MANUAL DE PRÁCTICA - BIOQUÍMICA II FAC.

FARMACIA Y
BIOQUÍMICA

UNIVERSIDA NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA”

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

CATEDRA: BIOQUIMICA II

GUIA DE PRATICA

AUTORAS:

Dra. CHACALTANA RAMOS, Luz

Dra. PARI OLARTE, Bertha

Q.F. CHUMBES HUAMAN, Andrea.

ICA – PERÚ
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PROLOGO

Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica

son cada vez más estrechas y se complementan de una forma más evidente
cada día, como se pone de manifiesto en esta “Guía Práctica de Bioquímica”.

En este contexto de continuos avances en la bioquímica y por la patogenia de

las enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que
puede jugar la inflamación en el inicio y progresión de la enfermedad, así como
los datos de “recientes” publicaciones que sugieren que ciertas infecciones
bacterianas o víricas podrían dar lugar al mencionado proceso inflamatorio.
De aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio
nos puede proporcionar en la detección precoz y el estudio y conocimiento de
la misma. Todo esto ha conducido a una nueva terminología para los avances
de las fases aguadas de las enfermedades hoy en día.

Esta es la novedad que aporta esta “guía de práctica”, avalada por los trabajos
químicos y bioquímicos más recientes de la literatura médica. Se prosigue a un
protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas séricas
rápidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un
laboratorio de bioquímica en continua evolución y que incorpora en todo
momento los últimos avances en determinaciones analíticas.
Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde
siempre.

Las Autoras

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OBJETIVO DE LA GUÍA PRÁCTICA

OBJETIVO GENERAL

Al final de semestre del curso práctico el estudiante será capaz de explicar

cómo funcionan los principales procesos metabólicos y los mecanismos
moleculares que le subyacen a la función fisiológica de células, tejidos, y
órganos del cuerpo humano, bajo distintas condiciones fisiológicas.

OBJETIVO ESPECIFICOS

- Se busca contribuir al logro de adecuadas condiciones del aprendizaje al

estudiante en el área de bioquímica II perteneciente a la Facultad de
Farmacia y Bioquímica.
- Que el estudiante entienda los fenómenos fisiológico desde el punto de
vista bioquímico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la
estructura fisiológica de la célula, del tejido y del organismo.
- Que el estudiante conozca los mecanismos bioquímico del
funcionamiento del organismo humano de una manera dinámica e
integral y, al mismo tiempo, comprenda cómo esos mecanismos se
encuentran alterados en la enfermedad.
- Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido
integrar el conocimiento a nivel bioquímico como una herramienta
fundamental para la comprensión de los procesos fisiológicos y de la
fisiopatología y con ello entienda los principios en los que se apoya la
tecnología empleada en el diagnóstico de enfermedades.
- Que el estudiante aplique el método científico como una herramienta en
la identificación, el análisis y la solución de problemas médicos.

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NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO

Las prácticas de Bioquímica son una parte esencial en la formación de un

alumno en esta materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es

necesario leer con atención estas notas y en particular, cada práctica antes de

entrar en el laboratorio.

1. Realizar las prácticas de Laboratorio con el debido interés y

responsabilidad.
2. Lea cuidadosamente la Guía de Práctica y tenga en cuenta las
indicaciones de los Profesores sobre el uso del material y equipo de
Laboratorio, así como el orden, limpieza y seguridad que debe
mantenerse.
3. El o la estudiante deberá acudir a todas las Prácticas de Laboratorio
provisto de mandil blanco con su respectivo logo de la facultad.
4. Por cada Práctica de Laboratorio, cada mesa de Trabajo presentará un
único informe, el cual consta de las siguientes partes: Introducción,
objetivos, resultados, discusión de los resultados, conclusiones,
cuestionario y bibliografía. Debiéndose presentar a la semana siguiente
en el horario y grupo respectivo que le corresponda; ò ciertos informes
de práctica puede ser entregados en el mismo día de la práctica
realizada. La presentación del informe será con letra clara y legible
desarrollado a mano.
5. El inicio de la práctica es en la hora exacta programada. Se tendrá una
tolerancia de 5 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se tendrá
derecho a Nota de informe de prácticas.
6. Las inasistencias a las Prácticas de Laboratorio NO SON
RECUPERABLES EN NINGUNO DE LOS GRUPOS, por lo tanto dichas
faltas deberán de ser justificadas con un máximo de una (01) semana.

