ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 03

TEMA: CULTIVO DE MICROORGANISMOS.

NOMBRES: CODIGOS:
Henry Caluña 142
Caluña Miguel 145
Cellan Dariana 146
Cujilema Lisseth 0026
Castro Pedro 0047
Cholota Luz 0038
Campusano Alex 0035
Cruz Dayana 0001
Duchicela Katty 0005
CURSO: 3ro “A”

FECHA: 18/11/2018

1°OBJETIVOS
Objetivo General.
Identificar distintos tipos de siembra poniendo en práctica lo aprendido en clases para
determinar las características presentes.
Objetivo Especifico
- Aprender los diferentes tipos de siembra: siembra por extensión, siembra en estrías
y siembra en profundidad.
- Conocer la presencia de movilidad en el crecimiento de microorganismos en medios
de crecimiento semi sólidos.
- Identificar los tipos de morfología coloniales de microorganismos presentes en las
siembras de cultivo.
- Realizar la cuantificación de bacterias presentes mediante la aplicación de fórmulas.

2° MARCO TEORICO
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra(inóculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Para sembrar en
microbiología es necesario mantener la habitación sin corrientes de aire y estar al lado de
la llama de un mechero (no más de 15 cm. de distancia). También se puede trabajar bajo
campana, o en flujo laminar, previa esterilización con luz UV. (Rodriguez, 2018)

Entre los tipos de siembras tenemos

2.1 Siembra en medio solido

2.1.1.-Los métodos de vertido en placa y extensión en placa En estos métodos, las

suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Se siguen
estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se
puede realizar en una sola etapa. En el método de vertido en placa, las muestras diluidas
se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas
en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y
serán más grandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se
siembran directamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con ayuda de
un asa de Diralsky de cristal estéril. (Roja, 2017)

La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie.

En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Las dos
técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor
número de colonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto se eligen
cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de
microorganismos. (Roja, 2017)

2.1.2.- El método de siembra por estría en placa Es el método más fácil y el más usado
para obtener cultivos axénicos .Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de
la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido
preparado en una placa Petrí (a las placas Petri también se les denomina simplemente
placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van
depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se
flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa
la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo
este proceso varias veces se logra separar células individuales, las placas se incuban en
un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número
suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente
representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. (Roja, 2017)

2.2.-Siembra en medios semisólidos

2.2.1.-Siembre por punción.: Se siembra por picadura o punción utilizando un hilo. Este
tipo de medio contiene una proporción menor de agar que los medios sólidos. El medio
queda inoculado al introducir el hilo en profundidad, pero sin tocar el fondo del tubo,
retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. En
medio semisólido se podrá comprobar si el microorganismo es o no móvil, ya que en el
primer caso se observará que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo
la picadura, detectándose turbidez. Este tipo de siembra en picadura sirve, también, como
otro método de conservación de microorganismos anaerobios facultativos. (Rodriguez,
2018)
2.3.- Siembra en caldos
Es una siembra directa a partir de la muestra en estudio. Si se trabaja con hisopo, descargar
el contenido del mismo en este medio de cultivo. Medio de cultivo utilizado para
propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos
nutricionales. Está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos,
aguas y otros materiales de importancia sanitaria. (Britania, 2018)
3. PROCEDIMIENTO.

Diluciones seriadas
1.- Preparar agua peptonada
2.- Colocar 9mL del agua peptonada a los tubos de ensayo y 90mL en un Erlenmeyer,
esterilizar a 121°C durante 30 minutos
3.- Pesar 10 gramos de suelo y colocar en los 90mL del agua peptonada del Erlenmeyer,
esperar 8 minutos para que sedimente
4.- Con una pipeta tomar 1mL del agua peptonada que se encuentra en el Erlenmeyer
y transferir al tubo de ensayo con notación 10-2, luego se transfiere 1mL del tubo 10-2
al tubo 10-3, se repite el proceso hasta llegar al tubo 10-4

