“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA
MOLINA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
CURSO:
QUÍMICA ORGÁNICA-LABORATORIO
PRÁCTICA:
N° 5
TÍTULO:
Extracción
MESA:
N° 5
INTEGRANTES:
Chacara Neira, Josselyn Marlene 20171327
Hilario Sedano, Mitsel Pool 20171038
Mendoza Ballarta, Christian Jean Paul 20171334
Tello Solis, Yuliza 20171339
Tolay Espinoza, Jorge Andre 20171085
DOCENTE:
Rabanal Atalaya, Melissa
2018
Objetivos
Aplicar la técnica de cromatografía en columna para separar los componentes de la
muestra mediante la cromatografía en columna, de los pigmentos azul, verde y
amarillo
Trabajar con placas de cromatografía en capa fina (c.c.f) y de papel de dimensiones
particularmente menores; observar el comportamiento en esta técnica cromatográfica
para analizar la relación de frente
Conocer que es la electroforesis y sus aplicaciones en la biología
Diferenciar entre la c.c.f y la de papel
Analizar e interpretar la Relación de Frente Rf de la cromatografía de capa fina y
papel
Diferenciar la cromatografía de capa fina y la cromatografía de papel.
RESUMEN
Con la técnica de cromatografía, podemos separar componentes de una mezcla, así como poder
reconocer sustancias a través de los Rf obtenidos.
En la cromatografía en columna observamos que esta se basa en la diferencia de velocidad con
que se desplazan los componentes de una mezcla de compuestos que se encuentran entre dos
fases en íntimo contacto. El azul de metileno que es más polar queda retenido y se necita un
solvente más polar como el agua acidulada para su adsorción; mientras que el anaranjado de
metilo es menos polar por lo que sale más rápido y solo necesita de etanol debido a que es
menos polar para su disolución. En la cromatografía en capa fina el uso de un adsorbente
eficiente como el Silicagel que se aplica en al portaobjetos formando una capa delgada y
uniforme; esto hace de la c.c.f. un método rápido y eficiente. En la cromatografía sobre papel,
se da el fenómeno de adsorción. Se utiliza el papel filtro como soporte de la fase fija (que puede
ser normalmente el agua que contiene en un 22% u otro líquido con el que se ha impregnado el
papel). Y la fase móvil es (1-propanol-butanona-agua).
Técnica que permite separar sustancias ,produciendo manchas de diferente color ; basado en
las diferentes velocidad de cada fluido a través de la fase fija, pudiendo así identificarlas.
INTRODUCCIÓN
La cromatografía agrupa una serie de técnicas que nos permiten analizar, separar o
purificar una sustancia o mezcla de éstas. Son los métodos más eficientes y más
usados, actualmente, en los laboratorios de química.
La cromatografía se basa en la distribución o en la diferente velocidad con que se
desplazan los componentes de una mezcla de compuestos que se encuentran entre
dos fases en íntimo contacto, es decir, una fase fija o estacionaria (generalmente es un
sólido o un líquido) y otra fase móvil (generalmente es un líquido o un gas).
En la separación cromatográfica, la fase móvil (disolvente o eluyente), la fase fija y los
componentes de la mezcla que se está separando o analizando, interaccionan entre si
y constituyen un sistema cromatográfico. El método consiste en depositar la muestra
(a separar o analizar) en un lugar de la fase fija (siembra o punteo) y hacer circular, en
intimo contacto con ambos y en una dirección dada, la fase móvil (desarrollo del
cromatograma). Los componentes de la muestra sembrada se desplazan (a distinta
velocidad) sobre la fase fija y, al terminar la operación, se localizarán a diferentes
distancias del lugar de siembra.
Un ejemplo aplicativo seria el importante rol desempeñado de la cromatografía en el
progreso de la química, lo tenemos en el estudio de los carotenoides (importante
grupo de pigmentos vegetales).
}
METODOLOGIA
1.Cromatografia en columna
a) Preparacion y Siembra de la columna
INTRODUCIR un trozo de
algodón hasta el fondo AGREGAR una
ADICIONARLE etanol
de la columna (sin que suspensión formada al
hasta las ¾ parte.
se quede atrapado en la agitar Silicagel y etanol.
llave)
ABRIR la llave hasta que
ABRIR la llave hasta que
la altura del solvente sea
todo el colorante sea DEPOSITAR la mezcla a
de 1cm por encima de la
absorbido por la fase separar.
superficie del
fija.
adsorbente.