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7. Cada Alumno será integrante de una Mesa de Trabajo, a la cual

pertenecerá a lo largo del Semestre Académico.
8. Por mesa de trabajo, será nombrado un responsable del material y
equipo recibido.
9. Al iniciarse la práctica, el responsable de mesa canjeará su Carnet
Universitario, por el material y reactivos a utilizarse en la práctica.
10. En caso de daño, deterioro o pérdida del material y equipo, el
responsable de mesa informará del hecho al Profesor. TODO EL GRUPO
ES RESPONSABLE DEL Daño CAUSADO y deberá repararlo en la
brevedad posible, no máximo de una (01) semana después del incidente,
con la detención de sus Carnet Universitarios.
11. Al final de la Práctica, se procederá a limpiar el material usado, con el
fin de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos.
12. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolverá a la
persona encargada de laboratorio y procederá a recibir su Carnet.
13. El laboratorio deberá quedar completamente limpio, las mesas secas y
limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura.

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PRACTICA N° 1

DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS

El carbohidrato más importante en la alimentación es la glucosa, la cual

ingerimos bajo la forma de disacáridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de
almidón, polisacáridos formados por muchas moléculas de glucosa.

El almidón es el constituyente esencial de cereales, leguminoso, tubérculos y

raíces. La digestión de los carbohidratos se produce gracias a las enzimas
digestivas producidas por la glándula salivares, el páncreas y la pared
intestinal. Estas enzimas son:
o La alfa amilasa salivar
o La alfa amilasa pancreática
o La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal

Las alfa amilasas son enzimas que actúan a pH neutro y en presencia de iones
cloro. Rompen los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacáridos y
glucosa. Los carbohidratos se comienzan a digerir en la boca por acción de la
α-amilasa de la saliva líquido orgánico segregado de modo reflejo ante la
presencia de la comida. La α-amilasa también llamada ptialina, cataliza la
hidrólisis de las unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico α-1,4.
Existen dos formas de evaluar la actividad enzimática e la amilasa:
o Por desaparición de sustrato: forma como desaparece el almidón
el que se aprecia por la reacción del lugol.
o Por formación de producto: forma como desaparece carbohidratos
reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian por
reducción del cobre.

En nuestra practica evaluaremos la actividad enzimática de la amilasa obre el

almidón mediante la reacción del remanente de almidón frente al yodo a mayor
decoloración, mayor actividad enzimática.

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OBJETIVO
- Comprender la importancia de la acción de la α-amilasa
- Interpreta la acción de la α-amilasa
- Comprender la importancia de la digestión de carbohidratos
- Determinar cuantitativamente la actividad amilasa

EQUIPOS
- Baño de agua o baño maría
- Espectrofotómetro

MATERIALES
- Probetas de 100m
- Probetas de 50 ml
- Pipetas de 2 ml
- Pipetas de 1 ml
- Pipetas de 5 ml
- Pipeta de 10 ml
- Fiola 100 ml
- Vaso de precipitado 250 ml
- Gradilla para tubos de ensayo
- Tubos de ensayo
- Propipetas
- Celda para espectrofotómetro
- Vasos descartables
- Materiales de limpieza

REACTIVO
- Almidón
- Buffer fosfato pH 6,6
- HCl
- Suero fisiológico
- Agua destilada

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TÉCNICA EXPERIMENTAL: Digestión del almidón por la amilasa salivar.

 Para la experiencia preparar cuatro tubos de ensayo de acuerdo al
siguiente esquema:

TUBO 1 2 3 4

ml Almidón 1% 2 2 2 2
ml Buffer fosfato pH
6,6 1 1 1 0
ml HCl 0,3 N 0 0 0 3,4
ml Suero Fisiológico 3 2,4 0 0

ml Agua Destilada 0 0 2,4 0

Colocar en baño maría a 37°C por 5 minutos. Luego agregar:
ml solución de
saliva 0 0,6 0,6 0,6

Colocar en baño maría a 37 °C por 20 minutos.

