Microscopio óptico

[Link]

Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos. También se le

conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de
campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton
van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente
pequeña y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el
material que se iba a examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente
convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros
aparatos ópticos.

Microscopio ó[Link]ón:A) ocular, B) objetivo, C) portador del objeto, D)

lentes de la iluminación, E) sujeción del objeto, F) espejo de la iluminación.

Contenido
 1 Historia
 2 Partes del microscopio óptico y sus funciones
 3 Sistema de iluminación
 4 Microscopio óptico compuesto
 5 Principales elementos de un microscopio básico
 6 Poder separador, objetivos de inmersión y aumento útil
 7 Correcciones
o 7.1 Las aberraciones
o 7.2 Corrección de las aberraciones
 8 Aplicaciones del microscopio óptico
 9 Microscopio estereoscópico
 10 Conectar una cámara digital a un microscopio óptico
o 10.1 Métodos básicos
 11 Desor
 12 Referencias

Historia
  1608 Zacharias Jansen construye un microscopio con dos lentes convergentes.
 1611 Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto.
 1665 Robert Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de corcho y
describe los pequeños poros en forma de caja a los que él llamó "células". Publica su
libro Micrographia.
 1674 Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios. Observará bacterias por
primera vez 9 años después.
 1828 W. Nicol desarrolla la microscopía con luz polarizada.
 1838 Schleiden y Schwann proponen la teoría de la célula y declaran que la célula
nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales.
 1849 J. Quekett publica un tratado práctico sobre el uso del microscopio.
 1876 Abbé analiza los efectos de la difracción en la formación de la imagen en el
microscopio y muestra cómo perfeccionar el diseño del microscopio.
 1881 Retzius describe gran número de tejidos animales con un detalle que no ha sido
superado por ningún otro microscopista de luz. En las siguientes dos décadas él, Cajal y
otros histólogos desarrollan nuevos métodos de tinción y ponen los fundamentos de la
anatomía microscópica.
 1886 Carl Zeiss fabrica una serie de lentes, diseño de Abbé que permiten al
microscopista resolver estructuras en los límites teóricos de la luz visible.
 1908 Köhler y Siedentopf desarrollan el microscopio de fluorescencia.
 1930 Lebedeff diseña y construye el primer microscopio de interferencia.
 1932 Zernike inventa el microscopio de contraste de fases.
 1937 Ernst Ruska y Max Knoll, físicos alemanes, construyen el primer microscopio
electrónico.
 1952 Nomarski inventa y patenta el sistema de contraste de interferencia diferencial
para el microscopio de luz.

Partes del microscopio óptico y sus funciones

* Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplia la imagen formada
en los objetivos.

2 * Objetivo: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta, lo que

significa que es muy importante este elemento del microscopio, es un elemento vital
que permite ver a través de los oculares

3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.

5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

6 * Tubo: es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera.

7 * Revólver: Es un sistema que agarra los objetivos, y que rota para utilizar un
objetivo u otro.

8 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina

hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico
de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una
determinada altura.
9 * Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca
la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación
situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la
preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa.

10 * Base: Es la parte inferior del microscopio que permite el sostén del mismo.

Sistema de iluminación
La fuente de luz (1), con la ayuda de una lente (o sistema) (2), llamada colector, se
representa en el plano del diafragma iris de abertura (5) del condensador (6). Este
diagrama se instala en el plano focal anterior del condensador (6) y puede variar su
abertura numérica. El diagrama iris (3) dispuesto junto al colector (2) es el diafragma de
campo. La variación del diámetro del diafragma de campo permite obtener su imagen
igual al campo visual lineal del microscopio. La abertura numérica del condensador (6)
supera, generalmente la de la abertura del objetivo microscópico. es la iluminacion que
permite ver mejor lo que queremos observar como las células o las membranas celulares
entre otros

Microscopio óptico compuesto

Artículo principal: Microscopio compuesto

Un microscopio compuesto es un microscopio óptico con más de un lente. Se utilizan

especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que
se transparentan.