C) Elución
Introducir un trozo de algodón
hasta el fondo de la columna (sin
que se quede atrapado en la llave).
Adicionarle etanol hasta las ¾
parte.
Agregar una suspensión formada
al agitar Silicagel y etanol.
El anaranjado de metilo
Abrir la llave hasta que la altura del cae primero a diferencia
solvente sea de 1cm por encima del azul de metilo
de la superficie del adsorbente.
2. Cromatografía en papel
A 1 cm de un extremo de la cinta de papel Whatman, se traza una línea recta
(línea de partida).
Señalar los lugares de siembra (sobre la línea de partida).
Con un tubo capilar colocar en un lugar de siembra 2 gotas de azul de metileno o
naranja de metilo y en el otro punto sembrar la mezcla para poder calcular el Rf
En un tubo de ensayo de 2x15 colocar el solvente 1- propanol – H2O – Acetona
(4:1:1)
La zona de siembra no debe
quedar sumergida en el
solvente.
Cuando la fase móvil haya
ascendido unos 8 a 10 cm,
retire el papel y calcule el Rf.
La relación de frente respecto al
azul de metileno fue de 2,2/8; y
la relación de frente de la
mezcla fue de 2,6/8. 5
3. Cromatografía en capa fina
Preparamos las
placas Luego introducir la Cuando el solvente
introduciendo 2 placa en una cámara este por llegar al
láminas de desarrollo que borde de la placa
portaobjetos en contiene la fase retire esta, deje
una suspensión de móvil (1- propanol – secar y calcule el
Silicagel + H2O – Acetona Rf.
Cloroformo. (4:1:1).
Con un tubo capilar
Dejar secar y señalar 2 se siembra 2 gotas de
puntos equidistantes la mezcla anaranjado
de los bordes y entre de metilo - azul de
sí; que se encuentren metileno en un punto
en la línea de partida a y en el otro uno de
1 cm del borde inferior los colorantes
(cualquiera).
La distancia recorrida por el
anaranjado de metilo es 1cm y la
distancia recorrida por la mezcla
(naranja de metilo + azul de
metileno) es 2cm.
DISCUSIONES
-El silicagel no tuvo efecto de retención en el verde de metilo por su mayor afinidad
a absorbentes orgánicos. La diferencia entre ambos componentes fue fácilmente
observable debido a sus colores característicos.
-Tomando en cuenta el valor de Rf obtenido, es posible afirmar que el absorbente y
el solvente utilizados en la capa fina son realmente eficaces para separar el naranja de
metilo. Un Rf de 0,911 indica que el pigmento realizó un gran recorrido a lo largo de
la lámina, casi alcanzando el recorrido del mismo solvente.
-En esta experimentación se realizó la separación de una mezcla conformada por
naranja de metilo y azul de metileno. Tomando en cuenta su Rf en el papel, ambos
disueltos en un solvente orgánico, se pudo observar que el naranja de metilo realiza
un mayor recorrido (Rf=0,789) y saca una ventaja de longitud con respecto al azul de
metileno (Rf =0,625).
-En ambos casos las distancias recorridas no llegaron al punto marcado por el
solvente, sin embargo, los colorantes se juntaron porque el azul de metileno que es
más polar queda retenido y se necesita un solvente más polar como el agua
acidulada para su absorción; mientras que el anaranjado de metilo es menos polar
por lo que sale más rápido y solo necesita de etanol debido a que es menos polar
para su disolución
CONCLUSIONES
La cromatografía en columna se basa en la diferencia de velocidades, con que se
desplazan los componentes de una mezcla de un compuesto, el cual se encuentra
entre dos fases e íntimo contacto.
Notamos que el azul de metileno, que es más polar queda retenido, por lo que
requiere de un solvente más polar como el agua acidulada.
En la realización de la cromatografía de capa fina(c.c.f.) se utiliza el Silicagel el
cual resulta ser un absorbente eficiente; pues al ser colocada en una laminilla de
aluminio se forma una capa delgada y uniforme.