 Pasado este tiempo tomar 0,5 ml de cada tubo y preparar cuarto

tubos más de acuerdo al esquema:

TUBO 1 2 3 4
ml digestión tubo 1 O,5 0 0 0
ml digestión tubo 2 O 0,5 0 0
ml digestión tubo 3 0 0 0,5 0
ml digestión tubo 4 0 0 0 0.5
ml HCl 0,05N 5 5 5 5
ml solución de
yodada 0,5 0,5 0,5 0,5

 Dejar en reposo por 15 minutos, luego leer al fotocolorímetro con

filtro rojo (660nm).

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INFORME N°1

DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:
- Grafique la curva de calibración de A490 nm vs [azúcar] M.

COMENTARIO: …………………………………………

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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. Realizar los cálculos para las soluciones utilizadas en prácticas.
o Almidón 1%
o HCl 0,3 N
o HCl 0,05 N
2. Dibujar un esquema sobre la Digestión de los Carbohidratos

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 2

GLICEMIA ENZIMÁTICA
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGIC

La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón
es un metabolito fundamental en los procesos biológicos.

La determinación cuantitativa de este compuesto, ha sido objeto de muchos

estudios y la literatura ofrece diversas técnicas de análisis que varían de
acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los
contenidos de glucosa y la viabilidad experimental.
El Método enzimático para la determinación de glucosa en sangre y otros
líquidos biológicos

Fundamento del método: El esquema de reacción es el siguiente:

⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗

⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗

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OBJETIVO
- Determinar por espectrofotometría el contenido de la glucosa en
suero y/o en plasma sanguíneo humano.
- Comprender la importancia de la glucosa
- Determinar cuantitativamente la determinación de la glucosa

EQUIPOS
Espectrofotómetro
Centrifugas
Micropipetas
Baño maría
Materiales

MATERIALES
Tubos de ensayos Propipetas
Tubos de centrifugación Jeringa de 5 cc
Pipetas graduadas 5 ml Aguja de 21
Pipetas graduadas 2 ml Ligadura
Gradilla para tubos ensayos Algodón y alcohol
Varilla de vidrio y/o baguete Materiales de limpieza

REACTIVOS
- Kit de glucosa:
o Estándar: solución de glucosa 1gr/l
o Enzima: viales conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa
(POD), 4-aminofenazona (4-AF).
o Buffer: buffer fosfatos pH 7.0 conteniendo hidroxibenzoato.
o Concentraciones finales:
 GOD ≥ 10 KU/L
 POD ≥ 1 KU/L
 4-AF : 0.5 mM
 Fosfatos: 100 mM, pH 7.0
 Hidroxibenzoato: 12 mM

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TÉCNICA EXPERIMENTAL:
- RECOLECCIÓN DE MUESTRA: Se debe obtener suero o plasma de la
manera usual. También es posible realizar la determinación en líquido
cefalorraquídeo. Además, cuando no es posible extraer sangre venosa o en
casos de extrema urgencia, la determinación se puede realizar en sangre
capilar.
o Aditivos: En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se
recomienda el uso de anticoagulante G.
o Estabilidad e instrucciones de almacenamientos: los hematíes y
leucocitos son los responsables de la destrucción enzimática de la
glucosa sanguínea, siendo máxima a 37°C, razón por la debe
centrifugarse la sangre dentro de las dos horas posteriores a la
extracción, hasta obtener un sobrenadante límpido y trasferir a otro
tubo para su conservación. En estas condiciones la glucosa es
estable 4 horas a temperatura ambiente o 24 horas refrigeradas (2-
10 ° C). En caso de no poder procesarse la muestra de la forma
antes indicada, deberá adicionarse un conservador en el momento
de la extracción para inhibir la glucolisis.
- Luego de obtener la muestra (plasma o suero).
- En tres tubos de ensayos marcados con B (blanco), S (Standard) y D
(desconocido o muestra), colocar según el siguiente esquema:
B S D
STANDARD - 2oul -
MUESTRA - - 20ul
REACTIVO DE
2 ml 2ml 2ml
TRABAJO

- Incubar minutos en baño de agua a 37°C. luego leer en espectrofotómetro

a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490 -530 nm) llevando el
aparato a cero con el blanco.

