UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y TECNOLOGÍAS

PROGRAMA DE QUÍMICA
INFORME DE LABORATORIO

Fitoquímica II (2018) - I

INFORME DE LABORATORIO Nº 4, 5, 6: AISLAMIENTO DE

ALCALOIDES DE LA Brugmansia arborea.
Maria Fernanda Quintero Carmona, e-mail: [email protected]

RESUMEN: La extracción y el aislamiento de los alcaloides de la Brugmansia arborea llamado comúnmente como
borrachero se llevó a cabo a partir de las hojas de esta especie. Se llevó a cabo el desengrasado de la especie vegetal, la
lixiviación, concentración del extracto y técnicas de reconocimiento para determinar la presencia de los alcaloides en el
extracto concentrado y el extracto con tratamiento previo.

PALABRAS CLAVE: aislamiento, alcaloide, escopolamina, borrachero, cromatografía.

ABSTRACT: The extraction and isolation of the alkaloids of the Brugmansia aureus commonly called as borrachero was
carried out from the leaves of this species. The degreasing of the plant species, the leaching, concentration of the extract
and reconnaissance techniques were carried out to determine the presence of the alkaloids in the concentrated extract and
the extract with previous treatment.

KEY WORDS: Isolation, alkaloid, scopolamine, borrachero, cromatography.

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INTRODUCCIÓN La reacción de Vitali-Morin: consiste en la nitración

Puesto que los alcaloides son compuestos de de los alcaloides con ácido nítrico fumante, se
carácter básico, su solubilidad en los diferentes forma una coloración en presencia de hidróxido de
solventes varía en función del pH, es decir según potasio con los derivados nitrados en solución
se encuentre en estado de base o de sal. alcohólica, la presencia de acetona estabiliza la
En forma de base, son solubles en solventes coloración. [1]
orgánicos no polares como benceno, éter etílico,
cloroformo, diclorometano, acetato de etilo. La Brugmansia arborea pertenece al género
En forma de sales, son solubles en solventes datura, todas las partes de las plantas de este
polares agua, soluciones ácidas e hidroalcohólicas. género son altamente tóxicas debido a su
El fundamento de la extracción se basa en el contenido en alcaloides tropánicos
carácter básico de los alcaloides y en el hecho de (escopolamina e hiosciamina, entre otros). Su
su existencia en las plantas como sales de ácidos ingestión, tanto en humanos como en otros
orgánicos o como combinaciones solubles de otras animales, puede resultar fatal. [2,3] El simple
sustancias, entre los principales se encuentran: los contacto con los ojos puede
ácidos tíglico, 3 metil butírico, benzoico, cinámico, producir midriasis (dilatación de las pupilas)
hidroxifenil propiónico, trópico y tricarboxílicos, y o anisocoria (desigualdad en el tamaño pupilar). [4]
además con otro tipo de sustancias como taninos y
fenoles. Los vegetales contienen generalmente
cantidades apreciables de materia grasa que
impide el buen desarrollo en los procesos RESULTADOS Y DISCUSIÓN
extractivos, produciendo emulsiones, por lo tanto,
es útil proceder a una deslipidación o desengrase Se llevó la extracción en soxhlet y lixiviación,
de la planta seca y molida con solventes como después se desarrollaron técnicas como la
hexano o éter de petróleo; es excepcional, pero cromatografía en capa fina para separar los
puede ocurrir que se extraiga en estos solventes y compuestos presentes en el extracto concentrado
en medio neutro alcaloides. y en el extracto previamente tratado, basado en la
polaridad de los compuestos, técnicas de
Las técnicas de reconocimiento son basadas en la reconocimiento con reactivos como Mayer,
capacidad que tienen los alcaloides en estado de Dragendorff, Hager, Wagner, Bouchard, por último,
sal (extractos ácidos), de combinarse con el yodo y se llevó a cabo la separación por cromatografía de
metales pesados como bismuto, mercurio, tugsteno columna donde se obtuvieron fracciones
formando precipitados; estos ensayos preliminares transparentes y de color amarillo en las cuales
se pueden realizar en el laboratorio o en el campo. puede encontrarse el alcaloide principal de la
Se utilizan reactivos generales para detectar Brugmansia arborea, la escopolamina.
alcaloides como: la solución de yodo-yoduro de
potasio (Reactivo de Wagner), mercurio
tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer),
tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de
Dragendorff), solución de ácido pícrico (reactivo
de Hager), ácido sílico túngtico (reactivo de
Bertrand), p-dimetilamino benzaldehido (reactivo
de Ehrlich); nitración de alcaloides (reacción de
Vitali-Morin se usa para alcaloides en estado
base).
El reactivo de Hager: consiste en una solución
saturada de ácido pícrico en agua, este reactivo
precipita la mayoría de los alcaloides, los picratos
se pueden cristalizar y ello permite por medio de
resinas intercambiadoras, separar los alcaloides. El Fig. 1. Estructura de la escopolamina.
reactivo de Bertrand: se disuelve 12.0 g de ácido
sílico túngstico en agua y se afora a 100 ml, se La separación en cromatografía en capa final se
ensaya con solución de alcaloides sales (en HCl llevó a cabo por la polaridad de los eluyentes y se
1%). El reactivo de Ehrlich: se prepara disolviendo elucidaron las placas por medio de la lámpara
p-dimetil amino benzaldehído al 1% en etanol y ultravioleta.
luego se le adiciona cloruro de hidrógeno, en
presencia de alcaloides, se forma una coloración
naranja.