Ocular. objetivo

Diafragma - Condensador.

Platina. Tubo
 Tornillos macro y micrométrico Revólver.

Principales elementos de un microscopio básico

Los microscopios de este tipo suelen ser más complejos, con varias lentes en el objetivo
como en el ocular. El objetivo de éstas lentes es el de reducir la aberración cromática y
la aberración esférica. En los microscopios modernos el espejo se sustituye por una
lámpara que ofrece una iluminación estable y controlable.

Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especímenes delgados, puesto

que su profundidad de campo es muy limitada. Por lo general, se utilizan para examinar
cultivos, preparaciones trituradas o una lámina muy fina del material que sea.
Normalmente depende de la luz que atraviese la muestra desde abajo y usualmente son
necesarias técnicas especiales para aumentar el contraste de la imagen.

La resolución de los microscopios ópticos está restringida por un fenómeno llamado

difracción que, dependiendo de la apertura numérica (AN o AN) del sistema óptico y la
longitud de onda de la luz utilizada (λ), establece un límite definido (d) a la resolución
óptica. Suponiendo que las aberraciones ópticas fueran despreciables, la resolución
sería:

Normalmente, se supone una λ de 550 nm, correspondiente a la luz verde. Si el medio

es el aire, la AN práctica máxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5.

Ello implica que incluso el mejor microscopio óptico está limitado a una resolución de
unos 0,2 micrómetros.

Poder separador, objetivos de inmersión y aumento

útil
 Poder separador

De la teoría de la difracción sobre la formación de imágenes mediante un microscopio

se obtiene que la distancia mínima entre dos puntos visibles por separado es:
Donde λ es la longitud de onda de la luz monocromática en la que se observa el objeto y
A es la abertura del microscopio.

 Objetivos de inmersión

El medio óptico líquido que rellena el espacio entre el objeto y el objetivo se le

denomina líquido de inmersión. El índice de refracción de este es próximo al del vidrio
(se utiliza agua, glicerina, aceites de cedro y de enebro, monobromonaftalina, entre
otros).1

Correcciones
 Tipos de objetivos y sus características.

Aunque todos los componentes que constituyen un microscopio son importantes, los
objetivos son de suma importancia, puesto que la imagen, en definitiva, depende en
gran medida de su calidad. Los mejores objetivos son aquellos que están corregidos
para las aberraciones.

Las aberraciones

Son alteraciones ópticas en la formación de la imagen debidas a las propias lentes del
objetivo.

 aberraciones geométricas (efecto Keystone)2

 aberraciones cromáticas

Corrección de las aberraciones

Para evitar las aberraciones geométricas se construyen los llamados objetivos planos o
planáticos, lo cual suele estar indicado en el propio objetivo con la inscripción PLAN.
Los objetivos que están corregidos para las aberraciones cromáticas se denominan
acromáticos (corregidos para el rojo y el azul), semiapocromáticos (corregidos para el
rojo y el azul y tienen una mayor apertura numérica) y finalmente los apocromáticos
(que son de mayor calidad y están corregidos para el rojo, el azul y el verde).

Aplicaciones del microscopio óptico

Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos de la ciencia en
donde la estructura y la organización microscópica es importante, incorporándose con
éxito a investigaciones dentro del área de la química (en el estudio de cristales), la física
(en la investigación de las propiedades físicas de los materiales), la geología (en el
análisis de la composición mineralógica de algunas rocas) y, por supuesto, en el campo
de la biología (en el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva), por citar
algunas disciplinas de la ciencia.

Hasta ahora se da uso en el laboratorio de histología y anatomía patológica, donde la

microscopía permite determinadas aplicaciones diagnósticas, entre ellas el diagnóstico
de certeza del cáncer, numerosas estructuras cristalinas, pigmentos, lípidos, proteínas,
depósitos óseos, depósitos de amiloide, etcétera.

