, flavonoides. ................................................................................ 110
Figura 25: Ensayo de solubilidad. ......................................................................................................... 111
Figura 26:Sembrado en cromatografía de capa fina. ............................................................................ 111
Figura 27: preparación del solvente, corrida de las muestras ................................................................ 112
Figura 28: manchas de desplazamiento en la luz UV 254 nm. ............................................................... 112
Figura 29: resultados de Cromatografía capa fina ................................................................................ 112
Figura 30: Obtención del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle....................................... 114
Figura 31: equipo de extracción ............................................................................................................ 114
Figura 32: dilución de las concentraciones ............................................................................................ 115
Figura 33:bacteria Escherichia coli ATCC 25922. ................................................................................... 115
Figura 34: Activación de las cepas bacteriana. ...................................................................................... 116
Figura 35:Estandarización del inoculo bacteriano según la escala de 0.5 Mc Farland. ...................... 116
Figura 36: Cepas puras de Escherichia coli ATCC 25922......................................................................... 117
Figura 37: Sembrado del inoculo bacteriano en agar Müeller Hinton: ................................................... 118
Figura 38:Aplicación de los discos de sensibilidad en las placas sembradas........................................... 118
Figura 39:Incubación a 37 °C por un periodo de 24, 48 y 72 horas......................................................... 119
Figura 40:Estufa conteniendo las placas Petri sembradas. .................................................................... 119

viii
Figura 41: Halos de inhibición del aceite esencial al 50 y 100% en cultivos bacteriano de E. coli a las 72 horas
con el control negativo. ........................................................................................................................ 121

ix
 INDICE DE ANEXOS

ANEXO 1 ............................................................................................................................................... 101

ANEXO 2:Constancia emitida por el Herbario San Marcos (USM) .......................................................... 103
ANEXO 3: Certificado de calidad de las Cepas Escherichia Coli. (ATCC 29522) ....................................... 105
ANEXO 4: Certificado de calidad de los medios de cultivo Agar ............................................................. 107
ANEXO 5: Materia Prima ...................................................................................................................... 108
ANEXO 6:Tamizaje fitoquímico del extracto de hojas Shinus molle L. (molle) ........................................ 110
ANEXO 7:Prueba de Solubilidad del extracto de las hojas del “molle” .................................................. 110
ANEXO 8: Cromatografía en capa fina del extracto de la hoja de Shinus molle (molle). ......................... 111
ANEXO 9: Cuantificación de Flavonoides totales por espectrofotometría UV-VIS ................................. 113
ANEXO 10: Preparación de los grupos experimentales .......................................................................... 114
ANEXO 11: Evaluación del Efecto Antibacteriano del Aceite Esencial de Schinus molle L. (molle)........... 115
ANEXO 12:Resultadoen placas de loshalos de inhibicion ....................................................................... 120
ANEXO 13: Resultados de Cromatografía (FID). .................................................................................... 122

x
 RESUMEN

El presente estudio de tipo descriptivo-explicativo, ejecutado mediante un diseño

cuasi experimental, ha sido realizado con el objetivo de evaluar la actividad
antibacteriana in vitro del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.)
como sustancia natural, comparada con el Ciprofloxacino sobre cepas de
Escherichia coli (ATCC® 25922™). El procedimiento experimental in vitro se
efectuó utilizando 25 placas con agar Müller Hilton, para un tamaño muestral de
80 mediciones de halos de inhibición; para la siembra microbiológica se utilizó el
Método difusión en disco, estandarizado por Kirby-Bauer, en cinco grupos de
estudio; se usó el aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) en
diferentes concentraciones al 100%, 50% y 25%, Ciprofloxacino (control positivo) y
agua destilada (control negativo), las cuales fueron evaluadas a las 24, 48 y 72
horas de incubación a 37°C, midiendo los halos de inhibición en mm., y el análisis
cromatográfico (GC-FID) para la identificación de metabolitos secundarios volátiles.
Los datos fueron procesados a través del programa estadístico SPSS®
mediante las pruebas de normalidad Kolmogorov-Smirnov y la prueba no
paramétrica de Kruskal-Wallis, trabajados a un nivel de confianza del 95%. Los
resultados obtenidos del análisis cromatográfico expresan que los cinco elementos
más relevantes que componen la muestra de aceite esencial son: limoneno, α-
pineno, β-pineno, β-mirceno y α-felandreno. Asimismo, la concentración que tuvo
mayor efecto antibacteriano frente a cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™)
fue al 100% , con un halo de inhibición de 29.4 mm, seguida de la concentración
50%, con un halo de inhibición de 14.7mm, según la escala de Duraffourd –
Lapraz, a un valor de significancia (p> 0.05), En conclusión, el aceite esencial de
las hojas de molle (Schinus molle L.) presenta efecto antibacteriano frente a cepas
de Escherichia coli.

Palabras clave: Aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.);
metabolitos segundarios volátiles; efecto antibacteriano; Escherichia coli;
Ciprofloxacino.

xi
 ABSTRACT

The present study of descriptive-explanatory type, executed by means of a quasi-

experimental design, has been carried out with the objective of evaluating the in
vitro antibacterial activity of the essential oil of molle leaves (Schinus molle L.)
natural substance as compared with ciprofloxacin on Escherichia coli (ATCC®
25922™) strains. Materials and Methods: experimental, in vitro study, 25 boxes
Müller Hilton agar for a sample size of 80 measurements of inhibition halos was
used for the seeding to method Disk diffusion, standardized by Kirby-Bauer in five
study groups, the essential oil of the molle leaves (Schinus molle L.) in different
concentration 100% ,50%, and 25% also it was used the ciprofloxacin as a positive
control, distilled water as negative control, behavior that it was evaluated at 24, 48
and 72 hours of exposure incubation 37°C measuring the inhibition halos in mm.
and Chromatographic analysis (GC-FID) for the identification of volatile secondary
metabolites. Data were processed through the SPSS® statistical software using the
Kolmogorov-Smirnov normality tests and Shapiro-Wilk and tests nonparametric
Kruskal-Wallis it was work at a confidence level of 95%. Results: The five most
relevant elements volatile secondary metabolites that make up the sample of
essential oil are: Limonene, α-pinene, β-pinene, β-myrcene, α-phellandrene,
Likewise, The concentration that had the highest antibacterial effect against strains
of Escherichia coli (ATCC® 25922 ™) was 100% with an inhibition halo of 29.4 mm,
followed by 50% concentration with an inhibition halo of 14.7 mm, with values of
significance (p> 0.05). Conclusion: The essential oil of the leaves of molle (Schinus
molle L.) has antibacterial effect against strains of Escherichia coli.

Key words: Essencial oil of molle leaves (Schinus molle L.); volatile secondary
metabolites; antibacterial effect; Escherichia coli; Ciprofloxacin.

xii
 INTRODUCCIÓN

En el mundo entero el uso de plantas medicinales se emplean en diversas

culturas para tratar y prevenir muchas enfermedades que afectan al ser humano.
Nuestro país se caracteriza por la diversificación de estas plantas, las cuales eran
usadas por nuestros ancestros para curar las enfermedades, mediante esencias,
parches de plantas, masajes, entre otros; estos se complementaban con rituales,
ruegos y suplicas sagradas a dioses de la naturaleza. Es el caso de la existencia
del Schinus molle L). Esta planta es reconocida por sus propiedades
antibacterianas, antimicrobianas, cicatrizantes, etc. Es por eso que se tuvo el
interés de conocer sus principios activos y su acción farmacológica (Gonzales,
1998). Es una especie ampliamente distribuida en el Perú que se ha adaptado a
diversas extensiones; contiene propiedades curativas en sus distintas partes, las
cuales se tratan de demostrar en numerosos estudios realizados en diferentes
países. Como un medio efectivo de brindar calidad de vida a los ciudadanos que
sufren ciertas afecciones y/o enfermedades crónicas, se plantea su utilización con
fines medicinales (Arroyo et al., 2007). La creciente demanda en la utilización y
mercadeo de fitofármacos con propiedades curativas o preventivas que ayudan al
organismo a recuperarse de los desequilibrios producidos por las enfermedades o
a protegerse de ellos, han mostrado un aumento en el consumo de la población en
general. (García et al., 2004).

El objetivo de esta investigación fue, justamente, comprobar que el aceite esencial

de las hojas de molle (Schinus molle L.) tiene efecto antibacteriano en cepas de
Escherichia coli, comparado con el Ciprofloxacino, en cultivos bacterianos,
usando el agar Müller Hilton por el método de difusión en disco; pues, se conoce
que un porcentaje de pacientes ya presentaron o están presentando resistencia al
Ciprofloxacino, por ello, el motivo de esta investigación.

La presente tesis que expone el planteamiento, marco teórico, proceso

metodológico, resultados, conclusiones y recomendaciones del estudio se integran
en seis capítulos, a saber:

1
El primer capítulo aborda el problema de la investigación, los objetivos, la
justificación e importancia del estudio.
El segundo capítulo desarrolla el marco teórico, teniendo en consideración los
antecedentes, las bases teóricas, la formulación de las hipótesis, las variables, así
como el marco conceptual.
El capítulo tercero se refiere a la metodología que comprende el tipo, diseño, la
formulación de las hipótesis, las técnicas e instrumentos de recolección de datos, y
el procedimiento experimental asumido.
El cuarto capítulo aborda la presentación y el análisis de los resultados.
El quinto capítulo expone las conclusiones y recomendaciones.
El capítulo sexto presenta las referencias bibliográficas consultadas.
Finalmente, la tesis que presentamos a la comunidad académica y al público, en
general, dada la alta significatividad del tema estudiado en campo de la salud,
consideramos que será un gran aporte para el tratamiento alternativo de las
enfermedades infecciosas, promoviendo así la calidad de vida de las poblaciones.

2
 CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1 Realidad problemática
El uso de plantas medicinales, estuvo presente en diferentes culturas y en
nuestros antepasados los cuales fueron transmitidos de generación en
generación. Demostrar mediante estudios in vitro su eficiencia y eficacia nos
proporciona el soporte necesario para confiar en su eficiencia y eficacia para el
uso terapéutico. (Abad M.J., 2007).

La OMS define a Escherichia coli como una bacteria que normalmente se

encuentra alojada en el intestino de los seres humanos y animales. En su
mayoría la cepa Escherichia coli no generan enfermedad. No obstante, existen
algunas que sí desarrollan en enfermedades graves, para contrarrestar estas
patologías, se han efectuado avances científicos en las últimas décadas, con el
propósito de buscar nuevas drogas para esta bacteria que muchas veces
presenta mutaciones como medida de defensa, aumentando progresivamente
las infecciones producidas por enterobacterias (OMS., 2002-2005).

Demostrar el efecto antibacteriano del aceite de Schinus molle L sobre las

cepas de Escherichia coli, tendría gran relevancia en la industria farmacéutica y
un menor costo en la producción, aumentando las posibilidades de su uso como
un producto natural antibacteriano, evitando así los efectos secundarios que
producen sus pares sintéticos. (Morales R.,2010). En nuestro país y a nivel
internacional se han desarrollado estudios usando plantas medicinales como una
buena alternativa de tratamiento frente a la invasión de microorganismos que
puedan poner en riesgo nuestra salud.

3
En el presente trabajo se pretende rescatar el empleo del Schinus molle L. como
tratamiento alternativo antibacteriano que nos ofrece esta planta milenaria. (1)

1.2. Formulación del problema

1.2.1. Problema general

¿El aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) presenta efecto
antibacteriano en cepas de Escherichia coli in vitro?

1.2.2. Problemas específicos

 ¿Qué tipos de metabolitos secundarios presentan en mayor proporción
el aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) que posea
actividad antibacteriana en cepas de Escherichia coli in vitro?
 ¿En qué nivel de concentración el aceite esencial de las hojas de molle
(Schinus molle L.) posee actividad antibacteriana en cepas de
Escherichia coli in vitro?
 ¿Cuál será la actividad antibacteriana del aceite esencial de las hojas
de molle (Schinus molle L.) comparado con ciprofloxacino en cepas
de Escherichia coli in vitro?

1.3. Objetivos de la investigación

1.3.1. Objetivo general
Comprobar que el aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle
L.) tiene efecto antibacteriano en cepas de Escherichia coli in vitro.

1.3.2. Objetivos específicos

 Identificar qué tipos de metabolitos secundarios presentan en mayor
proporción el aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.)
que posee actividad antibacteriana en cepas de Escherichia coli in vitro.
 Precisar la concentración del aceite esencial de las hojas de molle
(Schinus molle L.) con actividad antibacteriana en cepas Escherichia coli
in vitro.
 Comparar la actividad antibacteriana del aceite esencial de las hojas de
4
 molle (Schinus molle L.) con Ciprofloxacino en cepas de Escherichia coli
in vitro.

1.4. Justificación e importancia del estudio

En la actualidad la utilización empírica de las plantas medicinales han sido
reconocidas en nuestro país, como en múltiples culturas del mundo, y
transmitidas a través de generaciones. Sin embargo, la alta demanda y la
creciente desconfianza hacia sus pares sintéticos, nos obliga a proponer el uso
de sustancias accesibles naturales para aliviar nuestras molestias. ( Lock
O.,1994)
Las infecciones producidas por la presencia de bacterias, principalmente por
Escherichia coli, entre otras, considerándose como un problema de salud,
afectando a la población en general, con una prevalencia en las mujeres debido
a la anatomía, de que la uretra es corta y la cercanía de la vagina con el ano,
favoreciendo muchas veces la contaminación.
El aceite de las hojas de molle (Schinus molle L.) se puede utilizar como
tratamiento antibacteriano alternativo, evitando así crear resistencia
antibacteriana y efectos secundarios en los pacientes, además, poder difundir el
uso de dicha sustancia, permitiendo el crecimiento de la industria de productos
naturales.
La investigación es importante porque ya algunos pacientes hicieron resistencia
al antibiótico Ciprofloxacino, el cual si el aceite esencial de las hojas de molle
(Schinus molle L.) presenta efecto antibacteriano, sería una buena alternativa
para tratar enfermedades causadas por esta bacteria; también, porque nuestro
sistema de salud no cuenta con la cantidad de medicamentos para la población,
y estos no llegan a todos los rincones del país, además, debemos estar a la
búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas y porque los beneficiarios de esta
investigación será la población de escasos recursos económicos de la ciudad de
lima y del interior del país (Jiménez M., 2000).
Se cuenta con la especie biológica de estudio y, además, la Universidad cuenta
con todos los materiales reactivos y equipos para el desarrollo este proyecto,

5
asimismo, el costo de investigación no es muy elevado, lo cual permitió terminar
con éxito la parte experimental.

6
 CAPÍTULO II

MARCO TEÓRICO

2.1. Antecedentes de la investigación:

2.1.1. Antecedentes nacionales:

Clemente Cl. (2017), desarrolló una investigación in vitro sobre la

actividad antimicrobiana del extracto etanólico de las hojas de Schinus molle l.
“molle”, con el frente a cultivos de “Streptoccocus mutans “ATCC 25175”. Las
soluciones empleadas en parte experimental, fue la obtención del extracto
etanólico a concentraciones de 500 y 1000 mg/mL, el gluconato de
clorhexidina 0,12 % como control positivo y agua destilada como control
negativo. Se realizó el estudio de la actividad antimicrobiana con el método
de difusión en disco utilizando la técnica de siembra en superficie, con las
soluciones experimentales en condiciones de anaerobiosis por 48 y 72 horas
a 37°C, para luego proceder a la lectura de diámetros de halo de inhibición
con un vernier. Mediante el análisis cualitativo se determinó la presencia de
metabolitos: flavonoides, alcaloides, carbohidrato, esteroides y/o triterpenos,
azúcares reductores y compuestos fenólicos. Los resultados se analizaron
mediante el porcentaje de inhibición del crecimiento. El extracto etanólico a
concentraciones de 500 y 1000mg/mL, demostró tener actividad
antimicrobiana sobre Streptoccocus mutans“ATCC 25175” y de la
comparación realizada, el gluconato de clorhexidina produjo mayor inhibición.
En conclusión, el extracto etanólico de Schinus molle L. “Molle” presenta
actividad antimicrobiana sobre Streptoccocus mutans “ATCC 25175” y el
gluconato de clorhexidina es cualitativamente similar al extracto etanólico. (9).

Trejo C. (2015), el estudio in vivo tuvo como objetivo determinar el

efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de las hojas de Schinus molle
L. "molle", en cobayos. En la parte del análisis de su composición química
encontró metabolitos secundarios como los compuestos fenólicos y/o
taninos, flavonoides, triterpenos y esteroides, catequinas, resinas,

7
saponinas, azúcares reductores y cumarinas. Para ello, se usó 25 cobayos
de 500 y 600 g de peso distribuidos aleatoriamente en cinco tratamientos:
agua destilada (blanco), Loperamida (estándar), extracto hidroalcohólico de
las hojas de Schinus molle L. "molle" a 100, 200 y 300 mg/kg de peso. Los
resultados muestran que el extracto hidroalcohólico de las hojas de Schinus
molle L. "molle" a 100 mg/Kg de 39,1 %, a 200 mg/Kg de 34,8%, a 300 mg/Kg
de 92.7%, teniendo similar efecto antidiarreico el de 300 mg/Kg frente al
estándar Loperamida 2 mg/Kg que representa el 100% del efecto
antidiarreico. Se concluye que el extracto hidroalcohólico de las hojas de
Schinus molle a dosis de 300 mg/Kg de peso, tiene mayor efecto
antidiarreico estadísticamente similar a la Loperamida. (13)

Herrera Ascoy N. (2013), en este estudio evaluó el efecto del

extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle l. “molle” sobre la
viabilidad de streptococcus β-hemolítico, la recolección del material en
estudios se procedió de acuerdo a las normas y referencias establecidas. En
la parte experimental trabajó con cuatro concentraciones distintas (250, 500,
750 y 1000 mg/mL) de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
y el producto sintético: Penicilina como control de inhibición. Para evaluar el
efecto del extracto sobre el microorganismo utilizó el método de Kirby Bauer
modificado, sembrándose un inóculo estandarizado con el patrón de
turbiedad de 0.5 del Nefelómetro de Mc Farland en placas con Agar Müller
Hinton por la técnica de siembra en superficie. Los resultados fueron
expresados en diámetro (mm) de los halos de inhibición del crecimiento de
Streptococcus β-hemolítico, encontrándose que las concentraciones
empleadas afectan la viabilidad “in vitro” de este microorganismo. Concluye
concluye que a medida que aumentan las concentraciones de extracto
hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle” en el rango de 250 a
1000 mg/mL aumenta el diámetro del halo de inhibición del crecimiento de
Streptococcus β-hemolítico. (12).

8
 Llanos Arapa S. (2012), dicho estudio estuvo orientado en la
Extracción y caracterización del aceite esencial del fruto del molle (Schinus
molle l.), recolectadas en la Región Tacna, así como a la caracterización
físico-química e identificación de los componentes principales de dicho
aceite de Schinus molle l; probándose también su actividad antimicótica ante
Penicillium italicum. Se utilizaron materiales cumpliendo con los parámetros
establecidos por la Norma Técnica Peruana NTP-ITINTEC, cromatografía de
gases con detector de ionización de llama (FID), aceite esencial por el
método de destilación por arrastre de vapor de agua, además, se determinó
el contenido de humedad (18,158%), cenizas (3,785%) y proteínas (5,280%)
para los frutos de Los Palos (provincia de Ayacucho); y el contenido de
humedad (21,875%), cenizas (3,353%) y proteínas (5,560%) para los de
Tarata. El aceite esencial su rendimiento para el lote N° 01 (Los Palos) fue
6,575% (v/p), y para el lote N° 02 (Tarata) fue 7,705% (v/p). Las
características físico-químicas del aceite esencial lote Nº 01 (Los Palos)
fueron: índice de refracción (1,478), densidad (0,846 g/cm3), densidad
relativa (0,847), punto de congelación (-35ºC), índice de acidez (6,023 mg
KOH/g) e índice de éster (17,008); y para el aceite esencial lote Nº 02
(Tarata): índice de refracción (1,477), densidad (0,831 g/cm3), densidad
relativa (0,832), punto de congelación (-35ºC), índice de acidez (12,718 mg
KOH/g) e índice de éster (23,148). Ambos aceites se analizaron por
cromatografía de gases con detector FID, se identificaron los monoterpenos:
limoneno, α-pineno, β-pineno, β-mirceno, y α-felandreno. Se concluye: Hay
diferencias significativas de las 2 muestras recolectadas en diferentes
lugares, los aceites esenciales de molle inhibieron el desarrollo del hongo
Penicillium italicum. (3)

Annacone J. (2010), realizó un estudio donde evalúa el efecto

ecotoxicológico del extracto acuoso del Schinus molle l. (anacardiaceae) a
cuatro controladores biológicos de plagas agrícolas en el Perú. Estos
organismos son: Ceraeochrysa cincta (Schneider) (Neuroptera:
Chrysopidae), Chrysoperla asoralis (Bank) (Neuroptera: Chrysopidae)

9
Telenomus insidiosus Say (Anthocoridae: Hemiptera) en huevos, larva y
adultos, bajo condiciones de laboratorio. Para ello se empleó cinco
concentraciones acuosas de hojas de S. molle (p/v): 1.5%, 2.5%, 5%, 10% y
20%. Los parámetros de toxicidad aguda empleados fueron la concentración
letal (CL50) y la efectiva media (CE50). Los organismos se desarrollaron en
condiciones de laboratorio, se siguieron protocolos establecidos bajo normas
internacionales para el cuidado del medio ambiente y ecosistema. Se tuvo
un cuidado especial en analizar la posibilidad de riesgo ecológico del empleo
de este insecticida botánico en el agro ecosistema peruano. Los resultados
obtenidos confirman que los organismos toleran ciertas concentraciones, el
efecto de toxicidad en menor tiempo y frecuencia es la 10% y 20% para todas
las especies de plaga agrícola usadas en el experimento. Se concluye que
la toxicidad del extracto del Schinus molle l. al 10 y 20% pueden ser usados
como control biológico natural frente a plagas agrícolas. (2).