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Muestra Dragendorff Mayer Reinecke Bouchard
Extracto Color rojo Color Sin Color
concentrado oscuro verde cambio marrón
claro
Solución Color Sin Color Color rojo
acuosa naranja cambio rosa
ácida
Solución Color Sin Color Color
Fig. 2. Cromatografía de capa fina. Elución de las extraída con naranja con cambio amarillo naranja
placas a diferentes longitudes de onda. CH2Cl2 amarillo oscuro oscuro

Tabla. 2. Reconocimiento de alcaloides en extracto

Las técnicas de reconocimiento se llevaron a cabo concentrado, solución acuosa ácida y solución
en placas excavadas, obteniéndose los siguientes extraída con diclorometano.
resultados:

Muestra Dragendorff Mayer Hager Bouchard

Extracto Color rojo Color Precipitado, Color

concentrado oscuro verde color verde marrón
claro claro

Tabla. 1. Reconocimiento de alcaloides en extracto

concentrado.

El extracto concentrado era de color verde oscuro,

Fig. 4. Reconocimiento de alcaloides en extracto
al añadir cada uno de los reactivos se presentó
concentrado, solución acuosa ácida y solución
cambios en su coloración y en su estado físico
extraída con diclorometano, en placa excavada.
como con el reactivo de Hager, siendo positivo para
la presencia de alcaloides.
El reactivo de reineckato es una reacción de
clorhidrato de hidroxilamina y reacciona con los
alcaloides cuaternarios o que están en forma de N-
óxidos, dando un precipitado blanco, por lo cual, se
puede determinar que no hay presencia de estos
alcaloides según las pruebas llevadas a cabo en las
diferentes soluciones. El reactivo de Dragendorff
identifica la presencia de alcaloides cuando se
produce una coloración naranja o rojiza, siendo
positiva la presencia en las tres soluciones debido
a su coloración. El reactivo de Mayer se utiliza para
determinar presencia de alcaloides de forma
general, dando un precipitado o tornando la
solución de color blanco o amarillo claro, siendo
este positivo en el extracto concentrado y negativo
en las dos soluciones restantes, debido a algún
Fig. 3. Reconocimiento de alcaloides en extracto contaminante o el estado del alcaloide. El reactivo
concentrado en placa excavada. de Bouchard presenta una coloración naranja o un
precipitado, por lo cual, se puede observar que éste
reactivo es positivo en las tres soluciones
presentes. [6]

Se obtuvieron algunos inconvenientes a lo largo de

la práctica, uno de estos fue que no se formó la sal
con el reactivo de Reinecke, esto se puede atribuir
debido a la baja concentración de alcaloides en las
hojas de la planta manipulada.

