CONCEPTOS BÁSICOS
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MICROBIOLOGIA= Ciencia que se encarga del estudio de los microbios (Hongos, Bacterias y
Virus).
MICROBIO O MICROORGANISMO = Son organismos muy pequeños, de tamaño
microscópico, dotados de individualidad, con una organización biológica elemental. Pueden ser
unicelulares multicelulares (los conformados por células indiferenciadas, que al asociarse no
forman tej. , pues cada una de ellas constituye un organismo completo, independiente y dotado
de la capacidad de reproducción).
MICROBIOLOGIA CLÍNICA= Es una disciplina aplicada de la medicina que estudia los
microorganismos capaces de provocar enfermedades en los seres vivos.
TEORIA MICROBIANA DE LAS INFECCIONES = la misma resulta de la semejanzas
existentes entre los procesos fermentativos y las enfermedades infecciosas (por ej. Ambos se
producen por causa de microorganismos)
POSTULADO DE KOCH= Por el se establecen las condiciones que debe reunir un
microorganismo para ser considerado como agente causal de una determinada enfermedad
infecciosa. Tales condiciones son :
1. Demostrar la presencia del microorganismo en todas las personas enfermas y su
ausencia en las personas sanas.
2. Que el microorganismo pueda ser aislado en un cultivo sólido a partir de las lesiones
producidas en el enfermo.
3. Que el microorganismo pueda reproducir la enfermedad, al ser inoculado en un animal
de experimentación susceptible.
4. Que el microorganismo pueda ser aislado nuevamente a partir de las lesiones
producidas en dicho animal.
5. Que el microorganismo induzca una respuesta inmune especifica en el huésped
detectada por serología (por la aparición de anticuerpos específicos).
INOCULO = Es la Cantidad o Número de Gérmenes infectantes que son introducidos
accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales.
PROFILAXIS =Conjunto de medidas, medios yo terapéutica que se emplean para preservar al
individuo y/o la comunidad de determinada enfermedad.
ORGANIZACION ESTRUCTURAL DE LOS MICROORGANISMOS :
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CELULAS EUCARIOTAS = Este tipo de célula está dividida en compartimientos limitados
por membranas internas. Sus principales características son :
a. Membrana Citoplasmática= Es una bicapa lipídica, compuesta por proteínas,
fosfolípidos y esteroles. Actúa como membrana limitante (ayuda a mantener la forma) y
como barrera osmótica. En cierto tipo de células podemos visulizar Cilios y Flagelos. En
los Hongos además de esta membrana pueden presentar Pared o Cubierta Celular, la
cual está compuesta de polisacáridos.
b. Citoplasma=Presenta organelas (compartimientos internos rodeados por una
membrana propia); entre estas encontramos Retículo endoplasmático, Aparato de Golgi,
Vacuolas, Lisosomas; Mitocondrias, Cloroplastos (realizan la fotosíntesis en las plantas),
Centríolos, Ribosomas (80 s). Además el citoplasma cuenta con una estructura reticular
denominada citoesqueleto, compuesto por microtúbulos y microfilamentos.
c. Núcleo = Contiene el material hereditario. Este decimos que es verdadero puesto que
el compartimiento nuclear se halla verdaderamente separado del citoplasma por la
membrana nuclear. El ADN está organizado en 2 o más cromosomas que codifican el
material hereditario; cada cromosoma está compuesto por filamentos en doble hélice de
ADN, donde cada cadena presenta uniones protéicas y de histonas.
d. División = La división celular puede ocurrir ya sea por mitosis o por meiosis , según el
tipo celular.
e. Motilidad= La movilidad por parte algunos tipos celulares puede llevarse a cabo
mediante Flagelos, Pseudópodos, Fagocitosis, Endocitosis,y Pinocitosis
CELULAS PROCARIOTAS = Este tipo de células no están divididas en compartimientos ni
poseen núcleo verdadero. Sus principales características son :
a. Pared Celular = Es una estructura gruesa y rígida (a excepción de los micoplasmas)
que sirve para dar forma a la célula procariota, evitar la lisis osmótica y la acción de
agentes externos nocivos. En su estructura se halla un polímero específico, la mureína o
Péptidoglicano.
b. Membrana Citoplasmática= Esta no presenta esteroles en su composición. Asociada
a ella hay mesosomas (repliegues internos) y enzimas generadoras de ATP.
c. Citoplasma = No presenta organelas . Es de aspecto granular, donde se distinguen
granulaciones mayores (sustancias de reserva) y granulaciones submicroscópicas
(ribosomas – 70 s). Inmersos en el citoplasma encontramos ADN extracromosómico
(Plásmido) enrollado en forma circular, los cuales contienen información genética para
la síntesis de sustancias no indispensables.
d. Nucleoide = Contiene el material hereditario y de especificidad (ADN cromosómico),
conformando 1 solo cromosoma dispuesto como 1 filamento en doble hélice, apelotonado
en algún sitio del citoplasma. .En las cadenas hay ausencia de Histonas. Decimos que no
es un núcleo verdadero porque no posee una membrana que lo separe netamente del
citoplasma
e. División = La división celular ocurre por división o fisión binaria , la cual puede ser por
fisión , conjugación o por medio de un bacteriófago (virus que infecta a una bacteria , y
por lo que el genoma viral se recombina con el genoma de la bacteria)
f. Motilidad = Por Flagelos
g. Pilis o Fimbrias= Permiten la Adherencia a receptores de las Células huéspedes y la
transferencia de material genético entre algunas bacterias
BACTERIAS
Son Microorganismos procariotas, unicelulares, de tamaño microscópico (del orden de los
micrones).
CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES :
Están contenidas en una Pared Celular
Poseen ambos tipos de ácidos nucleicos (ADN y ARN)
Se multiplican por fisión binaria (tipo de reproducción asexual, donde la replicación es
lineal, comenzando en un extremo de la cadena de ADN y terminando en el otro, decimos
que es semiconservadora ya que c/u de las cadenas complementarias sirven de molde para
la síntesis de otra).
Pueden ser :
a. Aerobias o Anaerobias
b. Móviles o Inmóviles
c. Patógenas (causan enfermedades en el organismo al que invaden) o Saprofitas (es decir,
viven libres en la naturaleza, se nutren de materia inorgánica u orgánica, siendo
responsables de la transformación de la materia orgánica en mineral y de los ciclos del N
y del C en la naturaleza).
ESTRUCTURA BACTERIANA : los diferentes componentes bacterianos se dividen en :
1. PARED CELULAR
2. MEMBR. CITOPLASMÁTICA
ELEMENTOS OBLIGADOS 3. CITOPLASMA
(Constantes) 4. RIBOSOMAS
5. NUCLEOIDE
A. GLUCOCALIX
B. FLAGELO
ELEMENTOS C. FIMBRIAS
FACULTATIVOS D. CAPSULA
(Inconstantes) E. ESPORAS
F. PLASMIDOS
1.- PARED CELULAR : Es una estructura gruesa y rígida presente en casi todas las
especies bacterianas dando forma a la bacteria; se halla separada de la Memb.
Citoplasmática por el Espacio Periplasmático (este espacio virtual es más manifiesto en las
bacterias Gram – , y, allí encontramos proteínas y enzimas como la fosfatasa alcalina y ácida,
desoxiribonucleasas, ribonucleasas y penicilinazas). Se pone en evidencia utilizando la Tinción
de Gram (la que permite distinguir bacterias Gram - , bacterias Gram + y bacterias sin pared
(género Micoplasma y formas L – Bacterianas) o bien utilizando tinción de Ziehl Neelsen
podemos observarla en el caso de los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).
Composición : Su principal componente es el Péptidoglicano o Mureína (en el
caso de las Gram : N- Acetilglucosamina + N – Acetilmurámico; y en el caso de las BAAR : N
– Acetilglucosamina + N – Glicosil murámico)
Propiedades y Funciones :
1= Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica
del medio en el que se encuentra y a la acción de ciertos agentes externos.
2= Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos
esenciales.
3= Presenta antígenos de tipo y grupo específicos.
4= Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana
plasmática)
5= En las bacterias Gram – tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas (Lípido A).
6= Es el sustrato donde actúan los b - Lactámicos y otros antimicrobianos.
7= Resulta ser el fundamento del método de Gram
Síntesis de la Pared : Los precursores son sintetizados en el citoplasma bacteriano,
luego son transportados a través de la MP, se forma y elonga un polímero lineal y
finalmente se establecen puentes de unión entre los polímeros constitutivos. La síntesis de
la pared es inhibida por los b - Lactámicos.
