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Guía de Clonación de ADN

La clonación de ADN es una técnica que hace copias idénticas de un fragmento de ADN como un gen mediante la extracción y fragmentación del ADN, la unión de los fragmentos a un vector de replicación y la introducción en células receptoras para seleccionar colonias con el ADN recombinante.

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Guía de Clonación de ADN

La clonación de ADN es una técnica que hace copias idénticas de un fragmento de ADN como un gen mediante la extracción y fragmentación del ADN, la unión de los fragmentos a un vector de replicación y la introducción en células receptoras para seleccionar colonias con el ADN recombinante.

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¿Qué es la clonación de DNA?

La clonación de ADN es una técnica de biología molecular


que hace muchas copias idénticas de un fragmento de
ADN, como un gen.
Usos de la clonación de ADN:

•Productos biofarmacéuticos.

•Terapia génica.

•Análisis genético.
LOS PASOS PARA LA CLONACIÓN:

 Extracción y fragmentación especifica del DNA del


organismo de interés.

 Unión de los fragmentos de DNA: fragmentos del DNA que


nos interesa + vector de transformación y replicación.

 Introducción en las células receptoras del DNA


recombinante.

 Selección de colonias aisladas que porten moléculas de


DNA recombinante.
Extracción y fragmentación del DNA
 Obtención del DNA:
 Lisis Celular: La pared bacteriana se degrada mediante lisozimas y se lisa
con EDTA y SDS
 Purificación del DNA: Degradación de las proteínas y el RNA con protesas
y RNAasas.
 Fragmentación del DNA mediante enzimas de restricción:

Las del Tipo I.


Las de Tipo III.
Las endonucleasas de tipo II.
UNIÓN DE LOS FRAGMENTOS DE DNA A NUESTRO VECTOR.
Vectores de clonación
Plásmidos
Cósmidos y fagémidos.

Los fagémidos son


plásmidos bacterianos
unidos a un origen de
replicación de un fago
de DNA monohebra.
Permiten obtener el
DNA de cada hebra
por separado con un
fago auxiliar
INTRODUCCIÓN DEL DNA EN CÉLULA
HUÉSPED: TRANSFORMACIÓN.
Transformación mediada por Ca2+

Electroporación.

Lipofección.

Microinyección.

Biobalística.

Fusión de protoplastos.
SELECCIÓN DE COLONIAS AISLADAS QUE PORTEN
MOLÉCULAS DE DNA RECOMBINANTE.

 Técnicas de detección de productos génicos:

 Southern blot

 Secuenciación directa de fragmentos de DNA:

 Método de Sanger.

 Método de Maxam y Gilbert


Referencias bibliográfica

Alarcón, J. (2003). Clonación de ADN. [online] Khan Academy.


Available at: https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-
dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/overview-dna-cloning
[Accessed 14 Mar. 2019].

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