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- CONDICIONES DE REACCIÓN:
o longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro
con filtro verde (490 – 530 nm).
o Temperatura de reacción : 37°C
o Tiempo de reacción: 10 minutos
o Volumen de muestra: 20ul
o Volumen de reactivo de trabajo: 2 ml.
o Volumen final de reacción: 2,02 ml.

- ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL: el color de reacción

final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de
este lapso.

RESULTADO:
- El Tubo B se emplea para la calibración.
- El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.
- El tubo D nos da la lectura de las muestras.

GLICEMIA = D x f

Dónde:
D= es la absorbancia de la muestra (desconocido)
f= Concentración de estándar x 100
Absorbancia del estándar

VALORES NORMALES
- Suero o plasma: 0,70 – 1,10 g/L
- En los niños péqueños se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.

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DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA:

- Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglicemia) en:

o Diabetes Mellitus
o Enfermedades Renales
o Feocromocitoma
o Hipertiroidismo
o Gkucagonona
o Pancreatitis aguda
o Síndrome de Cushing
o Tumores páncreas
o Estrés por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco,
anestesia general).
o Los tratamiento con sueros en vena, ya que contiene dextrosa
(azúcar).
o Embarazo
o Medicamentos (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas
femeninas, etc.).

- Pueden aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:

o Dieta excesivas
o Enfermedades hepáticas
o Enfermedades de Addison
o Exceso de insulina en diabéticos
o Hipotiroidismo
o Hipotituarismo
o Insulinoma
o Alcohol y analgésico puede disminuirla

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INFORME N°2
GLICEMIA ENZIMÁTICA

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1) ¿cuáles son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero?
2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero
y líquidos biológicos.
3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes
diabéticos.
4) Enumere las 3 categorías principales de diabetes mellitus (DM) y cuál es la
más común.
5) Realice las características diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2.
6) Mencionar y explicar la triada diabética
7) Dibuje un gráfico señalando el mecanismo de acción de la glucosa, atreves
de sus hormonas catabólicas y anabólicas.

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 3

EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS

HEPÁTICO

Los seres vivos almacenan con frecuencia carbohidratos que aparentemente

sirven de materiales de reserva, se almacenan en forma de polisacáridos como el
almidón y la insulina en los vegetales y el glucógeno en los animales las
propiedades físicas y químicas de mucho polisacáridos neutros difieren lo
bastante de la otras sustancias naturales, para permitir su fácil aislamiento. Al
homogenizar.

Hígado de rata o conejo en ac. Tricloroacético (TCA), precipitan numerosas

sustancias de peso molecular elevado, como las proteínas y el ácidos nucleicos,
mientras que el polisacárido glucógeno continua disuelto.
El glucógeno puede separarse de los azucares y otros compuestos hidrosolubles
por precipitación con alcohol, porque los polisacáridos son muchos menos
solubles en alcohol acuosos que los azucares. Luego el glucógeno puede
purificarse a partir de soluciones acuosa por precipitación con alcohol.

OBJETIVOS:
- Recordar la importancia del glucógeno
- Recordar las fuentes de glucógeno
- Es la extracción del glucógeno hepático
- Ser capaz de realizar la hidrolisis ácidas enzimática

MATERIAL BIOLOGICA
Un pollo bien alimentado durante unas semanas antes

EQUIPO
Centrifuga
Balanza analítica

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MATERIALES
Pipetas de 5 ml
Pipetas de 10 ml
Tubos de ensayo
Tubos de centrifuga
Mortero con pitón
Varilla de vidrio
Probeta de 100 ml
Vasos de precipitación de 250 ml
Luna de reloj
Fiola de 100 ml
Gradilla para tubos de ensayo

REACTIVOS
Ácido tricloroacético al 5%
Ácido tricloroacéitico al 10%
Etanol
Arena lavada
Cloruro de sodio solido
Éter etílico
Hielo
Solución de lugol

TÉCNICA EXPERIMENTAL
- Prepare el ácido tricloroacetico al 5% y al 10% en la fiola.
- Decapitar un pollo bien alimentado con una dieta alta en carbohidratos
(una semana antes).
- Extraiga el hígado con sumo cuidado.
- Inmediatamente colocar el hígado en una luna de reloj bien helada y pesar
(previamente realizar pesada de la luna de reloj para obtener el peso del
material biológico por diferencia)
- Cortar el hígado en trozos pequeños y dejarlo caer en un mortero muy frio,
y adicionar 1 ml de TCA al 5 % por cada gramo de hígado.