Esquema de los diferentes tipos de pared celular :
2.- MEMBRANA CITOPLASMÁTICA (MP): Es una bicapa lipídica sin esteroles, que
presenta inclusiones de proteínas y glicolípidos que forman poros. También presenta enzimas ,
bajo control cromosómico, como Fosfatasa alcalina, Hidrolasas, Penicilinasas. Su cara externa
presenta la proteína fijadora de penicilina (dicha proteína interviene en la formación del
peptidoglicano o mureína y funciona como sitio diana para la acción de los b - Lactámicos); su
cara interna se relaciona con el ARNm, Ribosomas y el Nucleoide.
Propiedades y Funciones :
1 – Actúa como una activa y selectiva barrera osmótica
2 – Participa en la síntesis de la pared celular y la cápsula
3 – Realiza síntesis de ATP
4 – Es el sustrato donde actúan ATB como la Polimixina B (que alteran su permeabilidad)
En las bacterias Gram + podemos distinguir repliegues de la MP, denominados Mesosomas.
Mesosomas :
- Mesosomas Septales = Estos repliegues participan en la división celular.
- Mesosomas Laterales = participan en funciones de secreción (Ej. Secreción de b -
Lactamasa)
3.- CITOPLOASMA : Es una masa coloidal constituida por agua (85 %), minerales y
fermentos. No contiene sistemas membranosos (organelas). Presenta un aspecto granuloso,
distinguiéndose :
a.- Granulaciones mayores o microscópicas : Son vacuolas que almacenan sustancias de reserva,
glucógeno, líquidos o gases.
b. Granulaciones Submicroscópicas : Son ribosomas.
4.- RIBOSOMAS : Son gránulos de unos200 A de diámetro, ricos en ARN y proteínas. Poseen
un coeficiente de sedimentación de 70s (30s – 50s). Su función es realizar la síntesis de
proteínas. Son el sitio diana donde actúan varios antimicrobianos como loa Aminoglucósidos,
tetraciclinas, Cloramfenicol, Macrólidos y Lincosaminas (inhiben la síntesis protéica de la
bacteria).
5.- NUCLEOIDE : (ADN CROMOSÓMICO) Consiste en un único cromosoma (filamento de
ADN) que se encuentra apelotonado (en su estructura en doble hélice no presenta puentes de
histonas). En algunos puntos entra en relación con la MP o con sus Mesosomas.
Propiedades y Funciones :
1. Confiere a la bacteria sus peculiaridades genéticas.
2. Interviene en el mecanismo de transferencia hereditaria.
3. Regula la Síntesis Protéica.
4. Induce los cambios que llevan a la división celular
5. Es el sitio de acción donde actúan antibióticos como las Quinolonas (Ac. Nalidixico,
Norfloxacina,etc) , la Rifampicina y el Metroidazol.
Tipo de Replicación : La replicación es lineal, comenzando en un extremo y
terminando en el otro. El ADN Cromosómico se autoreproduce por un mecanismo
semiconservador , donde la cadena complementaria se separa y sirve de molde para la
síntesis de otra cadena.
A.- GLUCOCÁLIX =Es una delgada capa externa compuesta por Polisacáridos (Levano o
Dextrano) que facilitan la adherencia de la bacteria.
B.- FLAGELO = Se trata de una estructura helicoidal que se comporta como órgano locomotor
de la bacteria, además presenta el Ag H (específico de tipo) que es el responsable de la
aglutinación flagelar..
C.- FIMBRIAS O PILIS = Se trata de estructuras filamentosas carentes de movilidad,
constituidas por una proteína llamada Pilina. Por lo general están presentes en las bacterias
Gram – , mientras que en las bacterias Gram + sólo se describen en el Corinebacterium Renale y
algunos Streptococos.
Propiedades y Funciones :
1.
2. Propiedad Antigénica
3. Brindan Adherencia : ya sea a superficies de látex , hematíes y/o al glucocálix de las
células epiteliales.
4. Algunos tipos de Pilis (F e I) intervienen en la transferencia de material genético por
conjugación
Pili F = Filamento Sexual, largo , responsable de transmisión hereditaria
Pili I = Filamento corto, responsable de la transmisión del factor Col (productor de
bacteriocinas)
D.- CAPSULA = Estructura compleja, de grosor variable que rodea a una o más bacterias.
Puede estar presente tanto en bacterias Gram – como Gram +.
Composición : Agua (90%) y polímeros orgánicos (en el género Bacillus :
polisacáridos y polipéptidos)
Propiedades y Funciones :
1. Propiedad Antifagocitaria : Dificulta o impide la fagocitosis, lo cual potencia su
virulencia ya que favorece la multiplicación y facilita la invasión
2. Brinda Protección frente a Fagos y ATB : Dificulta la fijación de bacteriófagos e impide
el pasaje de ATB que puedan afectar a la bacteria.
3. Propiedades Antigénicas :
Induce la producción de anticuerpos protectores (esto es útil en la producción de
algunas vacunas)
Permite la diferenciación de tipos serológicos dentro de la misma especie ya sea por
aglutinación con sueros tipo o por el fenómeno de vitrifacción o de Quellung (hinchazón de
la cápsula)
1. Orienta a la clasificación mediante :
o Pruebas bioquímicas o inmunológicas.
o Microscopía de contraste de fase (donde se la observa como un halo claro y
refringente)
o Tinción negativa con Tinta China.
Síntesis de Cápsula : Se realiza a partir de la MP.
E.- ESPOROS = Son elementos de reproducción y/o de resistencia a un medio adverso que
presentan algunas bacterias , especialmente del género bacilar. Su forma, tamaño y ubicación
varía según la especie.
Tipos :
Endosporas : espora presente en el interior de la bacteria. Destinada a germinar
originando la forma vegetativa de la que deriva
Exosporas : esporo que permanece libre en el ambiente, constituyendo la forma de
resistencia bacteriana ante condiciones adversas o desfavorables (nutrición, desecación,
temperatura, presencia de agentes químicos, presiones, etc.)
Propiedades y Funciones :
Son resistentes al calor, a la desecación, a las presiones, a los agentes químicos, a los
rayos U.V. y radiaciones ionizantes.
Mantienen la virulencia de la forma vegetativa de la que derivan.
Tiene un muy bajo metabolismo, que les permite permanecer viables por períodos
tiempo indefinidos.
Tiene propiedades inmunogénicas.
Germinación
ESPORO Condiciones del Medio FORMA VEGETATIVA
Esporulación
F.- PLASMIDOS = (ADN EXTRACROMOSOMICO) Se trata de una estructura esférica,
que codifica independiente del nucleoide y que contiene información genética para sintetizar
sustancias que no son indispensables para la bacteria.
El ADN extracromosómico se transmite por Herencia a las bacterias hijas
Conjugación a otras bacterias (no hijas)
Tipos y Funciones : Los Plásmidos se clasifican por los caracteres que expresan y se designan
según esas propiedades
Plásmido "Ent" : Codifica la síntesis de enterotoxinas.
Plásmido "Inv" : Da a las bacterias enteroinvasivas la capacidad de penetración a las
células epiteliales del intestino.
Plásmido "K" : Codifica la Producción de los Ag de superficie de la Escherichia Coli.
Plásmido "Hly" : Codifica la producción de a - Hemolisina, responsable de la lisis de
hematíes
Factor F (sexual) : Son plásmidos autotransferibles, responsables de la transferencia de
genes por conjugación que codifican la producción de pilis sexuales o F.
Factor Col : codifican la producción de bacteriocinas (compuestos similares a los ATB)
que resultan letales para otras bacterias .
Factor R (de resistencia) : Es un plásmido, presente en ciertas bacterias Gram – , que
codifica los mecanismos de resistencia a uno o más ATB.
MECANISMOS DE LA ACCION PATÓGENA :
COLONIZACIÓN = Es la capacidad de llegar a la superficie del huésped por una
puerta de entrada (piel o mucosas), formar o establecer una colonia en el epitelio y
resistir la acción de los sistemas locales de defensa .
Se entiende por colonia bacteriana a la agrupación de bacterias originadas a partir de una
bacteria madre que se establecen y extienden por determinado medio.
Las bacterias patógenas pueden proceder :
Del Exterior = llegan al organismo por una puerta de entrada causando infecciones
exógenas.
Del Propio Organismo = son bacterias oportunistas, que integraban la población de la
flora normal, y que por determinados factores alcanzaron la capacidad de producir
infecciones endógenas.
