COLORACIÓN COMPUESTA
Son aquellas en que se emplean más de un colorante. La más común es la Gram, que fue
creada por el bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para
poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana
COLORACION GRAM
OBJETIVO.- Reconocer los dos grandes grupos de bacterias existentes mediante el método
de coloración diferencial, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan
de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella.
MATERIAL.-
Cultivos en medio liquido o solidos de:
Escherichia coli
Bacillus cereus
Proteus vulgaris
staphylococcus albus
streptococcus
Cristal violeta o violeta geciana
Lugol
Alcohol-cetona
Safranina
Asas de siembra
Aceite de inmersión
Porta objetos desengrasados
Pizetas con agua destilada
Microscopio
PROCEDIMIENTO
1. Colocar una gota de medio líquido con bacterias sobre un portaobjetos limpio y
desengrasado, en caso de tratarse de una muestra sólida, colocar previamente una
gota de agua destilada estéril sobre portaobjetos, luego extender la muestra sobre el
área de un cm2.
2. Fijar la muestra al aire o pasándola rápidamente por encima de la llama del merchero.
3. Después de la fijación de la muestra cubrirla con la solución fenicada de violeta de
genciana o la de Hucker.
4. Tiempo: 30 a 60 segundos, aproximadamente.
5. Lavar con agua a chorro.
6. Cubrir con Lugol y dejar actuar de 2 a 3 minutos.
7. Lavar.
8. Decolorar con alcohol, solo o con alcohol acetona hasta que ya no se desprenda más
colorante de la lámina.
9. Lavar.
10. Contrastar con safranina (10 a 30 segundos)
11. Lavar, secar y observar a inmersión.
Al final de la coloración según se verá al microscopio, los gérmenes pueden quedar ceñidos
de violeta o rojo. Los que toman el color violeta se llaman gram positivos y los que toman
color rojo se llaman gram negativo. Los gérmenes gran negativos, son los que han cedido al
color violeta por acción del alcohol acetona y por haber quedado sin coloración, han estado
aptos para tomar el segundo colorante que es el rojo.
La acción del lugol en esta coloración es conseguir una mayor fijación del violeta pro parte
de los gérmenes gram postivio por unión del colorante con el yodo del lugol.
En términos generales son gram positivos todos los cocos a excepción de Neisseria y son
gram negativos todos los bacilos a excepción de los esporulados los Mycobacterium y
Corynebacterium. La técnica original de Gram ha sufrido muy diversas modificaciones, una
de las ellas consiste en el empleo de safranina.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Figura 1. Staphylococcus ssp en Coloracion de Gram.Bacterias de color violeta (Gram
positivas).
En la figura se observó cocos gram positivos provenientes del staphylococcus (en griego
significa racimo de granos) que se encuentran en racimos, pares y e cadenas cortas con
forma redonda (coco), esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la
envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. La envoltura
celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared
celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared
celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La
capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de
retener el tinte durante la tinción de Gram al poseer una gran proporción de este polímero
complejo (mureína) la cual no la hace susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino
que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el
complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea . A diferencia de
las Gram-negativas, estas bacterias no presentan una segunda membrana lipídica externa.
CONCLUSIONES
-La tinción de Gram permite conocer la morfología celular, el tamaño, la forma y su
clasificación taxonómica (Gram positivos o Gram negativos) de acuerdo al color que tornan
las bacterias después de la tinción, sin embargo no permite conocer la especie o género de
la bacteria al cual pertenece.
-La coloración reacciona con la célula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.
-La Tinción es importante para la microbiología debido a que proporciona contraste entre el
microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos
morfológicos.
-Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes
celulares, vacuolas o cuerpos celulares. Permite el empleo de mayores amplificaciones.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Díaz Camilo (2011). Definición de tinción. [En línea]. Disponible:
http://es.scribd.com/doc/52811425/Tinciones-en-Microbiologia-Seminario. Citado: 19/11/2013.
Martinez Roberto. (2009). Bacteria gram positiva [En línea]. Disponible: http://martinez-
roberto.blogspot.com/. Citado: 19/10/2013.
Wikipedia (2013). Tinción de Gram. [En línea]. Disponible:
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram. Citado: 19/11/2013