Alba G. et al. (2009), en el presente trabajo evalúan la actividad

cicatrizante de una pomada con aceite esencial de Schinus molle L. (Molle),
en diferentes concentraciones en ganado vacuno con heridas infectadas y
en ratones albinos. Para ello, stilizaron 40 ratones albinos, distribuidos al
azar en 5 grupos; a los que se les depiló el lomo con un depilatorio comercial,
después de un reposo de 24 horas, realizaron dos incisiones sobre el lomo.
Inicialmente, se les colocó tópicamente la base de la pomada a un grupo de
vacuno dos veces por día por siete días, construida en 100% por vaselina,
constituyéndose en el grupo control. Por otro lado, a otros tres grupos se les
aplicó la pomada con tres niveles de concentración (1,75; 2.0 y 3,75%,
respectivamente); mientras que a un cuarto grupo (+) se le colocó el producto
comercial, siendo este último el grupo de referencia farmacológico,
posteriormente se sacrificaron por dislocación cervical, evaluándose las
lesiones, procediendo medir la fuerza o tensión en gramos abriendo la herida
cicatrizada, para esto se usó el dinamómetro; en la otra incisión se les retiró
conservándola en formol al 10% para un respectivo análisis histopatológico.
Al analizar los resultados obtenidos, se logró observar que el producto

10
natural del Schinus molle L contenía propiedades cicatrizantes en heridas
infectadas en ganado vacuno se sanaron en una buena manera; del mismo
modo, los experimentos realizados en ratones de cepa Balb C 53,
confirmaron la experiencia antes mencionada, siendo la concentración al 2%
la que presentó mayor poder cicatrizante. (4).

Méndez K. (2004), el presente trabajo de investigación tuvo como

objeto comparar la efectividad antibacteriana del aceite esencial del Schinus
Molle L frente al paramonoclorofenol alcanforado en cepas de Estreptococos
oralis, para ello usaron cepas estándar y el producto natural del aceite
esencial del Schinus Molle, se reactivaron los Enterococcus faecalis (ATCC
29212) y luego fueron sembrados en placas petri que contenían el medio de
cultivo Mueller Hinton con pozos de 6 mm. de diámetro donde se vertieron
aproximadamente 20 ul. del aceite esencia), paramonoclorofenol
alcanforado, gluconato de clorhexidina al 2% y agua destilada. Las placas se
incubaron a 37°C incluyéndose dos placas controles para comprobar la
viabilidad de las bacterias y la esterilidad del medio, después de las cuales
se realizó la medición de los halos de inhibición con un calibrador vernier o
regla pie de rey a las 24 y 72 horas. Los resultados obtenidos fueron: el
gluconato de clorhexidina al 2% posee significativamente mayor efecto
inhibidor que el aceite esencial de Schinus Molle L frente al
paramonoclorofenol alcanforado en cepas de Estreptococos oralis
CCUG27680, Enterococcus faecalis OMGS3372 y Fusobacterium sp,
mediante la prueba de difusión en agar por discos. El aceite esencial del
Schinus Molle Linneo presentó un mayor efecto antimicrobiano frente al
Streptoccocus oralis comparado con el paramonoclorofenol alcanforado,
asimismo, el efecto fue similar frente al E. faecalis y Fusobacterium sp.

2.1.2. Antecedentes internacionales

Rivadeneira-Cajas D. et al. (2015), el presente estudio in vitro tuvo
como objeto evaluar el potencial antimicrobiano del aceite esencial de
Schinus molle l. (molle) sobre Streptococcus mutans. Para dicho estudio se

11
usó el aceite esencial del molle como sustancia natural comparada con el
gluconato de clorhexidina al 0,12% sobre cepas de Streptococcus mutans
(S. mutans) (ATCC 25175). se utilizaron placas Petri con Agar sangre para
la siembra con el método de difusión en disco por cada concentración del
aceite esencial de S. molle al 100 y 50%, simultáneamente, se logró usar el
hidrolato o residuo de vapor de condensación del aceite, gluconato de
clorhexidina (control positivo), agua destilada (control negativo), lográndose
comparar el gluconato de clorhexidina al 0,12% con el efecto antimicrobiano
de las sustancias naturales, cuyo comportamiento se evaluaron a 24 y 72
horas de exposición. Al analizar las concentraciones, así como el residuo del
aceite de S. molle, provocaron efecto antimicrobiano frente a la cepa de S.
mutans (ATCC 25175), con valores de significancia (p>0,05) y de la
comparación, el gluconato de clorhexidina al 0,12% produjo mayor inhibición,
pero disminuyó parcialmente su efecto a las 72 h, mientras que las
concentraciones al 100 y 50% potencializaron su efecto en un 0,8% a las 72
h. Se concluye que, si existió un potencial efecto antimicrobiano del aceite
esencial de S. molle sobre la cepa bacteriana y en cuanto al gluconato de
clorhexidina, fue cualitativamente similar al aceite. (7).

Cruz-Carrillo A. et al (2010), realizó un estudio para evaluación in

vitro para analizar el efecto antibacteriano de los extractos de cuatro
especies vegetales: Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle Y
Silybum marianum”. El ensayo experimental, se realizó en dos etapas, una
relacionada con la preparación de esencias vegetales en el Laboratorio de
Control Biológico, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad
Pedagógica y Tecnológica de Colombia; mientras que la otra consistió en
relacionar con la aplicación de pruebas microbiológicas, realizadas en el
laboratorio de microbiología de la misma universidad. La preparación de
extractos etanólicos partiendo de las hojas secas de Bidens pilosa, Lantana
camara, Schinus molle y Silybum marianum, siendo sometidos a un análisis
microbiológico in vitro para analizar la actividad antibacteriana, sus
concentraciones mínimas inhibitoria y bactericida con respuesta al

12
Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa. La
preparación de cinco cajas de Petri con agar Muller-Hinton y con cinco hoyos
con un diámetro de 11mm, cuatro para los extractos y una para control
negativo. Añadiéndose en las perforaciones alícuotas de 0,2mL de las
diluciones madre de los extractos, evaluándose para cada caja una
concentración diferente, para cada uno de los extractos. Luego, se
compararon con un fármaco estándar llamado cloranfenicol o gentamicina.
El análisis de los resultados mostraron que los extractos tenían actividad
contra S. aureus; siendo las que mejor exhibieron actividad fue B. pilosa y L.
camara, S. molle y S. marianum mostrándose una capacidad moderada para
inhibir el crecimiento de S. aureus. Por lo tanto, se demuestró que las plantas
seleccionadas tienen actividad antibacteriana frente a S. aureus. (8).

Baroni, E. et al (2010), realizaron un estudio con el objetivo de

evaluar in vitro el efecto del suero bovino y la concentración bacteriana en la
actividad de ciprofloxacina sobre una cepa de Escherichia coli (ATCC
25922); para ello, usaron como referencia (CMI) las concentraciones
inhibitorias mínimas en caldo Mueller Hinton y en presencia de suero bovino
fueron de 0,0188 y 0,0047 μg/ml respectivamente, mientras que el valor de
la concentración preventiva de mutantes estimada en agar Mueller Hinton
fue de 0,60 μg/ml. Los ensayos de curvas de muerte bacteriana preparados
en caldo Mueller Hinton, mostraron que ninguna concentración llegaron una
eficacia del 99,9% (efecto bactericida) una vez finalizado el respectivo
ensayo. Por otro lado, se logró analizar que la actividad bactericida se
acrecentó bajo la presencia de suero bovino en forma directa al ir
aumentando las concentraciones, con una eficacia del 99,9% (efecto
bactericida) y (efecto de erradicación bacteriana). En el ensayo de curva
muerte construida en caldo Mueller Hinton, en presencia de una alta
concentración bacteriana, se observó que ninguna concentración redujo el
número de bacterias viables compatible a un efecto bactericida. Los
resultados mostraron que la eficacia del ciprofloxacino en la cepa de
Escherichia coli fue restringida por la carga bacteriana y los factores de

13
respuesta inmune presentes en el suero. En base a lo desarrollado, se
concluye que el tamaño del inóculo y el efecto del suero juega un papel
importante en la actividad antibacteriana de la ciprofloxacina sobre
Escherichia coli. (11).

Vázquez-Gonzales J. (2011), el objetivo de su estudio fue establecer

el efecto antimicótico in vitro del aceite de molle (Schinus molle) sobre
Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Para ello, realizó las pruebas en
el laboratorio de la Escuela Académica Profesional de Medicina Veterinaria,
durante el intervalo de tiempo de marzo a agosto del año 2011. En ese lugar,
hizo ensayos utilizando 24 placas petri para sembrarse la cepa liofilizada de
Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 en Agar Mycosel. Dividió las
placas en cuatro cuadrantes y colocó discos de sensibilidad empapados de
aceite de molle con concentraciones de 2%, 4%, 6%, 8%, 10% y 12%; usó
aceite mineral de control. Los halos de inhibición los midió con un vernier,
observándose que existe inhibición de crecimiento en todas las
concentraciones en promedios de 0,61 mm, 0,81 mm, 0,83 mm, 0,88 mm,
0,90 mm y 1,23 mm. Se concluye que el aceite esencial de Schinus molle
Linneo en las diferentes concentraciones antes mencionadas, permiten
controlar el crecimiento de Trichophyton mentagrophytes, siendo un método
ecológico y económico para combatir este hongo. Por lo tanto, el aceite de
molle logra inhibir el aumento en diversas bacterias y en algunos hongos por
su contenido de terpenos, alfa-pineno, beta-pineno, sesquiterpenos,
monoterpenos y taninos. (9).

Diaz C. et al. (2008), realizaron un estudio en la Universidad de Costa

Rica, con el objeto de demostrar la composición química del aceite esencial
de Schinus molle y su actividad citotóxica en líneas celulares tumorales. Se
caracterizó en términos de su composición química, actividad antioxidante,
capacidad de inducir citotoxicidad y el mecanismo de muerte celular
involucrado en el proceso. Como resultado, identificaron 42 constituyentes,
que representan el 97.2% del petróleo total. Los principales constituyentes

14
 del aceite fueron beta-pineno y alfa-pineno. La actividad antioxidante mostró
un IC (50) de 36.3 microg mL. El aceite esencial era citotóxico en varias
líneas celulares, demostrando que es más efectivo en carcinoma de mama
y líneas celulares leucémicas. El LD (50) para la citotoxicidad a las 48 h en
K562 correspondió a 78.7 microg mL, que era muy similar al LD (50) obtenido
cuando se midió la apoptosis. El aceite esencial no indujo una necrosis
significativa de hasta 200 microg mL, que junto con los resultados anteriores
indican que la apoptosis es el principal mecanismo de toxicidad inducido por
el aceite esencial de S. molle en esta línea celular. Estos resultados permiten
concluir que el aceite esencial probado fue débil antioxidante e indujo
citotoxicidad en diferentes tipos de células por un mecanismo relacionado
con la apoptosis. (15).

2.2. Bases teóricas

2.2.1. Generalidades de molle (Schinus molle L).
El “molle” ha sido considerado como un árbol originario del Perú y
extendido a toda el área andina durante el período pre-hispánico (Ecuador a
Chile y Bolivia).
En los Andes peruanos, donde fue nombrado “Molle”' (pronunciado
"moye"), se utiliza como combustible, como una barrera en los campos y
pastos, se planta a lo largo de muros de piedra seca para apoyarlos.
Después de la Conquista, fue llevado por los españoles a
Centroamérica y a México, donde recibió, por eso, el nombre de "Perú" o de
"Árbol del Perú". Posteriormente, a fines del siglo XVIII, se introdujo en
California, a partir de la Misión de San Luis Rey en San Diego. Parece que,
simultáneamente, llegó a Europa, ya que varios botánicos de ese siglo lo
mencionan en España. En la actualidad, existe en todo el trópico y su uso es
mencionado en el Mediterráneo, en África y en la India (Orozco, 2013).

[Link]. Descripción y Etiología

Se ha mencionado que Schinus corresponde al nombre del género de
la planta, el cual es de origen griego para designar al lentisco, un árbol

15
 parecido al Schinus molle (Molle), (falsa pimienta) es una especie de planta
perteneciente a la familia de la Anacardiaceae (subfamilia de los
Anacardioides), debido a que provoca una resina olorosa con características
muy parecidas a la del lentisco. El término “Molle” se refiere a un nombre
genérico para esta planta, el cual fue usado antiguamente por el científico
francés Tournefort, primer botánico quien estableció el género de las plantas.
Por otro lado, Cárdenas (1989), señala que el término deriva del nombre
quechua mullí, y no como es referido en el latín molle que significa “flojo”.

Los nombres más comunes del Schinus molle podemos encontrar a

los siguientes términos: pirul, pirú, árbol del Perú; molle, cuyash, huaribay;
aymara, muelle, falso pimiento, pimiento, mullí, aguaribay, árbol de la
pimienta, Gualeguay, pimentero” (Orozco, 2013, p. 27).

Esta planta produce una resina olorosa muy similar a la del lentisco.
“Molle fue un antiguo nombre genérico para esta planta, utilizado por el
científico francés Tournefort quien fue el primer botánico en dar a conocer el
género de las plantas, además deriva del nombre quechua mullí, no del
latín molle “flojo” (Cárdenas, 1989).
Entre los nombres más comunes del Schinus molle encontramos: pirul, pirú,
árbol del Perú; molle, cuyash, huaribay; aymara, muelle, falso pimiento,
pimiento, mullí, aguaribay, árbol de la pimienta, Gualeguay, pimentero”
(Orozco, 2013, p. 27).

[Link]. Distribución y habitad

Se encuentra en el Andino de los desiertos del Perú, sino también en
el centro de Chile y la Argentina.
Se distribuye naturalmente desde los 10°S en Perú hasta los 34°S en
argentina El Schinus molle L. es propio de las regiones cálidas y secas de
Sudamérica.
(Salazar Rodolfo, 2001), comenta que el Schinus molle se aloja en las
vertientes occidentales de los andes peruanos, laderas occidentales de la

16
región interandina, en la costa y en los valles. Ahora bien, Alba, Bonilla, &
Arroyo (2009) afirman que su límite superior de distribución es alrededor de
3500 msnm, en el centro y sur del Perú. Su distribución altitudinal varía de 0
a 3800 msnm, con precipitaciones anuales de 300 a 2000 mm y temperaturas
de 18 a 34°C. Tiene gran capacidad de rebrote. Progresa en terrenos secos y
rocosos gracias a sus raíces bien desarrolladas, las que puede llegar hasta
20 a 30 m de profundidad para buscar agua, requiriendo un tipo de suelo
levemente alcalinos con preferencia hacia la neutralidad, siendo exigente con
respecto a la luz, no muy resistente al frío, resistente a las termitas y que
pueda soportar sequías. (Salazar, 2001).

[Link]. Clasificación Taxonomía

Kasimala (2010) presenta en su estudio la siguiente clasificación taxonómica:
 DIVISIÓN: Spermaphytes
 SUB DIVISIÓN: angiospermas
 CLASE: dicotiledóneas
 SUB CLASE: Rosidae
 ORDEN: Spindales
 FAMILIA: Anacardiaceae o Terebinthaceae
 GÉNERO: Schinus
 ESPECIE: Schinus molle L.

[Link]. Descripción Botánico

El molle (Schinus Molle L.) tiene un olor persistente de hojas de roble,
que explica su pertenencia a la familia de la Anacardiaceae (Anacardiaceae
o Terebinthaceae). (Kasimala, 2010)
Etiología: La palabra molle proviene posiblemente de la palabra quechua
"mulli", aunque hay otra opción que refiere que es de origen Quiché, en donde
“MO" significa cierta clase de mosquito y "LE", hoja. Es decir, hojas de
mosquito.

17
Forma: Es un árbol perennifolio, de 4 a 8 metros de altura en algunos lugares
propicios pueden llegar a medir hasta 15 metros de altura, tiene un diámetro
a la altura de pecho de 25 a 35 cm.
Copa/hojas: copa redondeada y abierta, proporcionando sombra moderada.
Hojas compuestas, alternas, de sombra, de 15 a 41 folios alternos, con
nervadura central bien marcada y prominente en ambas caras, generalmente
apareados, de 0.85 a 5 cm de largo, estrechamente lanceoladas, de color
verde amarillento.
Ramas/Tronco/tallo: tronco nudoso, ramas flexibles, colgantes y abiertas. El
tallo es grueso, tortuoso, con frecuentes excreciones corticales y resina
blanquecina. La corteza es gruesa, fisurada, color marrón oscuro, madera
dura y compacta.
Flores: panículas axilares en las hojas terminales, de 10 a 15 cm, flores muy
pequeñas y numerosas, de color amarillento, miden 6mm transversalmente.
las flores masculinas o estaminadas constan de cáliz y corola de 5 piezas, 10
estambres desiguales insertados sobre un disco, de los cuales 5 alternan en
los pétalos, tienen un ovario globoso súpero, uniovular, 3 carpelos y 5 lóculos
conteniendo una semilla por lóculo, terminan en 3 pistilos y estigmas en forma
de cabezuela, tienen 8-10 estaminodios pequeños.
Frutos: drupas en racimos colgantes, cada fruto de 5 a 9 mm de diámetro,
con epicarpio rosado o rojizo brillante, con exocarpo coriáceo, seco en la
madurez, el mesocarpo forma parte de la dispersión. Tiene sabor ardiente y
picante. Inmaduro es carnoso y de color verde.
Semillas: negras lisas y opacas, conteniendo el embrión en dos cotiledones.
Raíz: sistema radical extendido y superficial.

Sexualidad: dioica.
Numero de cromosomas: 2n=28

18
 Rama Hojas Semillas Frutos

Figura N° 1: Descripción botánica de Schinus- Molle. (Kasimala, 2010)

[Link]. Usos del molle (Schinus molle L.)

Se le ha atribuido el poder antiséptico, antiespasmódico y sedante,
estimula la secreción gástrica por lo que son digestivos, además de
estimulación uterina, antiinflamatorio en casos de cervicitis y vaginitis.
(González, 2009).
Las medicinas tradicionales practicadas en ambos lados del mar Mediterráneo
utilizan los aceites esenciales de Schinus molle (Molle) como analgésicos,
antiinflamatorios, antitumorales, antibacterianos e insecticidas. Los estudios
experimentales sobre Schinus molle L. (Molle) han revelado diferentes
actividades biológicas y farmacológicas de Schinus molle L. (Molle) que
demuestran que esta planta es hipotensora, antitumoral, antibacteriano,
antihongos, antiinflamatorias, analgésico y antidepresivo, pero ningún estudio
se ha realizado contra los agentes patógenos de las plantas. Los extractos de
las hojas de mostraron un alto nivel de efecto anti microbiana contra la
Agrobacterium tumefaciens y el Bacillus subtilis. Este extracto también se
utiliza para tratar la ceguera y el reumatismo. Otros efectos medicinales del
aceite de corteza se conocen para tratar las úlceras, uretritis, verrugas,
heridas y enfermedades venéreas. (Ayala, Nielsen & Bravo, 1980). El “molle”
a la vez se emplea en las llamadas “limpias” o “barridos”, para curar el mal de
aire, susto y espanto en algunas culturas (CONAFOR, 2012).
En la industria textil las hojas, ramas, corteza y raíz se han empleado para el
teñido amarillo pálido de tejidos de lana. Por otro lado, se considera que las
19
semillas contienen aceites de los cuales se obtiene un fijador que se emplea
en la elaboración de perfumes, lociones, talcos y desodorantes. Su ceniza rica
en potasa se ha usado como blanqueador de ropa. Además, en la industria
maderera esta especie se ha utilizado para fabricar implementos de trabajo,
tales como mangos de herramientas, estacas, enseres rurales y fustes de
sillas de montar. Además, la resina se ha empleado en la fabricación de
barnices (Batis, 1999).

2.2.2. Aceites Esenciales:

 Características
Los aceites esenciales son compuestos vegetales que debido a su
consistencia son muy volátiles y de olor intenso. Se incluyen dentro de este
grupo solamente aquellas especies de plantas medicinales que las contienen
en concentraciones elevadas, entre 0,1 y 10 %.
Después de haber triturado un pétalo de flor, una ramita o cualquier parte de
una planta, un fragante emerge, significa que se libera un aceite esencial.
(García, 1988)
Según Elsa y Col, 2006, los aceites esenciales, esencias, también conocido
como son mezclas de sustancias aromáticas producidas por muchas plantas
y presentar en forma de pequeñas gotas en las hojas, frutos, resina, las ramas,
la piel de madera. Están presentes en pequeñas cantidades en comparación
con la masa de la planta: son altamente volátiles y aromáticas, es decir que
evapora rápidamente en el aire. Los estudios in vitro e in situ reportados en
frutas, hortalizas y lácticos, han indicado que se requieren muy bajas
concentraciones para lograr un efecto bioconservador.
Los aceites esenciales líquidos a temperatura ambiente, y por su volatilidad,
han sido extraíbles por destilación en corriente de vapor de agua, aunque
existen otros métodos. (Orlando, 2004). En general se han considerado
como los responsables del olor de las plantas, además pueden encontrarse
y obtenerse de diferentes órganos: raíz, rizoma (jengibre), leño (alcanfor),
hoja (eucaliptus), fruto (anís), sumidades floridas. (Bruneton, 2001).

