Batería de pruebas API20E.
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para
bacterias de la familiaEnterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-).
Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y
miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de
ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada
tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos
deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.
Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en
agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se
incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen
cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.
La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de
lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos
o negativos para cada reacción según el color aparecido.
Batería de pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas
Pueba Reacción / Enzimas Negativo Positivo
ONPG beta-galactosidasa sin color amarillo
ADH arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
LDC lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
ODC ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
CIT utilización del citrato verde azul oscuro o turquesa
H2S producción de H2S sin precipitado negro precipitado negro
URE ureasa amarillo rojo o naranja
TDA triptófano desaminasa amarillo marrón-rojo
color rosa o anillo rosa-
IND producción de indol amarillo
rojo
VP producción de acetoína (Voges-Proskauer) sin color rosa-rojo
GEL gelatinasa sin difusión difusión de pigmento
GLU fermentación/oxidación de glucosa azul o verde amarillo
MAN fermentación/oxidación de manitol azul o verde amarillo
INO fermentación/oxidación de inositol azul o verde amarillo
SOR fermentación/oxidación de sorbitol azul o verde amarillo
RHA fermentación/oxidación de ramnosa azul o verde amarillo
SAC fermentación/oxidación de sacarosa azul o verde amarillo
MEL fermentación/oxidación de melobiosa azul o verde amarillo
AMY fermentación/oxidación de amigdalina azul o verde amarillo
ARA fermentación/oxidación de arabinosa azul o verde amarillo
OX citocromo oxidasa
B. Etapas del procedimiento (Ver vídeo Procedimiento API20E)
Preparación de la suspensión bacteriana
Tomar una colonia bien aislada de
cada microorganismo y resuspenderla
homogéneamente en 5 mL de solución
salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua
estéril.
Siembra de la galería API
Cada pocillo tiene un tubo y una
cúpula (parte aerobia).
Llenar con la suspensión de bacterias
los tubos, no la cúpula, de todos los
pocillos.
Llenar la cúpula de los pocillos CIT ,
VP, GEL con la suspensión de
bacterias.
Tapar con parafina líquida
Llenar con parafina las cúpulas de los
pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S
para obtener anaerobiosis.
Poner la galería en su propia cámara húmeda de incubación
Poner la tira en su propia cámara
húmeda de incubación. Previamente
poner agua en los alvéolos de la
cámara para proporcionar una
atmósfera húmeda durante la
incubación.
Incubación en estufa
Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
Anotar los resultados inmediatos
La lectura de los resultados se lleva a
cabo por comparación de los colores
de cada pocillo con los de las tablas de
lectura.
Ver tabla de lectura (colores en
imagen) en otra pantalla
Ver tabla de lectura (colores en texto)
en otra pantalla
Y anotando el resultado como positivo
o negativo
Revelado de pruebas que requieren reactivos (Ver vídeo revelado y lectura API20E)
Para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios:
Si la glucosa da negativo y los tests positivos son 2 o menos de 2, no hay que
añadir reactivos. Cuando ésto ocurre se hacen otros tipos de API como el API
20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos
especiales.
Si la glucosa es positiva y/o 3 o más tests son positivos se revelan los test que
requieren reactivos:
TDA
Añadir una gota de FeCl3 10 %.
Positivo = color marrón oscuro.
VP
Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al
40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5
OH). Positivo = color rosa fuerte o rojo
en 5-10 minutos.
IND
Añadir una gota de reactivo de Kovacs
(1) o de Dimetilamino-cinamaldehido
(2). Dependiendo del reactivo utilizado
pueden darse las posibilidades
siguientes:
(1)Positivo = aparece un anillo rosa-
rojo
(2)Positivo =color de rosa a morado
en todo el pocillo
Oxidasa
Añadir una gota del reactivo
(tetrafenilendiamina) recién
preparado. Positivo = color azul que
aparece inmediatamente
Anotar el resto de resultados
La lectura de los resultados se lleva a
cabo por comparación de los colores
de cada pocillo con los de las tablas de
lectura.
