UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUIMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE ENFERMERÍA
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA
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HISTOPLASMA CAPSULATUM
Descripción
Histoplasma es un hongo dimórfico térmico, con crecimiento filamentoso o
micelial en su estado saprófito en el suelo, y con crecimiento levaduriforme o
esferular a 37ºC al parasitar a humanos o animales. Pertenece al filo
Ascomycota. La primo infección por H. capsulatum es con frecuencia pulmonar,
benigna, asintomática o subclínica, producida por la inhalación de conidias del
agente etiológico que vive saprofíticamente en el suelo.
Esta forma primaria cura generalmente en forma espontánea y deja como
secuela calcificaciones en el parénquima pulmonar y en los ganglios linfáticos
regionales. La histoplasmosis progresiva es mucho menos frecuente, se
caracteriza por ulceraciones cutáneas mucosas, astenia, adelgazamiento,
hepatoesplenomegalia, infartos ganglionares múltiples, lesiones pulmonares
progresivas, anemia, leucopenia y fiebre irregular. El pronóstico de esta última
forma es grave y conduce frecuentemente a la muerte de no mediar un
tratamiento adecuado.
La forma micelial microscópicamente presenta hifas hialinas septadas; a partir
de una hifa parental se desarrollan hifas (conidióforos) en ángulo recto que
generan grandes conidios unicelulares (macro conidios de 8 a 15 micras). Los
macro conidios son hialinos, redondos, de paredes gruesas, tuberculados y con
proyecciones digitiformes. También de las hifas pueden emerger pequeños
conidios (micro conidios de 2 a 5 micras) unicelulares, sésiles, hialinos,
redondos, de paredes lisas y finas.
Macroscópicamente las colonias crecen lentamente a 25ºC en Saboraud. Al
principio aparecen colonias blancas de aspecto algodonoso (colonias tipo A) y
después aparecen colonias de escaso micelio, aplanado y de color canela o
pardo oscuro (colonias tipo B), el reverso de la colonia va de color amarillo a
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anaranjado. A menudo los primo-aislamiento son del tipo B, en particular cuando
se aíslan del suelo; al envejecer pueden llegar a cubrirse de un micelio blanco y
transformarse en el tipo A, de manera irreversible.
La forma levaduriforme microscópicamente presenta levaduras ovoides y de
paredes finas, que se reproducen por gemación polar con una base estrecha.
Macroscópicamente las levaduras crecen lentamente a 37ºC, en medio de
infusión cerebro-cora. Histoplasma capsulatum (Ajellomyces capsulatus)
enriquecido con 5% -10% de sangre de carnero, formando colonias con
apariencia cremosa y húmeda, de color grisáceo a beige.
Morfología
La histoplasmosis o enfermedad de Darling, producida por el hongo
termodimorfo. Histoplasma capsulatum var. Capsulatum, es la tercera micosis
sistémica en frecuencia diagnosticada anualmente en la República Argentina,
después de las fungemias por levaduras y la criptococosis. La forma clínica
diseminada de esta enfermedad es considerada marcadora de SIDA, y la
asociación SIDA-histoplasmosis en nuestro país oscila entre 5,3 y 6%.
El diagnóstico de la enfermedad se realiza por examen microscópico directo,
previa coloración de Giemsa, y por cultivo de los materiales clínicos. La
observación directa, considerada presuntiva, permite visualizar levaduras
intracelulares (forma parasítica) en macrófagos y otras células del sistema
fagocítico. Esta técnica posee una sensibilidad limitada, dependiente de la
cantidad de levaduras presentes en el espécimen estudiado.
El aislamiento de H. capsulatum en cultivo es el método de diagnóstico definitivo
y el más sensible, especialmente en muestras de sangre, líquidos de punción y
biopsias. La fase micelial desarrolla a partir de especímenes clínicos entre los 5
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y 10 días de incubación a 25-28 °C en agar Sabouraud (glucosa 2%, peptona
1%, agar 1,5%). La identificación de la especie se realiza considerando las
características morfológicas de la fase micelial y la capacidad de convertirse en
levaduras al incubar a 37 °C en medios enriquecidos con cisteína.