20
Es importante distinguir entre los aceites esenciales, aceites fijos y grasas en
la planta. De hecho:
• Solo los aceites esenciales son volátiles, lo que los diferencia de los aceites
y grasas fijos.
• Se distinguen de los aceites fijos por sus composiciones químicas y
características físicas.
• Se asocian frecuentemente con otras sustancias como encías y resinas.
• Además, ellos mismos tienden a resinificarse por exposición al aire.
Así tenemos que, para la albahaca, hierbabuena, menta, romero o salvia, se
utilizan las hojas, mientras que son las raíces las que se emplean en el caso
de la angélica, valeriana o vetiver, los frutos para pimienta y nuez moscada;
las semillas para anís, omino, hinojo. Y las flores para rosa, manzanilla o
lavanda. (Matsuo, et al., 2012).

 Propiedades físico-químicas de los aceites esenciales

Propiedades físicas
Los aceites esenciales tienen en común una serie de propiedades
físicas (Lagos, 2012):
• Son solubles en alcohol, éter, cloroformo, aceites fijos, emulsionantes y en
la mayoría de los solventes orgánicos y poco solubles en agua a los que, sin
embargo, comunican su olor.
• Su punto de ebullición varía de 160 ° C a 240 ° C.
• Su densidad es generalmente más baja que la del agua, varía de 0.75 a
0.99 (los aceites esenciales de sasafrás, clavo de olor o canela son
excepciones).
• Tienen un alto índice de refracción.
• Son dextrogiros o levógiros, raramente inactivos en la luz polarizada.
• Disuelva las grasas, el yodo sufra fósforo y reduzca ciertas sales.
• Son perfumes, y están limitados en su conservación.
• Son muy resistentes a la intemperie y sensibles a la oxidación (pero no
rancio).

21
 • Son sustancias de consistencia oleosa, más o menos fluida o incluso
retinoide, muy olorosa y volátil.
• A temperatura ambiente, generalmente son líquidos, incoloros o de color
amarillo pálido, pero hay algunas excepciones.
• Son estimulantes, se usan tanto en interiores como fuera del cuerpo, a
veces puros. Generalmente disuelto en alcohol o un solvente adecuado.

Propiedades químicas de los aceites esenciales

La determinación de la composición química ha interesado a muchos
investigadores y los métodos de análisis químicos más sofisticados han
permitido identificar una gran cantidad de constituyentes de aceites
esenciales. Los aceites esenciales son mezclas más o menos complejas
cuyos componentes desempeñan el papel de perfume de importancia
desigual: algunos contribuyen poderosamente al aroma de la esencia, otros
simplemente participan en la armonía de la mezcla, de otros son
completamente inodoros o sin olor.
Los componentes de los aceites esenciales pertenecen casi
exclusivamente a dos grupos caracterizados por distintos orígenes
biogenéticos: el grupo Terpenoide por un lado y el grupo de compuestos
aromáticos derivados del fenilpropano, mucho menos común, por otro lado.
Los compuestos terpénicos proceden de la condensación del isopropeno y
pueden o no tener oxígeno. Los que carecen de oxígeno son hidrocarburos:
monoterpenos y [Link] pueden ser aromáticos y alifáticos.
(Zekari Dan, 2006).
Los monoterpenos y sesquiterpenos de 10 y 15 átomos de carbonos
derivados de geranilpirofosfato (GPP) y farnesilpirofosfato (FPP)
respectivamente, de acuerdo con su estructura se les clasifica según el
número de ciclos como acíclicos, monocíclicos, biciclícos, etc.
La composición del aceite esencial del Schinus molle Linneo es básicamente
de terpenos, siendo los monoterpenos los de mayor abundancia. Pero existen
muchos compuestos en este aceite, variando tanto en su composición como
en el contenido de los mismos. Las composiciones químicas de los aceites

22
esenciales extraídos de plantas aromáticas dependen de varios factores: los
factores geográficos (ubicación), los factores ecológicos (hábitat), siendo el
clima y la calidad de suelo muy importantes en estos dos últimos, la
variabilidad genética (genotipo), la extracción específica de la parte de la
planta (raíz, fruto, hoja, etc.), el pre-tratamiento que se realice al material
herbáceo (lavado, secado, molienda) y finalmente el proceso de extracción.
(Milojevié et al., 2008)
Monoterpenos: Los terpenos de función aldehídos se hallan distribuidos
ampliamente en las plantas especialmente valiosas por sus propiedades
aromáticas y considerándose un índice de calidad en el valor de los aceites
esenciales, muchos de los monoterpenos experimentan cierre de anillo
produciendo ácidos cíclicos insaturados. Los principales monoterpenos
responsables del aroma son alcoholes y aldehídos.
Sesquiterpenos: Los sesquiterpenos tienen propiedades débiles y son
menos volátiles, tienen una densidad aproximada de 0.9 g/ml, su viscosidad
es mayor que la de los monoterpenos.
Serie aromática
Fenilpropanos: son sustancias naturales ampliamente distribuidas en los
vegetales caracterizados por un anillo aromático unido a una cadena de 3
carbonos y derivados biosintéticamente del ácido shikimico.
Síntesis fitoquímicos
El análisis fitoquímico destaca la presencia de las familias de la molécula
activa, es una prueba cualitativa que permite destacar los compuestos
químicos encontrados en una planta u otros productos tales como:
flavonoides, taninos, alcaloides, saponinas, antraquinonas. (González, 2009).
Taninos
Comúnmente conocidos como "Taninos" de sustancias de origen vegetal, no
fenólico de poli estructura nitrogenada, soluble en agua, alcohol, acetona,
poco soluble en éter, sabor astringente.
Clasificación de los taninos:
Hay dos categorías de taninos, de diverso origen biogénico: taninos
hidrolisables y taninos condensandos,

23
Taninos hidrolizables: son ésteres de un azúcar, un fenol, derivados de
ácido o ácidos fenoles; la molécula de carbohidrato es la glucosa general, pero
en algunos casos de polisacáridos. Se divide en: Galio taninos y Elagio taninos

Figura 2: Estructura química del ácido gálico (A) y (B) elágico.

Taninos condensados: son una clase de flavonoides (sintetizados por las
plantas por la "vía biosintética de los flavonoides") que son los pigmentos
principales de muchas semillas. Son polímeros formados por unidades de
antocianidina (un flavonoide), cuenta de 2 a 20 unidades.

Figura 3: Estructura de base de datos de taninos condensados

24
Flavonoides
El flavonoide del término del latín "flavus", lo que significa "amarillo",
se refiere a una gama muy amplia de compuestos naturales pertenecientes
a la familia de los fenoles de la poli. Se consideran pigmentos vegetales, casi
universal. Casi siempre se encuentra disuelto en las vacuolas como
glucósidos, soluble en agua. Son responsables de la coloración de las flores
de fruta y a veces las hojas.
Clasificación y estructura
Los flavonoides tienen origen biosintético común que explica el hecho
de que tienen la misma básica a 15 átomos del esqueleto de carbono, que
consta de dos unidades aromáticas, dos ciclos en C6 (A y B), conectados
por una cadena a C3. Se pueden agrupar en varias clases según el grado
de oxidación del núcleo central tiránico. Flavonas, flavanoles, flavanonas,
antocianidinas, isoflavonas.

Figura 4: Estructura del flavonoide

Alcaloides
Los alcaloides son sustancias de origen biológico y a menudo (son
raros en el reino animal), de sustancias nitrogenadas, reacción alcalina
(alcaloides + sales ácidas). Sus nombres a menudo terminan con "INE".
Alcaloides siempre contienen carbono, hidrógeno y nitrógeno y más a
menudo y más oxígeno (excepcionalmente algunos alcaloides contienen
azufre). Alcaloides, por lo tanto son productos de aminoácidos naturales que
tienen efectos fisiológicos sobre el cuerpo humano.

25
 Saponinas
Las saponinas son generalmente conocidas como compuestos no
volátiles, tensados y activos, que se distribuyen principalmente en el reino
vegetal. El nombre "saponina" se deriva de la palabra latina sapo, que
significa "jabón". De hecho, las moléculas de saponina en agua forman una
solución espumosa.

Estructura y clasificación
Estructuralmente, saponinas pueden clasificarse en dos grupos según
la naturaleza de la saponina esteroide, genuino y tipo de patrón de saponina.

Esteroides, esterol y terpenoides

Los esteroides, esteroles y terpenoides son, sin duda, los metabolitos
vegetales más conocidos e incluyen varios subgrupos. Los esteroles
desempeñan un papel importante en la calidad de las grasas y los aceites.
Están en forma de alcoholes libres (por ejemplo: sitosterol), o en forma de
ésteres asociados con glucosas (ejemplo: esteroles glucósidos)

Figura 5: Glucósido de esterol y Sitosterol.

El análisis fitoquímico del molle revela que la planta de molle contiene taninos,
alcaloides, flavonoides, saponinas, esteroides, esteroles, terpenos, gomas,
resinas, y aceites esenciales.

26
 Tabla 1: Compuestos químicos del aceite esencial de Schinus molle L. (Molle).

COMPONETES CANTIDAD
α – Pineno 11.9 %
Canfeno 0.24 %
Sabineno 0.67 %
β-Pineno 13.53 %
β-Mirceno 30.12 %
α-Felandreno 26.42 %
P-Cimeno 1.24 %
Limoneno 9.85 %
β-Felandreno 5.67 %
Octanoato de metilo 0.43 %
β-Elemeno 0.16 %
α- Gurjuneno 0.28 %
Β-Cariofileno 0.46 %
α-Humuleno 0.12 %
Biciclogermacreno 0.38 %
β-Cadineno 0.17 %
Fuente: Extracción y Caracterización del aceite esencial Schinus molle L.
(Molle). Carrasco 1998.

 Propiedades biológicas de los aceites esenciales

Desde la antigüedad, las especies aromáticas y sus aceites esenciales se
han empleado en preparaciones culinarias no sólo como agentes
saborizantes y aromatizantes, sino también como conservantes naturales en
alimentos y en otros productos, donde los aceites esenciales pueden
detener, prevenir o inhibir el deterioro oxidativo y los daños causados por
bacterias, hongos u otros microorganismos. De esta manera, y debido a la
creciente presión de los consumidores, actualmente las industrias de
alimentos y cosméticos han disminuido el uso de conservantes sintéticos en

27
sus productos, reemplazándolos por sustancias de origen natural (Vargas y
Bottia, 2008).

Actividad antioxidante
En muchos estudios sobre especies vegetales se ha aislado una
amplia variedad de compuestos antioxidantes fenólicos lo cual los coloca en
la categoría de los antioxidantes más interesantes y promisorios, en general
flavonoides. Estos antioxidantes son sustancias importantes en el área de
farmacología, principalmente por su capacidad de contrarrestar la formación
de radicales, cuya influencia se ve reflejada en las propiedades que poseen,
así como antivirales, antialérgicas, anti-inflamatorias, antimicrobianas, etc.
Cabe resaltar que la actividad antioxidante de los compuestos fenólicos
presentes en las plantas aromáticas depende de su estructura y,
particularmente, del número y la posición el grupo hidroxilo (Díaz, 2007).

Actividad antimicrobiana de los aceites esenciales

Desde hace más de tres décadas se ha descrito a los fungicidas de
origen natural, como agentes de gran capacidad biodegradable y de efectos
secundarios menores, en comparación a los fungicidas comúnmente
comercializados (Dikshit et al., 1986). Así por ejemplo, se ha comprobado
que al incorporar aceite esencial de árbol de té en recubrimientos a base de
polímeros derivados de la celulosa constituye una alternativa eficaz para el
control en pos cosecha de Penicillium italicum en naranjas (Sánchez et al.,
2007). También, el aceite esencial de jengibre puede ejercer una acción
antimicrobiana sobre el Bacillus cereus, Staphylococus aureus y
Streptococus faecalis (Vásquez et al., 2001). El aceite esencial de la “hierba
de limón” (Cymbopogon citratus) mostró una notable actividad antifúngica
frente a Trichophyton rubrum (la formulación desarrollada resultó no irritante
y se propuso usar como antidermatofítica) (Guerra et al., 2004). Para la
evaluación de las propiedades antimicrobianas de los aceites esenciales se
aplican los métodos convencionales de ensayo para antibióticos. Existen dos

28
 técnicas básicas usadas, el método de difusión en agar y el método de
diluciones (Vargas y Bottia, 2008).

Aplicaciones de los aceites esenciales en la industria

Los aceites esenciales tienen un amplio rango de aplicación en la
industria. La figura Nº 01, proporciona una vista general de su uso en las
diferentes ramas de consumo. El tipo de aceite esencial y su calidad final
determinarán en qué producto será incorporado; los aceites pueden ser
empleados como materia prima en diferentes tipos de industria en general,
cosmética, alimenticia, bebidas, textil, etc.; mientras que en otras industrias,
como la farmacéutica, se pueden usar productos aislados de las mismas
esencias (Díaz, 2007).

2.2.3. Metabolitos secundarios volátiles reconocidos en el aceite

esencial
Dikshit et al. (1986) reconoció la presencia de mirceno, α-felandreno,
β-felandreno, p-cimeno, β-cariofileno y D-limoneno, como componentes
mayoritarios del aceite esencial obtenido de las hojas del molle.
Según Viturro et al. (2010) en muestras de aceite esencial de molle de Costa
Rica, Brasil, Ecuador, Perú, Bolivia y Argentina; en dicho resumen se puede
notar que los compuestos α- felandreno, β-felandreno, α-pineno, β-pineno,
limoneno, p-cimeno y mirceno son los más comunes:
 α-felandreno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 2-methyl-5-(1-methylethyl)-1,3-cyclohexadiene.
 β-felandreno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 1-isopropil-4-metil-2,4-ciclohexadieno.
 α-pineno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 2, 6, 6- trimetilbiciclo.
 β-pineno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 6,6-dimetil-2-metilenebiciclo [3.1.1] heptano.
 Limoneno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 4-isopropenil-1-metilciclohexeno.

29
  P-cimeno: Fórmula química: C10H14.
Nombre IUPAC: 6,6-dimetil-2-metilenebiciclo [3.1.1] heptano.
 Mirceno: Fórmula química: C10H16.
Nombre IUPAC: 7-metil-3-metileno-1,6-octadieno.

Fuente: Nobre et al. (2000), Palá (2002), Quiminet (2009)

Figura 6: Estructura molecular de los componentes volátiles más comunes del aceite esencial de Shinus molle
(molle).

30
2.2.4. Métodos de obtención de aceites esenciales
Los aceites esenciales se localizan en diferentes partes de la planta,
dependiendo de la especie, algunos suelen localizarse en glándulas
aceitosas, sacos de aceite, venas o en los cabellos glandulares, de donde
pueden ser extraídos utilizando vapor de agua. Para facilitar tal proceso
extractivo, y de esta forma, aumentar el rendimiento del aceites esenciales ,
generalmente, se hace necesario un tratamiento previo de la planta antes de
su destilación, el cual depende del tipo de material vegetal con que se vaya
a trabajar (Güenther, 1955); (Muñoz, 1987). Las hojas, flores y partes no
fibrosas de la planta, pueden ser sometidas a destilación sin tratamiento
previo, mientras que las raíces, tallos y plantas leñosas deben ser cortados
en pequeños trozos, antes de ser sometidos al proceso extractivo (Güenther,
1955). El almacenamiento y secado del material vegetal se debe llevar a
cabo en un ambiente seco y a temperaturas bajas, para minimizar pérdidas
por evaporación y evitar procesos de oxidación y resinificación. El secado se
lleva a cabo en desecadores bajo techo para evitar el contacto directo del
material vegetal con los rayos solares (Güenther, 1955) (Muñoz, 1987).
Existen diferentes métodos de obtención, los principales métodos utilizados
para obtener aceites esenciales a partir de plantas aromáticas (Bandoni,
2000) son los siguientes:

 Destilación con agua (hidrodestilación)

Este método consiste en llevar a estado de ebullición una suspensión
acuosa del material vegetal, de tal manera, que los vapores generados
puedan ser condensados y colectados. El aceite, que es inmiscible en agua,
es posteriormente separado. Esta técnica es sencilla, pero de mucha
precaución, ya que durante este proceso el aceite se somete a la acción de
altas temperaturas, las cuales pueden ocasionar procesos indeseables,
como la polimerización y resinificación de los terpenos, así como la hidrólisis
de los ésteres (Schreier, 1984).
La hidrodestilación, asimismo, es el método normativo para la extracción
de un aceite esencial, así como para control de calidad. El principio de la

31
 destilación hidráulica es una destilación heterogénea. El proceso es sumergir
la planta de crudo en un baño de agua. Todos entonces se trae a ebullición
generalmente la presión atmosférica como se muestra en la figura 9.
(Bandoni, 2000).

Figura 7: Instalación de la destilación hidráulicaInstalación de la destilación hidráulica

1 - Botella Erlenmayer 6 - Refrigerante

2 - Agua y planta. 7 - Soporte de refrigerante
3 – Calentador 8 - Aceite esencial
4- Control de temperatura 9 - Agua aromática
5 - Entrada de agua 10 - Bulbo

 Destilación por arrastre con vapor

La destilación por arrastre con vapor o destilación con vapor seco, que
se emplea para extraer la mayoría de los aceites esenciales es una
destilación de mezcla de dos líquidos inmiscibles y consiste, en una
vaporización a temperaturas inferiores a las de ebullición de cada uno de los
componentes volátiles por efecto de una corriente directa de vapor (Bandoni,
2000). En esta técnica el vapor de agua ligeramente sobrecalentado,
proveniente de un generador, se hace llegar hasta el recipiente que contiene
la planta, de donde arrastra los componentes volátiles que luego se
condensan obteniéndose así una mezcla de agua y aceite, de la cual el AE
se separa fácilmente por simple decantación, como se muestra en la figura
10. (Güenther, 1955) (Schreier, 1984) (Denny, 1989).
32
 Figura 8: Montaje de la formación de vapor de agua

1- La botella de Erlenmayer 7- Entrada al agua

2- Agua 8- Refrigerante
3- Ballón calentador 9- Soporte del refrigerante
4- Planta 10- Aceite esencial
5- Soporte de Erlenmayer 11- Agua aromática

 Destilación con agua y vapor

En este caso, el vapor se genera dentro del propio cuerpo del
alambique, donde el material vegetal se encuentra suspendido sobre un
tramado (falso fondo) que impide el contacto del material vegetal con el
medio líquido en ebullición. En comparación con la hidrodestilación, este
sistema reduce la capacidad neta de carga de materia prima dentro del
alambique, pero mejora la calidad del aceite obtenido (Bandoni, 2000).

 Hidrodestilación asistida por la radiación de microondas

Esta técnica fue inicialmente patentada en Canadá, por el Dr. J. Paré y
sus colaboradores, en 1991 [Paré, 1991; 1992]. Para la extracción de los AE
mediante MWHD, el material vegetal se sumerge al agua y se somete a la
19 acción de la radiación de microondas, que, al calentar el agua hasta
ebullición, produce vapores que atraviesan las estructuras celulares y
permiten la expulsión del AE contenido en ellas, luego, el AE arrastrado por
el vapor de agua, se condensa y se colecta (Kingston & Jassie, 1988)
(Europa Patente nº 0485668A1, 1992).

33
 Figura 9: Extracción asistida por microondas.
 Extracción por sustancias grasas
El método de extracción de grasa se utiliza en la floración en el
tratamiento de partes frágiles de plantas como las flores, que son muy
sensibles a la acción de la temperatura. Hace uso de los componentes
olorosos liposolubles de las plantas en la grasa. El principio es poner las
flores en contacto con una sustancia grasa para saturarla con esencia
vegetal. El producto obtenido es una pomada floral que luego se agota con
un disolvente que se elimina a presión reducida. En esta técnica, se puede
distinguir la infusión donde la saturación se realiza por difusión a la
temperatura ambiente de los aromas hacia el cuerpo graso y la digestión que
se practica con el calor, por inmersión de los órganos vegetales en el cuerpo
graso. (Güenther, 1955) (Jennings & Rapp, 1983).

Figura 10: : Técnica de extracción de grasa.

34
 Extracción con solventes
La técnica de extracción por solvente consiste en colocar en un
extractor un solvente volátil y el material vegetal a tratar. A través de
sucesivos lavados, el solvente cargará moléculas aromáticas, antes de ser
enviado al concentrador para ser destilado a presión atmosférica.
El producto así obtenido se llama "concreto". Este concreto se puede
elaborar con alcohol absoluto, filtrado y helado para extraer las ceras
vegetales. Después de una última concentración, obtenemos un "absoluto".
- Los rendimientos son generalmente más altos en comparación con la
destilación.
- El uso de disolventes orgánicos que pueden conducir al riesgo de artefactos
y posibilidad de contaminación de la muestra por impurezas a veces difíciles
de eliminar.
- La elección del disolvente: metanol, etanol, éter de petróleo o
diclorometano.
- Esta técnica de extracción se ha combinado recientemente con microondas
y ultrasonidos. (Sandra & Bichhi, 1987).