En cualquier caso , para iniciar la infección, los microorganismos deben fijarse o adherirse a las
células y colonizar el epitelio.
PENETRACIÓN= Se denomina así a la capacidad de las bacterias para atravesar la barrera
cutáneo – mucosa, alcanzar los tejidos subyacentes y ponerse en contacto con el medio interno
del huésped, manifestando su acción patógena.
Respecto a este punto, podemos decir que existen :
A. Ejemplos (Bordetella Pertusi, Vibrio Cholerae; Corinebacterium Diphtheriae)
B. Bacterias Sin poder de Penetración : Estas bacterias No Precisan atravesar el
epitelio para Expresar su Acción Patógena. Estas se adhieren, se multiplican, colonizan
el epitelio donde liberan una exotoxina soluble que al ser absorbida en la mucosa puede
ejercer o una acción local o general.
a través del epitelio intacto.
2.- heridas, quemaduras, catéteres, etc.: las bacterias atraviesan un epitelio que presente
alteraciones anatómicas y funcionales
C. Bacterias con capacidad de Penetración Pasiva : Estas bacterias atraviesan
pasivamente el epitelio, ya sea mediante : 1.- un vector de transmisión (artrópodos y
otros insectos) : las bacterias son inoculadas
D. Bacterias con Capacidad de Penetración Activa : Estas bacterias penetran
activamente el epitelio, mediante endocitosis realizada por la célula huésped.
Ej. Escherichia Coli, Shigella, etc.
MULTIPLICACIÓN E INVACION =
MULTIPLICACIÓN : Hace referencia a la capacidad de reproducirse y alcanzar un Nº
crítico que les permita para invadir y desarrollar su acción patógena, sorteando los
mecanismos defensivos del huésped. Para ello necesitan obtener del organismo los
elementos nutritivos, necesarios para su crecimiento y reproducción; cuando no los
encuentran, no pueden multiplicarse y por ende no pueden desarrollar la infección o ésta es
controlada con mayor facilidad en un lapso de tiempo breve.
INVASIÓN : Es la Capacidad de favorecer la difusión de la infección bacteriana en el
organismo (ésta se debe a la producción de algunos metabolitos, enzimas y otras sustancias)
ya sea interfiriendo los mecanismos defensivos del huésped o facilitando la penetración del
microorganismo.
o Factores que favorecen la Invasión : En su mayoría son enzimas
hidrolíticas que actúan sobre :
a.- Células y tejidos : Colagenazas
Hialuronidasa (Staphylococo Aureus, Streptococo Pyogenes, etc.)
b.- Desdoblamiento de : Proteínas (por parte de proteasas)
Mucina (Mucinasas)
Lípidos (lipasas)
Ac. Nucléicos (Nucleassa)
c.- Proceso de Coagulación Coagulasa (transforma fibrinógeno en fibrina)
Ej. : Staphylococo Aureus
Quinasa (Transforma plasminógeno en plasmina)
Ej. : Streptococo Pyogenes, Staphylococo Aureus.
CAPACIDAD LESIONAL = Es aquella capaz de producir alteraciones y/o lesiones en
las células y tejidos del huésped, responsables del cuadro patológico. Estas alteraciones
pueden ser producidas por acción directa (presencia de Antígenos capsulares, somáticos o
flagelares) o por mecanismos de acción Indirectos (producción de Sust. Tóxicas para las
células huéspedes), lo cuales producen un proceso inflamatorio y ponen en marcha
mecanismos inmunológicos responsables del cuadro clínico.
Factores Intervinientes:
1. ACCION TOXICA : Determinada por la producción de Exotoxinas y/o Endotoxinas
Exotoxinas= Son sustancias de naturaleza proteica que se liberan de forma directa o a
través de vesículas, sin que se produzca lisis bacteriana. Frecuentemente están codificadas
por plásmidos o fagos; a veces consisten en 2 o más subunidades (una de las cuales sirve
para adherirse y entrar a la cél. huésped , mientras que otra activa o inhibe determinada
función celular). Tiene una acción Específica y las podemos clasificar en Neurotoxinas
(toxina : diftérica, tetánica, botulínica, etc) y Enterotoxinas.(toxina de : Bordetella Pertusis,
Clostridium Perfringes, Clostridium Difficile, Shigella Dysenteriae, etc.). Algunas toxinas al
ser inactivadas (con formaldehído)no alteran su antigenicidad, y los toxoides resultantes
proporcionan algunas de las vacunas más eficaces (Ej. Toxoide tetánico y toxoide diftérico)
Endotoxinas = Son sustancia de naturaleza lipopolisacárida, localizadas en la
superficie celular del microorganismo y que son liberadas por lisis bacteriana. Son
producidas principalmente por las bacterias Gram – de los géneros Escherichia, Salmonella,
Shigella y Klebsiella. Los lipopolisacáridos (LPS)estimulan una gran variedad de respuestas
por parte del huésped. Desde el punto de vista clínico, los efectos más importantes de los
LPS son la fiebre y el colapso vascular o shock. La fiebre, actualmente se atribuye a la acción
de citoquinas sobre el hipotálamo (principalmente la IL-1 y el factor tumoral o TNF) y
puede beneficiar al huésped, al microorganismo o a ambos . En respuesta a los LPS, los
macrófagos son quienes producen estsas2 citoquinas. El shock por Endotoxinas (shock
séptico) se suele asociar con la diseminación sistémica del microorganismo y, el ejemplo
más común es las septicemia por bacterias Gram - como Escherichia Coli, Nesisseria
meningitidis, etc.
1. MECANISMOS INFLAMATORIOS : Ya sea por mecanismos de acción directa o
indirecta, las bacterias ponen en marcha el proceso inflamatorio; permitiendo que
lleguen al foco inflamatorio los Fagocitos. Si el microorganismo fuere capaz de producir
la destrucción de los Fagocitos, la liberación de enzimas lisosómicas desde estos últimos,
ampliarán aún más la reacción inflamatoria y llevando a alteraciones patológicas como la
formación de granulomas.
2. MECANISMOS INMUNOLÓGICOS : Las alteraciones patológicas también pueden
deberse a fenómenos de hipersensibilidad. La simple Rta. Inmune ya representa la
producción de una serie de reacciones como vasodilatación, edema, hiperplasia
ganglionar, infiltración celular, etc.; estas en condiciones normales apenas influyen en el
cuadro clínico , pero si se produce un fenómeno de hipersensibilidad (respuesta inmune
exagerada) el mismo puede ser el responsable de procesos patológicos graves o incluso
causales de muerte.
FACTORES DETERMINANTES DE LA ACCIÓN PATÓGENA :
Son la Adherencia, la Acción Tóxica y otros componentes bacterianos :
ADHERENCIA = Es el factor más importante en el momento de la colonización. Se
lleva a cabo mediante la utilización de adhesinas que interactúan con los receptores
superficiales de la célula huésped.
ACCION TOXICA = Como vimos ésta se debe a la producción de Exotoxinas y/o
Endotoxinas, por ejemplo :
Toxinas de Amplia Acción
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Neurotoxinas
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Enterotoxinas (citotónica y citotóxica)
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OTROS COMPONENTES BACTERIANOS = Como por ejemplo los antígenos
flagelares, capsulares, de pared o somáticos; que son capaces de favorecer la Respuesta
Inmune.
FACTORES DE VIRULENCIA :
FERMENTOS = Son enzimas como Mucinasas, Glicosidasas o Neuraminidasas que
descomponen las proteínas del moco, facilitando l penetración.
FACTORES DE SUPERFICIE = Como la Cápsula y/o los Antígenos de Pared que
inhiben la fagocitosis y la acción de sustancias bactericidas de la mucosa.
PROTEASAS Ig A =Es una Enzima proteolítica que descompone la Ig A (subclase 1)
desactivando el sistema local de defensa de la mucosa. La sintetizan microorganismos como
Neisseria Meningitidis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo Pneumaoniae y Haempophylus
Influenzae, etc.
BACTERIOCINAS = Son sustancias que actúan como antibióticos frente a otras
bacterias , lo que les permite competir con bacterias integrantes de la flora normal
microbiana del huésped.
CLASIFICACION DE LAS BACTERIASSe basa en la afinidad o no por la tinción de Gram,
su morfología y en la utilización o no de O2 en su metabolismo, las bacterias son divididas en 3
grandes grupos : Gram - , Gram + y aquellas que no se tiñen con Gram (ej. Las BAAR); a su vez
estos grupos pueden estar conformados por bacterias Aerobias o Anaerobias facultativas y
bacterias Anaerobias Estrictas.
