Hipótesis: La técnica de tinción negativa permite observar cápsulas bacterianas.
Objetivos:
General:
Aplicar la técnica de tinción negativa sobre una extensión de muestra de caldo de cultivo, para
observar cápsulas bacterianas.
Específicos:
- Limpiar con agua y jabón, y desinfectar con etanol 70% dos placas portaobjetos.
- Realizar una extensión de caldo de cultivo junto con el colorante nigrosina en una de
las placas portaobjetos.
- Observar al microscopio, utilizando el lente objetivo 100x y con el diafragma casi
cerrado para aumentar el contraste.
INTRODUCCION
Las tinciones negativas se realizan con colorantes caracterizados porque no pueden fijarse ni
penetrar en las células, provocando que las bacterias se vean “en negativo” o sin teñir, en
contraste con el fondo que sí aparece coloreado (López Goñi, Díaz , & Gamazo, 2005). Este
método sirve para observar inclusiones refráctiles que no se tiñen con facilidad, entre los que se
encuentran las cápsulas bacterianas y se suele combinar con una tinción simple para facilitar la
observación celular (Rodríguez, Gamboa, Hernández , & García, 2005). Los colorantes utilizados
pueden ser tinta china (suspende partículas de carbón) o nigrosina (colorante negro insoluble
en agua), que constituyen una suspensión coloidal que no penetra la cápsula, sino que precipita
a su alrededor (Negroni, 2009). Las cápsulas, son capas gelatinosas gruesas constituidas por
exopolímeros casi siempre de naturaleza polisacárida, que la propia bacteria excreta a través de
su pared celular y cuya presencia no es estrictamente necesaria para la supervivencia bacteriana
fuera de su hábitat natural (López Goñi, Díaz , & Gamazo, 2005). Dependiendo del tipo de
bacteria, la cápsula cumple diferentes funciones como, protección frente a la desecación,
defensa contra el ataque de virus bacterianos y de los efectos de metales pesados que le
resultan tóxicos, promueve la adhesión de las bacterias a superficies y además algunas bacterias
que la poseen, tienen la capacidad de infectar o invadir produciendo enfermedades, ya que su
presencia no permite que los glóbulos blancos las fagociten (Vera García, 2004).
RESULTADOS
Se tomaron muestras de tres diferentes caldos de cultivos para realizar la extensión y tinción
con nigrosina de cápsulas bacterianas. La imagen 1 muestra la extensión realizada con una
muestra de bacillus subtilis, donde se aprecian bacilo aparentemente aislados por toda la placa.
La imagen 2 es el resultado de una extensión de muestra de Staphilococcus aureus, donde
además de estafilococos se observan cocos libres. Mientras que en la imagen 3 se observa el
resultado de una extensión de una muestra de E. coli, donde se ven con dificultad bacilos
aislados. Todas las observaciones se las realizaron enfocando en 100x, y todas presentaban un
fondo oscuro (no negro) que hacía contraste con las bacterias, lo que permitió evidenciar la
presencia de cápsulas bacterianas.
DISCUSIÓN
Para las extensiones de las tres muestras de cultivo realizadas, la tinción negativa de capsulas
bacterianas logró su objetivo, permitiendo identificar formas y agrupaciones bacterianas a partir
de la observación de bacterias sin tinción que hacen contraste con el fondo oscuro teñido con
nigrosina. Sin embargo, la presencia de estas cápsulas pudo haber sido evidenciada de mejor
manera si la tinción negativa se complementaba con una tinción simple, que tiñera la bacteria
pero no a la cápsula, mostrándola como un halo refringente que rodea a la bacteria sobre un
fondo oscuro (Negroni, 2009). Además de esto, se pudo haber aumentando el contraste
cerrando el diafragma del condensador (López Goñi, Díaz , & Gamazo, 2005).
Bibliografía
López Goñi, I., Díaz , R., & Gamazo, C. (2005). Manual Práctico de Microbiología. Tercera
edición. Barcelona: MASSON.
Negroni, M. (2009). Microbiología Estomatológica, Fundamentos y guía práctica. Buenos Aires:
MÉDICA PANAMERICANA.
Rodríguez, E., Gamboa, M., Hernández , F., & García, J. (2005). Bacteriología Genereal.
Principios y Prácticas de Laboratorio. Costa Rica: UCR.
Vera García. (2004). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA.Segunda Edición. Costa Rica:
EUNED.