Figura 11: Los diferentes tipos de extracción de disolventes volátiles

 Extracción con fluidos en estado supercrítico

El principio básico para la extracción con fluidos en estado supercrítico
es el cambio de propiedades de transporte y solubilidad que presenta un

35
solvente en este 20 estado. El poder disolvente del CO2 supercrítico es
mayor para compuestos menos polares y con masa molecular pequeña.
De esta manera, son muy solubles en fluido supercrítico CO2 los aromas,
los terpenos y los lípidos debido a su baja polaridad. Otros compuestos que
pueden ser medianamente solubles, a condición de que su masa molecular
sea pequeña son el agua, los ácidos grasos, alcoholes, cafeína, nicotina,
colesterol, etc. (Bandoni, 2000) (Dean, 1998).

2.2.5. Métodos de análisis de calidad de los aceites esenciales

Los aceites esenciales son mezclas fragantes cuya calidad y
precio en el mercado están determinados principalmente por su composición
química, por el contenido de las sustancias de interés, y por las propiedades
fisicoquímicas y organolépticas que posee. De esta manera, el control de
calidad de un aceite esencial tiene como objetivo garantizar que la esencia
conserve determinadas características analíticas.

 Cromatografía en fase gaseosa

El principio de la GC está basado en la volatilización de la muestra en
el puerto del inyector y la separación de los componentes en una columna
que soporta la fase estacionaria, mientras que los componentes de la
muestra son arrastrados por la fase móvil; a la salida de la columna cada
componente es registrado por un detector bajo la forma de picos, que deben
ser simétricos y sin superposición. La separación de componentes se lleva
a cabo en virtud de la diferencia de sus coeficientes de distribución entre dos
fases, los cuales dependen de su estructura, de la naturaleza de las fases
(móvil o estacionaria) y de la temperatura de la columna cromatográfica. Los
resultados son cuantitativos y se obtienen en un espacio de tiempo
relativamente corto. Las únicas desventajas radican en que los componentes
de las muestras deben ser estables a la temperatura de operación y de
naturaleza volátil, para lo cual es necesario hacer un tratamiento preliminar
de las muestras, lo que puede convertir el proceso en difícil y complejo
(Vargas y Bottia, 2008).

36
  Espectrometría de masas
La Espectrometría de masas es una de las técnicas analíticas más
completas que existen, ya que proporciona un espectro característico de
cada molécula, permite medir la concentración de las sustancias y
proporciona información estructural sobre la molécula analizada. Dentro del
espectrómetro de masas, se procede a la ionización de la muestra mediante
diferentes métodos. El sistema de ionización más frecuente es el de impacto
electrónico que bombardea las moléculas con electrones de una cierta
energía, capaces de provocar la emisión estimulada de un electrón de las
moléculas y así ionizarlas. Además de moléculas ionizadas o iones
moleculares (M+) también se forman iones fragmento, debido a la
descomposición de los iones moleculares con exceso de energía, el tipo y
proporción relativa de cada uno de estos fragmentos es característico de las
moléculas analizadas y de las condiciones del proceso de ionización. Una
vez ionizadas las moléculas, se aceleran y se conducen hacia el sistema
colector mediante campos eléctricos o magnéticos. La velocidad alcanzada
por cada ión será dependiente de su masa. La detección consecutiva de los
iones formados produce el espectro de masas de la sustancia, que es
diferente para cada compuesto químico y que constituye una identificación
del compuesto analizado. El espectro de masas puede almacenarse en la
memoria del ordenador para compararse con los espectros de una colección
de espectros (o librería) y proceder a su identificación o puede estudiarse
para averiguar la naturaleza de la molécula que le dio origen (Gutiérrez y
Droguet, 2002).

 Cromatografía de gases con detector de ionización de llama

El detector de ionización de llama, FID (Flame Ionization Detector), es
uno de los detectores más usados y versátiles, básicamente, es un
quemador de hidrógeno/oxígeno, donde se mezcla el efluente de la columna
(gas portador y analito) con hidrógeno. Inmediatamente, este gas mezclado
se enciende mediante una chispa eléctrica, produciéndose una llama de alta

37
temperatura. La mayoría de compuestos orgánicos al someterse a altas
temperaturas se pirolizan y producen iones y electrones, que son
conductores eléctricos; este hecho se aprovecha estableciendo una
diferencia de potencial de unos centenares de voltios entre la parte inferior
del quemador y un electrodo colector situado por encima de la llama. La
corriente generada es baja (del orden de los 10-12 Ǻ), por lo tanto debe ser
el proceso de ionización que se da en la llama es complejo, pero se puede
aproximar el número de iones producidos al número de átomos de carbono
transformados en la llama que salen de la columna. Esto produce que sea
un detector sensible a la masa más que a la concentración, por lo tanto no
afectan demasiado los cambios en el flujo de salida. Existen algunos grupos
funcionales que no dan respuesta en este detector, como el carbonilo,
alcohol, halógeno y amina, tampoco responden gases no inflamables como
el CO2, SO2, agua y óxidos de nitrógeno; este hecho más que limitar el
ámbito de aplicación del detector, permite el análisis de muestras
contaminadas con alguno de los compuestos mencionados. La aplicación de
este método permite una alta sensibilidad de 10-13 g/s, un gran intervalo
lineal de respuesta (de 107),y un bajo ruido. Por lo general, es resistente, de
bajo mantenimiento, y fácil de utilizar (Villa, 2011).amplificada mediante un
amplificador de alta impedancia.

2.2.6. Actividad antibacteriana in vitro

Estudios reportados han demostrado que, el aceite esencial de Schinus
molle L. posee actividad antibacteriana contra cepas Gram (+), como:
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis,
además especies de la misma familia Anacardiaceae de Schinus molle,
mostraron efectos ante Streptococcus mitis, Streptococcus sobrinus,
Streptococcus sanguise, Streptococcus mutans. Schinus molle a la vez
posee efectos antimicrobianos sobre Gram (-) tales como: Escherichia
coli, Enterobacter, Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae y Proteus
vulgaris, de igual manera, se ha evaluado las propiedades antifúngicas frente
a Cándida albicans y Aspergillus niger. Se puede añadir estudios que han

38
 determinado el efecto citotóxico ante células tumorales. Cabe recalcar que
todas las investigaciones mencionadas han sido realizadas siguiendo las
normas de antibiogramas establecidas en la literatura, misma
metodología que se toma en consideración en el presente estudio. (Pauli,
2001); (Gonzalez, 2009); (Gualtieri, 2012); (Molinari, 2013); (Carvalho,
2013); (Álvarez & Boquet 1996); (Cedamanos & Mejía, 2014).

 Generalidades de las bacterias Gram positivos y Gram negativos

Escherichia Coli (ATCC 29522)
Son cepas con características fenotípicas y genotípicas definidas que
son empleadas como control para las determinaciones microbiológicas. La
norma ISO 17025:1999 se refiere a los requerimientos generales que
concierne a los laboratorios de ensayos y su respectiva calibración,; siendo
una norma internacional que establece que este tipo de laboratorios deben
de usar un buen sistema de calidad, que sean técnicamente adecuados y
son preparados para formar resultados lo más técnicamente posible y
válidos, La estructura y mantenimiento del cepario dispondría de un conjunto
de cepas de referencia con una confiable información, usándose en las
diferentes áreas de la ciencia y la tecnología. Su almacenamiento permite
tener estabilidad y reproducibilidad de características típicas, morfológicas,
bioquímicas, fisiológicas y serológicas de cada una de ellas (Hernández y
col., 2003).
Dominio: Bacteria o Eubacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: ‫ال‬- Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobactereaceae
Género: Escherichia
Especie: Escherichia coli
Fuente: Manual de Bergey’s. 2005.

39
Caracterización morfológica y bioquímica
Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (Gram
negativo), es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean
su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa
(Hernández y col., 2003). Su pared celular es del tipo didermo y está
constituida por la membrana citoplasmática, una capa fina de peptidoglicano,
entre ambas se encuentra el espacio periplásmico o periplasma, por encima
se sitúa la membrana citoplasmática externa constituida por una bicapa de
fosfolípidos intercalada con distintos componentes como el lipopolisacárido
(LPS), lipoproteínas y porinas (Mandell y col., 2005). E. coli produce
reacciones positivas para el rojo de metilo, indol, lisina descarboxilasa,
fermenta el manitol y produce gas a partir de la glucosa (Mandell y col.,
2005). Se trata de un enterobacteria catalasa positiva, oxidasa negativa,
reduce el nitrato a nitrito, siendo negativa la reacción de ureasa y fenilalanina
desaminasa (Mandell y col., 2005).
Enterobacterias
La familia Enterobacteriaceae constituye un grupo grande y
heterogéneo de bacterias Gram negativas. Reciben su nombre por la
localización habitual como saprofitos en el tubo digestivo, aunque se trata de
gérmenes ubicuos, encontrándose de forma universal en el suelo, el agua y
la vegetación, así como formando parte de la flora intestinal normal de
muchos animales además del hombre. Escherichia coli, el microorganismo
más prevalente de esta familia, es el microorganismo de vida libre que mejor
se ha estudiado. Estas bacterias pueden ser móviles (la mayoría) o
inmóviles, la mayor parte de ellas fermentan la lactosa y son capaces de
producir indol a partir de triptófano. (Mandell G.L., et al., 2006).
Historia
Theodoro Von Escherich, pediatra y microbiólogo alemán, estudió en
el año 1884 los microbios que se encontraban en el intestino infantil, a partir
de sus heces, para establecer su rol en la digestión y la enfermedad. En el
año 1885 publicó los resultados de su estudio, en cuyo reporte describe el

40
 aislamiento y caracterización de bacterias de rápido crecimiento con forma
de varas cortas y delgadas que llamó Bacterium coli commune. Aunque
posteriormente el microorganismo fue descrito por varios otros
investigadores con múltiples sinónimos, Escherich fue reconocido como el
primero estableciéndose el nombre definitivo del microbio como Escherichia
coli.

Epidemiologia
En los individuos hospitalizados o inmunodeprimidos (incluyendo los
pacientes alcohólicos y diabéticos), en especial en los pacientes que reciben
tratamiento antibiótico, hay colonización por Enterobacteriaceae, además de
en el tubo digestivo, en la orofaringe, el aparato genitourinario y la piel. La
infección por estas bacterias es frecuente en estos contextos. La proporción
de aislados resistentes a múltiples antimicrobianos, incluidos aquellos que
producen betalactamasas de espectro extendido (BLEE), ha aumentado de
forma ininterrumpida, de modo que casi todos los aislados nosocomiales, y
muchos de los aislados adquiridos en la comunidad, son ahora resistentes a
varias clases importantes de antimicrobianos. Diferentes factores han
contribuido al incremento de las infecciones por enterobacterias en nuestros
hospitales: el uso cada vez mayor de técnicas diagnósticas y terapéuticas
agresivas (catéteres intravenosos, endoscopias, intervenciones), el empleo
de potentes inmunosupresores y las estancias hospitalarias prolongadas,
entre otros.
Estructura de la membrana celular
La envoltura celular se caracteriza por una estructura multilaminar. La
membrana interna, llamada también como citoplasmática, se refiere una
doble capa de fosfolípidos con la función de regular el flujo de nutrientes,
metabolitos y macromoléculas, mientras que la siguiente capa es la externa,
se refiere a un peptidoglucano delgado con un espacio periplásmico que
presenta una alta densidad de proteínas. La membrana externa compleja se
refiere en otra doble capa de fosfolípidos que incluyen lipopolisacáridos

41
(LPS), se encuentra en la parte más externa y constituyen un factor
importante de virulencia de estas bacterias. Las lipoproteínas se encuentran
fijadas al peptidoglucano, son proteínas porinas multiméricas que ayudan al
flujo de diversas sustancias, incluyendo a los antibióticos betalactámicos, y
otras proteínas de la membrana externa. Entre estas proteínas hay algunas
organelas complejas que están radiadas hacia el exterior; es decir, los
flagelos que son estructuras usadas para la locomoción y que proceden de
una disposición basal ubicada en la membrana interna, las fimbrias tienen
una importante función como adhesinas, y los pili sexuales que son
estructuras que están en las bacterias que presentan plásmidos conjugativos
y que las bacterias usadas para mediar la transferencia conjugativa de ADN
del plásmido.
Patogenicidad por Escherichia coli
Contiene cuantiosos factores de virulencia, los cuales no están contenidos
en todas las cepas. Así la mayoría de las cepas solo son capaces de producir
infecciones en inmunodeprimidos, mientras que otras tienen factores
específicos de virulencia (Prieto-Fraile, 1997)
Infecciones intestinales
Diferentes tipos de Escherichia coli causan distintos tipos de infecciones
intestinales. Aunque el papel de esta bacteria como causante de diarreas
infantiles se conoce desde hace muchos años, hasta hace poco no se ha
identificado su papel como responsable en muchas ocasiones de la llamada
diarrea de viajero (Jawetz y col, 2002)
Escherichia coli enterotoxigénica: Una de las principales causas de
deshidratación ocasionada por la diarrea en niños menores de dos años y
de la diarrea del viajero son producidas por este tipo de bacteria, las cuales
son adquiridas, generalmente, por personas proveniente de un país
desarrollado quienes han visita regiones tropicales con bajas y deficientes
condiciones de higiene, presentando síntomas que tienden a ser leves con
un tipo de diarrea acuosa; aunque raramente los síntomas podrían ser más
complicados presentando fiebre alta, escalofríos y vómitos.
Escherichia coli enteropatógeno: Este tipo bacteria es una de las
principales causas de diarreas en neonatos en países con deficientes
42
condiciones higiénicas, como ocurre en los países subdesarrollados. Aunque
se han presentado raros casos de enfermedades en adultos en el mundo
industrializado, siendo los síntomas más comunes como lesiones típicas en
el área de la mucosa con la aparición de microcolonias que ocasionan la
desaparición de microvellosidades adyacentes.
Infecciones hospitalarias
En pacientes en estado de hospitalización clínica, la bacteria Escherichia coli
puede colonizar el tracto respiratorio y la piel de los enfermos, al igual que
otras enterobacterias o microorganismos ambientales. Esta colonización
puede ser el origen de neumonías (por aspiración de secreciones
respiratorias contaminadas), infecciones de heridas quirúrgicas, etc. En
algunos casos, desde un foco de infección puede pasar a la sangre y originar
bacteriemia y sepsis (Prieto - Fraile, 1997)

Infecciones respiratorias
Las infecciones del tracto respiratorio suelen ser oportunistas. En los
pacientes con enfermedades graves, la alteración de la fisiología permite la
colonización de la vía respiratoria y gástrica. Generalmente, el cuadro
clínico para esta enfermedad puede presentar síntomas característicos a
los de una bronconeumonía, que suele afectar más a los lóbulos inferiores,
con empiema afectando a un tercio de los pacientes y bacteriemia en el
otro, teniendo una alta tasa de mortalidad, más del 50%, afectando más a
las personas debilitadas.

Infecciones urinarias
En una infección urinaria complicada, el principal huésped de
bacterias alojadas en el aparato urinario es el Escherichia coli
encontrándose también otros tipos de bacterias. Los síntomas de esta
enfermedad producidas por estas bacterias presencia de un cuerpo
extraño, sondaje vesical, obstrucción del flujo urinario normal llamado
también hipertrofia prostática, anomalías congénitas.

43
En una infección urinaria, unas de sus principales causas son producidas por
la bacteria de Escherichia coli. La mayoría de las infecciones urinarias no
complicadas causadas ocurren en mujeres jóvenes, se debe a la penetración
en la vejiga de las bacterias que colonizan la región periuretral (Prieto-Fraile,
1997).
La infección del tracto urinario (ITU) se distingue por la presencia de
microorganismos patógenos dentro del sistema del tracto urinario, en el cual
puede o no presentar síntomas. El origen bacteriano de la ITU es el más
frecuente con cifras alrededor entre 80%-90%.
Etiología
En la mayoría de los casos, aproximadamente 95%, existe un sólo
microorganismo como responsable que causa la infección en el tracto
urinario, siendo el agente etiológico más frecuente el Escherichia coli ,
generando entre el 75% a 80% de casos.
Bacteriemias
Escherichia coli es uno de los microorganismos que con mayor frecuencia
se aísla de hemocultivos, sobre todo en enfermedades con infección
nosocomial. Estas bacteriemias pueden dar lugar a otras las bacteriemias
por Gram negativos produciendo sepsis, y en último extremo a shock séptico
desencadenando por la acción tóxica de la endotoxina o lipopolisacáridos
capsular (Prieto-Fraile, 1997).

Septicemia
Cuando las defensas normales del huésped son inadecuadas, la
bacteria puede alcanzar el torrente sanguíneo y causar septicemia. Los
recién nacidos a veces son muy susceptibles a la septicemia por
Escherichia coli debido a que carecen de anticuerpos IgM. La septicemia
también puede presentarse como consecuencia de infección del aparato
urinario (Jawetz y cols. 2002).
La Escherichia coli se aísla de heces en medios como Mac Conkey o
eosina azul de metileno (EMB) diferenciándose de las bacterias intestinales
debido a características morfológicas y de afinidad a la lactosa. Es

44
importante resaltar, la identificación de este tipo de bacteria a nivel de
especie usa procedimientos automatizados (Vitek). Para la tipificación en
la serológica de Escherichia coli se identificar los diferentes tipos de
antígenos, como son somáticos, flagelar y capsular.

Otro procedimiento en la identificación está basado en técnicas de

recombinación genética que pueden permitir el desarrollo de sondas
moleculares para la identificación de secuencias genes relacionados con la
producción de factores de patogenicidad de enterobacterias. Estas sondas
están elaboradas con secuencias específicas de DNA marcado con fósforo
radiactivo o con enzimas, que en un proceso de hibridación, reconocen
secuencias de ADN complementario en las cepas problema.

Una técnica de biología molecular muy utilizada actualmente es la

amplificación de secuencias específicas para un factor de virulencia
(enterotoxinas, citotoxinas, adherencia, invasividad) de una cepa en
particular por medio de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa
(PCR).

Tratamiento
El tratamiento para tratar los síntomas de una ITU depende del grado
de complicación, teniendo en cuenta los factores de riesgos. Al momento
de escoger el tratamiento más idóneo, debe de hacerse de una manera
empírica hasta que se logren obtener los resultados del urocultivo y
antibiograma, en el cual el médico debe de recetar un antibiótico efectivo
sobre el agente que se cree que sea el sospechoso de estar produciendo
esta enfermedad, cuyo fin en el tratamiento deben ser la adquisición de
respuesta rápida y que sea bien efectiva, evitando la recurrencia y tratando
en lo posible de resistencia a los antibióticos.

Recientemente, Escherichia coli viene presentando una creciente

resistencia a los antibióticos tradicionales, tales la ampicilina, amoxicilina y

45
a las cefalosporinas de primera y segunda generaciones, en el cual estos
no deberían ser utilizados en el tratamiento empírico de la pielonefritis.
Unos de los antibióticos más usados son la ciprofloxacina y la norfloxacina.
Sin embargo, el uso de fluoroquinolonas como terapia de primera línea para
el tratamiento.

Prevención y control
Al momento de buscar un control general para las infecciones
causadas por la cepa de Escherichia coli, se deben buscar en mejorar las
condiciones higiénicas, sanitarias, ambientales, así como una debida
adecuación y preparación de alimentos, claro sin dejar por fuera una buena
higiene personal, para así evitar en contraer enfermedades. Estas deben
medidas de aplicarse también en las hospitalarias para evitar posibles
brotes. Adicionalmente, se desarrollan estudios en la búsqueda de
productos inmunizantes con enterotoxinas y de elementos adherentes que
contengan a las cepas de los diferentes grupos de E. coli asociadas con
procesos diarreicos, los cuales pueden contribuir reducir la morbilidad
producida por estas bacterias, caso particular como la población infantil y
en los individuos que viajan de una zona de bajo riesgo de diarrea a una de
alta prevalencia.

2.2.7. Generalidades del Ciprofloxacino

 Descripción
El agente Ciprofloxacino es un antibiótico amplio espectro
antimicrobiano de la familia de las Fluoroquinolonas, es un poderoso
mediamente que combate gérmenes Gram Negativos aerobios, que
incluyen también agentes patógenos entéricos, como las Pseudomonas y
Serratia marcescens, Además, es un agente que es activo frente a
gérmenes Gram-positivos, pero recientemente se han observados que se
ha formado resistencia en algunas cepas como son los Staphyloccocus
aureus y pneumococos. Es importante tener en cuenta que no es activo
cuando se comprueban la existencia de bacterias anaeróbicas. En

46
ocasiones se usa combinándose con otros antibacterianos para tratar
tratamientos de las infecciones por micobacterias (M. tuberculosis y MAC).

Mecanismo de acción
Los efectos antibacterianos del antibiótico ciprofloxacino es gracias
a su acción inhibidora de la topoisomerasa IV y la DNA-girasa de tipo
bacteriana. Estas topoisomerasas perturban el DNA encajando pliegues
helicoidales de doble cadena, ayudando la facilitación del extendido de las
cadenas. La DNA-girasa presenta dos subunidades codificadas por el gen
gyrA, estas actúan quebrando las cadenas del cromosoma bacteriano,
pegándolas posteriormente una vez creadas la supe hélice. Las
quinolonas logran la inhibición de estas subunidades evitando cuando se
replican y la transcripción del DNA bacteriano, pero desconoce con
precisión debido a la acción de la DNA-girasa, la cual conlleva a la muerte
de la bacteria. Es importante resaltar, que las células humanas presentan
una topoisomerasa que procede de una manera similar a la DNA-girasa
bacteriana, pero esta enzima generalmente no es afectada por las
concentraciones bactericidas del ciprofloxacino.

