Los medios de cultivo en microbiología

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de

microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de
cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se
añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la

preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos

ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias
y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y
amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

Condiciones generales para el cultivo de

microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos
por completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes
o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida de
los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y
otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a

muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como

indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer
de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que
se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y
los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

La evolución de los medios de cultivo

Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en
el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios
de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos
de inflexión en su evolución.

La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo

Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos
realizados a base de gelatina.

Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño)
y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo
puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.

Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata

como soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido,
diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido
transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las colonias
microbianas.
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación
con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal

planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre

las bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) tuvieron
gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.
Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial composición química
favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en función de sus
procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos
nutrientes del medio.

En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores

de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se podía observar la producción
de ácidos en la fermentación en ciertos microorganismos.

Tipos básicos de medios de cultivo

atendiendo a su estado físico:

líquidos

semisólidos

sólidos

atendiendo a su utilidad práctica:

Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia

variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX,
FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se

añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las
 sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad (Mac
Conkey, Kanamicina-Vancomicina)

enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora

competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas

especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de
bacterias, ayudando a su identificación (Lowenstein).

Medios para identificación:

diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las

peculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo)
específicas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se
puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-
Fermentación)

Bibliografía
Importancia de los medios de cultivo
1785 words 8 pages
Show more
IMPORTANCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
MICROBIANOS

MEDIOS DE CULTIVO

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las

condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que
puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos
distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las
características del medio y cultivos discontinuos y continuos en
función de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le

aporten energía y elementos químicos para la síntesis de sus
constituyentes celulares. Dependiendo de la fuente de carbono
que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en
autótrofos si es el CO2 atmosférico (microorganismos
que …show more content…
Así es posible distinguir entre bacteria hemolíticas y no
hemolíticas que proliferan en el mismo medio.

MEDIOS DE PRUEBA: son medios para el ensayo de vitaminas,

aminoácidos y antibióticos, se utilizan medios de cultivos de
composición conocida. Así mismo, se recurre a medios de
composición especial para probar desinfectantes.

MEDIOS PARA CUENTA DE BACTERIAS: son medios para

determinar el contenido bacteriano de sustancias tales como la
leche y el agua, se emplean ciertos tipos específicos de medios
de cultivos. Se debe señalar su fórmula, así como las
especificaciones prescritas.

MEDIOS PARA CARACTERIZAR BACTERIAS: son medios

para determinar el tipo de crecimiento producido por los
organismos, así como la capacidad de las bacterias para
producir cambios químicos, se utiliza de manera convencional
una amplia variedad de medios de cultivos.

MEDIOS DE MANTENIMIENTO: son medios para preservar las

características fisiológicas y la viabilidad de un cultivo, quizás se
requiera de un medio diferente de aquellos que son óptimos
para el crecimiento. El crecimiento rápido y prolífico

De dónde viene el agar?

Todos sabemos el papel esencial que juega el agar en la microbiología; sabemos que gracias a esta
sustancia es posible que los microorganismos se cultiven en medio sólido, pero, ¿qué mas sabemos
sobre el agar? Muchos piensan que Walther Hesse fue quién descubrió este agente solidificante, sin
embargo, la historia es mucho más compleja que esto.

El agar, cuyo nombre completo es agar-agar, fue descubierto por el japonés Minora Tarazaemon,
quien notó que una sopa de alga en un clima frío se solidificó en una noche. Por esta razón, en
Japón el agar es llamado Kanten o “cielo congelado”. A partir de este momento el agar comenzó a
ser usado por los europeos en la industria de los alimentos. No fue hasta 1881 que se comenzó a
usar el agar como un agente solidificante en el cultivo de microorganismos. Walther Hesse, el
asistente de Robert Koch, fue quien sugirió el uso de agar para los cultivos, sin embargo, esto no
puede atribuírsele solo a él, ya que de hecho fue su esposa, Fannie, quien tuvo la idea de usar el agar
en el laboratorio.

Bueno, ya sabemos sobre la verdadera historia del agar, pero, ¿qué tiene que ver esto con los
organismos marinos? De hecho tiene muchísimo que ver, ya que el agar se extrae de algas rojas de
diferentes especies. Según la especie de la cual se extraiga, el agar varía en su composición química
y propiedades físicas, sin embargo, sus componentes principales son la galactosa y el ácido
glucuronico. Entre las principales especies de alga que se utilizan para la producción de agar
están Gracilaria lichenoides, Gelidium corneum, G. amansii, entre otras, sin embargo, la producción
del agar originalmente comenzó con G. amansii (Rodophyaceae), ya que es una de las algas más
abundantes en las costas japonesas.
El polisacárido del agar se acumula en las paredes celulares de las algas agarophytas, embebida en
estructuras fibrosas compuestas de celulosa cristalizada. Este polisacárido es utilizado por la célula
como una reserva de energía, por lo que el contenido de agar varía según la época del año. Además,
otras variaciones en el contenido de agar en la célula se deben a las condiciones hidrodinámicas
donde crece el alga, ya que se ha encontrado una pared celular mucho más gruesa en algas donde los
movimientos de agua son más fuertes. El agar es secretado en forma de un compuesto precursor por
el aparato de Golgi, luego éste se deposita en la pared y se polimeriza con ayuda de enzimas.