Ver a continuación un Esquema de Clasificación de las bacterias :
BACTERIAS AEROBIAS O ANAEROBIAS FACULTATIVAS
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BACTERIAS ANAEROBIAS ESTRICTAS
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BACTERIAS QUE NO SE TIÑEN CON GRAM
A. MYCOPLASMAS : No tienen Pared
B. MICOBACTERIUM (TUBERCULOSO Y LEPRAE) : Son BAAR (bacilos ácido
alcohol resistentes), se tiñen con Ziehl Neelsen. No pedir Cultivo
C. ESPIRILOS (TREPONEMA PALIDUM): es una espiroqueta, que se tiñe con
Giemsa o impregnación Argéntica; visibles a la microscopía de campo oscuro o de
contraste de fase. No pedir Cultivo
D. CHLAMIDEAS (PNEUMONIAE Y TRACHOMATIS) : Son de Parásitos
Intracelular Obligados
RELACION HUÉSPED – BACTERIA :
CONCEPTO DE :
INFECCIÓN BACTERIANA= Es la entrada, establecimiento y multiplicación de
bacterias en la superficie o interior del huésped que va asociada a una Respuesta específica ;
pudiendo o no ser acompañada de manifestaciones clínicas.
COLONIZACIÓN BACTERIANA= Capacidad de las bacterias para establecerse y
multiplicarse en la piel y/o mucosas del huésped en cantidades suficientes que permitan
mantener un cierto número poblacional; sin que su presencia establezca o determine
Respuestas clínicas ni inmunológicas.
INFECCIÓN INAPARENTE o SUBCLÍNICA (ASINTOMÁTICA) : Es aquel
establecimiento de bacterias , que si bien induce una respuesta orgánica específica, no va
seguida de manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un escaso Nº de Bacterias, a que
éstas son poco virulentas o a que el huésped presenta un normal funcionamiento de sus
defensas.
ENFERMEDAD INFECCIOSA : Son aquellas enfermedades causadas por múltiples
agentes patógenos(bacterias, virus, hongos y parásitos). Dichos agentes interactúan con el
organismo humano de diferentes maneras, resultando así una relación que está dada por :
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Las enfermedades infecciosas se produce cuando tras el establecimiento de las bacterias surgen
alteraciones y/o manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un gran Nº de Bacterias, a que
estas son muy virulentas o a que determinadas circunstancias produjeron una depresión de los
mecanismos defensivos del huésped, lo que interfiere con la Respuesta Inmunitaria.
PATOGENICIDAD O PODER PATÓGENO = Es la capacidad de producir daño o
enfermedad por parte de una determinada especie de microorganismo. Hace referencia a la
especie.
El poder patógeno no solo depende de la especie de microorganismo sino también de las
características del huésped:
Nº de Bacterias + Virulencia (Mecanismos de Acción Patógena y factores de virulencia)
Enfermedad
Grado de Resistencia Organica (Grado de Resist. Específica e Inespecífica del Huésped)
VIRULENCIA = Es el mayor o menor grado de Patogenicidad que posee un
microorganismo. Hace referencia a la cepa de determinado microorganismo.
CONCEPTO DE FLORA BACTERIANA NORMAL :Es la población de microorganismos
que residen en piel y/o mucosas de las personas sanas. Tales microorganismos en su mayoría
son bacterias, hongos, virus y parásitos.
La composición de la FN es variable y depende de factores como las características zonales del
organismo, la edad, el sexo, su alimentación, la higiene personal, el clima, las condiciones
socioeconómicas de la población y el grado de saneamiento ambiental.
Respecto a las características zonales del organismo, diremos que estas difieren según :
Condiciones físico – químicas (humedad Temperatura y pH)
Potencial de oxidoreducción
Condiciones nutritivas (cantidad y calidad de nutrientes)
Presencia de receptores específicos en la MP de las células huéspedes.
Presencia de Sust. Inhibidoras (Lisozimas, Bacteriocinas, Ac. Grasos no saturados, Ig A
secretoria)
Cabe destacar que los microorganismos están ampliamente distribuidos en la naturaleza, por
ello el hombre se encuentra expuesto constantemente a los mismos desde su nacimiento (en el
pasaje por el canal vaginal) y luego por contacto y exposición. El hombre presenta zonas
potenciales de colonización que reúnen las condiciones fisico- químicas, nutricionales, etc. que
pueden resultar adecuadas o no para la supervivencia y multiplicación de diversas especies de
microorganismos.
IMPORTANCIA DE LA FLORA NORMAL =
1. Sirve como Barrera frente a microorganismos patógenos u oportunistas
2. En el tubo digestivo es beneficiosa para la digestión de productos no atacables por los
fermentos digestivos del sujeto, así como también contribuyen a la síntesis de algunas
vitaminas como la vit. K
CONCEPTO DE BACTERIOFAGO o FAGO: Virus cuyo huésped natural son las bacterias,
en las que se reproducen. En algunas especies bacterianas los Fagos juegan un papel importante
en la trasmisión de información genética de una bacteria a otra, pudiendo (mediante
trasducción) ser los encargados de trasmitir factores de resistencia a los antibióticos, como
ocurre con los Staphylococos. En otros casos el ingreso de un fago a una bacteria determina que
el genoma viral se integre al de la bacteria, de tal forma que los genes parasitados por el fago
pueden determinar que se expresen nuevos caracteres en el fenotipo (Lisogenia por
fagoconversión); así el Corinebacterium Diphtheriae sólo será patógeno ( por lo tanto
toxigénico) cuando se halle parasitado por un fago.
AGENTES ANTIMICROBIANOS (ANTIBIÓTICOS O ATB)
.- TIPOS : Pueden ser Bactericidas o Bacteriostáticos
1. Bactericidas : ATB con capacidad para destruir microorganismos sensibles o
susceptibles, sin que medie la participación de las defensas humorales o celulares del
huésped.
2. Bacteriostáticos : ATBG que inhiben de forma reversible los procesos metabólicos
esenciales de cierta bacteria.
Origen de Agentes Microbianos :
ATB Verdaderos : Son sustancias de origen biológico como por ej. las penicilinas,
quienes derivan de un hongo del género penicillium.
Quimioterápicos verdaderos : Son sustancias que derivan de síntesis química,
como por ej. las sulfamidas, las cuales surgieron de los estudios realizados sobre las
anilinas.
Agentes Antimicrobianos Nuevos : Son Sustancias obtenidas por manipulación
molecular de ATB verdaderos y/o Quimioterápicos verdaderos, con el fin de ampliar sus
espectros de acción sobre microorganismos o bien para mejorar sus características
farmacológicas.
.- CLASIFICACIÓN SEGÚN SU SITIO DE ACCIÓN :
Para ver el gráfico seleccione la opción "Descargar" del menú superior
Ver esquema de ATB al Dorso :
.- RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ATB :
Debido al uso excesivo, inadecuado, frecuente e irracional de los ATB, las bacterias las bacterias
se volvieron más resistentes a ellos; esto contribuyó a la selección de especies resistentes y a la
aparición de microorganismos multiresistentes, que ante el vacío ecológico creado por el mal
uso de ATB, encuentran condiciones favorables para la multiplicación y proliferación
Los diferentes tipos de resistencia son :
a.
b. Resistencia Natural
c. Resistencia Secundaria
d. Resistencia Mutacional
e. Resistencia Transferible
.- SUSCEPTIBILIDAD DE LAS BACTERIAS A LOS ATB: Cuando la resistencia
bacteriana comenzó a ser un fenómeno frecuente (debido al mal uso de los ATB) adquirió gran
importancia el empleo de pruebas de sensibilidad antimicrobianas, ya que estas nos permiten
determinar la respuesta a ellos por parte de cepas individuales dentro de cada especie. El
empleo de ATB para cada antibiograma se debe decidir en función de : la especie aislada, de los
ATB disponibles en la institución y del foco de la infección.
CONCEPTO DE ANTIBIOGRAMA: Conjunto de procedimientos que permiten determinar la
sensibilidad in vitro de un microorganismo ante un determinado ATB.
Las pruebas de sensibilidad o susceptibilidad antimicrobianas que se utilizan para determinar la
actividad de un ATB frente a una cepa en particular, son principalmente de 2 tipos :
DILUCIÓN EN CALDO = Puede realizarse en medios de cultivos líquidos o sólidos.
Es un método cuantitativo que sirve para determinar la sensibilidad y resistencia de las
bacterias.
Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones
decrecientes de ATB.