Siembra de vertido en placa

1.- Preparar PCA, pero aun no plaquear
2.- Con ayuda de una pipeta verter 1mL de la dilución 10-4 en una caja Petri esterilizada
3.- Adicionar el agar PCA en la caja Petri
4.- Homogenizar el agar y la muestra y dejar que se solidifique
5.- Incubar a 30°C durante 24h con las placas invertidas

Siembra por estrías

1.- Preparar PCA, plaquearlo en una caja Petri y esperar que solidifique
2.- Dividir imaginariamente la caja Petri en 4 cuadrantes
3.- Esterilizar el asa de cultivo en un mechero hasta que alcance el rojo vivo, dejar
enfriar y tomar una muestra de un cultivo de microorganismos
4.- Inocular la muestra realizando estrías muy juntas en el primer cuadrante, clavar el
asa en el agar y girar ¼ la caja.
5.- Realizar el mismo procedimiento, pero realizando estrías más separadas entre si
6.- En el cuarto cuadrante realizar únicamente una estría
7.- Incubar la caja posición invertida por 24-48 horas a 30°C
 Siembra por extensión en la superficie
1.- Preparar PCA, plaquearlo en una caja Petri y esperar que solidifique
2.- Con ayuda de una pipeta colocar 0.1mL de la dilución 10-4 en el centro de la
superficie del agar
3.- Con ayuda de la misma pipeta extender la mezcla uniformemente por toda la
superficie del aga PCA
4.- Incubar la caja posición invertida por 24-48 horas a 30°C

Siembra por picadura o punción en medio semisólido

1.- Preparar medio de cultivo SIM y llevar a punto de ebullición
2.- Pipetear 5mL del medio preparado y transferirlo a tubos de ensayo, tapar y
esterilizar
3.- Dejar solidificar en posición vertical
4.- Esterilizar el asa con calor y dejar enfriar
5.- Con ayuda del asa, tomar el material que se desea sembrar.
6. - Introducir el asa con el inóculo en el tubo de ensayo hasta el fondo, formando un
canal y retirar el asa por el mismo trayecto.
7.- Incubar durante 24-48 horas a 30°C

Siembra en caldos
1.- Preparar caldos TSB y colocar 9mL en un tubo de ensayo y 10mL en otro, esterilizar
2.- Transferir 1mL de la dilución 10-4 al tubo con 9mL de TSB, homogenizar y taponar
3.- Esterilizar el asa con calor y dejar enfriar
4.- Con ayuda del asa tomar la muestra de los cultivos de microorganismos
5.- Inocular la muestra en el tubo de TSB con 10mL y taponar
6.- Incubar durante 24-48 horas a 30°C

3°RESULTADOS
VERTIDO EN PLACA
Prueba fallida, debido a que la inoculación no se realizó de la manera correcta un factor
importante de esto fue que las diluciones fallaron en su porcentaje óptimo de cantidad por
lo tanto no se puede realizar el conteo, en cuanto a su forma y características se puede
observar los siguiente.
Siembra por profundidad

Consistencia Características ópticas

Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Opaca: No
- Lisa - Cremosa Un color - Opaca
permite el paso
opacado,
de la luz
 muestra
blanquecina

Siembra por Extensión en superficie

Consistencia Características ópticas

Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Opaca: No
permite el paso
-Colonias de la luz
- Cremosa - Opaca
lisas y Blanquecino
rugosas - No se puede
aislar las
colonias

SIEMBRA EN CALDO
En el medio en liquido los microorganismos mostraron un crecimiento requerido es
decir se alcanzaron las condiciones y expectativas optimas ya que se pudo observar en
medio de la dilución una gran cantidad película (nata) sedimentación y turbidez.

10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 Control

Turbidez Mucha Poca carga No se No se No se
carga microbiana utilizo utilizo utilizo
microbiana

SIEMBRA EN ESTRIADO
prueba fallida debido a que la inoculación n o se dio en las correctas condiciones por lo
tanto hubo carga microbiana que impido el crecimiento de los microorganismos, un
factor importante que también afecto en este crecimiento es que solo se utilizó hasta la
dilución al 1x10-3 por lo tanto no se puede identificar las zonas se notó una sola masa .
 Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)

- Traslúcida: No
permite
observar
- Cremosa Amarillo - Opaca
- Rugosa claramente
opacado
objetos a través
de la colonia

SIEMBRA EN MEDIO SEMISÓLIDO

Prueba fallida, debido a que no se utilizaron las diluciones exactas por este motivo no
existe movilidad bacteriana.

