MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un sustr

ato o una solución de nutrientes que permite el desarro

llo de microorganismos.
Macronutrientes: carbono, hidrógeno, oxígeno y
nitrógeno.
Micronutrientes: fósforo, potasio, azufre, magnesio.
Vitaminas y hormonas
Elementos traza: zinc, cobre, manganeso, molibdeno,
cobalto.
MACRONUTRIENTES Carbono. El carbono es el
esqueleto de los tres más importantes nutrientes
(carbohidratos, lípidos y proteínas) para la obtención
de energía y material celular.
Hidrógeno y Oxígeno. El hidrógeno y oxígeno forman
parte de muchos compuestos orgánicos. Se
encuentran en el H 2O, como componentes de
nutrientes y en la atmósfera. Además, el O 2 se utiliza
en la respiración aeróbica como aceptor terminal de
electrones.
Nitrógeno. Todos los organismos requieren nitrógeno.
El nitrógeno es metabolizado y llega a ser parte de las
proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de la pared
celular.
MICRONUTRIENTES (c.a. 0,2 g / l)
Fósforo. El fósforo es esencial para la síntesis de
ácidos nucleicos y ATP; también forma parte de los
fosfolípidos y polímeros de la pared celular.
Potasio. El ión potasio actúa como coenzima y
probablemente como catión en la estructura de RNA y
otras estructuras aniónicas celulares.
Azufre. El azufre es necesario para la biosíntesis de
los aminoácidos cisteina, cistina y metionina. También
forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y
ferredoxina.
Magnesio. Se utiliza como cofactor de reacciones
enzimáticas donde actúa el ATP.
ELEMENTOS TRAZA (c.a. 25 mg / l) En general los
requerimientos de elementos traza se conocen
cualitativamente. Es difícil demostrar su requerimiento
debido a que las cantidades necesarias se suelen encontrar
a menudo como contaminantes en otros constituyentes del
medio. Son necesarios para activar algunos enzimas; por
ejemplo, el Mo6+ se necesita en la nitrogenasa que es el
enzima que cataliza la conversión del nitrógeno atmosférico
en amoníaco en la fijación biológica de nitrógeno
CONSTITUYENTES TÍPICOS
• Agentes gelificantes: agar. • Extractos: levadura, ca
rne, hígado, semillas... • Peptonas: soja, carne, gelati
na, caseína... • Sistemas amortiguadores: fosfatos...
• Indicadores de pH: cristal violeta, rojo de fenol... •
Agentes reductores: microaerofilia
o anaerofilia. • Agentes selectivos: pH, antibióticos...
Medio simple y complejo: Dependiendo del tipo de
microorganismo usado (autotrófico o heterotrófico) el
medio puede ser simple o complejo. Los autotróficos
dependen del dióxido de carbono como fuente de
carbono. Tienen un mejor crecimiento en un ambiente
rico en dióxido de carbono. Por otro lado, los
heterotróficos, fijan el dióxido de carbono durante el
crecimiento; y el aire atmosférico generalmente
suministra cantidades adecuadas de dióxido de
carbono para este propósito. Autótrofos generalmente
requieren un medio simple inorgánico. Ellos requieren:
1) Sales inorgánicas 2) Agua 3) Fuente de Nitrogeno
4) Fuente de Carbono (usualmente dióxido de carbono
del aire) Hay otros microorganismos más complejos,
en cambio, que no sintetizan tan fácil todos los
nutrientes o métodos de energía que ellos requieren.
Diseño y Uso del medio:
1) Medio Sintético: Es el cual todos los constituyentes
están específicamente definidos y agregados, de cierta
manera, de forma pura. Sus composiciones y
concentraciones están predefinidas dependiendo del
microorganismo que se quiera inocular (tabulado).
Ventajas: - Ayudará en la reproducibilidad de los
resultados de vez en cuando, porque la composición
del medio está bien definida. - El problema de espuma
es casi nulo, debido a que los agentes espumantes
como proteínas y péptidos de gran peso molecular
están ausentes. - La recuperación y purificación de los
productos fermentación son mucho más fáciles, ya que
el medio puede estar diseñado para evitar los
componentes entrometidos. Todas las ventajas, son
contrarrestadas por el hecho de altos costos para
hacer este medio.
2) Medio crudo: Su composición no está definida. Se
encuentran en ej. Melaza, sulfato de amonio, etc. La
mayor característica del medio crudo es su ventaja
económica. Además, las fuentes de carbono y
nitrógeno están de forma que pueden ser fácilmente
consumidas por el microorganismo. El medio crudo es
generalmente usado a escala industrial después de
perfeccionar la composición del medio en la etapa de
investigación y desarrollo (R&D).