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 La extracción se basó en la solubilidad de

PARTE EXPERIMENTAL los alcaloides en los solventes orgánicos
Se recolectaron aproximadamente 100 g de debido a su forma básica.
borrachero para realizar la extracción en Soxhlet
con 500 mL de éter de petróleo a 60-80 ºC. La  La identificación de la presencia de los
solución se refluyó y después de 8 h. El solvente de alcaloides se llevó a cabo mediante
la extracción total es removido al vacío dando un técnicas de reconocimiento con algunos
residuo formado principalmente por lípidos y reactivos específicos basados en metales
carotenoides. El material vegetal en polvo es y yodo.
secado al aire y usado para la extracción etanólica.
El extracto se realiza la lixiviación en solución con  Se llevaron a cabo técnicas de separación
etanol al 95%, a éste se le añade HCl 0,5 N y se para la obtención del alcaloide como
agita durante 3 horas. La solución ácida es cromatografía en capa fina y
basificada con 15% NaOH a pH 10, y las bases cromatografía en columna.
libres son extraídas en cloroformo (alcaloides
secundarios y terciarios). La solución acuosa
puede contener alcaloides solubles en agua
(alcaloides cuaternarios), los cuales son CUESTIONARIO
determinados por los reactivos de precipitación –
Reinecke o Mayer- en solución ácida; el precipitado 1. ¿En qué consiste la derivatización?
es disuelto en acetona: metanol (1:1), y la solución
es pasada a través de una resina de intercambio Consiste en transformar un compuesto químico en
iónico en forma de cloruro, dando, después de la un producto que posee una estructura química
evaporación, una mezcla de cloruros crudos. Este similar. Se aprovecha un grupo funcional específico
método es usado especialmente para alcaloides del compuesto parental en la reacción de
con nitrógeno cuaternario. Diferentes técnicas derivatización formando el reactivo en un derivado
cromatográficas son utilizadas para separar los que posee una reactividad química, solubilidad,
componentes desde la mezcla de sus bases. Por diferentes a las originales.
último, se lleva a cabo la separación en
cromatografía de columna, se añade 5 g de silica a 2. ¿Cuáles son los criterios para la
la columna y 50 mL. de etanol (eluyente). Se añade elección de un reactivo derivatizante?
un poco de etanol a la columna y luego se vierte la
suspensión previamente preparada en su interior. A. Idoneidad: Estado de la muestra para el
Se abre la llave, se golpean suavemente las análisis.
paredes de la columna mientras dura la
sedimentación del adsorbente para que este se B. Eficacia: Los compuestos que coeluyen
compacte adecuadamente procurando que no se pueden separarse varias veces por el
formen burbujas y evitando que se seque la gel de método de derivatización.
sílice. El etanol que se va recogiendo de la columna
se incorpora al vaso donde se preparó la C. Detectabilidad: Ampliar el rango de
suspensión adsorbente-eluyente para así detección de los productos.
recuperar la gel de sílice que hubiera podido quedar -Origen químico de los productos
y se transvasa todo de nuevo a la columna. Se -Generar producto en menor cantidad de
prepara la muestra con 1 g de sílica y 2 mL de etapas posibles.
compuesto, se mezcla y se hace una pastilla que -Reactivo que permita condiciones de
se introduce a la columna. A continuación, se abre operación simple.
la llave y se continúa añadiendo diferentes mezclas -Menos toxicidad.
de solventes por polaridad para recoger los
metabolitos separados. 3. Enuncie y explique las principales
teorías de derivatización en GC
CONCLUSIONES
A. Sililación: Se forman por substitución de
 Se llevó a cabo la extracción de los los hidrógenos activos de ácidos,
alcaloides de la especie Brugmansia alcoholes, tioles, aminas, amidas, cetonas
arborea conocida comúnmente como y aldehídos enolizables.
borrachero, por métodos como extracción
soxhlet y lixiviación. B. Acilación: Conversión de compuestos que
contengan hidrógenos activos como -H, -