4. OBSERVACIONES.
 Se logra visualizar en los caldos la formación de nata, turbidez y precipitado
indicando así que existe microorganismos
 Al no sembrar bien en el caldo no se puede visualizar si existe la movilidad de los
microorganismos.
 En la caja Petri de PCA siembra por extensión no se puede cuantificar las colonias
en la zona 4 por su alta carga microbiana y solo se visualiza todo un solo conjunto
 En la caja Petri de vertido en placa no se puede observar las diferentes colonias
que se pueden formar porque todo es un solo conjunto.
 En la caja Petri de siembra por estriado se corre el riesgo de rasgar el agar y afectar
la práctica, con esta forma de siembra nos permite visualizar la movilidad de los
microorganismos.
5. CONCLUSIONES.
- Se logró aprender los diferentes tipos de siembra: siembra por extensión, siembra en
estrías y siembra en profundidad.

- Se comprendió la presencia de movilidad en el crecimiento de microorganismos en

medios de crecimiento semi sólidos.

- Se identificó los tipos de morfología coloniales de microorganismos presentes en las

siembras de cultivo.

- De acuerdo a los datos obtenidos se logró la cuantificación de bacterias presentes

mediante la aplicación de fórmulas.
6. RECOMENDACIONES.
Se recomienda el uso correcto de los distintos equipos y materiales de laboratorio.
Para evitar contaminaciones desinfectar el área de trabajo
Utilizar los implementos de seguridad dentro del laboratorio.
Evitar el contacto de las pipetas con la superficie de contacto.
Sella con cinta masquin las muestras y colocarlas en sentido opuesto una vez que el agar
se ha solidificado para evitar la formación de gotas de agua.
Se recomienda ajustar de manera correcta los tampones al omento de esterilizar para
evitar el escape de líquido.
En la siembra por estriado evitar romper desgarrar o deformar la superficie del agar.
Utilizar una pipeta diferente para cada procedimiento
Esterilizar el asa de cultivo previo a la utilización de este

7. BIBLIOGRAFIA
Britania. (2018). Britania. Obtenido de
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2844b49b1c6.
pdf
Rodriguez, E. (2018). Medios de cultivos. Obtenido de
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/152380/mod_resource/cont
ent/1/2018%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
Roja, F. (2017). Aula Virtual. Obtenido de
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni
_02/56/cap309.htm
 1 1:1 2018/
12/17

ANEXO II
c) d)

e)
NOTAS: CATEGORIA ESCUELA TEMA:
DEL SUPERIOR Tipos de siembra.
DIAGRAMA:
POLITECNICA
a. Siembra por DE
Aprobado
estría o CHIMBORAZO LÁ ESC FEC
Preliminar
agotamiento. M: : HA:
FACULTAD
b. Siembra por Certificado 
punzón. DE CIENCIAS
Por aprobar
c. Siembra en ESCUELA DE 1 1:1 2018/
Información 
caldo. 12/17
INGENIERIA
Por calificar
QUIMICA

ELABORADO
POR:
Grupo1 – Mesón
2
ANEXO III
f) g)

h) i)
NOTAS: CATEGORIA DEL ESCUELA SUPERIOR TEMA:
DIAGRAMA: POLITECNICA DE Tipos de siembra.
CHIMBORAZO
d. Resultado: Siembra Aprobado
Vertido en placa. FACULTAD DE
Preliminar LÁM: ESC: FECHA:
e. Resultado: Siembra por CIENCIAS
estría o agotamiento. Certificado  Por
ESCUELA DE
f. Resultado: Siembra por aprobar
INGENIERIA 1 1:1 2018/12/
punzón.
Información  Por 17
g. Resultado: Siembra en QUIMICA
caldo. calificar

ELABORADO POR:
Grupo 1 – Mesón 2