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- Pesar 0,5g de arena lavada y agregarlo al mortero para iniciar la

trituración (mantener el mortero en hielo) hasta obtener una masa liquida
homogénea.
- Trasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente hasta las
dos cuartas partes de la capacidad.
- Llevar los tubos a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM
- Decantar el líquido sobrenadante opalescente en la probeta de 1000ml
- Enjuagar el mortero con un volumen mayor de TCA al 10% con el objetivo
de conseguir una extracción más completa del glucógeno hepático.
- Verter el líquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifugar durante 5
minutos a 2000 RPM
- Decantar el sobrenadante uniendo al primer extracto TCA en la probeta y
anotar el volumen total.
- Repetir los pasos anteriores para mayor rendimiento
- Añadir con agitación a los extractos TCA, 2 volúmenes de etanol por cada
volumen de extracto.
- Agitar la mezcla y dejar en reposo hasta que el precipitado flocule.
- Una vez observada la floculación agitar energéticamente y trasvasar el
contenido en el número mayor posible de tubos de ensayos, para llevar a la
centrifuga por 5 minutos a 2000 RPM
- Eliminar el sobrenadante trasparente
- Aislar en la luna de reloj el glucógeno de cada tubo de ensayo para su
posterior secado.

RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO:

o Tome una pequeña cantidad del glucógeno y disuélvalo en 2 ml de
agua destilada en un tubo de ensayo, agregue unas gotas de
reactivo de lugol. Observe el color.
o Repita lo anterior pero emplee 2 ml de glucosa en lugar de
glucógeno disuelto en agua destilada.

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INFORME N°3
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS HEPÁTICO

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:
1. Indique el rendimiento total del glucógeno y calcule el contenido del
glucógeno obtenido en el hígado, expresándolo en gramos del glucógeno
por 100 gr de tejido fresco, compare los resultados obtenidos con los otros
grupos de mesa y vea si el tamaño del hígado afecta el contenido de
glucógeno,
2. Informe de los resultados obtenidos en el reconocimiento con lugol.

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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. Compare las características del almidón, glucógeno, celulosa y quitina
2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucógeno en el hígado
3. Qué importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimática
4. Cuáles son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los
carbohidratos.

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 4

SCHOCK INSULINICO EN COBAYO

EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA
FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO

El término shock insulínico se utiliza para describir la hipoglicemia severa que

produce pérdida del conocimiento y otros trastornos. La hipoglicemia se produce
cuando la glucosa del cuerpo se gasta con demasiada rapidez, cuando ésta es
liberada en el torrente sanguíneo con mayor lentitud que lo requerido por el
cuerpo, o cuando se libera demasiada insulina en el torrente sanguíneo.

La insulina es una hormona producida por el páncreas en respuesta a mayores

niveles de glucosa en sangre, cuya función es reducir estos altos niveles de
glucosa. La hipoglicemia es relativamente común en las personas diabéticas. Se
presenta por un exceso de insulina oral o de medicamento oral antidiabético,
cuando no se come lo suficiente, o por un incremento repentino del ejercicio sin
compensarlo con una mayor ingesta de alimentos. La hipoglicemia relativa, es
decir, cuando la glucosa en la sangre de un recién nacido está baja, es bastante
común. Un bebé nacido de una madre diabética o con diabetes gestacional
(causada por el embarazo) puede presentar hipoglicemia severa. En estos casos el
niño es llamado "bebé de madre diabética". Si durante el embarazo el nivel de
azúcar en la sangre de la madre es persistentemente alto, el páncreas del feto
interviene en el control del exceso de azúcar produciendo insulina adicional.
Cuando el niño nace, ya no recibe más glucosa de la madre, pero aún produce -
mayor cantidad de insulina, y este exceso hace que el azúcar en la sangre del
bebé descienda a niveles peligrosos. Esto es una emergencia médica que de no
tratarsepuede provocar convulsiones y daños al sistema nervioso del bebé.