Microscopio estereoscópico

Microscopio estereoscópico. Microscopio estereoscópico.

El diseño de este instrumento es distinto al del diagrama de más arriba y su utilidad es

diferente, pues se utiliza para ofrecer una imagen estereoscópica (3D) de la muestra.
Para ello, y como ocurre en la visión binocular convencional, es necesario que los dos
ojos observen la imagen con ángulos ligeramente distintos. Obviamente todos los
microscopios estereoscópicos, por definición, deben ser binoculares (con un ocular para
cada ojo), por lo que a veces se confunden ambos términos. Existen dos tipos de diseño,
denominados respectivamente convergente (o Greenough) y de objetivo común (o
Galileo).

El diseño convergente consiste en usar dos microscopios idénticos inclinados un cierto

ángulo uno con respecto a otro y acoplados mecánicamente de tal forma que enfocan la
imagen en el mismo punto y con el mismo aumento. Aunque es un diseño económico,
potente y en el que las aberraciones resultan muy fáciles de corregir, presenta algunas
limitaciones en cuanto a modularidad (capacidad de modificar el sistema para poner
accesorios) y la observación durante tiempos largos resulta fatigosa.

El microscopio estereoscópico es apropiado para observar objetos de tamaños

relativamente grandes, por lo que no es necesario modificar los objetos a ver, (laminar)
ni tampoco lo es que la luz pase a través de la muestra. Este tipo de microscopios
permite unas distancias que van desde un par de centímetros a las decenas de ellos
desde la muestra al objetivo, lo que lo hace muy útil en botánica, mineralogía y en la
industria (microelectrónica, por ejemplo) como en medicina (microscopios quirúrgicos)
e investigación, fundamentalmente en aplicaciones que requieren manipular el objeto
visualizado (donde la visión estereoscópica es esencial). En la fotografía se aprecia una
concha de 4 cm de diámetro.

Podríamos decir que un microscopio estereoscópico sirve para las disecciones de

animales.

Conectar una cámara digital a un microscopio óptico

 Adaptador digital LM para la Canon EOS 5D.

Un adaptador óptico mecánico es importante en fotografía digital. Dicho adaptador sirve

de enlace entre la cámara y el microscopio. Es especialmente importante que la
conexión mecánica sea firme, pues cualquier movimiento mínimo, es decir, vibraciones
de la cámara, reduciría la calidad de la imagen notablemente. Adicionalmente, se
requiere un adaptador óptico para el trayecto de luz con el que se logrará así que el
sensor CCD/CMOS de la cámara proyecte una imagen de total nitidez e iluminación.

La fotomicrografía (fotografía realizada con la ayuda de un microscopio compuesto) es

un campo muy especializado de la fotografía, para la que hay disponibles equipos de
precio muy elevado, y no simples equipos de estudio.

Con un microscopio de calidad adecuada, como los que se encuentran en la mayoría de

los laboratorios científicos, se pueden realizar fotomicrografías de una calidad
razonable, utilizando una cámara de uso general, de objetivo fijo o intercambiable.

Métodos básicos

Hay dos métodos básicos de tomar fotografías por medio del microscopio. En el primer
método el objetivo de la cámara realiza una función parecida a la del cristalino del ojo y
proyecta sobre el sensor una imagen real de la imagen virtual que se ve por el ocular del
microscopio. Este método es el único adecuado para utilización de cámaras con objetivo
fijo, esto es, no intercambiable.

El segundo método, adecuado para cámaras con objetivo intercambiable, implica retirar
el objetivo de la cámara y ajustar el microscopio de modo que el ocular forme una
imagen directamente sobre el sensor.