Medios de enriquecimiento. Son medios complejos
(normalmente) con aditivos adicionales para favorecer
el crecimiento de determinados microorganismos
(particularmente heterótrofos exigentes). Ejemplo:
adicción de sangre, suero o extractos de tejidos de
animales y plantas.
Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por
su diseño el crecimiento específico de un
microorganismo particular (o grupo de
microorganismos). Es de gran utilidad para el
aislamiento de microorganismos a partir de una
población microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como
fuente de carbono es selectivo para autótrofos;
adicionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de
los Gram. (+); utilizando maltosa como única fuente de
carbono sólo crecerán los que usen maltosa.
Medios diferenciales. Son aquellos destinados a
facilitar la discriminación de microorganismos de una
mezcla por sus propiedades diferenciales de
crecimiento en dichos medios. Ejemplo: Agar sangre
diferencia hemolíticos de no hemolíticos; McConkey
diferencia lactosa (+) de lactosa (-). F.- Medios de
mantenimiento. Suelen ser distintos a los de
crecimiento óptimo ya que el crecimiento rápido y
prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las
células. Ejemplo: al añadir glucosa y utilizarla los
microorganismos producen ácidos, acidificándose el
medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los
medios de mantenimiento
El agar es un elemento solidificante muy empleado
para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo y
se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas
excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en él.
Agar Nutritivo Medio de cultivo utilizado para
propósitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a
requerimientos nutritivos. Su uso está descrito en
muchos procedimientos para el análisis de alimentos,
aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar
solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriológico el componente dominante es un
polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas y
que presenta la indudable ventaja de que, a excepción
de algunos microorganismos marinos, no es utilizado
como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua
alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los
40ºC, dependiendo de su grado de pureza.
La esterilización generalmente se hace por:
Calor húmedo (121°C, 15psi, 15‐20 min) El calor
húmedo es un método térmico de esterilización y mata
microorganismos por la coagulación de proteínas
(desnaturalización), lo que es causado por la rotura de
los puentes de hidrógeno que son los que mantienen a
las proteínas en su forma tridimensional;1 las proteínas
por lo tanto regresan a su estructura secundaria, se
coagulan y se convierten en proteínas no funcionales.
El calor húmedo puede penetrar más rápidamente que
el calor seco porque las moléculas de agua conducen
mejor el calor que las moléculas de aire. Por ello el
calor húmedo puede ser usado a temperaturas más
bajas y menor tiempo de exposición que el calor seco.
Calor seco (200°C, 2h) El calor cambia
las proteínas microbianas por las reacciones de
oxidación y crea un medio interno árido, así quema a
los microorganismos lentamente. Una simple analogía
es la lenta carbonización de papel dentro de un horno
caliente, aunque la temperatura permanezca por
debajo del punto de ignición del papel.
Radiación (UV, rayos X y rayos ϒ)
UV :La esterilización por rayos ultravioleta (UV)
desinfecta alterando el componente DNA de los
microorganismos e impidiendo su reproducción, por
tanto es un medio no-químico que inactiva bacterias,
esporas, protozoos, levaduras y virus. El UV es un
proceso en línea, por lo tanto no requiere tanque de
contacto, el tiempo de retención requerido se mide en
segundos en lugar de minutos.
Productos químicos (cloración, ozonificación)
Filtración (0,2 μm)
- Por vapor.
- Autoclave (se pone el medio a vapor bajo presión en
una estufa de presión) Aparato para esterilizar por
vapor que consiste en un recipiente cilíndrico, de
paredes resistentes; metálico, y con cierre hermético
autoclave, en cuyo interior, que contiene un líquido,
generalmente agua, el objeto se somete a presiones y
temperaturas elevadas sin llegar a hervir.
Es importante debido a que:
- Un organismo extranjero puede contaminar el
producto final.
- El medio puede ser consumido innecesariamente
para apoyar el crecimiento del organismo
contaminante.
- El producto contaminante puede ser más pesado
que el producto deseado.
- El producto contaminante puede interferir en la
recuperación del producto deseado.
Métodos para evitar contaminación en el proceso
de fermentación:
- Esterilización del medio.
- El inóculo tan puro como sea posible.
- Esterilización del fermentador.
- Esterilización de todo el equipo de fermentación.
- Esterilización de todos los materiales agregados al
fermentador.
- Esterilización del aire.