PRUEBAS
ASÉPTICAS
CONTENIDO
Bienvenida
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OBJETIVO
Verificar la esterilidad comercial de la línea de
producción completa, basándose en la evaluación del
producto final.
El propósito es demostrar si la línea está preparada
para el inicio de la producción comercial.
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DEFINICION
FDA ( 21: CFR 113 ):
Es la demostración de que los componentes,
sistemas de proceso y/o sus combinaciones que
hayan sido entregadas y/o instaladas, operen
dentro de los límites especificados o que sean
capaces de alcanzar un resultado satisfactorio
previamente acordado.
Buenas Prácticas de Manufactura (GMP)
Todas las plantas deberán estar sujetas a este tipo
de pruebas
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APLICACIONES
El procedimiento está destinado para su aplicación en las
siguientes situaciones:
La construcción de una planta completamente nueva
La instalación de una línea nueva en una planta existente
Cuando se realice cualquier modificación que involucre
superficies que estén en contacto con el producto comercialmente
estéril
La introducción de nuevos productos.
Cambio de condiciones o parámetros de proceso.
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PREPARACIONES PREVIAS A
LA PRUEBA
“Commissioning” o puesta en servicio
Demostración de que los equipos, la línea de producción o
la planta cumplen con lo especificado y mutuamente
acordado entre el cliente y Tetra Pak.
Debe llevarse a cabo tras la instalación de los equipos y
antes de la verificación de la esterilidad comercial.
Terminar de ajustar los programas del controlador.
Calibración de instrumentos y lazos de control.
Ensayo mecánico de la línea completa con agua incluyendo corridas
de producción, CIP y SIP (esterilización in situ).
Entrenamiento de operadores y personal de mantenimiento y
calidad.
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PREPARACIONES PREVIAS A
LA PRUEBA
Prerrequisitos según las buenas prácticas de
fabricación
• Calidad de las materias primas
• Proceso térmico
• Puntos críticos de control de CIP
• Servicios
• Higiene ambiental
• Nivel de instrucción de los operadores y del personal
de mantenimiento y de calidad
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PREPARACIONES PREVIAS A
LA PRUEBA
Verificación de la integridad de envases
La integridad de envases debe verificarse durante la puesta en
servicio / pruebas previas con agua y durante la siguiente prueba
de llenado.
Simular una corrida de producción continua con agua que incluya
a toda la línea. Debe lograrse un mínimo de 330 envases y
verificar
Conductividad - 300 envases
Sellados transversal por estiramiento - 10 envases
Sellado longitudinal - 10 envases
Disolución para evaluación de patrón de calor - 10 envases
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PRUEBA DE LLENADO
Efectuarse una corrida con producto seguida por una
limpieza CIP, antes de comenzar las pruebas de
esterilidad.
El objetivo de la prueba de llenado
es triple:
•Terminar de ajustar los programas
del controlador
•Calibrar instrumentos y lazos de
control
•Ensayo mecánico de la línea
completa con producto
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PROTOCOLO DE ENSAYO
Los protocolos de ensayo estarán bien documentados
con el fin de poder ser utilizados como registros.
Deberán cubrirse las siguientes áreas:
• Calidad de la material prima, por ejemplo concentrado
• Procesamiento
• Envasado
• Integridad de envases
• Evaluación del producto terminado
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RECOMENDACIONES
Producto y materias primas para la prueba
Se recomienda de ser posible el producto que piensa producir
comercialmente, para obtener resultados más representativos en
las pruebas.
El material de envase a usar debe ser apropiado para el producto
a envasar, por ejemplo material TBA/ml cuando se envasa leche
o TBA/jl cuando se envasa jugo.
Debe usarse el material de envase destinado a producción
comercial, no el material de ensayo entregado con la envasadora.
La tira de sellado longitudinal usada debe ser apropiada para el
producto y material de envase empleados.
Debe emplearse peróxido de hidrógeno que cumpla con la
especificación de Tetra Pak para el tipo de máquina envasadora a
ensayar.
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RECOMENDACIONES
Re recomienda incluir eventos que ocurren en una rutina normal
de producción, empalmes de tira, material, paradas, CIP, y
almacenamiento de producto intermedio en tanques (si aplica)
Los envases deben ser identificados con la hora (hh:mm:ss), la
cual debe ser igual a la del TPOP y todos los eventos tienen que
ser documentados.