Algunas veces, se desconoce la causa de la hipoglicemia (idiopática). En estos

casos, personas que no son diabéticas y que no tienen otras causas conocidas de
hipoglicemia pueden presentar síntomas de este trastorno. La hipoglucemia
puede ocurrir a causa de un tumor secretor de insulina del páncreas, por
enfermedad

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OBJETIVOS

- Demostrar lo que pasa cuando se administra glucosa al conejo que se

encuentra en estado de shock.
- Ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren como resultado de
la administración de la insulina.
- Observar los efectos de un exceso de insulina en los conejos
- Recordar los procesos bioquímicos que ocurren durante dicho proceso y
relacionarlo con episodios de la diabetes

EQUIPO

- Balanza analítica

MATERIALES BIOLÓGICO

- 1 conejos en ayunas durante 24 horas

MATERIALES

Fiola de 100 ml Jeringa de tuberculina

Tubos de ensayo Algodón y alcohol
Vaso de precipitación 100 ml Materiales de limpieza
Agitadores de vidrio Jeringa de 10 cc
Gradillas para tubos de ensayo

REACTIVOS

Glucosa anhidra
Insulina de acción rápida
Agua destilada
Adrenalina

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TÉCNICA EXPERIMENTAL
- El conejo es un animal muy sensible a la acción de la insulina, cuya
respuesta a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razón,
el conejo es el animal de elección en el ensayo biológico oficial de
estandarización de las preparaciones insulínicas. Efectivamente, la
definición de la unidad estándar de insulina está basada en la respuesta
observada con este animal.
- En base a estas consideraciones, usaremos conejos en este experimento,
uno de los más dramáticos de la Bioquímica. La cantidad de trabajo físico
requerida en el experimento será muy pequeña. En su lugar, una
observación muy cuidadosa del animal y de su conducta durante la
primera parte del experimento, será la principal preocupación del
estudiante, haciendo ojalá una revisión mental de aquellos aspectos del
metabolismo intermedio que pueden sufrir cambios en el animal entero.
Durante este periodo los integrantes del grupo deben tratar de disminuir
cualquier causa de excitación para el animal. ¿Por qué?
- El conejo deberá estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se
inyectan 0.3ml de insulina por vía subcutánea al comenzar la sesión de
laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorción lenta
(Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).
- Luego de media hora se le inyectan también por vía subcutánea de 0,2ml
de insulina.
- Mientras usted espera los dramáticos efectos de la insulina, prepare una
solución al 10 % de glucosa que se le administrará al animal y tenga lista
también una jeringa de 10 ml. Después de un tiempo variable, pero
seguramente cerca de una hora después de la segunda inyección de
insulina, el animal entrará en convulsiones. Antes de que esto ocurra el
animal habrá pasado por una serie de cambios característicos, los cuales
recuerdan los cambios que experimenta un individuo con shock insulínico.
- Si al animal no se le presta atención posterior, puede ocurrir que no se
observe el período de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en
estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene
durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se

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establece otro período de convulsiones, durante el cual el animal parece

encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo
a esta nueva crisis.
- Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, aún en
estado comatoso, se le administran 10 ml de la solución al 10% de glucosa
por vía intraperitoneal.
- Como el animal había sido sobrecargado de insulina, la inyección de la
solución de glucosa sólo lo protegerá en una forma temporal. En las horas
siguientes es seguro que el animal caerá de nuevo en shock más de una
vez. Usted tendrá entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte.
Asegúrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones
deben hacerse del animal, la primera a las 2 ó 3 horas y la segunda a las 6
horas. En cada una de estas visitas, como medida de protección, se
inyectan intraperitonealmente 10 ml de solución al 10% de glucosa.

SÍNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:

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INFORME N°4
SHOCK INSULINICO EN COBAYO

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicémico
2. ¿Qué cambios observó usted en la conducta del animal a medida que los
niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock?
3. ¿A qué nivel estaba la glucosa sanguínea cuando el animal cayó en shock?
4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrénicos) se les provoca shock insulínico
de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que
estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. ¿Cree usted que es
el efecto sobre los músculos y sus correspondientes conclusiones lo que
busca el psiquiatra? ¿Será acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual
conduce a cambios en la conducta aún de un conejo?
5. Describa qué es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal
que se encuentra en estado de shock.
6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un
animal como resultado de la inyección de insulina.
7. ¿Para que utilizamos la adrenalina? ¿Cuál es su mecanismo de acción?

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 7

REACCIONES DE ÓXIDO REDUCCIÓN EN MUESTRAS

BIOLÓGICAS.
FOSFORILACION OXIDATIVA

Todos los compuestos orgánicos son combustibles, es decir si se calientan

suficientemente en presencia de oxigeno, se produce bióxido de carbono, agua y
calor de acuerdo con la siguiente reacción:

Compuesto orgánico + O2 + Calor → CO2 + H2O + Energía

Si el agente oxidante es moderado en su acción se puede observar en forma

gradual los productos de las acciones sucesivas, por ejemplo:
- Si un alcohol primario se oxida, el producto será un aldehído
R-CH2OH + O2 → R-OH
- Si uno de los aldehídos se oxida será un acido carboxílico
R-CH + O2 → R-COOH
- En cambio un alcohol secundario al oxidarse produce una cetona.
R-CH-OH + O2 → R-C=O

Una cetona al oxidarse, no da un acido carboxílico como lo hace el aldehído. S

utilizamos como agente oxidante un reactivo que cambe de color al reducirse
mediante este cambio podemos comprobar si la reacción es positiva o no; además
una prueba organoléptica como lo es el olor nos ayuda a comprobar si se lleva la
reacción o no.

En general estos reactivos son sales que contienen un metal, que al cambiar su
número de oxidación cambia el color tales como: las sales de cobre cúprico
(Cu++) que son azules cambian a cobre cuproso (Cu+) que son rojas, otros
ejemplos son el reactivos Fehling (azul) que al oxidarse origina…………

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OBJETIVOS
Al término de la práctica, el alumno establecerá mediante reacciones químicas
cual es el producto de oxidación de:
- Un alcohol primario
- Un alcohol secundario
- Un aldehído

MATERIALES
Gradilla para tubos de ensayos
Tubos de ensayos
Soporte universal completo
Vaso de precipitado de 100ml
Pinza para tubos de ensayo
Pipetas de 5 ml
Pipetas de 2 ml
Goteros
Matraz de 100ml.

REACTIVOS
Reactivo de Fehling A y B
Solución de glucosa 1%
Solución de sacarosa 1%
Solución de maltosa 1%
Solución de lactosa al 1 %
Formaldehido
Acetona
Solución de bicromato de potasio al 3%
Acido sulfúrico concentrado

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TÉCNICA EXPERIMENTAL
1. Oxidación de un aldehído y una cetona con bicromato de potasio. En dos
tubos de ensayos A Y B:
a. En el tubo A colocar 1 ml de formaldehido y en el B 1 ml de cetona
agregar a ambos tubos 1ml de bicromato de potasio y 2 gotas de
ácido sulfúrico.
b. Anotar las observaciones hechas y las reacciones que se llevan a
cabo en cada tubo.
c. ¿Cuál es el agente oxidante y cuál es el reductor?
d. En el tubo B ¿hubo reacción? ¿por qué?

2. Oxidación de un aldehído (glucosa) con el reactivo de Fehling:

a. Marcar cuatro tubos con las letras A, B, C, D respectivamente.
b. En el tubo de ensayo marcado como A, colocar 2ml de solución de
glucosa.
c. En el tubo marcado como B, colocar 2ml de solución de sacarosa.
d. En el tubo marcado como C, colocar 2ml de solución de maltosa.
e. En el tubo marcado como d, colocar 2ml de solución de lactosa.
f. Agregar a cada tubo 1 ml del reactivo de fehling A y 1ml de Fehling
B
g. Calentar los cuatros tubos a baño maría de 5 a 10 minutos.
h. Hacer observaciones, comparando las reacciones de los cuatro
tubos.
i. ¿Cuál es el agente oxidante y reductor en este caso?