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SH y -NH, esteres, tioesteres y amidas  Metanol

mediante el ácido carboxílico.  Etanol
 Acetona
C. Alquilación: Es la substitución de un  Acetato de etilo
hidrógeno activo por un grupo alifático o  Diclorometano
aromático. Conversión de ácidos  Cloroformo
orgánicos en ésteres.  Tetracloruro de carbono
 Éter
 Benceno. [5]
4. Explique por lo menos tres ejemplos
de la utilidad de la derivatización.
8. Indique la toxicidad de las sustancias
que utilizó y como se podrían
Ej: Transformar compuestos no volátiles en
desechar.
volátiles.

Ej: Conversión compuestos no detectables en

productos apropiados por minimización del límite
9. Presente algunos de los soportes
de detección.
más utilizados para cromatografía en
columna.
Ej: Formación de cromóforos para la detección UV
de analitos en HPLC.
 Gel de sílice
5. ¿Qué debe hacerse para encontrar el  Alúmina
eluyente adecuado para una  Celulosa
sustancia en una cromatografía en
columna? 10. Explique los factores que influyen en
una separación por cromatografía en
Primero se debe encontrar los eluyentes en los columna.
cuales la muestra problema se disuelva,
posteriormente se debe realizar pruebas de  Temperatura: A menor temperatura las
elución en cromatoplacas para verificar con sustancias se absorben en la fase.
que eluyente o mezcla de los mismos se  Pureza de los disolventes
presenta la separación de los componentes de  Polaridad del eluyente seleccionado: una
la mezcla o la mayoría, así como también la sustancia polar se desplaza más fácil con
mayor separación entre componentes. un eluyente polar.
 Masa de la muestra: Muestras de masa
6. Indique algunas de las aplicaciones grande tardan más tiempo en ser
de la cromatografía de adsorción en purificadas.
columna.
REFERENCIAS
 Separación y purificación de compuestos
orgánicos. [1] Arango, Jaime. Alcaloides y compuestos
 Monitorización de una reacción, poniendo nitrogenados. Medellín. Universidad de Antioquia.
un punto en el cromatograma cada cierto 2008, p. 7-8.
tiempo.
 Identificación de un compuesto. [2] F. Löhrer & R. Kaiser: Biogene Suchtmittel:
 Comprobación de la pureza del Neue Konsumgewohnheiten bei jungen
compuesto. Abhängigen?, en: Der Nervenarzt, Volume 70,
 Elección del solvente adecuado para 1999, p. 1029-1033.
cromatografía preparativa.
[3] European Food Safety Authority (EFSA)
7. Escriba una lista de eluyentes (2012). «Compendium of botanicals reported to
utilizados en cromatografía en contain naturally occuring substances of possible
columna en orden de polaridad concern for human health when used in food and
decreciente (anote su bibliografía). food supplements». EFSA Journal, p 2663.

[4] Van der Donck, I.; Mulliez, E.; Blanckaert, J.

 Agua
(2004). «Angel's Trumpet (Brugmansia arborea)

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and mydriasis in a child - A case report». Bulletin de

la Societe Belge d'Ophtalmologie, p. 53-56.

[5] Manual de Prácticas. Química Orgánica. Tabla

de disolventes más usados en orden de polaridad.
UNAM. México. Pág. 1311.

[6] Remington. Farmacia. 20ª Edición. Tomo I.

[7] Dra. Margarita Cardier. La cromatografía y sus

aplicaciones.