La calidad de la óptica de un microscopio (objetivo y ocular) es fundamental en la

determinación de la calidad de una imagen fotográfica. Los objetivos y oculares de
microscopio se encuentran en diferentes calidades, determinadas por la precisión con
que han sido corregidos de aberraciones. Los objetivos más económicos están
corregidos de aberración esférica para un solo color, generalmente el amarillo verdoso,
pero no de aberración cromática para la totalidad del espectro visible, sino sólo para dos
o tres colores, primarios. Estos objetivos se llaman acromáticos, y también muestran
cierta cantidad de curvatura de campo; esto es, que la totalidad del campo de visión del
objetivo no puede llevarse simultáneamente a foco fino.

Existen los acromáticos de campo plano, en los que la curvatura de campo ha sido casi
totalmente corregida, se denominan planacromáticos.

Los apocromáticos están corregidos de aberración esférica para dos colores y de

aberración cromática para los tres colores primarios. Aun así, mostrarán curvatura de
campo a menos que sean planapocromáticos, los mejores objetivos de que se dispone.
Los oculares también tienen diferentes calidades. Los más simples son los de campo
ancho.

Los oculares compensadores se diseñan para compensar ciertas aberraciones cromáticas

residuales del objetivo, y dan su mejor resultado cuando se utilizan con objetivos
apocromáticos, aunque también pueden utilizarse con éxito con los acromáticos de
mayor potencia. Existen los oculares foto, especiales para fotomicrografía, y cuando se
utilizan con los objetivos planapocromáticos dan la mejor calidad posible de fotografía.

Desor
El diseño de objetivo común utiliza dos rutas ópticas paralelas (una para cada ojo) que
se hacen converger en el mismo punto y con un cierto ángulo con un objetivo común a
ambos microscopios. El diseño es más sofisticado que el convergente, con mejor
modularidad y no genera fatiga en tiempos de observación largos. Sin embargo es más
costoso de fabricar y las aberraciones, al generarse la imagen a través de la periferia del
objetivo común y en un ángulo que no coincide con el eje óptico del mismo, son más
difíciles de corregir.

Los microscopios estereoscópicos suelen estar dotados, en cualquiera de sus variantes,

de un sistema pancrático (zoom) o un sistema de cambiador de aumentos que permite
observar la muestra en un rango de aumentos variable, siempre menor que el de un
microscopio compuesto.

Referencias
1. ↑ Microscopio compuesto - [Link]
2. ↑ Entrada en Google Books
PRÁCTICA 3. ESTRUCTURA Y MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO.
OBSERVACIÓN DE CÉLULAS Y PROCESOS CELULARES (MITOSIS)