Farmacocinética: El ciprofloxacino se suministra por vía

intravenosa e oral, el absorbiéndose de una manera rápida en el tracto
digestivo, lográndose probar un mínimo en el metabolismo de primer paso.
En estudios se ha demostrado en ayunas se podría absorber como 70%
de la dosis suministrada, que conlleva a concentraciones plasmáticas
máximas en apenas de 30 a 150 minutos. Mientras que cuando se
suministra con las comidas se retardan las concentraciones, pero de igual
manera la absorción en total no es afectada. (CAF DIGEMID)

Indicaciones y Posología
Las infecciones urinarias de grado moderadas no complicadas deben
tratarse de la siguiente manera:

47
  Adultos se debe suministrar una dosis oral de 250-500 mg cada 12
horas de 7 a 14 días.
 En pacientes hospitalizados por lo general las dosis lo determina el
médico tratante, pero por lo general se debe suministrar una dosis
intravenosa de 200 mg cada 12 horas, según sea el caso.

En las infecciones urinarias graves y/o complicadas:

 Administración oral: Adultos: 500 mg cada 12 horas durante 7 a 14 días.
 Administración intravenosa: Adultos: 400 mg cada 12 horas.

Contraindicaciones
Se debe evitar El ciprofloxacino en pacientes con hipersensibilidad a
las quinolonas debido que producen artropatías al administrado
experimental a animales inmaduros, haciéndose necesario precauciones
sobre todo cuando se suministra en el área pediatría. Aunque, la
incidencia es relativamente baja con valores cercanos a 1,5%, las cuales
logran desaparecer una vez que se para el tratamiento. Se ha
demostrado que estas fluoroquinolonas están relacionadas a rupturas de
tendones, por lo cual se debe parar el tratamiento lo antes posible una
vez que haya iniciado el tratamiento.

El ciprofloxacino se está dentro de la categoría C, catalogada como de

alto riesgo en el embarazo, debido que atraviesa a la barrera de tiene la
placenta, y es excretada en la leche materna, lo cual se recomienda no
ser usada durante el embarazo o la lactancia.
Interacciones
El ciprofloxacino minimiza el aclaramiento hepático de la cafeína y de
la teofilina, en la cual se puede desarrollarse efectos tóxicos como
náuseas y vómitos, ansiedad, nerviosismo, taquicardia o convulsiones.
Se debe prestar atención en la interacción de una dosis-dependiente
en que los individuos quienes consuman cafeína en grandes
cantidades.

48
 La absorción oral del de este antibiótico puede ser afectada de manera
directa por sales de aluminio, calcio, hierro y cinc, aumentando la
afectación en caso particular si se suministran una hora antes del
antibiótico.
Un aumento en el tiempo de la protrombina y del INR en individuos que
reciben tratamiento con warfarina y ciprofloxacino, la interacción de 2 a
16 días de haberse iniciado el tratamiento con el antibiótico en los
pacientes anti coagulados estabilizados. Sin embargo, las dosis de 500
mg 2 veces al día del ciprofloxacino no parecen afectar de forma
significativa el tratamiento anticoagulante. (Lancet 1989).

Recomendaciones
Las quinolonas están dentro del ciprofloxacino y de ser usadas se
debe prestar especial precaución en individuos con enfermedades del
sistema nervioso central y enfermedades cerebrovasculares, siendo un
factor preocupante de riesgo alto evitando las convulsiones, minimizando
su aparición. Este tipo de antibiótico afecta a individuos con insuficiencia
renal, ya que es excretada en por vía renal. Por lo tanto, se debe de
aplicarse con cuidado las dosis minimizando en lo posible su prolongación
y altas dosis. Es importante resaltar que no es necesario realizar un ajuste
de la dosis en los adultos mayores, mayores de 65 años, siempre y cuando
no presenten problemas de índole renal.
Adicionalmente, se debería de suministrar este antibiótico con la debida
precaución en personas que tengan o presenten una alta deshidratación
por la posibilidad de adquirir cristaliuria, debido que se concentra en exceso
en la orina.
Pueden presentarse efectos adversos gastrointestinales en particular en
pacientes con colitis, y puede producirse super infecciones por gérmenes
no sensibles. También puede ocurrir candidiasis (CAF DIGEMID).

49
2.3. Formulación de hipótesis
2.3.1. Hipótesis general:
HG: El aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) presenta
efecto antibacteriano significativo en cepas de Escherichia coli, in vitro.

2.3.2. Hipótesis específicas:

 H1: Existen metabolitos secundarios en mayor proporción en el aceite
esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) con actividad
antibacteriana en cepas de Escherichia coli, in vitro.
 H2: Existe una alta concentración del aceite esencial Schinus molle L.
(Molle) con efecto antibacteriano en cepas de Escherichia coli in vitro.
 H3: El aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.), al ser
comparado con el Ciprofloxacino presenta igual actividad
antibacteriana, frente a cepas de Escherichia coli.

2.4. Variables
2.4.1 Operacionalización de variables e indicadores

 Variable Independiente:
Aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle)
 Variable dependiente:
Efecto antibacteriano
 Variable interviniente:
Periodo de incubación

50
 Tabla 2: Operacionalización de las variables.
VARIABLE DEFINICIÓN DIMENSIONES INDICADORES

V.I
Identificación de
Producto obtenido
metabolitos
Aceite esencial de de las hojas de Fitoquímico
secundarios
las hojas de molle molle ( Schinus Organoléptico
(Schinus molle L.) molle L).
Concentración a
determinar.
Aceite al 25%
Aceite al 50%
Aceite al 100%
Ciprofloxacino

V.D
Efecto del
Efecto producto en Medición del diámetro
Antibacteriano estudio sobre el Microbiológica de inhibición.
microorganismo: (Halos de inhibición)
cepas de
Escherichia coli
(ATCC 29522)

[Link] Tiempo necesario

Periodo de para que se 24, 48 y 72horas
incubación produzca una observacional
respuesta

2.5. Marco conceptual

2.5.1. Definición de términos básicos
Aceite esencial: también denominada esencia. Producto de las
plantas que comunican a los órganos que las contienen, olor agradable.
Químicamente son mezclas complejas de sustancias volátiles,
generalmente líquidas, que pueden extraerse por destilación, por arrastre
o por vapor de agua. Poseen las siguientes propiedades: antisépticos,
digestivos, antiespasmódicos y sedantes (Guerra L., 2011).
In vitro: es una técnica que consiste en realizar un experimento ya sea en
tubo de ensayo o un ambiente controlado (laboratorio).
Patógeno: microorganismo que daña a un huésped por invasión, lesión o
porque producen sustancias toxicas.
Cromatografía: es un método en las que los componentes se han de
separar y se distribuye en dos fases, una está en reposo, (fase
estacionaria) y la otra se mueve en dirección definida (fase móvil).
51
Müller Hinton agar: es un medio que carece de inhibidores, sustancia
gelatinosa que se usa como medio de cultivo para el crecimiento de una
gran cantidad de microorganismos tanto Gram positivos como Gram
negativo y hongos. Recomendado universalmente para la realización de la
prueba de sensibilidad. Medio de cultivo nutritivo no selectivo que
promueve el desarrollo microbiano.
Halos de inhibición: es la zona alrededor de un disco de antibiótico, en
el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar
inoculado con gérmenes.
Agente antibacteriano: el término se refiere a una sustancia cuyas
propiedades son capaces de eliminar agentes bacterianos o la inhibición
de su crecimiento o proliferación sin incurrir en el daño del objeto, ambiente
u organismo que las porta. Son en esencia fármacos como es el caso de
los antibióticos u otros agentes químicos capaces de combatir estos
cuerpos. (David V.2010).
Bacteria Gram positivas: se caracterizan porque ser uno de las grandes
bacterias, que se pueden teñir de azul oscuro o violeta por la tinción de
Gram. Es importante resaltar, que esta característica química se relaciona
estrechamente conectada a la estructura de la cobertura celular, en la que
se refleja una clase natural de clasificación bacteriana. La cobertura celular
de las bacterias Gram positivas presenta una membrana citoplasmática,
además de tener una pared celular integrada por una gruesa capa de
peptidoglucano, que rodea a la anterior. (Cavalier-Smith, T. (2006).
Bacterias Gram negativas: se distinguen porque no se tiñen de azul
oscuro o de violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado
claro, de allí es donde nace el nombre de gramnegativos, en la cual esa
característica está unida a la estructura di dérmica dada por la cobertura
celular, pues tiene una doble membrana celular, refiriéndose a la
presentación de dos membranas lipídicas donde se localizan en una fina
pared celular de peptidoglicano, a diferencia de las bacterias Gram
positivas sólo tienen una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano
es de mayor grosor. (Cavalier-Smith, T. (2006).

52
Bacterias anaerobias facultativas: bacterias que se caracterizan por una
peculiar versatilidad en el aspecto respiratorio, pues se desarrollan tanto
en presencia como en ausencia de oxigeno atmosférico ( Cavalier-Smith,
T. (2006).
Inhibición bacteriana: se manifiesta con la formación del halo de
inhibición bacteriano alrededor de pozos que contienen sustancias
antibacterianas en un agar con cultivos microbiológicos en placas Petri.
Cepa bacteriana: todos los organismos descendientes de un cultivo puro,
por tanto, con fenotipo y genotipo definidos, están pueden ser clínicas o
procedentes de un cepário, cultivadas bajo ciertos estándares (NCCLS
1997).
Efecto inhibidor: es el impedimento del crecimiento o destrucción
(muerte) de bacterias por la actividad de un agente antibacteriano
natural o sintético, su mecanismo de acción depende de la sustancia
antibacteriana; puede ser por aumento de la permeabilidad de la
membrana citoplasmática alterando los procesos esenciales de la célula
bacteriana y finalmente provoca su muerte o aprovechando la estructura
o función bioquímica entre el huésped y las bacterias, causando por
mecanismos específicos la muerte o inhibición del crecimiento de la
bacteria. Para evaluar in vitro el efecto inhibidor se empleará el método de
difusión en placas.
Extractos vegetales: se define como extracto vegetal el producto líquido
obtenido a partir de plantas o parte de ellas con varios procedimientos y
con varios solventes (Morales R.2000).
Solubilidad: capacidad de disolución de un compuesto químico; depende
de la forma en que se encuentran: aglicones libres (son insolubles en agua)
o heterósidos (son solubles en agua y mezclas hidroalcohólicas e
insolubles en disolventes orgánicos apolares. (Díaz C. et al, 2008).
Actividad antimicrobiana: capacidad que presenta un compuesto para
inhibir el aumento de población bacteriana o para eliminarla, se puede
expresar cuantitativamente con pruebas in vitro (Thaweboon, 2009).

53
 CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1. Tipo de investigación
 Descriptivo- Explicativo
Es descriptivo porque se buscó señalar las características del material
vegetal en una situación experimental.
Explicativo, debido a que se buscó determinar los efectos
antibacterianos in vitro del material vegetal, frente a cepas bacterianas.
 Comparativo
Se estableció la comparación de la muestra vegetal con el producto
comercial (Ciprofloxacino) , frente a cepas bacterianas.
La investigación realizada pertenece al nivel de investigación aplicada,
pues, sus resultados servirán para posibilitar tratamientos terapéuticos
alternativos en poblaciones vulnerables.
3.2. Diseño
Esta investigación asumió un diseño cuasi experimental, donde la muestra
vegetal fue sometida a experimento microbiológico “in vitro”.
3.3. Población y muestra
 Población vegetal:
Se recolectaron plantas de molle (Schinus molle L.) del distrito de
Lurigancho-Chosica, departamento de Lima.
 Muestra vegetal:
8 kilos de hojas de molle (Schinus Molle L.)

 Población microbiológica:
Microorganismo bacteriano de Escherichia coli
 Muestra microbiológica:
Cepas estandarizadas: Escherichia coli (ATCC® 25922™)

 Tamaño muestral: 80 mediciones o determinaciones.

54
3.4 Material de laboratorio
Materiales de vidrio
• Asa de siembra.
• Balones de vidrio de 100, 250, 500 ml.
• Matraces de 100 y 250 ml.
• Pipetas de 1, 5 y 10 ml.
• Placas petri de 10 x 150 mm.
• Probetas de 25 y 50 ml.
• Tubos de ensayo 13 x 100 mm y 15 x 150 mm.
• Vasos de precipitación de 250 y 500 m.
Equipos
• Autoclave.
• Balanza analítica.
• Estufa de cultivo a 37ºC.
• Mechero Bunsen.
• Micro pipetas de rango de 5-10 µl, 20-200 µl y 100-1000 µl.
• Refrigerador.
Equipo de Destilación por arrastre de vapor.
Medios de cultivo
• Agar Nutritivo.
• Agar Müeller Hinton.
• Caldo Müeller Hinton.
Reactivos
• Alcohol 70°.
• Agua destilada.

• Dimetilsulfóxido (DMSO).

Otros materiales
• Discos de papel filtro.
• Espátulas.

55
 • Gradillas.
• Pinzas estériles.
• Vernier
3.5 Técnicas e instrumentos de recolección de datos
Se elaboró una ficha de datos en donde se anotaron los resultados
del método de difusión en placas con discos de papel filtro. La recolección
de los datos se realizó de forma manual y visión directa.
Para la medición de los halos se utilizó el instrumento vernier calibrada
en milímetros. Se verificó cada una de las fichas para evitar errores u
omisiones en los datos que pudieran perjudicar la investigación. Para la
interpretación de los resultados en la evaluación de tipo cuantitativa se tomó
como referencia los diámetros de halo de inhibición y para la
interpretación de los resultados en la evaluación de tipo cualitativa se tomó
como referencia las pautas por Duraffourd (1983).

3.6. Procedimiento experimental

 Recolección de la muestra vegetal Schinus molle L. (Molle)
Se recolectaron las hojas de Schinus molle L. "molle" en el Pueblo de
San Antonio de Chaclla, (Distrito de Chosica), departamento de Lima, La
temperatura media oscila entre los 18° C. a 26° C. ubicación geográfica:
Altitud 911 msnm, Latitud Sur 11°56'14", Longitud Oeste 76°42'13”. La
muestra fue recolectada el 28 de enero entre las 7 am y 9 am. Se tuvo un
cuidado en la selección solo se tomaron las hojas verdes y que hayan
alcanzado un buen estado biológico, posteriormente se mantuvo un buen
estado de conservación, hasta la realización de la extracción. (Anexo 1).

 Preparación de la Muestra
Limpieza: eliminar residuos que podrían contaminar la muestra.
Secado: bajo sombra a temperatura Ambiente.
Selección: eliminar las hojas que presentan signos de deterioro.
Maceración: durante 8 días. (Anexo N° 2)

56
 3.7 Obtención del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle
L.)
Las hojas de cada planta, se secaron a temperatura ambiente,
durante ocho días en un lugar seco bajo cubierta y se trituraron
manualmente, logrando una cantidad de 800g. El material triturado fue
sometido a un en un balón de fondo plano con 2 litros de agua destilada,
el método usado para la extracción es: método de arrastre con vapor de
agua, donde éste es arrastrado por la corriente de vapor de agua que se
genera en la fuente de vapor, luego esta mezcla (vapor de agua y aceite)
es condensada mediante su paso por un refrigerante de vidrio, para luego
separar el aceite del agua por simple diferencias densidades, el
procedimiento duro 6 horas, a una temperatura de 110 V. (Motle, 1977);
(Guarnizo, 2009),

El aceite esencial destilado se recibió en un depósito estéril y

cerrado, aquí se pudo observar un estado difásico entre agua y aceite
esencial, debido a las diferencias de densidad. Esto permitió separar
el aceite esencial mediante el uso de pipetas Pasteur a un tubo de
vidrio con tapa rosca cerrado herméticamente envolviéndolo en papel
aluminio y almacenado a temperatura ambiente y en oscuridad hasta
su utilización. (Lagos, 2012). (Anexo 7).

- Análisis de calidad del aceite esencial de las hojas de molle:

 Características organolépticas:
Aspecto: Liquido cristalino
Color : Amarillo claro
Olor : Ligeramente teáceo

 Determinación de la concentración del aceite esencial

Probeta de 5 ml. vacía = 16.311 g.
Probeta de 5 ml. con aceite = 19.958 g.
Masa = 19.958 – 16.311 = 3.648g

57
Volumen = 3.980ml.

D = densidad
M = masa
V = volume
d= M 3.648 g d = 0,9165 g/ml
V 3.880 mL.

cc = 1000mg --------------- 1g
X -------------- 0,9165g
X= 916.5 mg/mL

Rendimiento del aceite esencial de las hojas de molle (RAE)

Se determinó el % de RAE por el método gravimetría-
volumétrico, para ello se realizó el método de arrastre por vapor
de agua en un equipo de destilación de vidrio. Obteniéndose 3.980
ml de aceite esencial a partir de la destilación de 8 kg de las hojas,
colocamos 500 gramos por una repetición de 5 veces en el equipo de
arrastre por vapor. Obteniendo un determinado volumen. (Lagos,
2012), (Azaña, 2010).

Para determinar la eficacia del aceite esencial. Se aplicó la siguiente

formula:
Se logró un rendimiento del 0,22 %
% RAE= Vol. A.E.(ml) x 100%
P. muestra (g)

% RAE = Porcentaje de rendimiento del aceite esencial.

Vol. AE = Volumen del aceite esencial obtenido. (3.80 ml)
P. muestra = Peso de la muestra a destilar. (2000 g)

% RAE = 3.80 ml x 100 = 0.19

58
 % RAE = 0, 22
Dikshit et al. (1986) Instituto Central de Plantas Medicinales y
aromáticas, India: Hojas frescas Hasta 0,8% (0,05-0,89).
Índice de refracción:
Índice de refracción es el cambio de dirección que experimenta
una onda al pasar de un medio a otro distinto. Es una constante que
depende del carácter y del estado de la sustancia analizada. Es un
indicador de pureza, el valor está relacionado con el grado de
saturación, con la razón cis/trans de los dobles enlaces y puede estar
influenciado con el daño que sufre el aceite tras la oxidación. Valor
normal 1.4600 y 1.5000 a más o menos 15 o 20 grados centígrados.

Análisis cromatográfico del aceite esencial de las hojas de molle

Se realizó íntegramente en el Laboratorio de Química
Inorgánica N° 12, en la Facultad de Ciencias de la Universidad
Nacional de Ingeniería (UNI). Para realizar esta determinación, se
inyectó la muestra en un cromatógrafo de gases equipado con
detector de ionización de llama (FID). El equipo empleado ha sido un
Varian modelo 450GC; la separación cromatográfica se ha realizado
a través de una columna capilar SUPELCOWAX T10 (de 30 m de
longitud, 530 μm de diámetro interno, 1 μm de espesor, y de fase
estacionaria) con inyector tipo split: 1/20, y el software usado fue el
Galaxie versión [Link].
La operación de inyección fue en modo split (partición de la muestra
antes que ingrese a la columna); el gas portador fue helio cuya
velocidad o flujo de gas de arrastre fue de 5 ml/min; con temperaturas
del horno programadas de 70ºC a 160ºC (con una pendiente o razón
de incremento de 4ºC/min), y la temperatura del inyector fue de 250ºC.
Las condiciones ambientales en las que se llevó a cabo la
determinación fueron, 23°C y 68% de humedad relativa.

59
3.8. Actividad antibacteriana
3.8.1. Obtención del microorganismo
Se trabajó con una cepa de bacteria estándar de Escherichia coli
(ATCC® 25922™)(AmericanType Culture Collection), producto diseñado solo
para propósito de estudio en investigaciones científicas in vitro,
información proporcionada por el Departamento de Salud y Servicios
Humanos para el Control y Prevención de Enfermedades y los Institutos
Nacionales para la Salud [Link]. La bacteria fue adquirida a través del
Laboratorio GenLab.
3.8.2. Reactivación de la cepa bacteriana
La cepa bacteriana de Escherichia coli (ATCC® 25922™), vino en un tubo
estéril la cual previamente se lo rehidrató con 0.5ml de peptona,
se tomó algunas gotas de la dilución para sembrarlas en agar sangre, se
incubó de 24-48 horas a 37°C, de donde se tomó las colonias para la siembra
en nuestro estudio, en agar Müeller Hinton por 24, 48 horas a 37°C. (Álvarez
& Boquet, 1996).
3.8.3. Preparación del inóculo bacteriano
Método de suspensión directa de colonias: este método es el más adecuado
para la preparación del inóculo.
Se tomó con un asa de kolle, 2 a 3 colonias del agar Müeller Hinton
previamente reactivadas , que se transfirieron a un tubo que contenía 5 ml.
solución salina 0.9% , se homogenizaron con el uso de un vortex,, hasta
alcanzar una turbidez de (1X108 UFC/ml) coincida con el estándar Nº 0.5 de
la escala de Mc Farland . (Álvarez & Boquet, 1996). Esto se logró,
comparando al tubo patrón que fue adquirido de una casa comercial de
laboratorio GenLab.
3.8.4. Preparación de la sustancia vegetal para el estudio
El aceite esencial estuvo en refrigeración hasta el momento de su uso, para
eso se procedió a realizar las diluciones utilizando como el solvente el
dimetilsulfóxido (DMSO). (Cedamanos & Mejía, 2014).
 Concentración: 100%, se usa el aceite esencial directamente (puro)
volumen final 500ml.