Este método permite determinar la CIM (concentración Inhibitoria mínima) y la CBM
(concentración bactericida mínima). Para determinar la CIM se utilizan una serie de tubos de
ensayo en los cuales se va colocando sucesivamente el ATB a doble dilución; luego se siembra el
microorganismo. La CIM corresponderá al primer tubo de ensayo donde no se observe turbidez
(la turbidez indica que existe crecimiento bacteriano). Para determinar la CBM seleccionamos
los tubos donde no observemos turbidez y sembramos su contenido sobre un medio de cultivo
sólido, luego observaremos si hay o no desarrollo de colonias. LA CBM corresponderá a aquella
dilución donde no ha crecimiento bacteriano alguno.
DIFUSIÓN EN DISCOS DE AGAR = Se realiza en medios sólidos y es la prueba más
usada (de rutina) en los laboratorios. Permite probar la eficacia de varios ATB al mismo
tiempo.
Con este método determinamos la CIM . Para ello se siembra, en un medio de cultivo sólido
(Agar), una suspensión de microorganismos (108 UFC/ml ) y sobre esto se colocan discos o
monodiscos de papel embebidos en concentraciones arbitrarias y conocidas de ATB. En el Agar
húmedo , el ATB difunde desde los discos, con lo cual su concentración va decreciendo a partir
del disco. Luego se incuba adecuadamente (EJ. 24 – 48 HS) y a continuación observaremos los
Halos de Inhibición del Crecimiento Bacteriano; inmediatamente medimos (en mm) el diámetro
que poseen los halos de inhibición.
El Punto de corte de los halos , corresponde a un valor de CIM equivalente a la concentración de
ATB que se alcanza en suero. Finalmente se compara la lectura realizada con tablas
internacionales y se determina la sensibilidad o resistencia del microorganismo, clasificando a la
cepa como Sensible (S) o Resistente y/o Intermedia (R) para ese ATB.
CIM : (CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA) Es la concentración más baja de
un ATB capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo en condiciones
estandarizadas.
CIM por E–Test : Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el
microorganismo a ensayar, tiras plásticas que llevan incluidas un gradiente de concentración de
un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formación de una elipse
de inhibición de crecimiento.
Las Ventajas de este método frente al de CIM por Dilución :
a. Brinda un resultado de la CIM más exacto
b. Es en método menos laborioso
Las Desventajas de CIM por E – Test frente al de CIM por Dilución :
a. No se puede determinar CBM
b. Es un método muy costoso
CBM : (CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA) Es la concentración más baja de
un ATB capaz de destruir una porción predeterminada de un inóculo (en general el 99,9 %)
en un tiempo determinado. Corresponde a la dilución donde no se observa crecimiento
alguno de microorganismos. Es importante que la concentración de ATB en el foco de
infección supere por lo menos 10 veces la CBM.
Las situaciones clásicas que requieren realizar una CBM son :
Infecciones en pacientes neutropénicos severos.
Meningitis
Endocarditis
Osteomielitis
Como guía para seleccionar la dosis adecuada a ser administrada, puede utilizarse la medición
de la concentración de ATB en el suero del paciente; para lo cual se toma una muestra de suero
del paciente (bajo tratamiento ATB) antes de la administración de una nueva dosis endovenosa
(en el valle de la curva de concentración) y luego se toma otra muestra al terminar la infusión
endovenosa (en el pico de la curva de concentración). Esto permite determinar el PIS y el PBS
para monitorear y eventualmente corregir la dosificación del ATB empleado.
PIS : (PODER INHIBITORIO DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el suero
del paciente, capaz de inhibir el desarrollo visible de un microorganismo.
PBS : (PODER BACTERICIDA DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el
suero del paciente, capaz de matar al inóculo en un 99,9 %
VIRUS
Son microorganismos subcelurares, que se comportan como parásitos intracelulares estrictos
CARACTERÍSTICAS GENERALES :
Poseen tamaño ultramicroscópico (invisibles al M.O., salvo el Poxvirus).
Su estructura elemental está formada por 1 sólo tipo de ácido nucléico (ARN o ADN),
contenido en la capside, la que a su vez puede o no estar rodeada por una envoltura
lipoprotéica o peplos.
Carecen de organelas y no poseen ribosomas (sólo algunos virus mayores contienen
algunos fermentos).
En medios inanimados se comportan como partículas inhertes ya que en ellos son
incapaces de crecer y multiplicarse.
En el medio intracelular el Ácido Nucleico viral utiliza los mecanismos de biosíntesis de
la célula huésped para replicarse e inducir la síntesis específica de sus proteínas que al
integrarse al genoma replicado originarán nuevos viriones.
No son sensibles a los ATB pero el Interferón inhibe su mecanismo de replicación.
ESTRUCTURA y MORFOLOGIA :
ACIDO NUCLEICO : Como ya dijimos posee un solo tipo de Ac. Nucleico (ARN o
ADN) que puede encontrarse en forma monocatenaria, bicatenaria, lineal o circular. La
función del ácido nucleico es suministrar la información para programar, en la célula
huésped, la síntesis de sus propios componentes.
CAPSIDE : Es una cubierta proteica que rodea al Ac. Nucleico viral, protegiéndolo y
facilitándole la penetración en la célula susceptible.
Está compuesta por subunidades proteicas, llamadas CAPSÓMEROS, los cuales se acoplan
siguiendo un orden simétrico que le confiere al virus su morfología particular :
1. Simetría Icosaédrica = Los capsómeros forman una figura geométrica compuesta
por 20 caras, 30 aristas y 12 vértices.
2. Simetría Helicoidal= Lo capsómeros adoptan la forma de un espiral rígido o con
aspecto de resorte o pelota.
3. Simetría Mixta = Los capsómeros dan una simetría combinada de las 2 anteriores;
por ej. a los Bacteriófagos (virus que parasitan bacterias) quienes presentan una cabeza
de simetría Icosaédrica y una cola de simetría helicoidal especializada en inyectar el
Ácido Nucleico a la bacteria
4. Simetría Compleja = Como por ej. la del Poxvirus.
ENVOLTURA O PEPLOS : Se trata de una membrana Lipoprotéica que envuelve la
nucleocapside viral (Ácido Nucleico + Capside) protegiéndola. En algunos virus, de la
envoltura parten proyecciones o espículas de naturaleza glucoprotéica.
Según la presencia o no de envoltura, los virus pueden dividirse en :
I. Virus Desnudos= Su nucleocapside no se encuentra rodeada de peplos; son
resistentes a las condiciones del medio ambiente, a la bilis y esto se debe a la estructura
proteica de la capside.
II. Virus Envueltos = Su nucleocapside está rodeada por peplos; estos virus son
sensibles a factores ambientales tales como : sequedad, al pH gástrico a la bilis, etc.
debido a que el peplos por su estructura lipídica torna más vulnerable al virus.
CONCEPTO DE VIRION : Se denomina así a la partícula viral completa posea o no envoltura.
CONCEPTO DE VIROIDE : Partícula de ARN sin proteínas que infecta a vegetales
CONCEPTO DE PRION: Partícula proteica infectante, sin Ac. Nucleico que causa
enfermedades en animales como la encefalitis espongiforme (mal de la vaca loca)
CLASIFICACIÓN de los VIRUS :
Virus ADN :
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Virus ARN :
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REPLICACIÓN VIRAL : Los virus carecen de metabolismo y se comportan como partículas
inhertes en medios inanimados, pero dentro de las células susceptibles, el Ac. Nucleico viral
emplea los mecanismos de biosíntesis célula para replicarse e inducir la síntesis de proteínas
específicas que posteriormente se integraran al genoma replicado para originar nuevos viriones,
los cuales se liberaran de la célula huésped para luego infectar otras células.
Las etapas de la Replicación Viral son : Iniciación, Expresión y replicación, ensamblaje y
liberación. (Ver esquema)
1. ETAPA DE INICIACIÓN : Comprende los pasos de Adsorción (Adherencia),
Penetración y Desnudamiento.
Adsorción o Adherencia a la Célula : Este hecho dependerá de la interacción entre
las moléculas de la capside (virus desnudos) y/o del peplos (virus envueltos), con las
moléculas superficiales de la MP (receptores) de la célula huésped .