Los equipos deben funcionar de acuerdo con los Manuales de
Operación (OM).
Debe llevarse a cabo un registro de la prueba
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PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Tamaño de la muestra
Es responsabilidad del cliente definir el nivel aceptable
de calidad que se debe probar.
La cantidad de envases que se va a ensayar depende
del nivel de calidad deseado y se basará en la
distribución de Poisson.
Los resultados de las muestras tomadas en cada
producción deberán sumarse para efectuar la
evaluación estadística.
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PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
PASO 1: Establecimiento de los AQL’s
¿ Qué es un “Nivel Aceptable de Calidad” (NAC)
- Número máximo de defectivos
esperados en una producción
¿ Quién lo define ?
- Este número debe ser realista
y acorde a la situación de la
planta, normalmente se trabajan
los siguientes valores:
1 : 1,000 ( 0.1 % )
1 : 10,000 ( 0.01 % )
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PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
¿ Cuál es la recomendación de Tetra Pak ?
Sugiere una prueba de 3 etapas de 9000 envases en
total manejando un índice de defectivos de 0,1%, lo
que corresponde a un máximo de 4 defectos basados
en un 95% de probabilidad para la aceptación de la
prueba
Simulando las condiciones promedio durante la
producción normal. Estas condiciones deberían
incluir paradas, CIP y almacenamiento intermedio del
producto en un tanque aséptico.
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Cálculos de resultados
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PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Rutina de Ensayo sugerida
Etapa 1. Llenar mínimo 3000 envases y realizar un paro de 40 min con
2 renovaciones de tubo a los 15 y 30 min.
Etapa 2 Llenar mínimo 3000 envases que incluyan procesamiento
UHT finalizando con una limpieza CIP completo o intermedio.
Etapa 3. Llenar las ultimas mínimo 3000 unidades
Si la instalación que se va a verificar posee un tanque aséptico, se
recomienda almacenar el producto de la etapa 3 en el tanque aséptico a
temperatura ambiente y envasarlo al día siguiente..
2. Detección temprana de una falla grave (~300 muestras adicionales)
3. Detección de esporulados termofilos (~ 300 muestras adicionales)
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INCUBACION BAJA ACIDEZ
1. Muestra 3 etapas 2. Detección temprana de una
~9000 envases falla grave (~300 muestras
adicionales)
Incubar durante mínimo Incubar durante Evaluar por métodos rápidos
7 días a 30-35°C*
3 días a 30°- 35°C (pH, sensorial, ATP,
inspección visual)
Estriar todas las muestras Evaluar todas las unidades
e incubar durante 72 por pH y mínimo al 1%
horas a 30°-35°C realizarle análisis 3. Detección de
microbiológico esporulados termofilos
(~ 300 muestras)
*Si no existe una incubadora para todas
las muestras, se pueden dejar a T mínimo
de 23°C por un tiempo mayor
Incubar durante 5 Estriar todas las muestras e
días a 55°C incubar x 5 días a 55°C
Nota: Numere los envases de muestra y las placas estriadas respectivamente.
Enjuague y guarde los envases para investigaciones posteriores. Debe
verificarse la integridad de cualquier envase cuyo contenido muestre CCB / Ene - 10
desviaciones microbiológicas, visuales u organolépticas.
= % de envases inestériles detectados
= Costo
%
100
75
50
25
1 2 3 4 5 6 7 8 9
# Días de incubación CCB / Ene - 10
INCUBACION ALTA ACIDEZ
1. Muestra 3 etapas
~ 9000 envases
Inspección diaria para
Incubar durante mínimo detección de envases
15 días a 23-25°C hinchados
Estriar todas las muestras Estriar mínimo el 1% y el
e incubar durante 72 restante inspeccionar
horas a 25°C. visualmente
Nota: Numere los envases de muestra y las placas estriadas
respectivamente. Enjuague y guarde los envases para investigaciones
posteriores. Debe verificarse la integridad de cualquier envase cuyo
contenido muestre desviaciones microbiológicas, visuales u
organolépticas.