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INFORME N°7
FOSTORILACION OXIDATIVA

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es oxidación? Y ¿Qué es un agente oxidante?
2. ¿Qué es reducción? y ¿Qué es un agente reductor?
3. ¿Qué papel juega el reactivo de fehling?
4. ¿Los aldehídos y las cetonas son reductores?
5. Dibuje el ciclo de kress e identifique los intermediarios que intervienen en
la fosforilacion oxidativa.
6. ¿Qué implica las reacciones de óxido - reducción?
7. Las reacciones que siguen según el grafico, implican oxidación y reducción,
complete la tabla:

Autores: [Link].R / B.P.O. / [Link].H 33

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LAS PAREJAS QUE MOLÉCULAS SE HALLAN EN LAS MOLÉCULAS

REDO QUE ESTADO REDUCIDO Y CUALES DE
INTERVIENEN EN ESTADO OXIDADO TRANSFERENCIA
REDUCIDO OXIDADO DE GRUPOS QUE
PARTICIPAN

8. Completar, Aceptores de electrones en la respiración anaeróbica.

TIPO DE ACEPTOR DE PRODUCTO
RESPIRACIÓN ELECTRONES REDUCIDO
Respiración de azufre
Respiración de sulfato
Respiración de
carbonato (bacteria
acetogenicas)
Respiración de
carbonato (bacteria
metanogenicas)
Respiración de nitrato
Respiración de hierro
Compuestos orgánicos

9. Llene los espacios en blancos, complete los enunciados que siguen

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a. Los ácidos grasos, las hexosas y los_______________ son las

principales moléculas que sirven como combustibles para los
heterótrofos.
b. En vegetales y animales, el NADPH se genera catabólicamente en la
vía ________________.
c. Los tres productos principales que se generan en el catabolismo
completo de la glucosa son _________________, _____________ y
___________________.

10. De las transformaciones bioquímicas que siguen, ¿Cuáles generan y no

generan NADH, NADPH, ATP?
a. Glucosa →piruvato (en la glicolisis)
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

b. Piruvato →dióxido de carbono

i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

c. Glucosa-6 fosfato →fructuosa-6-fosfato (en la vía de las pentosas

fosfato).
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

d. Glucosa → etanol
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

e. NADH→NAD+ (en el transporte de electrones)

i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

f. Electrones del agua → ferredoxina.

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i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

11. Diga si los enunciados son verdaderos o falsos, si son falsos diga cuál es la
respuesta correcta.
a. El NADH es una forma de potencial reductor que se emplea en la
biosíntesis reductiva. ( ____________)

b. La fotosíntesis es la única fuente de ATP y NADPH en las plantas

verdes. (____________).

c. El ATP se genera en el catabolismo exclusivamente por fosforilacion

de ADP vinculada a transferencia de electrones (_____________).

d. El metano es una forma altamente reducida de carbono, de modo

que pueda actuar como fuente de electrones del entorno para los
autótrofos. (____________).

e. Todos los autótrofos generan NAPDH durante los transportes de

electrones (____________).

BIBLIOGRAFÍA:

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1) Lehninger A, Nelson D. Principios de bioquímica. 4a. ed. Barcelona:

Ediciones Omega; 2010.

2) Holum J. Fundamentos de química general, orgánica y bioquímica para

ciencias de la salud. México: Editorial Limusa Wiley; 2009.

3) Devlin T. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 4a. ed.

Barcelona: Editorial Reverté; 2010.

4) Laguna J, Piña E. Bioquímica de Laguna. [Link]. México: Editorial El

Manual Moderno; 2008.

5) McKee T, McKee R. Bioquímica. 3a. ed. España: McGraw-Hill

Interamericana Editores; 2011.

6) Murray K, Granner D. Bioquímica de Harper. 16a. ed. México:IPN/Editorial

El Manual Moderno; 2010.

7) Stryer L. Bioquímica. 5a. ed. Barcelona:Editorial Reverté; 2009.

8) Montgomery R. Bioquímica: casos y texto. 6a. [Link] Harcourt-Brace;

2008: cap.4.

9) Villazón S, Cárdenas C, Villazón.

Autores: [Link].R / B.P.O. / [Link].H 37