En la c.c.f. el recorrido del solvente es 4.5 cm y de la mezcla 4.2 , mientras que
en la cromatografía de papel el recorrido del solvente fue 11.5 , del azul de
metileno 7.5cm y del amarillo de 9.5 cm.
BIBLIOGRAFIA
CUEVA P., LEON J.J., FUKUSAKI, A. 2013. Manual de Laboratorio de
Química Orgánica. 3ra. Edición. ESERGRAF. Lima - Perú.
FOX M.A. Y WHITESELL, J.K. 2000. Química Orgánica. 2da. Edición.
Addison- Wesley Logman. México.
FUKUSAKI Y., ALEJANDRO. 2009. Química Orgánica. 2da. Edición. Ed.
Virtual. Lima - Perú.
LEÓN CAM, JUAN JOSÉ. 2011. Introducción a la Química Orgánica. ESERGRAF. Lima -
Perú.
CUESTIONARIO: Cromatografía en columna
1. ¿Cuál es la principal utilidad de la cromatografía en columna?
La utilidad de la cromatografía en columna se basa en que se puede aplicar de manera
directa a las separaciones y purificaciones a escala preparativa, se puede elegir el
tamaño de la columna y su contenido para ajustarlos a la cantidad de muestra que se
va a fraccionar. Además de ser una técnica de corto tiempo.
2. ¿Qué fenómenos fijos intervienen en una columna cromatográfica que utilice silicagel
como fase fija?
Los fenómenos físicos presentes son la adsorción y desorción, el primero consiste en
que las moléculas de una sustancia (adsorbato) se adhieren en la superficie de un sólido
finamente dividido (adsorbente, Silicagel) y el segundo es la separación de las
moléculas adsorbidas en la superficie del sólido.
3. ¿Cuáles son las principales diferencias entre un HPCL y una columna cromatográfica
simple?
Las principales diferencias derivan en que las columnas de HPCL el solvente o fase
móvil circulan con gran dificultad (por su empaquetamiento mucho más compacto), por
lo que debe ser impulsado a alta presión (mediante bombas de alta presión) y las
columnas suelen estar construidas en materiales muy fuertes como el acero inoxidable.
Además, para lograr la máxima eficiencia de los solventes usados en HPCL deben tener
un mayor grado de pureza y el eluato al salir de la columna pasa a través de un detector
para monitorear la presencia del material.
4. ¿Cuál es el factor que hace que la HPCL sea mucho más eficiente que una columna
cromatográfica simple?
La mayor eficiencia de esta técnica se debe a que la fase estacionaria está formada de
partículas esféricas muy pequeñas y de tamaño uniforme. Usándose micro esferas con
un tamaño de 5 a 10 micrones.
5. Estamos operando una columna cromatográfica usando como adsorbente Silicagel y
casi todos los compuestos se han eluido, excepto un compuesto que no es eluido con
este solvente ¿Qué cambios introduciría para poder eluirlo?
Se tiene que cambiar de adsorbente generalmente la mezcla de dos o tres adsorbentes
de distinta polaridad resultan más eficientes que absorbentes puros.
6. ¿Cómo es posible trabajar con unas sustancias incoloras en una columna
cromatografía, si no es posible localizar las sustancias dentro de una columna?
Se analiza el eluato por cromatografía en capa fina o sobre papel. Como este proceso
es largo suele recibirse el eluato en muchos matraces o tubos de ensayo de volúmenes
similares, anotándose en cada uno un número o cogidos que indique su orden de salida
de la columna (utilizando un colector de fracciones el proceso se vuelve casi
automático). Luego se juntan las fracciones que tienen igual o similar contenido y se
elimina o recupera el solvente (por destilación o usando un rota vapor) obteniéndose el
residuo de cada fracción. Posteriormente se pueden aplicar otros procesos de
purificación (cristalización, destilación, etc.) o de identificación de sustancias (puntos de
ebullición, espectro IR, etc).
7. ¿Qué tipo de cromatografía utilizaría para eliminar las sales minerales que están
contaminando una muestra de cafeína?
Cromatografía de intercambio iónico
8. ¿Qué es un colector de fracciones y cuál es su principal utilidad?
