FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
Facultad de Ciencias Biológicas
E.A.P. Microbiología y Parasitología (10.3)
Práctica N°2: ESTUDIO DE METABOLISMO DE LAS PROTEÍNAS POR LOS
MICROORGANISMOS
Curso:
Fisiología Microbiana
Alumna:
Cárdenas Ortega Joel
Profesor:
Roger Palomino
Horario:
Miercoles y viernes de 2 a 4 pm.
Fecha de realizacion:
Miercoles 07 de setiembre del 2018
Fecha de entrega:
Miercoles 12 de setiembre del 2018
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INTRODUCCIÒN
Los microorganismos para poder cumplir con su metabolismo, se valen de toda
sustancia que pueda estar en el nicho ecológico donde ellos habitan. Los
microrganismos tienen opción de utilizar diferentes tipos de compuestos. Desde el
punto de vista energético los compuestos más requeridos son carbohidratos y
lípidos; pero en algunos casos los microorganismos también suelen utilizar
proteínas.
La proteína no le es directamente útil a la célula microbiana, tiene que degradarla
con enzimas denominadas proteasas, que toman nombres específicos dependiendo
de la proteína que degrade.
Una vez que degrada a las proteínas en sus componentes moleculares,
aminoácidos, estos si le sirven como fuente energética, para producir CO2 y
energía.
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RESUMEN
En la práctica se realizaron dos experiencias: la acción proteolítica sobre la gelatina:
formas de licuefacción e hidrolisis de caseína.
Para la acción proteolítica de la gelatina se sembró por puntura E. coli,
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis en 1 tubo con
medio gelatina cada uno y luego se incubó a temperatura ambiente
Finalmente, para hidrólisis de caseína se sembró por estriado simple E. coli y
Bacillus subtilis en una placa con Agar-leche la cual fue dividida en dos partes
iguales, y rotulados correctamente con los nombres de las cepas utilizadas cada
una, seguidamente se incubó a 37°C
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OBJETIVOS
Diferenciar a los microorganismos según la producción o no producción de
ciertas enzimas como: proteasas, caseínasa, gelatinasa, etc.
Evidenciar como ciertas especies de bacterianas producen enzimas
denominadas GELATINASA y CASEINASA, tanto para la licuefacción e
hidrolisis de proteínas.
Evidenciar como es que los microorganismos acceden a las proteínas y a los
productos de la degradación de las proteínas para cumplir con su metabolismo.
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MATERIALES
Cultivo en caldo de:
- Escherichia coli
- Staphylococcus aureus
- Pseudomonas aeruginosa
- Bacillus subtilis
4 tubos con gelatina, rotulados correspondientemente:
1 placa con agar-leche:
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PROCEDIMIENTOS
EXPERIENCIA Nº1
Acción proteolítica sobre la gelatina: formas de licuefacción:
1. Se sembró por puntura cada especie microbiana de E coli, Staphylococcus
aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis en los medios de
gelatina en columna.
2. Luego se incubaron los 4 cultivos a temperatura ambiente.
EXPERIENCIA Nº2
Hidrólisis de la caseína:
1. Se dividió una placa petri con agar-leche en dos sectores.
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2. Se inoculó E coli y Bacillus subtilis.
3. Luego se incubaron ambas placas a 37°C durante 24 hrs.
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RESULTADOS
Acción proteolítica sobre la gelatina: formas de licuefacción:
E. coli: solidificación
NEGATIVO (extremo
derecho)
S. aureus, P. aeruginosa y B.
subtilis: licuefacción de la
gelatina
POSITIVO (de izquierda a
derecha respectivamente)
Hidrólisis de la caseína:
E. coli: CASEINASA NEGATIVO
(lado izquierdo)
B. subtilis: presento un halo
CASEINASA POSITIVO (lado
derecho)
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DISCUSION
Acción proteolítica sobre la gelatina: formas de licuefacción:
Esta prueba se realizó con el fin de determinar la capacidad de algunos
microorganismos de producir exoenzimas gelatinasas.