Ver tabla de lectura (colores en
imagen) en otra pantalla
Ver tabla de lectura (colores en texto)
en otra pantalla
Y anotando el resultado como positivo
o negativo
Perfil numérico e identificación
Del conjunto de reacciones y
resultados se obtiene un perfil
numérico de 7 cifras. Los pocillos
están separados en grupos de tres: en
total tenemos 7 grupos de tres tubos o
tripletes (el test número 21
corresponde al test de la oxidasa). A
cada pocillo se le da el valor 0, 1, 2 o
4.
o Si la reacción es negativa se pone 0.
o Si la reacción es positiva se pone: 1
si es el primer pocillo de un triplete, 2
si es el segundo, 4 si es el tercero.
o Se suman los valores de cada
triplete y se obtiene un código de 7
cifras.
o Con este código se busca en la tabla
de identificación la especie de que se
trata.
C. Entrenamiento en la lectura de los resultados positivos o negativos de cada prueba
En las tablas de lectura del comienzo de este ejercicio se muestran los colores de los resultados positivos y
negativos para cada prueba. Para irse familiarizando con dichos resultados le proponemos realizar estos ejercicios
de entrenamiento aconsejando que consulte también las dos tablas a que nos hemos referido anteriomente
(colores en modo imagen y en modo texto). Para ello:
o Observe la imagen del supuesto práctico para cada prueba (columna)
o Compare con las imágenes de resultados positivos y negativos de esa prueba de esta tabla y
de las otras 2 anteriores, y
o Conteste a la preguntas de entrenamiento para esa prueba, haciendo clic sobre la letra azul
que antecede a la opción.
Pruebas ONPG ADH H2S URE GEL GLU RHA
Resultado
Negativo
sin
sin color amarillo precipitado amarillo sin difusión azul o verde azul o verde
negro
Resultado
Positivo
rojo o precipitado rojo o difusión de
amarillo amarillo amarillo
naranja negro naranja pigmento
Supuesto
práctico
RESULTADO RESULTADO RESULTADO RESULTADO RESULTADO RESULTADO RESULTADO
Contestar
: : : : : : :
Preguntas
de
a ) Negativo a ) Negativo a ) Negativo a ) Negativo a ) Negativo a ) Negativo a ) Negativo
entrenamient
o
b ) Positivo b ) Positivo b ) Positivo b ) Positivo b ) Positivo b ) Positivo b ) Positivo
D. Entrenamiento en la codificación de los tripletes y en la interpretación de los colores de cada prueba
Para irse familiarizando con la codificación de los tripletes, así como con la determinación de los resultados
positivos y negativos para cada prueba, le proponemos realizar estos ejercicios de entrenamiento
aconsejando que consulte tambien las dos tablas de lectura que hemos referido anteriomente (colores en
modo imagen y en modo texto). Para ello:
o Por cada triplete, observe la coloración obtenida en los resultados de las 3 pruebas de ese
triplete
o Compare esas imágenes con los resultados positivos y negativos de esas 3 pruebas en las
tablas de lectura
Ver tabla de lectura (colores en imagen) en otra pantalla
Ver tabla de lectura (colores en texto) en otra pantalla
o Adjudique a cada prueba el correspondiente valor (negativo=0; positivo=1, 2, o 4 según
posición en el triplete)
o Sume los 3 valores
o Conteste a la preguntas de entrenamiento para esa prueba, haciendo clic sobreel número
correspondiente.
0-1-2-3-4-5-6-7 0-1-2-3-4-5-6-7 0-1-3-4-5-6-7
0-1-3-4-5-6-7 0-1-3-4-5-6-7 0-1-3-4-5-6-7
0-1-3-4-5-6-7 0-1-3-4-5-6-7 0-1-2-3-4-5-6-7