El objetivo fundamental de esta práctica es la familiarización con el manejo del

microscopio óptico. se utilizará un microscopio compuesto o lumínico, en el que la luz
atraviesa la muestra con el material a observar y, a través de un juego de lentes, llega al
ojo del observador una imagen aumentada. En la primera parte de la práctica se revisa
brevemente la estructura del microscopio y se aprende a enfocar una preparación y las
normas para el correcto uso del aparato. En segundo lugar, se realizarán preparaciones
sencillas para observar distintas estructuras biológicas de tejidos tanto animales como
vegetales. Finalmente, se realizará una preparación algo más compleja que permitirá la
observación del proceso de mitosis en meristemos vegetales.
1. Estructura y manejo del microscopio óptico
Las partes esenciales que componen un microscopio óptico (ver figura adjunta) son:
Parte mecánica
- Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
- Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un
sistema de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas
escalas que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La
platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la
misma, que permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido
longitudinal y transversal respectivamente.
- Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.
- Revólver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
- Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el
microscopio para trasladarlo de lugar.
- Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer
enfoque de la muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la
platina verticalmente de forma perceptible.
- Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque precidso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es
el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer
enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.
Parte óptica
- Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador,
situados en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de
lentes convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se
mono o binoculares.
- Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte
inferior del tubo, mediante el revólver. En esta estructura se pueden acoplar
varios objetivos (ordenados de forma creciente según sus aumentos, en el
sentido de las agujas el reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos
de cada objetivo, que también van reseñados en el lateral del mismo. Algunos
objetivos no enfocan bien la preparación al aire, y se deben de utilizar con un
aceite de inmersión (normalmente van marcados con un anillo rojo). Estos
objetivos de inmersión no se utilizarán normalmente en estas prácticas.
- Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos
contraste. Se regula en altura mediante un tornillo (letra J de la figura).
- Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación
está constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie
del microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que
envía los rayos luminosos hacia la platina.
- Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o
cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.
- Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es
necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan
incorporado en el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un
potenciómetro para regular la intensidad de la luz.
1.1. Montaje y enfoque de una preparación microscópica
 Antes de observar la preparación al microscopio, esta debe de ser montada sobre
vidrio. Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta),
que, como su nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y
cubreobjetos (cubre) que siempre ha de colocarse sobre la muestra. Una vez
colocada la muestra en el porta, se debe añadir una gota de agua, o de la solución
acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar interfases agua-aire, que
provocan zonas ciegas.
Para enfocar la preparación se ha de seguir de forma minuciosa el protocolo
descrito debajo de la figura.
Consejos prácticos
- En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y
desenchufe debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el
microscopio del transformador.
- Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se esté
utilizando, ya que la vida media de la bombilla es corta.
- Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.
- Anotar siempre el número de aumentos con el que se observa la preparación.
Para calcularlo basta multiplicar el número de aumentos del objetivo por el
de los oculares. Hacer esquemas y dibujos de lo observado con cada aumento.
- Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersión, ya
que se requiere un aceite especial sin el que, además de no enfocar bien, existe
una gran probabilidad de dañar la lente al rozar con el cubreobjetos.
- Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la
preparación. EL MICROSCOPIO, ADEMÁS DE UNA GRAN
HERRAMIENTA EN BIOLOGÍA, ES UN GRAN JUGUETE PARA
DISFRUTAR DE ÉL DESCUBRIENDO EL APASIONANTE MUNDO DE
LO PEQUEÑO, para ello, hay que rastrear todo este mundo.
 EL MICROSCOPIO ÓPTICO

A. OCULARES (A)
B. REVOLVER (B)
C. OBJETIVOS (C) (los
aumentos en el ext.)
D. PLATINA (D)
E. Tornillos para
desplazar la preparación sobre la platina en sentido longitudinal y
transversal (E)
F. CONDENSADOR
(F)
G. Tornillo
MACROMÉTRICO (G)
H. Tornillo MICROMÉTRICO (H)
I. DIAFRAGMA IRIS (I)
J. Tornillo para regular la altura del condensador (J)
K. INTERRUPTOR (K)
L. Regulador de la Intensidad de Luz (L)
M. PINZAS para ajustar la preparación sobre la platina (M)
N. PIE O SOPORTE (N)