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Análisis Microbiológico
•El método recomendado es el estriado en placas de agar de recuento total
(PCA – Producto de baja acidez, y agar de suero de naranja (OSA) o
similar, por ejemplo, agar de extracto de malta o agar de dextrosa
Saboraud,) de una muestra de cada envase, tomada asépticamente usando
un asa de ojal calibrada de 10 μl
•Se recomienda realizar un control adecuado del medio (esterilidad del agar)
en paralelo con el ensayo de esterilidad.
•El método de apertura de los envases debe ser tal que los sellados de los
envases permanezcan intactos, por si se los necesita para futuras pruebas
de integridad.
•Debe tenerse cuidado de esterilizar con alcohol o por flameado las
superficies externas de los envases sometidos a muestreo con fines
microbiológicos, antes de su apertura aséptica con tijeras o cuchillas
esterilizadas.
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METODOS DE EVALUACION
Debe ser un método destructivo, entre
los que se destacan:
1) Medición del valor de pH (variación
de 0.1 und.)
2) Turbidez
3) Sabor y olor del producto (sensorial)
4) Acidez titulable
5) Pruebas microbiológicas ( < 100
UFC/ml. EU Council Directive 92 46 EEC)
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APERTURA DE MUETRAS PARA
LA EVALUACION
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MEDICION POR pH
Es rápida y menos costosa, pero no detecta el número de
microorganismos
Antes de iniciar la medición, el electrodo debe ser calibrado y
recalibrado frecuentemente (ej. Cada 30 minutos).
Se debe dejar el electrodo de 3-5 segundos antes de registrar
la lectura.
Después de analizar una muestra con desviación el electrodo
debe ser lavado antes de la siguiente medición.
Antes de iniciar la medición, por cada etapa de la prueba
calcular el pH promedio, tomando 10 muestras aleatorias.
Si la desviación de pH es mayor a 0,1 unidades del valor
promedio la muestra se considera positiva y debe ser analizada
máximo 4 horas después de la apertura.
Un variación en el pH puede ser debido a una contaminación
microbiológica.
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ENVASES DEFECTIVOS
Un envase NO es un defectivo cuando se identifica la causa
raíz del defecto!!!
• Envases dañados en transportador
• Envases dañados durante su manejo
• Material de envase sucio o defectuoso
• Sistemas con fugas
• Mala calidad de materia prima
• Errores operacionales
• Sellados defectuosos
• Aperturas de tubo
• Fallas del sistema de apertura
• Malas practicas de manufactura
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INTERPRETACION DE LOS
RESULTADOS DE LA PRUEBA
La muestra se considera comercialmente estéril si:
• Una estría sobre una placa de agar muestra < 10 colonias
Y
• El envase no muestra defectos visuales (hinchado, pérdidas,
etc.)
• El producto no muestra signos de deterioro (turbiedad,
mohos, mal olor, etc.)
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INTERPRETACION DE LOS
RESULTADOS DE LA PRUEBA
La muestra NO se considera comercialmente estéril si:
• Una estría sobre una placa de agar muestra > 10 colonias
(Por lo general, si el envase es inestéril, la estría está
cubierta)
O
• El envase muestra defectos visuales (hinchado, pérdidas,
etc.)
O
• El producto muestra signos de deterioro (turbidez, mohos,
mal olor, etc.)
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CONSECUENCIAS DE LA
DESVIACIÓN
- Se realizará una “acción buscafallas.”
- Una vez comprobado que el defectivo corresponde a una sección
de la prueba, se establecen medidas correctivas para evitar que se
repita durante producción comercial.
Primeras producciones comerciales:
-Prestar atención en las áreas donde se dio el defectivo
esquema estricto de muestreo por parte de C.C.
- Cuarentena por 7 días (baja acidez) y 14 días (alta acidez).
NO hacer liberaciones de producto antes de las fechas de
análisis por parte de C.C. CCB / Ene - 10
¿Qué acción tomar si no se detectó la
causa del defecto y el número se sale de
especificaciones?
- Si no se encuentra la causa luego de un plan buscafallas se
hará una nueva prueba de esterilidad
Nueva prueba: controlar todos los parámetros prestando
especial atención en:
1. calidad de la materia prima (esporulados totales y
termorresistentes)
2. rutinas operación
3. buenas prácticas de manufactura
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PROCEDIMIENTOS Y PAUTAS
“Pautas para la evaluación microbiológica de
productos comercialmente estériles”
QAM – 588002-0508
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