Penetración : El virión puede entrar en la célula huésped por :
Traslación directa a través de la MP Virus Desnudos
Por captación del virión a través de fagosomas
Por fusión del peplos a la MP Virus Envueltos
Desnudamiento o pérdida de la cubierta : El peplos y/o la capside se desprenden
y el Ac. Nucleico viral es liberado hacia el citoplasma celular
1.
a. Síntesis del ARNm Viral =
2. ETAPA DE EXPRESIÓN Y REPLICACIÓN : La forma en que se da la replicación
viral dependerá de la naturaleza de su Ácido Nucleico. Esta etapa comprende 3 pasos a
saber : la Síntesis de ARNm viral, la Traducción del ARNm viral y la Replicación del
Genoma viral (ácido nucleico viral) :
Los Virus cuyo Genoma es ADN : Utilizan la ARN polimerasa del huésped para
transcribir directamente del ADN viral, la síntesis del ARNm viral.
Los virus cuyo genoma es ARN : Utilizan una ARN polimerasa viral, la cual puede
estar contenida en la nucleocapside o ser sintetizada después de la infección a la célula.
o Los Virus ARN Bicatenario = Utilizan una Polimerasa Viral para transcribir
una cadena en ARNm viral.
o Los Virus ARN Monocatenarios= Tienen 3 vías para distintas para formar
ARNm viral. Es importante aclarar que esto dependerá del sentido (+ ó – ) de
configuración de la cadena del ARN viral (es decir si tiene o no la secuencia necesaria de
bases para la traducción) :
o Los Virus ARN de Cadena configurada en Sentido + : Es decir que tiene la
secuencia de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan directamente esta
cadena de ARN como ARNm viral.
o Los Virus de Cadena configurada en Sentido – : Es decir no tienen la secuencia
de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan una polimerasa viral que
transcriba dicha cadena de ARN en una cadena de ARN configurada en sentido +, que
podrá actuar como ARNm viral.
o Los Retrovirus : (ARN Monocatenarios de cadena configurada en sentido +)
Primero utilizan una Transcriptasa Inversa Viral, contenida en su nucleocapside, que lo
transcriba en una cadena de ADN Monocatenario configurada en sentido – ,
inmediatamente después se forma ADN Bicatenario que ingresa al núcleo celular
integrándose al genoma del huésped. Luego ese ADN viral (integrado al genoma
celular), por obra de una polimerasa del huésped será transcrito en ARNm viral
VIRUS ADN VIRUS ARN Bicatenario VIRUS ARN Monocatenario RETROVIRUS
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En los Ribosomas será traducido a Proteínas Virales necesarias para formar el nuevo virión
a. Traducción del ARNm Viral = Ocurre en los Ribosomas citoplasmáticos de la célula
huésped; el ARNm viral los utiliza para sintetizar proteínas virales (enzimas y moléculas
reparadoras) que le permitan replicar el genoma viral, así como también induce la
síntesis de proteínas necesarias para la formación de la capside.
b. Replicación del Genoma Viral = Para ello utiliza las polimerasas virales y/o las del
huésped para actuar sobre el Ac. Nucleico viral, transformándolo en una plantilla de
transcripción configurada en sentido contrario al original, que servirá de molde para la
producción de numerosas cadenas de Ac. Nucleicos virales (con la configuración
original)
En los Virus ADN : la replicación del genoma ocurre en el núcleo de la célula huésped
(excepto el Poxvirus, que se replica en el citoplasma), previa utilización de una polimerasa
(viral o del huésped). Por ejemplo : en el Herpes Virus, el ARNm viral traducido en los
ribosomas citoplasmáticos produce una ADN polimerasa indispensable para síntesis de
nuevo ADN viral; mientras que el Adenovirus utiliza enzimas virales y del huésped para
conseguir el mismo fin.
En los Virus ARN : la replicación del genoma ocurre en citoplasma de la célula
huésped (excepto los virus de la gripe o Influenza y el virus del sarampión que se replican en
el núcleo). El mecanismo de replicación dependerá del tipo de cadena y del sentido de su
configuración:
o Virus ARN Monocatenario configurado en sentido + : El ARN viral (de
configuración +) es utilizado directamente como ARNm viral y en los ribosomas, al ser
traducido, produce una ARN polimerasa viral que originará, a partir de la plantilla de
ARN de configuración +, un ARN viral de configuración – , que luego es trascripto
repetidamente en muchas cadenas positivas, formando la progenie. (Ej. Poliovirus)
o Virus ARN Monocatenario configurado en sentido – : El ARN viral (de
configuración –), primeramente por obra de una polimerasa viral es trascripto en
ARNm viral de sentido +, éste será traducido en los ribosomas produciendo una ARN
polimerasa viral, ésta polimerasa luego origina, a partir de la plantilla de ARN de
configuración – , un ARN viral de configuración +, que será trascripto repetidamente en
muchas cadenas negativas; es decir, se forma la progenie. (Ej. Virus de la Rabia)
o Virus ARN Bicatenarios : En este tipo de virus la polimerasa viral actúa
sobre la cadena de ARN de configuración – transcribiéndola en ARNm viral de sentido
+, luego ésta cadena actúa como plantilla para la síntesis de nuevas cadenas de sentido
– a fin de reestablecer la condición bicatenaria de la progenie. (Ej. Rotavirus)
o Retrovirus (ARN Monocatenarios de sentido +) : En este tipo de virus el
ARN viral, por obra de una transcriptasa inversa, se transforma en ADN viral el cual se
integrará al genoma del huésped en el núcleo celular; allí utiliza una ARN polimerasa
del huésped para transcribir a partir del ADN viral la síntesis de ARN viral.
1. El Ensamblaje de viriones consiste en la formación de una nueva nucleocapside,
puede darse en el núcleo o en el citoplasma de la célula huésped.
La Liberación de viriones consiste en el desprendimiento de los virios del medio
intracelular, esto puede darse por:
1. Citólisis de la célula huésped : Los virus desnudos utilizan este mecanismo que
consiste en la lisis celular cuando está repleta de nuevos viriones
2. Gemación : mecanismo utilizado por los virus envueltos (los que poseen
peplos). Este tipo de virus originan su envoltura a partir de zonas específicas de
la MP y/o de la Memb. Nuclear, donde previamente el ARNm viral insertó
proteínas y glucoproteínas. Por este mecanismo no siempre se causa la muerte
inmediata de la célula huésped (por destrucción de su MP); de tal forma que la
célula infectada puede continuar liberando viriones durante largos períodos de
tiempo.
2. ETAPA DE ENSAMBLAJE Y LIBERACIÓN DE LA PROGENIE VIRAL :
ANTIVIRALES
CONCEPTO DE DROGAS ANTIVIRALES : Son drogas que interfieren con el ciclo
intracelular de la replicación, impidiendo la formación de una progenie viral infecciosa. Su
mecanismo de acción interfiere con los pasos bioquímicos esenciales de la replicación viral.
CONCEPTO DE ACCION VIRUCIDA : Son soluciones formoladas, fenoladas, iodadas, Ac.
Oxidantes, Hipocloritos, etc., que actúan directamente sobre la partícula viral infectante, antes
de que ingrese al huésped susceptible. Son utilizadas en la desinfección de ambientes y
equipamiento.
CONCEPTO DE INMUNOMODULADORES : Son drogas que modifican la respuesta
inmune del huésped, induciendo la destrucción de las células infectadas y/o evitando que la
acción citotóxica del virus genere un daño que ponga en peligro la vida del individuo. Dentro de
este grupo de drogas se incluyen los INTERFERONES
PRINCIPALES ANTIVIRALES :
AMANTADINA Y RIMANTADINA : Son útiles en la profilaxis contra infecciones por Virus
Influenza Tipo A; actuando sobre la etapa de iniciación de la replicación viral. Sus efectos
adversos más importantes son : el insomnio y el nerviosismo (los que desaparecen al suprimir el
tratamiento).
RIBAVIRINA : Actúa frente al Virus Sincitial Respiratorio (VSR), Virus Influenza
Tipos A y B, Virus ParaInfluenza, Virus del Sarampión, Virus de la Hepatitis A y
HIV
Efectos Adversos
En Aerosol : No se observa una toxicidad significativa.
Por Vía Oral y/o Intravenosa : Provoca Anemia transitoria y Aumento de la Bilirrubina.
GANCICLOVIR : Tiene acción frente a la replicación del Citomegalovirus; empleándose
para el tratamiento de la colitis, esofagitis, retinitis y neumonías causadas por este virus en
pacientes inmunodeprimidos.
Entre sus Efectos Adversos destacamos: A largo plazo puede ser responsable de una
mielosupresión.