Por último, ¿cómo se pasa desde un alga roja a un compuesto en polvo que solidifica los medios de
cultivo? Originalmente, el procedimiento para producir agar se basaba en el congelamiento del agar
para extraer el gel resultante. Luego surgieron técnicas en las cuales se hervían las algas con
vinagre o sake para acidificar el agua y luego se filtraba el extracto y se dejaba enfriar para
solidificarlo. La gel resultante se cortaba y se congelaba. Luego de dos días se descongelaba y se
secaba al sol. Actualmente el proceso está industrializado, y el proceso de extracción utiliza
congelamiento, diálisis, filtración, entre otros procesos para la obtención de agar.

Agar-agar

Mizuyōkan, una popular gelatina japonesa hecha con frijol rojo y agar.

El agar o agar-agar es una sustancia gelatinosa, un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas de los
géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, entre otros, resultando, según la especie, de un
color característico. La palabra “agar” viene del malayo agar-agar, que significa jalea.
También es conocido por los nombres “gelosa”, “gelosina”, “gelatina vegetal”, “gelatina
china” o “gelatina japonesa”. Las algas y el gel extraído de ellas han sido utilizada desde
tiempos antiguos en los países de Extremo Oriente (China, Japón, Corea, etc.) y fue
llevada a Europa hacia la mitad del siglo XIX. En la actualidad, las algas productoras se
cultivan en muchas zonas.
Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una
mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa.1 Aunque
ambas clases de polisacáridos comparten tienen la misma estructura básica, estando
formadas por unidades alternadas de D-galactosa y de 3,6-anhidro-L-galactopiranosa,
unidas por enlaces α-(1-3) and β-(1-4) , la agaropectina está modificada con
grupos ácidos, tales como sulfato y piruvato2. Los polisacáridos de agar forman parte de la
estructura de la pared celular de las algas. Disuelto en agua caliente y enfriado se vuelve
gelatinoso. Su uso principal es como soporte de cultivo en microbiología, para el
crecimiento de bacterias, hongos y virus bacteriófagos. Presenta la gran ventaja de que
caso ningún microrganismo es capaz de degradarlo, por lo que las placas fabricadas con
él no se alteran. También se usa como laxante, y para diversos usos en tecnología
alimentaria, como espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y
como agente aclarador de la cerveza.
 Índice
[ocultar]

 1Medios selectivos
 2Usos en biología molecular
 3Uso en la cocina y en la industria alimentaria
 4Referencias
 5Enlaces externos

Medios selectivos[editar]
Para el medio de cultivo, véase Placa de agar.
Los medios de agar selectivos son utilizados para aplicar una presión selectiva a los
organismos que crecen en ellos; por ejemplo para seleccionar solamente bacterias Gram
negativas se usa el Agar McConkey, que a su vez tiene un colorante que indica si la
bacteria es fermentadora de lactosa o lectos y sacarosa.

Usos en biología molecular[editar]

La carga neutra y el bajo grado de complejidad química de la agarosa hacen poco
probable que interactúe con biomoléculas, como proteínas y ácidos nucleicos. Los geles a
base de agarosa purificada tienen un tamaño de poro relativamente grande, siendo útiles
para la separación basada en el tamaño molecular de complejos de proteínas o proteínas
mayores a 200 kDa y fragmentos de ADN mayores a 100 pares de bases. La agarosa se
puede utilizar para la separación electroforética en la electroforesis de gel de agarosa o
para la cromatografía de exclusión molecular.

Uso en la cocina y en la industria alimentaria[editar]

El agar tiene un gran poder gelificante, ya que con cantidades del menos del 1% de
materia ssólida se obtiene una gel bastante resistente; Los geles de agar son
transparentes, duros y quebradizos, Esta propiedad los diferencia de los otros geles de
polisacáridos, que son más elásticos y pegajosos Además el agar tiene la propiedad
particular de presentar una gran histéresis térmica. Es decir, mientras que el gel de agra se
forma, según el tipo concreto a una temperatura de alrededor entre 30 y 40 ºC, convertirlo
de nuevo en líquido exige calentarlo hasta entre 75ºC y 90ºC. Es un polisacárido no
digerible, por lo que carece de valor calórico2