El colector de fracciones es un sistema de recolección de muestras que permite recibir
el eluato de forma casi automática aprovechando el tiempo al máximo, en lugar de
utilizar muchos matraces de volúmenes similares.
9. ¿Qué diferencias encuentras entre la cromatografía de gases y la cromatografía
de columna?
Criterio C. DE COLUMA C. DE GASES
Fase fija Líquido Líquida
Fase móvil Sólido Gaseosa
Fenómeno físico
predominante y estado
Adsorción y partición Partición
físico de las fases
involucradas
Complejidad relativa Simple Complejo
Eficiencia relativa Menor Mayor
Costo relativa Barato Costoso
Automatización Casi automática Automática
10. ¿Qué son “Resinas de Intercambio iónico” y cuál es su utilidad?
Son sustancias insolubles de elevado peso molecular, que tienen grupos iónicos
(intercambiables) en su molécula. Generalmente derivado de celulosa o resinas
sintéticas, pudiendo ser de dos tipos: catiónicas y aniónica. Su utilidad se basa en que
puede retener los iones de la muestra. Permite separar mezclas de compuestos
orgánicos con inorgánicos.
CUESTIONARIO: Cromatografía en capa fina y Cromatografía sobre papel
1. ¿Qué se entiende por Rx?
Es el valor obtenido de la relación entre el desplazamiento de la sustancia
respecto al del patrón de comparación. Los valores de Rx son más
reproducibles ya que sus condiciones experimentales tienen una influencia
mucho menor
2. ¿Cuáles son las diferencias entre la c.c.f. y la de papel?
CAPA FINA SOBRE PAPEL
Utiliza placa de aluminio o plástico Utiliza papel filtro ( fibras de celulosa)
como soporte inerte y una capa de como soporte inerte
silicagel
Adsorción, reparto, el intercambio Partición continua
iónico o combinación de estos.
Análisis cualitativos y cuantitativos Fines analíticos
3. Cite algunas aplicaciones de la cromatografía en su especialidad
Cromatografía en capa fina: análisis de alimentos, medicinas, sangre,
productos petrolíferos y de fisión radiactiva.
Cromatografía sobre papel: separación de pigmentos vegetales.
4. Interprete los valores de Rf 0,05; 0,6 y 0,98.
Rf = 0,05: la distancia que recorre el disolvente es 20 veces la distancia
recorrida por la sustancia.
Rf =0,6: la distancia de la sustancia y el disolvente son próximas.
Rf = 0,98: la diferencia de distancias entre la sustancia y el disolvente es
mínima.
5. Introduciría algún cambio cuando se tiene un Rf de 0,05. ¿Por qué?
Debido al valor muy pequeño de Rf lo cual significa muy poca eficiencia,
introduciría un patrón o una sustancia de comparación para identificar la
sustancia.
6. Explique algún método para localizar las bandas de adsorción cuando se
trabaja con sustancias incoloras en una columna.
Emplear “reveladores”
Fluorescencia (emisión de radiación visible al absorber rayos UV)
Radiactividad (cuando se trabaja con compuestos marcados por isotopos
radioactivos).
Rociar la placa de CCF con ácido sulfúrico para hacer que los compuestos incoloros
se oscurezcan.
El uso de un aerosol que contiene p-anisaldehido.
Rociar con ácido fosfomolibdico al 5 % las placas reveladas.
7. ¿Qué es el “electroforesis” y cual es principal aplicación en los compuestos
biológicos?
Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un
campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un
soporte solido (electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz
porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre) dependiendo de
la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de
las moléculas y a su masa.
En biología molecular, se hace uso de electroforesis ya que es una parte importante del
procedimiento sistemático del análisis (separación, purificación y preparación) de los
ácidos nucleicos y las proteínas. La mayoría de biomoléculas poseen una carga eléctrica
que depende del pH del medio en el que se encuentren, en consecuencia, pueden
desplazarse cuando se someten a campos eléctricos.
Las proteínas pueden tener carga positiva o negativa, en cambio los ácidos nucleicos
solo poseen carga negativa, debido a su esqueleto de fosfatos, entonces en una
electroforesis los ácidos nucleicos migraran hacia el ánodo.