ACICLOVIR : Es un antiviral eficaz en infecciones por Virus Herpes Simples y Herpes
Zoster
VIDARAVINA : Es activa contra las células mutadas por infección del Virus Herpes
Simples (resistentes al Aciclovir), por lo que resulta efectivo en el tratamiento del Herpes
Neonatal, la Encefalitis Herpética, la Queratitis Herpética. También tiene acción frente al Virus
Varicela Zoster por lo que resulta muy útil actualmente para tratar la varicela de los
inmunodeprimidos.
Entre sus efectos adversos destacamos :
Trastornos Gastrointestinales (Náuseas, Vómitos y Diarreas)
Trastornos Neurológicos (Parestesia, Ataxia, etc)
A elevadas dosis : puede causar anemia megaloblástica, Leucopenia y trombocitopenia.
AZIDOTIMIDINA (AZT), DDI, DDC, 3TC, 4DT : Actúan como análogos de nucleósidos ,
inhibiendo la síntesis de ADN por bloqueo de la transcriptasa inversa de los retrovirus
(HTLV, HIV 1 Y 2)
Efectos Adversos : Mielosupresión, la cual no se prolonga más allá de los 6 meses.
INDINAVIR, RITONAVIR Y NELFINAVIR : Son Activos contra el HIV
HONGOS
Son microorganismos de estructura celular eucariota (pudiendo ser unicelulares o
pluricelulares); son heterótopos, aclorófilos y de metabolismo adsortivo.
De Vida Libre = Estas especies digieren la materia orgánica mediante liberación de enzimas al
medio
externo (adsorción)
Hay Especies Oportunistas = Son especies de vida libre que se pueden adquirir por
inhalación o a través de heridas, tras
lo cual pueden integrarse la flora microbiana normal (como la Cándida), siendo inofensivos
para el huésped a menos que este presente compromiso de sus defensas.
Patógenas = Son especies capaces de captar nutrientes directamente desde los tej. del
huésped.
CARACTERISTICAS PRINCIPALES :
Poseen una pared celular rígida que contiene quitina, glucano, manano y otros
polisacáridos.
La MP es rica en esteroles
Su citoplasma presenta Organellas (mitocondrias, Ret. Endoplasmático, etc) y además
existe Flujo Citoplasmático.
Poseen núcleo verdadero (Núcleo rodeado de Mem. Nuclear) y contiene varios pares de
cromososmas (los filamentos de ADN están unidos por puentes histonas y proteínas).
Tipo de reproducción : Sexual (hongos perfectos) o Asexual (hongos Imperfectos)
Se cultivan sólo en medios ácidos, donde se desarrollan lentamente ya sea en forma de
Levaduras o de filamentos (Hifas y/o Micelios).
CLASIFICACIÓN de los HONGOS:
SEGÚN LA FORMA DE CRECIMIENTO Y ESTRUCTURA
1.- LEVADURAS
2.- FILAMENTOSOS
3.- DIMORFICOS
SEGÚN EL TIPO DE REPRODUCCIÓN
a.- INPERFECTOS (realizan reproducción de tipo asexual)
b.- PERFECTOS (realizan reproducción de tipo sexual)
ESTRUCTURA Y MORFOLOGIA : (levaduriforme, filamentosa, dimórfica)
LEVADURIFORME = Son Hongos Unicelulares de forma oval, inmóviles que se
reproducen por gemación, bipartición o un proceso intermedio entre ambas.
FILAMENTOSA = Son Hongos Pluricelulares, formados por estructuras tubulares
denominadas Hifas; las que se desarrollan, ramifican y entrelazan conformando una
estructura llamada Micelio.
o HIFAS : Son túbulos cilíndricos ramificados, de diámetro variable, tabicados o
no, constituidos por una pared celular rígida, delgada y transparente que contiene una
masa citoplasmática multinucleada y móvil.
Las hifas pueden tener una serie de elementos que cumplen diferentes funciones, como por
ejemplo :
Rizoides = Penetran en el sustrato primitivo en busca de alimentos
Depredadores = para la captura
Órganos
Aspersorios = Para la fijación
Estolones = Para la búsqueda de nuevas zonas nutricionales
MICELIOS : Conjunto de hifas ramificadas, entrelazadas y de disposición variable. Los
Micelios pueden ser :
1. Micelio Aéreo o Reproductor = Es la parte del micelio que se proyecta por encima
del sustrato y que se encarga de función reproductora y de dispersión de la especie
mediante esporas.
2. Micelio Vegetativo= Es la parte del micelio que penetra en el sustrato (superficie del
suelo, plantas, alimento, etc.)para absorber sustancias nutricionales.
o PSEUDOMICELIO : Es una estructura de transición entre la colonia ( talo)
unicelular o pluricelular que presentan algunos hongos unicelulares como la Cándida.
DIMÓRFICA = Son Hongos que pueden existir tanto en forma de levadura o
filamentosa, según el medio en el que se encuentren. Ej. Histoplasma Capsulatum,
Coccidioides, Paracoccidioides, Blastomyces, Sporothrix, etc.
FORMAS DE CRECIMIENTO :
1. Por ESPORAS: Las esporas son elementos de reproducción y resistencia que se
forman por condensación del citoplasma y contenido nuclear, de manera que de una
célula madre se origina 4 o más elementos hijos (cada uno de los cuales contiene una
parte del núcleo primitivo); las esporas están envueltas por una cubierta resistente
(consistente en 2 membranas , una interna y otra externa) y pueden albergar una o más
células divididas por septos. Poseen un esporo germinativo de donde surgirá una nueva
hifa en el momento del desarrollo.
Tipos :
Exosporas o Conidios: Esporas asexuales que nacen por brotación en el extremo de
un filamento de micelio; según su tamaño se designarán como micro o macroconidios.
Endosporas o Gonidios : Son esporas que se forman en el interior del esporangio
(vesícula que contiene esporas)
Clamidiosporas : Son esporas asexuales de pared gruesa y en reposo
Cigosporas : Son esporas formadas por la conjugación entre los filamentos de micelio
1. REPRODUCCIÓN : Puede ser de dos tipos :
2. Por OIDIOS: Estadio imperfecto de los hongos de la familia Erysiphaceae que permite
el crecimiento por separación de un parte del micelio y posterior reproducción por
gemación (reproducción asexual)
3. ASEXUAL : La realizan los denominados hongos imperfectos. Se da a partir de un
micelio, sin conjugación nuclear, ni reducción de cromosomas. Puede llevarse a cabo por
:
Brotación o Gemación= Consiste en la formación de una yema en una determinada
zona de la célula madre; a medida que la célula hija aumente de tamaño se irá separando de
la célula madre.
Bipartición (Esporulación – Germinación) : Mediante este mecanismo se forman
esporas que luego , en un medio adecuado, germinarán.
La Célula vegetativa (directamente): TALOSPORAS (astrosporas, blastosporas
y clamidiosporas)
Estructuras Especiales: CONIDIOS (esporas asexuales que surgen
Esporas desarrolladas por gemación y que se liberan por
a partir de hifas
abstricción; según su tamaño se nombran
como micro o macroconidios
ESPORANGIOSPORAS (estas se forman dentro de
una estructura sacular , llamada esporan-gioforo, en los extremos de las hifas no tabicadas)
Fragmentación : Por este mecanismo las hifas se fragmentan y c/u de esos
fragmentos crecerá y regenerará, dando origen a una nueva colonia.
1. SEXUAL : Este tipo de reproducción la realizan los denominados hongos perfectos.
Consiste en fusión de 2 núcleos haploides sexualmente diferentes, de la unión surge una
célula diploide (zigoto) que por división meiótica originará 4 células haploides , las
cuales se rodean por una gruesa cubierta constituyendo las esporas (ej. zigosporas,
ascosporas, oosporas).
CLASIFICACION DE LAS MICOSIS PROVOCADAS – ANTIMICÓTICOS
EMPLEADOS :
MICOSIS SUPERFICIALES : Se pueden tratar con Itraconazol
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MICOSIS PROFUNDAS : Se pueden tratar con Itraconazol (a criterio médico)
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ESTERILIZACIÓN (ANEXO 1)
ESTERILIZAR =Procedimiento Físico–Químico que mata toda forma de vida , en estado
vegetativo y/o esporulado (forma de activa y forma de resistencia respectivamente).
DESINFECTAR = Es eliminar todos los Microorganismos pero no sus formas de resistencia.
DESINFECTANTE = Sustancia química que produce la desinfección de material y que, por sus
características, resulta tóxica o irritante para los tejidos vivos; por lo que su uso está limitado a
objetos y/o superficies inanimadas.
ANTISÉPTICO = Es una solución que puede provocar inhibición del crecimiento microbiano
y/o la muerte de los microorganismos; y que , por sus características químicas puede ser
aplicada sobre tejidos vivos (piel, mucosas, heridas, etc.)