Se utilizó el medio de cultivo Gelatina Nutritiva que está compuesto de peptona,
extracto de carne, gelatina y agua destilada. La gelatina es una proteína demasiado
grande para entrar en la célula bacteriana, por lo tanto la célula primero la cataboliza
en componentes más pequeños, aminoácidos.
Los tubo con S. aureus P. aeruginosa, y B. subtilis licuaron la gelatina, mientras que
el tubo con E. coli continuo con el medio solificado.
Hidrólisis de la caseína:
La caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco y opaco
característico, debido a que está presente en suspensión coloidal. Muchas bacterias
poseen caseasa, una exoenzima capaz de hidrolizar dicha proteína, esta produce
péptidos más pequeños y por lo tanto suspensiones más claras. A este fenómeno
se le denomina “peptonización” y es útil en la identificación de algunas especies
microbianas.
El área de la placa donde se inoculó [Link] resulto negativa en la producción de
caseínasa, mientras que B. subtilis resultó positiva a caseínasa.
ANEXO
Tabla 1. Resultados del metabolismo de enzimas de 4 especies bacterianas.
PRUEBAS Proteólisis de la Hidrolisis de la
M.O Gelatina caseína
E. coli - -
S. aureus +
[Link] +
B. subtilis + +
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CONCLUSIONES
Cada reacción metabólica está regulada no solo con respecto a otras
reacciones, sino también con respecto a la concentración de nutrientes en el
medio.
Las proteínas funcionan como enzimas, para formar estructuras, pero
además los aminoácidos pueden utilizarse como fuente de energía o como
sustratos para otras rutas biosintéticas
En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los
microorganismos inoculándolos en diferentes medios de cultivo con sustratos
que pueden utilizar como fuente de energía, fuente de carbono y como
factores esenciales para su crecimiento.
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CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante la capacidad de degradar proteínas que ostentan
algunos microorganismos?
La importancia de degradar las proteínas consiste en la conversión de moléculas
complejas en moléculas más simples para que estos puedan ser debidamente
aprovechados por los microorganismos.
La transformación de los nutrientes en compuestos útiles para la subsistencia
de un organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones químicas que
realizan unas proteínas conocidas como enzimas
2. ¿Qué enzimas están implicadas en la degradación de la gelatina?
La prueba de licuefacción de gelatina se utiliza como medio de cultivo gelatina
nutritiva, en esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo
de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la
gelatina o muestran cambios característicos debido a los productos de degradación.
La gelatina como proteína derivada del colágeno animal es hidrolizada por la
gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con pérdida de sus características
gelificantes.
El medio de cultivo de gelatina contiene peptona y el extracto de carne que
proporcionan los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos.
La gelatina es el sustrato para determinar la capacidad de un microorganismo de
producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas), que licúan la gelatina.
3. ¿Qué efecto tiene la degradación de la caseína sobre las características
organolépticas de la leche?
Al hablar sobre las características organolépticas de la leche nos referimos a un
análisis sensorial (color, olor, sabor, consistencia), estas características se pueden
observar al momento que se da hidrolisis de la caseína en el agar leche por B.
subtilis resultando positiva a caseínasa mostrando un halo alrededor de siembra,
esto producto de la ruptura de enlaces peptídicos, ruptura del enlace amidico y la
formación de un complejo enzima-sustrato
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BIBLIOGRAFIA
Jean F. MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica. Portada. Ed. Médica Panamericana, 2003 - 850
páginas.
Ozawa, A. (1967). Relationship between Indole Production, Nitrite Production
and Carbohydrate Fermentation in Vibrio cholerae. Japanese journal of
microbiology, 11(1), 25-31.
Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio. Front Cover.
Editorial Universidad de Costa Rica, 2005 - 475 pages
pág. 12