60
  Concentración: 50%, se prepara: en un tubo estéril se coloca 250ml
de aceite y 250 ml DMSO con un volumen final de 500ml. (Dilución
1:1).
 Concentración: 25%, se prepara: en un tubo estéril se 125 ml de aceite
y 375 ml de DMSO con un volumen final de 500ml. (Dilución 1:3).
(Anexo N° 8).

3.8.5. Preparación de los discos de sensibilidad

Para esta prueba se prepararon discos de sensibilidad con
antibióticos de papel filtro (Wathman Nº 42) de aproximadamente 6 mm de
diámetro, que se colocaron en un beaker de 100 ml con agua destilada para
su esterilización y desnaturalización del antibiótico en autoclave (121ºC, 15
lb por 15 minutos). Posteriormente, se vació el agua del beaker que contiene
la solución desnaturalizada y el beaker conteniendo los discos se los llevó a
estufa regulada a 100ºC por 1 hora para su secado, y posteriormente ser
usados. La actividad antibacteriana del aceite esencial se evaluó por el
método de difusión en disco. Se impregnaron los discos previamente
esterilizados de 6 mm de diámetro con una cantidad determinada
correspondiente a los cinco grupos de estudio.

3.8.6. Sensibilidad antibacteriana por el Método de disco difusión.

Método de Kirby-Bauer.(Método disco-placa-cultivo).(Udayakumar &
Hazzena, 2002). Se empleó el agar Müeller Hinton, dado que se
considera el mejor medio para las pruebas de sensibilidad de rutina y
se preparó como indica la casa comercial,las cuales fueron adquiridas en
Laboratorio de microbiológico Arez. Este método, que sufrió diferentes
modificaciones hasta que fue estandarizado por Kirby-Bauer en los Estados
Unidos en 1966, representa la prueba de susceptibilidad más ampliamente
utilizada en bacteriología clínica porque permite obtener resultados
bastante exactos mediante un método cuantitativo, semicuantitativo o
cualitativo, este último es el más utilizado.

61
 El Comité de Expertos de la OMS (NCCLS en su documento M7-T) publicó
las “Normas” para efectuar algunas modificaciones al descrito por Bauer, de
manera que los resultados sean comparables en todas partes del mundo.

3.8.7. Sembrado del inóculo bacteriano

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo
bacteriano de Escherichia coli (ATCC® 25922™) (estándar Nº 0.5 de la escala
de Mc Farland), con ayuda de la micropipeta, se transfirieron 100 µl de la
suspensión bacteriana en placas de agar Müeller Hinton, con el asa de
siembra, se diseminó en la superficie para asegurar una distribución
uniforme del inóculo. Se dejó secar la placa a temperatura ambiente durante
3 a 5 minutos.

3.8.8. Aplicación de los discos en las placas inoculadas

Posteriormente con unas pinzas estériles se procedió a colocar los discos de
sensibilidad a las placas:
Se utilizaron 5 grupos: control positivo, control negativo, aceite esencial al
100%, 50% y 25%. Cada uno de los grupos cuenta con 20 repeticiones.
Se procedió de la siguiente manera:
 Grupo I: control positivo, formado Ciprofloxacino 500mg, se dividió la placa
Petri en cuatro cuadrantes, donde se colocaron a cada uno de ellos se
colocaron los discos de sensibilidad previamente sumergida en la muestra
de interés. Se utilizaron un total de 20 repeticiones.
 Grupo II: control negativo, formado por agua destilada, se dividió la placa
Petri en cuatro cuadrantes, donde se colocaron los discos de sensibilidad
previamente sumergida en la muestra de interés. Se utilizaron un total de
20 repeticiones.
 Grupo III: aceite esencial puro al 100%, se dividió la placa Petri en cuatro
cuadrantes, donde se colocaron los discos de sensibilidad previamente
sumergida en la muestra de interés. Se utilizaron un total de 20
repeticiones.

62
 Grupo IV: aceite esencial con una concentración al 50%, se dividió la placa
Petri en cuatro cuadrantes, donde se colocaron los discos de sensibilidad
previamente sumergida en la muestra de interés. Se utilizaron un total de
20 repeticiones.
 Grupo V: aceite esencial con una concentración al 25%, se dividió la placa
Petri en cuatro cuadrantes, donde se colocaron los discos de sensibilidad
previamente sumergida en la muestra de interés. Se utilizaron un total de
20 repeticiones.

3.8.9. Incubación:
Una vez identificadas y rotuladas las placas se llevaron a incubación a 37 °C
.De tal manera que tuvimos 5 grupos de trabajo (control +, control -,
concentración del Molle al 100%, 50% y 25%.)
Las lecturas del halo de inhibición se realizaron por un periodo de 24, 48, 72
horas, con la ayuda del vernier previamente calibrado.
Posteriormente, se midió el diámetro del halo de inhibición del crecimiento de
los microorganismos y el cálculo del porcentaje del efecto inhibitorio relativo
respecto al control positivo, que se procedió aplicando la siguiente expresión
(Martínez, 1996).

3.8.10. Lectura del efecto antibacteriano del aceite esencial de las

hojas de molle (Shinus molle L.).
La lectura del efecto se realiza a las 24, 48 y 72 horas, una vez
transcurrido el tiempo indicado se procede a la medición e interpretación de
la zona circunda el disco, llamada halo de inhibición. Este informa si el
microorganismo es sensible, resistente o intermedio. La falta de desarrollo
alrededor del disco indica que la bacteria es “sensible” al antimicrobiano
selectivo, lo que significa que después de tratar al paciente infectado por el
microorganismo con las dosis habituales de dicho antimicrobiano se
observará una respuesta favorable al tratamiento. El crecimiento del
microorganismo alrededor del disco indica una cepa “resistente”, es decir,
una con la cual no se obtendrá ninguna respuesta terapéutica.

63
El tamaño de cada halo de inhibición depende de la sensibilidad de la cepa
al antimicrobiano, de la velocidad de crecimiento del microorganismo, de
la cantidad (carga) de antimicrobiano selectivo presente en el disco y de la
capacidad para difundir en el medio.
Para la interpretación de los resultados se tomó como referencias las
pautas por (Duraffourd y Lapraz, 1983). La evaluación se realizó tanto
cuantitativamente por medición numérica de los halos de inhibición, y
cualitativamente siguiendo las pautas por Duraffourd; para demostrar la
susceptibilidad que tienen los microorganismos al aceite esenciales.
Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.
Sensibilidad baja (sensible +): para un diámetro entre 9 a 14 mm.
Sensibilidad Medio (sensible ++): para un diámetro entre 14 y 20 mm.
Sensibilidad alta (+++): para un diámetro superior a 20 mm.

64
 CAPÍTULO IV

PRESENTACIÓN Y ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Se realizó el estudio in vitro en la especie bacteriana: de Escherichia
coli (ATCC® 25922™) de la actividad antibacteriana del aceite esencial
de las hojas de Schinus molle L. (Molle), Se trabajaron 5 grupos de estudio
en los que incluye control positivo al ciprofloxacino, control negativo al agua
destilada y diferentes concentraciones del aceite, cada una de ellas con 20
repeticiones por cada sustancia a las 24, 48 y 72 horas. Comprobándose
sensibilidad de la bacteria mencionada.
Los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas a la planta en
estudio han sido agrupados en tablas y gráficos, para la mejor interpretación
de los resultados que se detallan a continuación. Se utilizó el diseño
completamente aleatorio, debido a que este es un diseño de simple
distribución, siendo útil para métodos y técnicas de laboratorio.

4.1. Procesamiento de los datos

Se utilizó el programa SPSS® , programa estadístico que permitió
obtener referencias y cálculos estadísticos, utilizando estadística no
paramétrica bajo pruebas de normalidad Kolmogorov-Smirnov y Shapiro-
Wilk, determinando el análisis de Kruskal-Wallis, para comparar el efecto
de varias sustancias empleadas en el estudio a las 24, 48 y 72 horas.
Evaluación de la susceptibilidad de la cepa de Escherichia coli ATCC 25922
por método de difusión en placas con discos de papel filtro, impregnados
en: Aceite esencial de Schinus molle (molle) 25% ,50% y 100%,
Ciprofloxacino 500mg, .Agua destilada.

65
 4.2. Análisis Cromatográfico (GC-FID).
4.2.1. Metabolitos volátiles secundarios del aceite esencial de las hojas
de molle (Shinus molle).
De acuerdo al análisis de cromatografía de gases con detector de
ionización de llama (GC-FID), el cromatograma resultante (Anexo Nº 15)
registró cinco picos que representan los cinco metabolitos volátiles
mayoritarios presentes en la muestra de aceite. Para identificar tales
compuestos fue necesario comparar el tiempo de retención experimental en
minutos, con el tiempo de retención teórico también en minutos; ya que en el
ensayo, a la salida de la columna cada componente es registrado por el
detector en un determinado tiempo y bajo la forma de picos; estos tiempos
fueron comparados con tiempos de retención estándares establecidos para
cada tipo de compuesto (estándares pertenecientes al laboratorio Nº 12 de la
Universidad Nacional de Ingeniería de Lima (UNI), Perú).
El tiempo de retención experimental, el tiempo de retención teórico y el área
de cada pico, se registran en el cuadro leyenda del mismo cromatograma
(Anexo Nº 11). Los elementos identificados según su tiempo de retención, se
registran en la tabla Nº 9.

Tabla 3: Tiempos de retención e identificación de los metabolitos secundarios aislados por GCFID del aceite esencial de
Shinus molle L. (molle)

TRE TRT
N° (min) (min) % Área Identificación

1 3,24 3,22 0,23 Limoneno

2 5,13 5,03 0,100 α-pineno

3 5,73 5,82 0,034 β-pineno

4 5,96 5,22 0,029 β-mirceno

α-
5 7,20 6,60 0,011 felandreno
Fuente: Universidad Nacional de Ingeniería (UNI).
TRE (min): Tiempo de retención experimental en minutos.
TRT (min): Tiempo de retención teórico en minutos;
66
GC-FID: cromatografía de gases con detector de ionización de llama FID.

De acuerdo a los estudios precedentes, como los de Viturro et al.(2010), los

elementos identificados en el cuadro anterior, pertenecen al grupo de
componentes característicos del aceite esencial de molle peruano
(Ayacucho), a excepción del β-mirceno; no obstante Viturro et al. (2010)
lograron reconocer otros compuestos como el p-cimeno, Δ-cadineno, Ƭ-
cariofileno, D-germacreno, B-germacreno, aunque en proporciones muy
bajas.

4.2.2 Importancia de los metabolitos volátiles hallados

 Limoneno: Fórmula química: C10H16
El limoneno tiene un amplio uso en la industria farmacéutica y alimentaria
como aromatizante y para dar sabor. Es usado, por ejemplo, en la obtención
de sabores artificiales y en la fabricación de dulces, bebidas o goma de
mascar. También es empleado como disolvente de resinas, pigmentos, tintas,
pinturas, en la fabricación de adhesivos o como aditivo en fragancias. Otro de
sus usos es el de insecticida porque no es tóxico para los seres humanos y
animales domésticos, ni perjudicial para la jardinería.
 α-pineno: Fórmula química: C10H16
El β-pineno es un monoterpeno bicíclico, precursores de fragancias;
precisamente la industria de fragancias y saborizantes. Empleado
principalmente en la producción de mirceno y geraniol, resinas terpénicas, y
como precursor para producir acetato de nopilo, el cual se utiliza para la
elaboración de perfumes; así mismo, el β-pineno reacciona con
paraformaldehído para formar el nopol, un alcohol utilizado en diversos
productos de uso doméstico y como materia prima para la obtención de otros
compuestos sintéticos (Alarcón et al., 2005).
 β-mirceno: Fórmula química: C10H16
Se usa como un intermediario para la producción de diversas fragancias.
 α-felandreno: Fórmula química: C10H16

67
 Tiene aplicaciones industriales mayormente como un producto químico para
síntesis; participando en mezclas con otros metabolitos volátiles como el
pineno y limoneno, para aromatizar bebidas, licores, perfumes, dentífricos,
jabones y cremas cosméticas (Ortuño, 2006).

4.3. Actividad antibacteriana del aceite esencial de las hojas de molle

Se evaluó la actividad antibacteriana del aceites esencial Schinus molle
L.(molle) frente a cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™), el resultados
de la actividad antibacteriana (Anexo Nº 14), en los cinco grupos en estudio,
se realizó la lectura de los halos de inhibición en un periodo de tiempo de 24,
48 y 27 horas.

Fuente: Elaboración propia

Figura 12: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™), frente al
aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), concentración al 25% con un halo de inhibición de Medio de
9mm (escala de Duraffourd-Lapraz

68
 Fuente: Elaboración propia
Figura 13: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™), frente al
aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), concentración de 50% con un halo de inhibición de Medio de
14mm (escala de Duraffourd-Lapra

Fuente: Elaboración propia

Figura 14: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™), frente al
aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.), al 100% con un halo de inhibición promedio de 29mm (escala de
Duraffourd-Lapraz).

Es posible que la actividad antibacteriana se deba a las mezclas y

cantidad de los componentes del aceite esencial de las hojas de molle (Shinus
molle L.), en especial de sus componentes volátiles, alteren la permeabilidad
de la membrana plasmática de la célula bacteriana, haciéndola más
vulnerable a los cambios del medio y susceptible al envejecimiento, ya que
69
 actualmente no se tiene un conocimiento exacto de cuál es el mecanismo de
acción de los aceites esenciales, así mismo, los aceites esenciales provocan
la modificación del pH del medio impidiendo el normal desarrollo de la
bacteria.

Fuente: Elaboración propia

Figura 15: Elaboración propia

Fuente: Elaboración propia

Figura 16: Susceptibilidad antibacteriana (Método de disco difusión) de Escherichia coli (ATCC® 25922™), frente al
control negativo: agua destilada con un halo de inhibición de 0mm / 6 mm incluyen el disco de sensibilidad en las
mediciones. (Escala de Duraffourd-

4.4. Presentación y análisis de los resultados estadísticos

Se realizó el estudio in vitro en la especie bacteriana: de Escherichia
coli (ATCC® 25922™) y de la actividad antibacteriana del aceite esencial

70
de las hojas de molle (Schinus molle L), Se trabajaron 5 grupos de estudio
en los que incluye control positivo al ciprofloxacino, control negativo al agua
destilada y diferentes concentraciones del aceite, cada una de ellas con 20
repeticiones por cada sustancia a las 24, 48 y 72 horas. Comprobándose
sensibilidad de la bacteria mencionada.
Los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas a la planta en
estudio han sido agrupados en tablas y gráficos, para la mejor interpretación
de los resultados se utilizó el diseño completamente aleatorio, debido a que
este es un diseño de simple distribución, siendo útil para métodos y
técnicas de laboratorio microbiológicos.
Los datos fueron procesados a través del programa estadístico SPSS®
mediante las pruebas de normalidad Kolmogorov-Smirnov y prueba no
paramétrica Kruskal-Wallis trabajados a un nivel de confianza del 95%.

4.4.1. Datos estadísticos

Los Datos obtenidos de los halos de inhibición o susceptibilidad de la
cepa de Escherichia coli (ATCC® 25922™) por método de difusión en placas
con discos de papel filtro, impregnados en: aceite esencial de las hojas de
molle ( Schinus molle) al 100%, 50%, y 25%, agua destilada como control
negativo y Ciprofloxacino como control positivo.

En la ficha de recolección de datos se han registrado todas las lecturas de

los tamaños de los halos de inhibición en mm. de los cinco grupos, cada
grupo con 20 repeticiones; la sustancia empleada en el estudio son las hojas
de molle (Shinus molle L.) frente a la cepa de Escherichia coli (ATCC®
25922™), por el método de difusión en disco, en este caso se determinó la
Media de cada grupo y el periodo o tiempo de incubación que fueron tomadas
a las 24, 48 y 72 horas.

71
Tabla 4: Resultados de lecturas de los halos de inhibición en mm de los cinco grupos de estudio en diferentes tiempos.
RESULTADOS: LECTURAS DE LOS HALOS DE INHIBICION EN mm
GRUPO: 4 GRUPO: 5
GRUPO 1 ACEITE GRUPO: 2 GRUPO:3 ACEITE CIPROFLOXACIN AGUA CONTROL
100% ACEITE 50% 25% O (+) (-)
24 72 24 72 24 72 24 72 24 72
Repetición h. 48h. h. h. 48h. h. h. 48h. h. h. 48h. h. h. 48h. h.
1 12 18 25 10 12 13 6 8 10 21 34 38 6 6 6
2 13 24 29 9 12 13 7 9 12 24 35 37 6 6 6
3 14 21 25 11 13 14 8 10 11 23 36 39 6 6 6
4 13 20 28 12 14 15 7 9 10 26 37 39 6 6 6
5 12 19 26 12 15 16 6 8 11 25 34 36 6 6 6
6 13 18 29 11 14 16 7 9 12 24 36 37 6 6 6
7 14 20 27 10 13 14 6 7 10 23 32 34 6 6 6
8 15 22 30 11 13 14 7 8 8 23 34 35 6 6 6
9 12 23 29 9 12 15 6 7 9 25 36 37 6 6 6
10 16 28 32 10 13 15 7 8 8 23 32 34 6 6 6
11 14 23 30 11 12 14 7 9 10 22 31 32 6 6 6
12 15 26 31 9 13 15 6 7 8 23 33 34 6 6 6
13 13 20 27 10 14 14 7 8 9 22 28 30 6 6 6
14 15 24 30 10 13 14 6 8 8 23 31 31 6 6 6
15 12 21 27 9 14 15 7 7 9 24 29 32 6 6 6
16 15 25 33 8 10 13 7 8 10 21 28 30 6 6 6
17 13 24 33 10 14 15 6 8 9 20 29 33 6 6 6
18 12 23 31 11 14 16 6 8 10 25 33 35 6 6 6
19 16 24 32 10 15 16 7 9 11 26 37 38 6 6 6
20 13 25 33 9 14 16 7 9 12 28 39 40 6 6 6
MEDIANA 13 23 29.5 10 13 15 7 8 10 23 33.5 35 6 6 6

Fuente: Elaboración propia.

Interpretación:

 Nulo: < 8mm

 Sensible límite: 9-14
 Sensible medio 15-19mm
 Sensible Alto: > 20mm.

72
 Media de los halos de inhibición a las 24 horas

25.0 23.6

Halos de inhibición (mm)

20.0 GRUPO 1 ACEITE
100%
GRUPO: 2 ACEITE
15.0 13.6 50%

10.2 GRUPO:3 ACEITE

25%
10.0
6.7 6
GRUPO: 4
CIPROFLOXACINO
(+)
5.0

0.0
Grupos de estudio

Fuente: Elaboración propia.

Figura 17: Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las
24 horas de incubación a 37°C.
(Los valores de halos de inhibición incluyen tamaño de discos 6 mm)

En la figura se muestra la Media de los halos de inhibición de los 5

grupos en estudio a las 24 horas de incubación, producidas por acción del
aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.) en diferentes
concentraciones, frente a cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™).
Apreciándose que al aumentar las concentraciones del aceite, mayor es el
efecto antibacteriano. El grupo No4 (control positivo) ciprofloxacino tuvo una
tendencia positiva con respecto a los demás grupos, muestra mayor efecto
antibacteriano, con un halo de inhibición de 23.6 mm, mientras las
concentraciones de los aceites esenciales de las hojas de molle (Shinus molle
L.) al 100% es de 13.6mm, al 50% 10.2mm. La sensibilidad de ambos grupos
está en el límite (8-14mm) . El grupo No3 una concentración al 25% de aceite
esencial, no presenta ningún efecto antibacteriano, puesto que según la
escala de DURAFFOURD, los valores de < 8mm, su acción es nula. El control
negativo, no se evidencia halos de inhibición porque contiene solo agua.

73
 Media de los halos de inhibición a las 48 horas

35.0 33.2

Halos de inhibición (mm)

30.0
GRUPO 1 ACEITE
100%
25.0 22.4
GRUPO: 2 ACEITE
20.0 50%
GRUPO:3 ACEITE
15.0 13.1 25%
GRUPO: 4
10.0 8.2 CIPROFLOXACINO
6 (+)
5.0
0.0
Grupos de estudio

Fuente: Elaboración propia.

Figura 18: Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las 48 horas de
incubación a 37°C.
(Los valores de halos de inhibición incluyen tamaño de discos 6 mm)
En la presente figura se muestra la Media de los halos de inhibición
de los 5 grupos en estudio a las 48 horas de incubación, producidas por acción
del aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.) en diferentes
concentraciones, frente a cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™).
Apreciándose que al aumentar las concentraciones del aceite, mayor es el
efecto antibacteriano. El grupo No4 (control positivo) ciprofloxacino tuvo mayor
efecto antibacteriano, con un halo de inhibición de 33.2 mm, seguido el aceite
esencial con una concentración de 100% de 22.4mm, al 50% 13.1mm. El
grupo No3 una concentración al 25% de aceite esencial, no presenta ningún
efecto antibacteriano, puesto que según la escala de DURAFFOURD, los
valores de < 8mm, su acción es nula, por ser control negativo, no se evidencia
halos de inhibición porque contiene solo agua.