La macro morfología típica de las colonias a 25-28 °C en agar Sabouraud es
inicialmente algodonosa y blanca, tornándose pulverulenta y parda con el
tiempo. Al microscopio, se observan macro conidios esféricos, de pared gruesa
con proyecciones digitiformes, de 8-15 mm de diámetro; micro conidios ovales,
de 1-4 x 2-6 mm de diámetro e hifas delgadas y ramificadas, de 1,2-1,5 mm.
Algunas colonias pueden ser albinas y presentar macro conidios de pared lisa,
los aislamientos clínicos de H. capsulatum en los primo cultivos son típicos de la
especie.
La existencia de aislamientos con características morfológicas poco sugestivas
de H. capsulatum fue comunicada en escasas oportunidades por algunos
investigadores. Se han descrito variantes morfológicas macroscópicas para este
hongo, con colonias glabras y verrugosas e incluso aislamientos de suelo con
pigmento rojo o rosado, características infrecuentes para la especie.
Comunicaron aislamientos aberrantes de H. capsulatum con colonias húmedas,
cerebriformes y pigmentadas a 25-28 °C, con escasos clamidoconidios al
examen microscópico.
Se observaron hifas septadas, ligeramente engrosadas y flexuosas, en mutantes
de laboratorio deficientes en un gen que codifica para una proteína de 21 kDa
involucrada en el proceso de termodimorfismo. También fueron descritos
aislamientos incapaces de convertirse in vitro en levaduras cuando se cultivaban
a 37 °C, mientras que a 25-28 °C presentaban abundantes macroconidios,
característicos de H. capsulatum.
Estas variantes deben ser diferenciadas de Renispora flavissima, Sepedonium
spp. y Chrysosporium spp, por el parecido morfológico de los macroconidios (7,
9, 10, 19). Nuestro objetivo es comunicar la presencia de aislamientos de H.
capsulatum con características morfoló- gicas aberrantes para la especie en la
Argentina. Se estudiaron cinco aislamientos, cuatro provenientes de
hemocultivos y uno de lavado broncoalveolar, recuperados en dos episodios
diferentes de histoplasmosis asociada a un paciente con SIDA.
Los tres primeros aislamientos fueron recuperados de igual número de
hemocultivos seriados. En el laboratorio de origen, los cultivos desarrollados en
los medios de rutina a 25-28 °C presentaron características morfológicas
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atípicas. Ante la sospecha de H. capsulatum, se realizó la prueba de conversión
dimórfica y se obtuvo la fase levaduriforme característica de este hongo.
Los especímenes fúngicos fueron analizados fenotí- picamente siguiendo la
metodología indicada en el Manual de procedimientos del Departamento
Micología del INEI - ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. A los 30 días de cultivo en
agar Sabouraud a 25-28 °C desarrollaron colonias blancas, glabras, umbilicadas,
centralmente radiadas, con márgenes regulares y sin pigmentación (Figura 1).
Figura 1
En el examen microscópico se observaron hifas hialinas con clamidoconidios
aislados terminales, subterminales e intercalares, de 4 mm de diámetro; hacia el
centro de la colonia se observaron hifas ligeramente engrosadas y tortuosas. No
se observaron macro ni microconidios (Figura 2).
El crecimiento a 25-28 °C no fue inhibido por cicloheximida. En agar cerebro-
corazón adicionado con cisteína, incubado a 37 °C, se obtuvo la fase
levaduriforme típica. La identificación de H. capsulatum se confirmó por la
presencia de los exoantígenos H y M específicos en cada uno de los
aislamientos, mediante la técnica de inmunodifusión doble utilizando como
control antígeno y antisueros comerciales.