ENFOQUE DEL MICROSCOPIO

Los pasos a seguir para la perfecta utilización del microscopio son las siguientes:
1.- Enchufar el microscopio al transformador y éste a la red (NUNCA ENCHUFAR EL
MICROSCOPIO DIRÉCTAMENTE A LA RED. SIEMPRE QUE NO SE ESTÉ MIRANDO
POR EL MICROSCOPIO HAY QUE APAGAR LA LUZ).
2.- Colocar la preparación sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en el orificio
central de la platina.
3.- Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de estructuras
importantes.
4.- Subir la pletina accionando el tornillo macrométrico y mirando la preparación desde fuera hasta
alcanzar el tope superior. En ningún caso tocar la preparación con los objetivos.
5.- Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macrométrico hasta
conseguir ver el objeto lo más nítido posible.
6.- Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta verlo claramente.
7.- Para observar la preparación a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple giro del
revolver (SIN MOVER EN NINGÚN CASO EL TORNILLO MACRO). Las pequeñas
varisaciones que observeis en el enfoque se producen al cambiar de objetivo y se corrigen con el
micro.
8.- Para observar otros campos, desplazar la preparación moviendo los tornillos de la platina.
9.- Para cambiar la preparación:
- Bajar la platina.
- Colocar el objetivo de menor aumento
- Quitar la preparación y colocar la siguiente
Para desconectar el microscopio, además de los tres pasos anteriores:
- Apagar y desenchufar el transformador de la red
- Tapar el microscopio con su funda
2. Observación de células animales y vegetales
Para comenzar a utulizar el microscopio, se observarán células animales y
vegetales, y se estudiarán sus diferencias. Además, se observarán orgánulos celulares,
en concreto plastos de células de tubérculo de patata.
Práctica 2.1. Observación de células del epitelio de la mucosa bucal
Este epitelio está constituido por células de un contorno irregular, prácticamente
incoloras a la luz blanca, por lo que, para su observación es preciso realizar un proceso
previo de tinción, en este caso con azul de metileno, que permitirá observar un
citoplasma granulado y un núcleo claramente diferenciado.
Método
1. Raspar suavemente la cara interior de la mejilla con un palillo, y depositar el
contenido en un portaobjetos extendiéndolo con cuidado.
2. Fijar la muestra a la llama para estabilizar las estructuras y adherirla al porta.
Para ello, se pasa la cara inferior del porta por encima de la llama brevemente, con
cuidado de no quemar las células.
3. Añadir 1-2 gotas de azul de metileno sobre las células fijadas y dejar teñir
durante 3 minutos.
4. Lavar suavemente la preparación para eliminar el exceso de colorante. Para ello,
colocar el porta en pendiente bajo el grifo y dejar caer lentamente un chorro fino de
agua.
5. Secar la parte inferior del porta y colocar un cubreobjetos.
6. Observar la preparación
Práctica 2.2. Observación de células de hoja de lirio
Estas células se caracterizan por poseer forma regular debido a una pared celular
muy refringente, por lo que nos es precisa su tinción para observarlas. En una hoja se
pueden observar células epidérmicas, de forma hexagonal y gran tamaño, incoloras,
entre las que se incrustan las células oclusivas que forman los estomas, mucho más
pequeñas, de forma arriñonada y con cloroplastos de color verde brillante en su interior.
En un segundo plano, se pueden observar células del mesófilo o del parénquima en
empalizada, tejido fotosintético por excelencia, con forma poligonal y con una gran
cantidad de cloroplastos de color verde intenso.
Método
1. Hacer una incisión transversal superficial con el bisturí en un trozo de hoja de lirio
y, tirando de la epidermis, obtener una lámina lo más delgada posible.
2. Depositar la lámina sobre un portaobjetos, añadir una gota de agua y tapar con un
cubreobjetos.
3. Observar la preparación
Cuestiones
1. ¿Qué diferencias se aprecian entre las células animales y vegetales
observadas?¿Cuáles pueden ser generalizables?
2. ¿El azul de metileno es un colorante ácido o básico?¿Por qué?
3. ¿Qué interferencias aparecen al observar las preparaciones?
3. Observación de plastos de células de tubérculo de patata
Los plastos son orgánulos típicos de células vegetales. En la parte anterior de la
práctica se han observado cloroplastos de células estomáticas y de células
parenquimáticas. En este parte se observará la estructura y propiedades de los
amiloplastos de patata.
Práctica
Los leucoplastos son orgánulos incoloros, con formas diversas, cuya función es
almacenar distintos tipos de sustancias. Concretamente, los amiloplastos de patata,
almacenan almidón que se deposita en capas sucesivas, por lo que poseen forma de
concha de mejillón, donde se distingue un punto muy refringente en la punta, llamado
hilo (donde se acumula mayoritariamente la amilosa), y unos anillos de crecimiento que
en conjunto constituyen la loncilla (donde se acumula mayoritariamente la
amilopectina). Debido a la presencia de almidón, los amiloplastos se pueden teñir con
lugol.
Método
1. Raspar suavemente con el bisturí la superficie de un trozo de patata pelada, y
extender sobre un portaobjetos una pequeñísima cantidad del raspado.
2. Añadir una gota de agua y colocar un cubreobjetos.
3. Observar al microscopio.
Una vez estudiada la estructura de los amiloplastos
4. Levantar el cubreobjetos y añadir una gota de lugol (diluido 1/10), volver a colocar
el cubreobjetos
5. Observar la preparación
Cuestiones
1. ¿Por qué los amiloplastos aparecen libres y no incluidos dentro de una célula?
 2. ¿Por qué en la loncilla hay fundamentalmente amilopectina, mientras que la
amilosa está en el hilo interior?
4. Observación de procesos de división celular: Mitosis
Mediante el proceso de mitosis, el núcleo de las células eucaróticas se divide,
repartiendo de forma equitativa el material genético, previamente duplicado; asímismo,
el citoplasma también se dividirá, repartiendo los orgánulos celulares en dos células
hijas. Habitualmente, la mitosis se estudia en 5 fases, que tienen su reflejo en la
observación al microscopio de células mitóticas. En células que no se encuentran en la
fase de mitosis del ciclo celular, células en interfase, se puede observar un núcleo muy
definido por su membrana nuclear. Cuando estas células entran en mitosis, las distintas
fases se diferencian como:
- Profase: el material cromosómico se condensa y comienzan a hacerse visibles
los cromosomas. La membrana nuclear y los nucléolos se desorganizan, por lo
que el material nuclear ocupa gran parte de la célula.
- Prometafase: los cromosomas están completamente condensados y buscan su
ubicación en el plano ecuatorial de la célula.
- Metafase: los cromosomas están situados en el plano ecuatorial de la célula,
formando la placa madre.
- Anafase: las cromatidas hermanas se separan, migrando un juego hacia cada
polo de la célula.
- Telofase: cada juego de cromosomas, situado en cada polo de la célula se
descondensa. Se organiza la membrana nuclear y los nucléolos.
Durante el proceso de final de telofase, se puede observar la citocinesis, por
estrangulamiento en células animales o por formación de un tabique en células
vegetales.
Práctica