74
 Media de los halos de inhibición a las 72 horas

40.0
34.8
35.0
Halos de inhibición (mm)
29.4 GRUPO 1 ACEITE
30.0 100%
GRUPO: 2 ACEITE
25.0 50%
20.0 GRUPO:3 ACEITE
14.7 25%
15.0 GRUPO: 4
9.9 CIPROFLOXACINO
10.0 6 (+)

5.0
0.0
Grupos de estudio

Fuente: Elaboración propia.

Figura 19:Medias de los halos de inhibición en cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™) a las 72
horas de incubación a 37°C

(Los valores de halos de inhibición incluyen tamaño de discos 6 mm)

En la figura se muestra la Media de los halos de inhibición de los
5 grupos en estudio a las 72 horas de incubación, producidas por acción del
aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.) en diferentes
concentraciones, frente a cepas de Escherichia coli (ATCC® 25922™).
Apreciándose que al aumentar las concentraciones del aceite, mayor es el
efecto antibacteriano. El grupo No4 (control positivo) ciprofloxacino su efecto
antibacteriano 34.8mm, se ha detenido con respecto a los demás grupos, el
aceite esencial: la concentración de 100% de 29.4mm, al 50% 14.7.1mm
(sensibilidad media ++) al 25% el diámetro de inhibición es 9.9mm
(sensibilidad limite +). Según la escala de DURAFFOURD, los valores de <
8mm, su acción es nula. El control negativo, no se evidencia halos de
inhibición porque contiene solo agua.

75
4.2 Prueba de Hipótesis
Contrastación de la Hipótesis General

El aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L) presenta

significativamente efecto antibacteriano en cepas de Escherichia
coli (ATCC® 25922™) in vitro, comparado con el Ciprofloxacino.

Hipótesis estadística

H0: El efecto antibacteriano con respecto al diámetro de los

halos de inhibición es igual en los grupos de estudio.
H1: El efecto antibacteriano con respecto al diámetro de los halos
de Inhibición son diferentes entre los grupos de estudio.

Nivel de Significancia
Para la presente investigación se trabajó con un nivel de confianza
del 95%, correspondiente a un nivel de significancia (α) de 5% =
0.05.

Determinación del Estadígrafo

Se identificó que la variable de agrupación determina cinco
grupos, con lo que se estableció la necesidad de utilizar
estadígrafos para más de dos muestras independientes

76
 a) Determinación de la distribución normal de los datos

Se aplicó la prueba de normalidad como análisis estadístico, en función del

tamaño de la muestra de estudio. Para la Prueba de Normalidad de datos
inicialmente se verificó que las muestras tomadas provengan de una
población con distribución normal. Esto fue realizado con las pruebas de
Kolmogorov - Smirnov y Shapiro – Wilk, donde probamos: Ho (hipótesis nulal)
donde la muestra proviene de una población con distribución normal y
Ha (Hipótesis alterna) donde la muestra no proviene de una población
con distribución normal, como se expresa en la siguiente tabla.

Fuente: Elaboración propia.

Figura 20: : Pruebas de normalidad Kolmogorov - Smirnov y Shapiro – wilk de las muestras en estudio obtenido de
SPSS®
La figura nos muestra la prueba de Shapiro-Wilk, que se utiliza en
muestras realizadas con menos de 50 repeticiones. Al aplicar la prueba de
Shapiro-Wilk se obtuvo una Sig. Asintót. (p) < 0.05 en todos los grupos que
contienen diferentes concentraciones de Shinus molle (molle)
es menor a 0,05 (estadísticamente significativo), es decir, que se tiene un
95% de confiabilidad. Bajo este resultado se rechaza la hipótesis nula (Ho) y
se acepta la hipótesis alterna (H1), la misma que demuestra la existencia de

77
 diferencias de sus medias respecto al valor de la tendencia central de las
[Link] cual nos demuestra que no todas las medias son iguales.

Según la tabla No 5, La prueba de Shapiro-Wilk, donde nos indica que los

valores de significancia son menores que 0,05 . significa que tenemos un 95%
de confiabilidad, por ello se rechaza la Ho para todas las muestras, debido
a que menciona que las muestras proceden de poblaciones con la misma
distribución de probabilidad (medias similares); por lo tanto, se toma la Ha
donde ninguna de las sustancias proviene de una población con
distribución normal.

Tabla 5:Prueba de Shapiro-Wilk

Shapiro-
Wilk
Estadístico gl Sig.
GRUPO 1 ACEITE 100% 0.142 45 0.023 0.919 45 0.004

GRUPO 2 ACEITE 50% 0.154 45 0.009 0.937 45 0.016

GRUPO 3 ACEITE 25% 0.194 45 0.000 0.916 45 0.003

GRUPO 4 CONTROL 0.152 45 0.011 0.903 45 0.001

POSITIVO
CIPROFLOXACINO (+)
GRUPO 5 CONTROL 44 44
NEGATIVO AGUA
Fuente: Elaboración propia.

4.4.3 Análisis por Kruskal-Wallis: comparación de tres o más grupos a

las 24, 48 y 72 horas.
Se determinó realizar pruebas no paramétricas para demostrar la igualdad de
medias (promedios); una de estas pruebas es la Kruskal-Wallis, prueba no
paramétrica utilizada para la comparación de varias muestras o grupos.

Toma de Decisión
Al encontrarse un P-Valor menor a 0.05, se rechazó la hipótesis nula, por lo
que se establece que hay dependencia de las variables; es decir, que los halos

78
de inhibición varían significativamente con el tiempo de incubación, a mayor
concentración, mayor halo de inhibición.

4.4.4 Estadísticos descriptivos del análisis de Kruskal-Wallis a las 24

horas
La siguiente tabla obtenida del sistema SPSS®, según análisis de Kruskal-
Wallis, describe los datos de mayor importancia e incidencia del estudio
realizado, muestra en relación al número de repeticiones de las pruebas (N)
los valores de máximos, mínimos, medias y desviación estándar para cada
grupo de estudio y sus respectivas concentraciones correspondientes a las 24
horas.
En la tabla No 6, se describe la relación existente entre cada grupo de estudio.
Se muestran los resultados de los diámetros de inhibición: mínimo, máximo,
DS y las Medias de los datos obtenidos en milímetros, que fueron leídas a las
24 horas, en donde se puede observar que el efecto antibacteriano del aceite
esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) no alcanza la sensibilidad
adecuada, la concentración al 100% muestra una sensibilidad limite; en las
demás concentraciones el efecto es nulo. El control positivo Ciprofloxacino
muestra una buena sensibilidad con un diámetro de inhibición 28mm,
tendencia a incrementar su poder de acción frente a la Escherichia coli
(ATCC® 25922™); el control negativo no muestra ningún halo de inhibición
Tabla 6: Análisis de Kruskal-Wallis a las 24 horas

Estadístico Descriptivo 24 horas

Mínimo Máximo Media Desv. Estándar
N
GRUPO 1 ACEITE 100%
20 12 16 13 1.35
GRUPO 2 ACEITE 50%
20 8 12 10 1.07
GRUPO 3 ACEITE 25%
20 6 8 6 0.59
GRUPO 4 CONTROL POSITIVO
20 20 28 23 1.93
GRUPO 5 CONTROL
NEGATIVO AGUA
20 6 6 6 0.0
Fuente: Elaboración propia.

79
 En la tabla No 7, se describe la relación existente entre cada
grupo de estudio; se muestra el resultado de los diámetros de inhibición:
mínimo, máximo, DS y las Medias de los datos obtenidos en milímetros, que
fueron leídas a las 48 horas, en donde podemos observar que el efecto
antibacteriano del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) ha
tenido una tendencia positiva, alcanza la sensibilidad efectiva, la
concentraciones al 100% muestra una sensibilidad alta con una media de 22
mm, al 50% una sensibilidad limite 13mm, al 25% el efecto es nulo. El control
positivo Ciprofloxacino muestra la Media de inhibición 33mm, mostrando una
tendencia a incrementar su poder de acción frente a la Escherichia coli
(ATCC® 25922™); el control negativo no muestra ningún halo de inhibición

Tabla 7: Análisis de Kruskal-Wallis a las 48 horas

Estadístico Descriptivo 48 horas

Mínimo Máximo Media Desv. Estándar

N
GRUPO 1 ACEITE 100%
20 18 28 22 2.72
GRUPO 2 ACEITE 50%
20 10 15 13 1.21
GRUPO 3 ACEITE 25%
20 7 10 8 0.83
GRUPO 4 CONTROL POSITIVO

20 28 39 33 3.19
GRUPO 5 CONTROL NEGATIVO AGUA

20 6 6 6 0.0
Fuente: Elaboración propia.

En la Tabla N° 8, se describe la relación existente entre cada grupo de

estudio; se muestra el resultado de los diámetros de inhibición: mínimo,
máximo, DS y las Medias de los datos obtenidos en milímetros, que fueron
leídas a la 72 horas, en donde podemos observar que el efecto antibacteriano
del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.) ha tenido una
tendencia positiva a través del tiempo, alcanza la sensibilidad efectiva; la
concentraciones al 100% muestra una muy sensibilidad con una Media de 29
mm, al 50% una sensibilidad limite 14 mm; este valor se mantiene en el
tiempo, con una sensibilidad al límite medio; al 25% el efecto es nulo. El
control positivo Ciprofloxacino se ha detenido el crecimiento del diámetro con
80
una Media de inhibición 34mm. Se puede afirmar que si posee efecto
antibacteriano del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.)
frente a la Escherichia coli (ATCC® 25922™), en las concentraciones 100 y
50%. El control negativo no muestra halos de inhibición.

Tabla 8: Análisis de Kruskal-Wallis a las 72 horas

Estadístico Descriptivo 72 horas

Mínimo Máximo Media Desv. Estándar
N
GRUPO 1 ACEITE 100%

20 25 33 29 2.6
GRUPO 2 ACEITE 50%

20 13 16 14 1.04
GRUPO 3 ACEITE 25%

20 8 11 9.8 1.35
GRUPO 4 CONTROL POSITIVO
20 30 39 34 2.84
GRUPO 5 CONTROL NEGATIVO
AGUA

20 6 6 6 0.0
Fuente: Elaboración propia.

81
4.4.5 Prueba de Kruskal-Wallis entre las muestras en estudio

Fuente: Elaboración propia.

Figura 21: Kruskal-Wallis de muestras independientes

4.4.6 Grado de sensibilidad según Duraffourd – Lapraz

Determinación del grado de sensibilidad de cepas de Escherichia coli
(ATCC® 25922™), frente a diferentes grupos a distintas concentraciones. En
esta tabla se observa el análisis cualitativo según las pautas de Duraffourd-
Lapraz los cuales determinan que halos que obtengan 8mm o inferiores
tendrán un efecto nulo antibacteriano, de 9 a 14mm obtendrán una
sensibilidad límite, de 15 a 19mm una sensibilidad media y sumamente
sensible si fue superior a 20mm.
Se puede observar que las concentraciones al 100% tienen una sensibilidad
alta (+++)de 85% de los resultados, mientras un 15% tienen una sensibilidad
media (++). Las concentraciones al 50% muestran una sensibilidad media (++)
al 80% y un 20% presentan una sensibilidad limite (+). La concentración al
25%, tiene 90% una sensibilidad nula. El control positivo Ciprofloxacino, tiene
una sensibilidad alta (+++), superior a cualquier sustancia natural.

82
Tabla 9: Efecto antibacteriano del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle L.), concentración: 100 %, 50 %
y al 25 % en cepas de Scherichia coli (ATCC® 25922™), según la según escala de Duraffourd y Lapraz.

Halos de Inhibición
Sensibilidad Sensibilidad Sensibilidad Sensibilidad
Nula ( -) limite(+) 9- media(++) alta(+++) Numero de
GRUPOS menos de 8mm 14mm 15-19mm mayor 20mm repeticiones
GRUPO 1
ACEITE
100% 0 (0%) 0 (0%) 3 (15%) 17(85%) 20
GRUPO 2
ACEITE
50% 0 (0%) 4(20%) 16(80%) 0 (0%) 20
GRUPO 3
ACEITE
25% 18(90%) 2(10%) 0 (0%) 0 (0%) 20
GRUPO 4
CONTROL
POSITIVO 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 20(100%) 20
GRUPO 5
CONTROL
NEGATIVO
AGUA 20 (100%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 20
Total

38 6 19 37 100

Fuente : Propia

4.5 Discusión de resultados

Los metabolitos secundarios volátiles hallados en el presente estudio difieren
de algunas investigaciones. Los resultados obtenidos mediante el
cromatógrafo de gases, acoplado a detector de ionización en llama (GC-FID)
expresan haber sido identificados cinco metabolitos: β-mirceno, α-felandreno,
α-pineno, limoneno, β-felandreno como componentes mayoritarios; sin
embargo, Dikshit et al. (1986) reconoció la presencia adicional de otros
componente tales como el p-cimeno, β-cariofileno y D-limoneno, que forman
parte de los componentes mayoritarios del aceite esencial obtenido de las
hojas de molle (Shinu molle L). Viturro et al. (2010) hicieron un análisis a gran
escala en muestras de aceite esencial del fruto del molle de Costa Rica, Brasil,
Ecuador, Perú, Bolivia y Argentina; en dicho resumen se puede notar que los
83
compuestos α- felandreno, β-felandreno, α-pineno, β-pineno, limoneno, p-
cimeno y mirceno son los más comunes, por otra parte, las investigaciones
realizadas por Guerra, L. (2011), determinan que los componentes
mayoritarios del aceite esencial del fruto de Schinus molle son: mirceno, α-
felandreno, δ-cadineno, limoneno, α-cadinol y β-felandreno, al igual que
Deveci et al. ( 2010) que analizaron el aceite de Schinus molle de la región de
Turquía, encontrando que los compuestos volátiles mayoritarios son: α-
cadinol y δ-cadineno (Devici O., et al., 2010).

Cuando se evaluó el efecto antibacteriano del aceite esencial de las

hojas de molle (Shinus molle L.) en cinco grupos, usando
concentraciones al 100%, 50% y 25% con controles, positivo
(ciprofloxacino), negativo (agua destilada), la respuesta de los diámetros
o halos de inhibición se realizaron en tres tiempos 24, 48 y 72 horas de
periodo de incubación; sin embargo, Rivadeneira-Cajas, D. et al. (2015);
evaluaron in vitro el potencial biosida del aceite en un periodo de incubación
de 24 y 72 horas. Las concentraciones usadas para evaluar la actividad
antibacteriana varían de un investigador a otro, como Cedamanos, et al.
(2014), que usaron S. mutans ATCC 25175 frente al aceite esencial de
Schinus molle, cuyo efecto fue de alto grado a concentraciones del 25% y
50% a las 24 horas, usando la técnica de difusión en pozos; al igual, Gonzales
E. (1998), utilizo varias bacterias Gram positivas y Gram negativas, las
respuestas del efecto fueron leídas a las 24 horas de incubación.
En la prueba de susceptibilidad, se empleó el método Difusión en disco,
estandarizado por Kirby-Bauer, método que tiene gran utilidad en los
ensayos in vitro, el cual se fundamenta en la inhibición del crecimiento
bacteriano, mediante la difusión de sustancias activas en un medio
sólido y posteriormente se evidencia por la formación de halos claros. El
procedimiento experimental se procedió de acuerdo a las
recomendaciones NCCLS ((National Committee For Clinical
Laboratory Standards, 2000).

84
Se comprobó que el efecto antibacteriano del aceite esencial de las hojas de
molle con el ciprofloxacino frente a cepas de Escherichia coli, muestran la
eficacia del producto natural, al igual que Baroni E. (2010) que comparó
ambos productos, observando halos de inhibición semejantes al presente
estudio; asimismo, Vázquez-Gonzales J. (2011) compara el efecto inhibidor
del molle con un producto comercial, que al observar la respuesta
comparativa, resalta el beneficio de la planta para ser usado como una
alternativa terapéutica, un método ecológico y económico para combatir
infecciones microbianas.

85
 CAPÍTULO V

5.1. Conclusiones
 El análisis de cromatografía de gases con detector de ionización de
llama (GC-FID) identificó cinco componentes terpénicos mayoritarios
en el aceite esencial de la hojas de molle (Shinus molle L.), de los
cuales cuatro son monoterpenos cíclicos: limoneno, α-pineno, β-
pineno y α-felandreno, y un monoterpeno acíclico: el β-mirceno.

 La concentración del aceite esencial de la hojas de molle (Shinus

molle L.) que tiene mayor efecto antibacteriano, frente a cepas de
Escherichia coli (ATCC® 25922) es la concentración al 100 por
ciento, con un halo de inhibición de 29.4 mm, seguida de la
concentración al 50 por ciento que tuvo 14.7mm., según la escala de
Duraffourd .

 El aceite esencial de la hojas de molle (Shinus molle L.), al 100 por

ciento de concentración, presenta efecto antibacteriano, en cepas
de Escherichia coli (ATCC® 25922), en comparación con el
Ciprofloxacino. Ambos productos presentan sensibilidad alta (> de
20mm).

86
5.2. Recomendaciones
1. Complementar estudios de la composición química del aceite esencial
de las hojas de molle (Shinus molle L,) en diferentes regiones del Perú
para determinar los componentes volátiles mayoritarios responsables
del efecto antibacteriano en cepas de interés clínico.

2. Realizar nuevos trabajos de investigación sobre el aprovechamiento

del aceite esencial de molle en el campo farmacéutico, cosmético y
alimentario, teniendo como base este estudio, ya que las mezclas de
sus componentes químicos hacen de este un producto potencialmente
industrializable.

3. Realizar extracciones de diferentes partes de la planta (fruto, semilla,

tallos frescos, etc.), ya que de ello depende la cantidad y calidad de
aceite esencial.

87
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

No hay ninguna fuente en el documento actual.

No hay ninguna fuente en el documento actual.
1. Olga Lock de Ugaz (1994) Investigacion Fitoquimica. Métodos en el estudio
de productos naturales. 2° ed. Peru.

1. Iannacone J. Alvariño L. (1994.) “Toxicidad de Schinus molle L. (Anacardiaceae)

a cuatro controladores Olga Lock de Ugaz. Investigacion Fitoquimica. Métodos
en el estudio de productos naturales. 2° ed. Peru:

2. Iannacone J. Alvariño L. (2010) “Toxicidad de Schinus molle L.

(Anacardiaceae) a cuatro controladores biológicos de plagas agrícolas en el
Perú. Articulo Scielo versión On-lineISSN2448-8445
[Link]

3. Llanos Arapa S. (2012) Extracción y caracterización del aceite esencial de

molle (schinus molle l.) Escuela Académica Profesional de Ingeniería en
Industrias Alimentarias Facultad de Ciencias Agropecuarias UNJBG, Tacna-
Perú.

4. Alba, A., (2009). Actividad cicatrizante de una pomada con aceite esencial de
Schinus molle L. (molle) en ganado vacuno con heridas infectadas y en
ratones. Ciencia e Investigación.

5. Annacone J. et al (2010). Toxicidad de Schinus molle L. (Anacardiaceae) a

cuatro controladores biológicos de plagas agrícolas en el Perú.

6. Méndez K. (2004) “Estudio comparativo in vitro del efecto antibacteriano del

Schinus molle y el paramonoclorofenol alcanforado en bacterias anaerobias
facultativas y estrictas de necrosis pulpar” [Tesis para optar el título de
cirujano-dentista]. Universidad Nacional Federico Villarreal. Lima.

7. Daysi Rivadeneira-Cajas, Patricia Álvarez-Velasco “aceite esencial de

Schinus molle l. (molle) como potencial antimicrobiano sobre Streptococcus
mutans. estudio in vitro.

8. Cruz-Carrillo Anastasia, et al , evaluación in vitro del efecto antibacteriano de

los extractos de Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle y Silybum
marianum.

88
9. Guerra L. 2011, evaluación de la actividad antimicrobiana y antioxidante de
aceites esenciales de plantas usadas n medicina tradicional.
[Tesis Doctoral facultad de ciencias Biologicas]. Universidad nacional del
[Link]:
[Link]

10. Clemente Sotteccani Claudia. Actividad antimicrobiana del extracto etanólico

de las hojas de Schinus molle l. “molle. [Tesis para optar el Título
profesional de Químico Farmacéutico]. Universidad Alas Peruanas. Lima
2017.

11. Gonzalez, A. (2009). Actividad cicatrizante de una pomada con aceite

esencial de Schinus molle l. “molle” en ganado vacuno con heridas
infectadas y en ratones. Tesis de grado,Farmacia y Bioquímica ,Ibarra,
Ecuador. Baroni, [Link] al “Actividad antibacteriana in vitro de
ciprofloxacina sobre Escherichia coli: efecto del suero bovino y tamaño
del inóculo (2014).

12. Herrrera Ascoy, Nereyda Pamela. Efecto del extracto hidroalcohólico de

hojas de Schinus molle L. “molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-
hemolítico “in vitro”. [Tesis Doctoral facultad de ciencias Biologicas].
Universidad Nacional de [Link] 2013. URI:
[Link]

13. Trejo R. Efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de las hojas de

Schinus molle L.(molle). [Tesis para optar el título profesional de Químico
Farmacéutico]. Universidad Nacional San Cristobal de Huamanga. Ayacucho
– Peru 2014.

14. Molinari E. Estudio fitoquímica y potencial biosida de los aceites extraídos de

Schinus molle. [Tesis de grado]. Perú: Universidad Nacional Agraria la Molina;
2013.