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Dos nuevos aislamientos del mismo paciente, provenientes de un hemocultivo y
de un lavado bronco alveolar, fueron obtenidos luego de seis meses pos
tratamiento con anfotericina B, e intratratamiento con itraconazol (ITZ). Estos
eran fenotípicamente idénticos a los tres primeros y se identificaron como H.
capsulatum. Los cinco aislamientos mantuvieron las características descritas por
el período de un año y no pudo demostrarse presencia de conidios, aun en
medios que favorecen su formación.
Reproducción
H. capsulatum es un ascomiceto heterotálico que tiene una etapa anamórfica o
asexual, y una etapa teleomórfica o sexual conocida como Ajellomyces
capsulatus, que exhibe temporalmente las fases dicarióticas y diploides que
forman ascosporas haploides después de reducciones meióticas. Por lo tanto,
las especies H. capsulatum y A. capsulatus constituyen el mismo organismo
holomorfo.
El sistema de apareamiento bipolar heterotálico de H. capsulatum se describió
por primera vez a principios de la década de 1970, con cepas designadas como
(+) o (-), representando uno de los primeros descubrimientos de sus estructuras
sexuales. El apareamiento entre cepas recién aisladas (+) y (-) ocurre en la fase
micelial y se ha demostrado in vitro; sin embargo, en este ambiente, la fertilidad
se pierde rápidamente durante el cultivo continuo, lo que sugiere que las
presiones selectivas pueden servir para mantener la fecundidad en su hábitat
natural.
Se ha sugerido que las cepas de cada tipo de apareamiento no están
representadas por igual entre los aislados clínicos de H. capsulatum. Las
muestras ambientales exhiben una relación 1: 1 de los dos tipos de
apareamiento; en muestras clínicas, se ha observado una relación de 7: 1 (- / +).
Sin embargo, los experimentos de infección murina revelaron potenciales de
virulencia similares entre aislamientos de tipos de apareamiento opuestos, lo que
sugiere que los aislados (+) y (-) pueden diferir en la capacidad de producir
propágulos infecciosos debido a una mayor capacidad de convertir hifas en
levaduras. Aún no está claro cómo el tipo de apareamiento podría participar en
el proceso de regulación de la transición dimórfica y aumentar la virulencia.
La caracterización del tipo de apareamiento de H. capsulatum se realizó sobre
la base de las similitudes entre el locus MAT de varios ascomicetos, y esta
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característica ha permitido la identificación de un posible locus MAT en
organismos cuyos genomas han sido secuenciados. El locus MAT1 predicho,
identificado en H. capsulatum, compartía características comunes con
el locus MAT en otros hongos ascomicetos.
Hábitat
En el ambiente crece en el suelo y en la madera en descomposición como hongo
saprofito filamentoso; principalmente en suelos húmedos, ricos en nitrógeno con
excrementos de aves y guano de murcié- lagos y a temperaturas entre -18ºC y
37ºC (habitualmente en climas con 22ºC a 29ºC de temperatura media y
humedad superior al 67%); pudiendo llegar a sobrevivir durante más de 10 años.
Normalmente se puede encontrar en espacios cerrados, tales como grutas,
cuevas, minas, túneles, iglesias y construcciones abandonadas, pero también en
espacios abiertos (por ejemplo: parques públicos) contaminados con
excrementos de aves y murciélagos.
Los conidios son resistentes a la desecación y pueden permanecer viables largos
periodos de tiempo. Vías de entrada Respiratoria, Percutánea, Mucosas.
El hábitat donde H. capsulatum es más frecuentemente aislado son cavernas,
cuevas, minas, túneles, criptas, alcantarillas y casas abandonadas, en la
mayoría de los casos relacionado a áreas rurales. Sin embargo, existen
antecedentes de aislamientos en espacios abiertos de zonas urbanas donde el
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patógeno fue recuperado de excretas de aves en parques públicos, y de guano
de murciélagos en unidades habitacionales. Otros brotes urbanos fueron
asociados con plantas de interior y fertilizantes orgánicos enriquecidos con
guano de aves y/o murciélagos (composta).
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