Se observará el proceso de mitosis en células del meristemo apical de la raíz de

ajo. Este tejido está formado por células indiferenciadas que se dividen activamente.
Para la observación del proceso, se realizará una tinción previa del material
genético, con orceína acética y clorhídrica.
Método
1. Fijación y tinción de la muestra
-cortar el extremo apical de la raíz y colocarlo sobre un vidrio de reloj.
 - añadir gotas de orceína hasta cubrir la raíz.
- calentar el vidrio de reloj hasta observar vapor blanco. Cuidar que nunca se
seque la raíz
- dejar enfriar durante 5 min y repetir la operación.
- dejar enfriar 10 min.
2. Preparación de la muestra.
- colocar el meristemo teñido sobre un portaobjetos.
- cortar en 5-6 trozos con un bisturí.
- añadir una gota de orceína fresca y colocar un cubreobjetos.
- colocar una almohadilla de papel de filtro sobre el cubre y realizar un
aplastamiento para extender las células, presionando fuertemente con el dedo
pulgar.
- retirar la almohadilla de papel y observar la preparación.
Cuestiones
1. ¿Qué porcentaje de células se encuentra en mitosis?
2. ¿Se observa el huso acromático?¿Por qué?
3. ¿Qué tipo de colorante es la orceína?

[Link]

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

 Sistema óptico
o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen
del objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.
 o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
 Sistema mecánico
o SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monocular, binocular, …..
o REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al
girar, cambiar los objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior,
ya debería estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el
de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a
través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo
nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al
cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El
objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan
las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa
una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
. Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que
nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el
aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio
camino entre éste y el de x40.
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo
de inmersión.
 e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo
entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor
que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no
se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía
de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina
y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y
se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel
especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde
de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada,
se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este
tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las
lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido
en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica
y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

Práctica en formato Word 2003: [Link] (56Kb)

[Link]