89
15. Dikshit, A., Naqvi, A. y Husain, A. (1986). Schinus molle: a New Source of
Natural Fungitoxicant. Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants of
India.Recuperadoel08deoctubrede2010.
[Link]

16. Diaz C. et al. Composición química del aceite esencial de Schinus molle y su
actividad citotóxica en líneas celulares tumorales. Instituto Clodomiro Picado,
Facultad de Microbiología, Universidad de Costa Rica, San José, Costa Ric
Nat Prod Res. 2008; 22 (17): 1521-34. doi: 10.1080 / 14786410701848154.

17. Alonso MJ, Allue J. Fitoterapia para los trastornos urinarios: retención hídrica,
infecciones urinarias, litiasis renal. En: Castillo E, Martínez I. Manual de
Fitoterapia. Elssevier Masson, Barcelona, 2007, pp 315-327.

18. Sánchez Merino J. et al Sensibilidad microbiana de Escherichia coli

en infecciones urinarias extrahospitalarias. Rev. Scielo, Actas Urol Esp vol.27
no.10 nov./dic. 2003. ISSN 0210-4806.

19. Jiménez M, Fernández e. Infecciones urinarias en la mujer y en el paciente

geriátrico. En: Navío S, editor. Patología urológica infecciosa. Madrid. Aula
Médica, Ediciones 1999: 87-102.

20. NCCLS: Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that
grow aerobically - fourth edition; approved standard. NCCLS document M7-A4
(ISBN 1-56238-309-4). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400; Wayne,
Pennsylvania 19087, USA 1997.

21. Fernández a, Lantero m, Gastañares MJ et al. Escherichia coli resistente a

quinolonas en el área sanitaria de un hospital de 650 camas. Actas Urol Esp
1994; 18 (6): 634-638.

22. Albarracín, G. y Gallo, S. (2003). Comparación de dos métodos de extracción

de aceite esencial de Piper aduncum (cordoncillo) procedente de la zona
cafetera. UniversidadNacionaldeColombia.mayode2010 de
90
 [Link]
[Link].

23. Pigrau Serrallach C. Servicio de Enfermedades Infecciosas Hospital Vall

d’Hebron Universitat Autónoma. Barcelona. REV. 2013 Ergon C/ Arboleda, 1.
28221 Majadahonda (Madrid).

24. Naber KG. Which fluoroquinolones are suitable for the treatment of urinary
tract infections? Int J Antimicrob Agents. 2001;17(4):331-341.

25. Matthew A. Croxen et al. Recent Advances in Understanding Enteric

Pathogenic Escherichia coli. Clin. Microbiol. Rev. October 2013 26(4): 822-
880.

26. Morales R. Estudio de la extracción del aceite esencial de la semilla del

Schinus molle Linneo a escala banco. [Tesis, para optar el título de ingeniero
químico]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2000.

27. Toledo E. Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de orégano

(Origanum vulgare) sobre distintas cepas aisladas de alimentos. Lima:
Universidad Nacional del Callao;2006.

28. Diaz P, Torres R. Actividad antibacteriana in vitro del aceite esencial de

Schinus molle. [Tesis, para optar el título de ingeniero químico farmacéutico].
Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 1998.

29. Bandoni, A., Retta, D., Di Leo Lira, P. y Van Baren, C. (2009). ¿Son realmente
útiles los aceites esenciales? Sociedad Latinoamericana de Fitoquímica.
Recuperdo el 21 de junio de 2010. En:
[Link]

30. Abasto K, Avilés E, Céspedes G, Claros E, Guillén V, Luna N, Morales M.

Plantas medicinales y sus usos. Revista científica Burbuja universitaria.
[Revista en Internet]. Citado el 24 mayo de 2010. En:
[Link]
91
31. Milojevié S. Z., T. D. Stojanovié, R. Palié, M. L. Lazié, V. B. Veljkovié. "Kinetics
of distillation of essential oil from comminuted ripe juniper (Juniperus
communis L.) berries". Biochemical Engineering Joumal39: 547-553, 2008.

32. Lagos E. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro del aceite

esencial Thymus vulgaris l. “tomillo” frente a Porphyromonas gingivalis atcc
33277 causante de gingivitis. [Tesis de grado]. Perú: Unidad Nacional Jorge
Basadre Groh; 2012.

33. Vargas, A. y Bottia, E. (2008). Estudio de la composición química de los

aceites esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de
Bolívar y el Peñón. Universidad Industrial de Santander. Ruperado.
[Link]
s%20cibimol/Edwin%20Bottia%20y%20Adriana%[Link].

34. Durafford, C. y Lapraz, J. 1983. Cuadernos de Fitoterapia Clínica. Editorial

Masson S.A. Barcelona.

35. García J. y Picasso J. 2000. “Compendio de Microbiología Medica”. Ediciones

Harcourt, S.A. Madrid España.

36. Huguet, J. 2002. Determinación de factores de virulencia asociados a

Escherichia coli Entero hemorrágica en cepas peruanas aisladas entre 1999-
2001. Revista Peruana Medicina Experimental (Perú). vol.19(2).

37. Viturro, C., Bandoni, A., Dellacassa, E., Serafini, L. y Elder, H. (2010).
Normalización de productos naturales obtenidos de especies de la flora
aromática latinoamericana- Problemática Schinus en Latinoamérica. Proyecto
CYTED IV.20. Recuperado el 09 de agosto de 2011, de
[Link]

38. Lock de ugaz, O. 1994. Investigación Fitoquímica, Métodos en el Estudio de

Productos Naturales. 2da Edición. Editorial Pontificia Universidad Católica
del Perú. Lima.
92
39. National committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2000.
Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow
aerobically. Approved Standard M7-A5. Wayne.

40. Vargas, A. y Bottia, E. 2008. Estudio de la composición química de los aceites

esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de
Bolívar y el Peñón. Tesis de la Universidad Industrial de Santander.
Bucaramanga – Colombia.

41. Universidad Nacional de Ingeniería – UNI. (2012). Determinación de la

composición química del aceite esencial de molle, muestra N° 01 AELP
(Informe Técnico N° 1562-11-LAB12). Lima: Facultad de Ciencias.

42. Ruffinengo, S., Maggi, N., Damiani, N., Faverin, C. y Eguaras, M. (2007).
Eficacia del aceite esencial micro encapsulado de Schinus molle sobre Varroa
Destructor. Dirección Nacional de Alimentos de Buenos Aires. Recuperado: el
18 octubre de 2011, de [Link]
3/apicola/01_info/a_sintesis/ lista/[Link].

43. Brooks G, Butel J, Ornston N. Microbiología Médica de Jawetz, Melnicky

44. Adelberg. 15º edición. México: Editorial Manual Moderno; 1996.

45. biológicos de plagas agrícolas en el Perú. Articulo Scielo 2010 versión On-
lineISSN2448-8445 [Link]

46. Llanos Arapa S. Extracción y caracterización del aceite esencial de molle

(schinus molle l.) Escuela Académica Profesional de Ingeniería en Industrias
Alimentarias (2012) Facultad de Ciencias Agropecuarias UNJBG, Tacna-
Perú.

47. Alba, A., (2009). Actividad cicatrizante de una pomada con aceite esencial de
Schinus molle L. (molle) en ganado vacuno con heridas infectadas y en
ratones. Ciencia e Investigación.

48. Annacone J. et al (2010). Toxicidad de Schinus molle L. (Anacardiaceae) a

cuatro controladores biológicos de plagas agrícolas en el Perú.

93
49. Méndez K. “Estudio comparativo in vitro del efecto antibacteriano del Schinus
molle y el paramonoclorofenol alcanforado en bacterias anaerobias
facultativas y estrictas de necrosis pulpar” [Tesis para optar el título de
cirujano-dentista]. Universidad Nacional Federico Villarreal. Lima. 2004.

50. Daysi Rivadeneira-Cajas, Patricia Álvarez-Velasco “aceite esencial de

Schinus molle l. (molle) como potencial antimicrobiano sobre Streptococcus
mutans. estudio in vitro.

51. Cruz-Carrillo Anastasia, et al , evaluación in vitro del efecto antibacteriano de

los extractos de Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle y Silybum
marianum.

52. Guerra L. 2011, evaluación de la actividad antimicrobiana y antioxidante de

aceites esenciales de plantas usadas n medicina tradicional.
[Tesis Doctoral facultad de ciencias Biologicas]. Universidad nacional del
[Link]:
[Link]

53. Clemente Sotteccani Claudia. Actividad antimicrobiana del extracto etanólico

de las hojas de Schinus molle l. “molle. [Tesis para optar el Título
profesional de Químico Farmacéutico]. Universidad Alas Peruanas. Lima
2017.

54. Gonzalez, A. (2009). Actividad cicatrizante de una pomada con aceite

esencial de Schinus molle l. “molle” en ganado vacuno con heridas
infectadas y en ratones. Tesis de grado,Farmacia y Bioquímica ,Ibarra,
Ecuador. Baroni, [Link] al “Actividad antibacteriana in vitro de
ciprofloxacina sobre Escherichia coli: efecto del suero bovino y tamaño
del inóculo (2014).

55. Herrrera Ascoy, Nereyda Pamela. Efecto del extracto hidroalcohólico de

hojas de Schinus molle L. “molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-

94
 hemolítico “in vitro”. [Tesis Doctoral facultad de ciencias Biologicas].
Universidad Nacional de [Link] 2013. URI:
[Link]

56. Trejo R. Efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de las hojas de

Schinus molle L.(molle). [Tesis para optar el título profesional de Químico
Farmacéutico]. Universidad Nacional San Cristobal de Huamanga. Ayacucho
– Peru 2014.

57. Molinari E. Estudio fitoquímica y potencial biosida de los aceites extraídos de

Schinus molle. [Tesis de grado]. Perú: Universidad Nacional Agraria la Molina;
2013.
58. Dikshit, A., Naqvi, A. y Husain, A. (1986). Schinus molle: a New Source of
Natural Fungitoxicant. Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants of
India.Recuperadoel08deoctubrede2010.
[Link]

59. Diaz C. et al. Composición química del aceite esencial de Schinus molle y su
actividad citotóxica en líneas celulares tumorales. Instituto Clodomiro Picado,
Facultad de Microbiología, Universidad de Costa Rica, San José, Costa Ric
Nat Prod Res. 2008; 22 (17): 1521-34. doi: 10.1080 / 14786410701848154.

60. Alonso MJ, Allue J. Fitoterapia para los trastornos urinarios: retención hídrica,
infecciones urinarias, litiasis renal. En: Castillo E, Martínez I. Manual de
Fitoterapia. Elssevier Masson, Barcelona, 2007, pp 315-327.

61. Sánchez Merino J. et al Sensibilidad microbiana de Escherichia coli

en infecciones urinarias extrahospitalarias. Rev. Scielo, Actas Urol Esp vol.27
no.10 nov./dic. 2003. ISSN 0210-4806.

62. Jiménez M, Fernández e. Infecciones urinarias en la mujer y en el paciente

geriátrico. En: Navío S, editor. Patología urológica infecciosa. Madrid. Aula
Médica, Ediciones 1999: 87-102.

95
63. NCCLS: Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that
grow aerobically - fourth edition; approved standard. NCCLS document M7-A4
(ISBN 1-56238-309-4). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400; Wayne,
Pennsylvania 19087, USA 1997.

64. Fernández a, Lantero m, Gastañares MJ et al. Escherichia coli resistente a

quinolonas en el área sanitaria de un hospital de 650 camas. Actas Urol Esp
1994; 18 (6): 634-638.

65. Albarracín, G. y Gallo, S. (2003). Comparación de dos métodos de extracción

de aceite esencial de Piper aduncum (cordoncillo) procedente de la zona
cafetera. UniversidadNacionaldeColombia.mayode2010 de
[Link]
[Link].

66. Pigrau Serrallach C. Servicio de Enfermedades Infecciosas Hospital Vall

d’Hebron Universitat Autónoma. Barcelona. REV. 2013 Ergon C/ Arboleda, 1.
28221 Majadahonda (Madrid).

67. Naber KG. Which fluoroquinolones are suitable for the treatment of urinary
tract infections? Int J Antimicrob Agents. 2001;17(4):331-341.

68. Matthew A. Croxen et al. Recent Advances in Understanding Enteric

Pathogenic Escherichia coli. Clin. Microbiol. Rev. October 2013 26(4): 822-
880.

69. Morales R. Estudio de la extracción del aceite esencial de la semilla del

Schinus molle Linneo a escala banco. [Tesis, para optar el título de ingeniero
químico]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2000.

70. Toledo E. Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de orégano

(Origanum vulgare) sobre distintas cepas aisladas de alimentos. Lima:
Universidad Nacional del Callao;2006.

96
71. Diaz P, Torres R. Actividad antibacteriana in vitro del aceite esencial de
Schinus molle. [Tesis, para optar el título de ingeniero químico farmacéutico].
Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 1998.

72. Bandoni, A., Retta, D., Di Leo Lira, P. y Van Baren, C. (2009). ¿Son realmente
útiles los aceites esenciales? Sociedad Latinoamericana de Fitoquímica.
Recuperdo el 21 de junio de 2010. En:
[Link]

73. Abasto K, Avilés E, Céspedes G, Claros E, Guillén V, Luna N, Morales M.

Plantas medicinales y sus usos. Revista científica Burbuja universitaria.
[Revista en Internet]. Citado el 24 mayo de 2010. En:
[Link]

74. Milojevié S. Z., T. D. Stojanovié, R. Palié, M. L. Lazié, V. B. Veljkovié. "Kinetics

of distillation of essential oil from comminuted ripe juniper (Juniperus
communis L.) berries". Biochemical Engineering Joumal39: 547-553, 2008.

75. Lagos E. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro del aceite

esencial Thymus vulgaris l. “tomillo” frente a Porphyromonas gingivalis atcc
33277 causante de gingivitis. [Tesis de grado]. Perú: Unidad Nacional Jorge
Basadre Groh; 2012.

76. Vargas, A. y Bottia, E. (2008). Estudio de la composición química de los

aceites esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de
Bolívar y el Peñón. Universidad Industrial de Santander. Ruperado.
[Link]
s%20cibimol/Edwin%20Bottia%20y%20Adriana%[Link].

77. Durafford, C. y Lapraz, J. 1983. Cuadernos de Fitoterapia Clínica. Editorial

Masson S.A. Barcelona.

78. García J. y Picasso J. 2000. “Compendio de Microbiología Medica”. Ediciones

Harcourt, S.A. Madrid España.

97
79. Huguet, J. 2002. Determinación de factores de virulencia asociados a
Escherichia coli Entero hemorrágica en cepas peruanas aisladas entre 1999-
2001. Revista Peruana Medicina Experimental (Perú). vol.19(2).

80. Viturro, C., Bandoni, A., Dellacassa, E., Serafini, L. y Elder, H. (2010).
Normalización de productos naturales obtenidos de especies de la flora
aromática latinoamericana- Problemática Schinus en Latinoamérica. Proyecto
CYTED IV.20. Recuperado el 09 de agosto de 2011, de
[Link]

81. Lock de ugaz, O. 1994. Investigación Fitoquímica, Métodos en el Estudio de

Productos Naturales. 2da Edición. Editorial Pontificia Universidad Católica
del Perú. Lima.

82. National committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2000.

Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow
aerobically. Approved Standard M7-A5. Wayne.

83. Vargas, A. y Bottia, E. 2008. Estudio de la composición química de los aceites

esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de
Bolívar y el Peñón. Tesis de la Universidad Industrial de Santander.
Bucaramanga – Colombia.

84. Universidad Nacional de Ingeniería – UNI. (2012). Determinación de la

composición química del aceite esencial de molle, muestra N° 01 AELP
(Informe Técnico N° 1562-11-LAB12). Lima: Facultad de Ciencias.

85. Ruffinengo, S., Maggi, N., Damiani, N., Faverin, C. y Eguaras, M. (2007).
Eficacia del aceite esencial micro encapsulado de Schinus molle sobre Varroa
Destructor. Dirección Nacional de Alimentos de Buenos Aires. Recuperado: el
18 octubre de 2011, de [Link]
3/apicola/01_info/a_sintesis/ lista/[Link].

86. Brooks G, Butel J, Ornston N. Microbiología Médica de Jawetz, Melnicky

98
87. Adelberg. 15º edición. México: Editorial Manual Moderno; 1996.

99
ANEXOS

100
ANEXO 1

101
102
ANEXO 2:Constancia emitida por el Herbario San Marcos (USM)

103
104
ANEXO 3: Certificado de calidad de las Cepas Escherichia Coli. (ATCC 29522)

105
106
ANEXO 4: Certificado de calidad de los medios de cultivo Agar

Código Producto: PA901004

Descripción: Agar Mueller Hinton Placa 90x15 mm

Lote: MH0198

Fecha Elaboración: 15/02/2018

Fecha Vencimiento: 15/04/2018

El agar se preparó a partir del medio deshidratado BD Mueller Hinton Agar, siguiendo las
instrucciones del fabricante y se adicionó 5% de sangre estéril de carnero.

Ensayos

Apariencia Medio de cultivo ámbar Conforme

claro
Esterilidad Incubación a 35°C x 24 Conforme
horas
Escherichia coli ATCC 25922 Incubación a 35°C x 24 Crecimiento.
horas
Staphylococus aureus ATCC Incubación a 35°C x 24 Crecimiento.
25923 horas
Pseudomonas aeruginosa Incubación a 35°C x 24 Crecimiento.
ATCC 27853 horas

Lic. Luis Alvarado Rios

CTMP 6765

107
 ANEXO 5: Materia Prima

Figura 22:Árbol, hojas y flores de Schínus molle L. (Molle).

Fig. N° 23: Recolección y limpieza

108
Fig. N°24: Secado y maceración del Schinus molle L. (molle).

109
ANEXO 6:Tamizaje fitoquímico del extracto de hojas Shinus molle L. (molle)

 Alcaloides

Figura N° 23: Figura 23: Metabolitos secundarios, Alcaloides.

Figura 24: Metabolitos secundarios, flavonoides.

ANEXO 7:Prueba de Solubilidad del extracto de las hojas del “molle”

110
 Figura 25: Ensayo de solubilidad.

ANEXO 8: Cromatografía en capa fina del extracto de la hoja de Shinus molle (molle).
Alcaloides y Flavonoides

Figura 26:Sembrado en cromatografía de capa fina.

111
 Figura
27:

preparación
del solvente, corrida de las muestras

Figura 28: manchas de desplazamiento en la luz

UV 254 nm.

Figura 29:

resultados de Cromatografía capa fina

112
 ANEXO 9: Cuantificación de Flavonoides totales por espectrofotometría UV-VIS

Lectura de las diluciones en espectrofotómetro UV-VIS a 415 nm

113
 1.50000
CURVA
y = 7.0988x - 0.0162 DE CALIBRACION
R² = 0.9997

1.00000

0.50000

0.00000
0.00000 0.05000 Absorbancia
0.10000 0.15000Lineal 0.20000
(Absorbancia)0.25000

Figura 30: Obtención del aceite esencial de las hojas de molle (Schinus molle
L.)

Armando el equipo de trabajo Controlando siempre la temperatura

Figura 31: equipo de extracción

ANEXO 10: Preparación de los grupos experimentales

114
 Se realizó las diluciones utilizando solvente Dimetilsulfoxido (DMSO)

Figura 32: dilución de las concentraciones

ANEXO 11: Evaluación del Efecto Antibacteriano del Aceite Esencial de Schinus molle L. (molle).

Obtenidas del laboratorio Gen Lab.

Figura 33:bacteria Escherichia coli ATCC 25922.

115
 Figura 34: Activación de las cepas bacteriana.

Patrón de Mc Farland adquirido de una Comparando la homogenización de la

casa comercial turbidez con el estándar de Mc Farland

Figura 35:Estandarización del inoculo bacteriano según la escala de 0.5 Mc Farland.

116
Figura 36: Cepas puras de Escherichia coli ATCC 25922.

117
 Figura 37: Sembrado del inoculo bacteriano en agar Müeller Hinton:

Se utilizaron 5 grupos: control

Se procedió a la colocación de los positivo, control negativo, aceite
discos de sensibilidad a las placas esencial al 100%, 50% y 25%.

Figura 38:Aplicación de los discos de sensibilidad en las placas sembradas.

118
 Procedemos a envolver con papel crack
para llevar a la estufa a incubación

Figura 39:Incubación a 37 °C por un periodo de 24, 48 y 72 horas.

Figura 40:Estufa conteniendo las placas Petri sembradas.

119
ANEXO 12:Resultadoen placas de loshalos de inhibicion

Figura N° 40: Susceptibilidad antibacteriana

de Escherichia coli ATCC 25922 frente al aceite
esencial de las hojas de Shinus molle (Molle)
por el Método de disco difusión a las 72 h.
(Halo de inhibición).

120
 Figura N°41: Halos de inhibición
en concentraciones al 25% con el
control negativo.
Resultados obtenidos a las 72 h.

Figura 41: Halos de inhibición del aceite esencial al 50 y 100% en cultivos bacteriano de E. coli a las 72 horas con el
control negativo.

121
ANEXO 13: Resultados de Cromatografía (FID).

Fuente: Universidad Nacional de Ingeniería (UNI)

Figura Nº 43: Cromatograma de picos para la muestra de aceite
esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.)

Fuente: Universidad Nacional de Ingeniería (UNI)

Figura Nº44: Lectura de la cromatografía de los 5 picos de la
muestra de aceite esencial de las hojas de molle (Shinus molle L.)

122