AGENTES ESTERILIZANTES :
QUÍMICOS
SUST. QUÍMICAS EN SOLUCIÓN
o Glutaraldehído, Alcoholes
o Jabones, Detergentes
o Metales Pesados (Cu++ - Ag+)
o Halógenos (Cl – o Yodo)
o Azul de Metileno (colorante)
GASES O VAPORES
o Oxido de Etileno
o Glicoles
FISICOS
CALOR HUMEDO : El calor desnaturaliza las proteínas y los Microorganismos
mueren por coagulación.
Vapor a Presión Atmosférica= (Autoclave) Basado en el principio de que el agua
calentada en un recipiente cerrado genera vapor que queda retenido bajo presión,
alcanzando altas temperaturas sin hervir (a 1 atm de presión alcanza una Temperaturas de
130 ºC y esteriliza los materiales en 30 min.) Además el vapor tiene la capacidad de permear
sust. porosas por condensación. Es Utilizado para esterilizar ropa y medios de cultivo, látex,
gomas, etc.
Tindalización = Utilizada para sust. sensibles a las altas temperaturas bajo presión,
pero que pueden soportar 100 ºC. Durante 3 días, dejando periodos de incubación a 37 ºC
durante 24 hs entre c/u de ellos, el material se calienta a 100 ºC durante 30 - 60 min. (en el
primer calentamiento mueren las formas vegetativas de los microorganismos). Luego se
incuba. La incubación permite que algunas formas de resistencia germinen, por lo que el
segundo calentamiento sirve para eliminarlas y el tercer calentamiento tiene por finalidad
asegurar una buena esterilización
Vapor ajo Presión
Ebullición
CALOR SECO : Se emplean temperaturas más elevadas que desnaturalizan proteínas
matando a los microorganismos por oxidación.
Flameado = Utilizado para esterilizar artículos metálicos. Mediante incineraciónse
destruyen microorganismos presentes en materiales patógenos, gasas, colchones, ropa, etc.
Aire Caliente = Se emplean temperaturas de 160 ºC, requiriéndose un cierto tiempo
para que el aire caliente penetre (por lo que el objeto debe ser expuesto unas 2 hs.). El aire
caliente actúa sobre los objetos por conducción (el calor es absorbido desde la superficie
externa del objeto hasta calentar su interior), lo que hace que los microorganismos se
deshidraten antes que se coagulen sus proteínas, por lo que su muerte es un proceso de
oxidación o de incineración lenta.
FILTRACIÓN : Consiste en hacer pasar los líquidos a través de filtros que retienen a
los microorganismos. Este método se emplea con toda sustancia que pueda ser alterada por
el calor ( ya sean sueros, vitaminas o medios de cultivo)
RADIACIONES NO IONIZANTES :
Rayos Infrarrojos = Tienen acción calorífica sobre el objeto irradiado
Rayos U.V. = Actúan por 3 mecanismos a) Uniéndose a proteínas y bases a las que
alteran; b) producen O3 en contacto con el aire y este elemento interacciona con las
bacterias; c) transforma en parte el agua en agua oxigenada.
RADIACIONES IONIZANTES : Incluyen Rayos X y Rayos Gamma, quienes
producen inactivación del genoma bacteriano y muerte. Permiten la esterilización en frío
(radioestrilización) en todos aquellos materiales que pueden ser alterados por acción del
calor.
BIOSEGURIDAD (ANEXO 2)
MATERIAL BIOLÓGICO = Material orgánico o inorgánico que pueda contener o ser
reservorio de agentes patógenos.
EXPOSICIÓN = Contacto de :
- Piel y mucosas no intactas
- Piel y mucosas intactas pero por tiempo prolongado con material biológico
- Lesión percutánea
- Área extensa
ACCIDENTE BIOLÓGICO = Toda exposición accidental de un individuo a un material
biológico. Los procedimientos básicos ante un accidente biológico son :
1.- Manejo adecuado del personal expuesto
2.- Reporte del accidente (en ficha epidemiológica)
3.- Evaluación clínica del personal expuesto
4.- Tratamiento del personal expuesto
CONCEPTO DE BIOSEGURIDAD = Es una disciplina encargada de prevenir
accidentes biológicos, para ello se vale de un conjunto de medidas y controles destinados a
disminuir el riesgo de exposición a agentes infecciosos o patógenos en clínicas, hospitales,
industrias, etc.
Objetivos Primarios:
1.- Proteger la vida del individuo, la comunidad y el medio ambiente.
2.- Evitar el contagio y/o infección del operador o terceros en un laboratorio que maneje
material biológico
Pretende :
a.- Alertar sobre los riesgos potenciales
b.- Brindar conocimientos necesarios sobre las que permitan adoptar las normas de conducta
apropiadas para
medidas preventivas y de acción inmediata manejar material biológico
frente a un accidente biológico
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NIVELES DE BIOSEGURIDAD: Si se trabaja con microorganismos potencialmente
peligrosos o letales, las precauciones deberán extremarse. Según la peligrosidad del
microorganismo, los niveles de bioseguridad se clasifican en :
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DIAGNOSTICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS (ANEXO 3)
El Diagnóstico definitivo de las
Enf. Infecciosas se basa en :
Diagnóstico Clínico=Consiste en la evaluación de signos y síntomas, lo que nos llevará a
establecer un Diagnóstico Presuntivo.
Diagnóstico Complementario = Comprende métodos y/o estudios como:
-Imagenológicos
-Bioquímicos Contribuyen a establecer o a completar el diagnóstico definitivo
-Histopatológicos, etc.
Diagnóstico Microbiológico = Comprende un conjunto de procedimientos y técnicas
por los
cuales podemos llegar a conocer al agente etiológico de la enfermedad y su
susceptibilidad.
Para llegar a ello es imprescindible que se realice precozmente (de manera que sea beneficioso
para el paciente y la comunidad). Debe ser lo más exacto posible (para que nos permita
instaurar una terapéutica adecuada)
En una Enfermedad Infecciosa se requiere :
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1.- La Solicitud de Examen Microbiológico : El pedido para el examen microbiológico
debe contener los siguientes datos :
Datos Filiatorios del Paciente
Tipo de Muestra, Fecha de Obtención y Condiciones de la Toma de Muestra
Datos Clínicos
Estado Inmunitario
Tratamiento Medicamentoso previo a la toma de muestra
Determinación a Realizar por el laboratorio
Todos estos datos brindan información indispensable para el procesamiento y posterior
interpretación de la muestra.
2.- La Muestra : (ejemplos)
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En cualquier diagnóstico microbiológico es muy importante realizar una adecuada toma de
muestra (realizada en el sitio exacto y que sea representativa), no menos importante es la
conservación y el transporte del material a analizar; ya que de todo esto dependerá que los
resultados obtenidos sean correctos. Para garantizar esto se toman las medidas adecuadas para
cada caso ; pero minimamente se ponen en práctica una serie de Medidas Generales que son
las siguientes :
Evitar cualquier tipo de contaminación externa.
Tomar la muestra, en lo posible, antes de la administración de ATB.
Colocar una cantidad representativa (suficiente) del material a estudiar en recipiente
estéril.
Los recipientes deben ser cerrados (para mantener la muestra inalterable), luego
rotulados correctamente e ir acompañados de la solicitud que contengan los datos necesario
para procesar la muestra.
Enviar la muestra lo más rápido posible al laboratorio bien conservar en un ambiente
apropiado (heladera o a Temp. ambiente – según sea el caso).
Utilizar medios de transporte apropiados para mantener la viabilidad de los
microorganismos, presentes en la muestra, durante un tiempo prolongado.
3.- TIPOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO :
POR METODOS DIRECTOS : Pueden ser Específicos o Inespecíficos. Estos métodos
permiten demostrar : la presencia de un Microorganismo o agente etiológico, los componentes
del mismo (sus antígenos), las sustancias producidas por su metabolismo (metabolitos) y/o su
genoma. Comprende Examen Citológico al M.O. (visualización), Cultivos, Aislamiento e
Identificación del germen, Antibiograma .
EXAMEN CITOLÓGICO AL MO: (Examen en Fresco y técnicas de campo oscuro).
Mediante estas técnicas podemos detectar agentes etiológicos (como bacterias y hongos) y
visualizar también otros elementos como hematíes, Leucocitos Polimorfo nucleares (PMN)
y algunos parásitos. Cabe señalar que un recuento alto de PMN por campo indica que hay
una reacción inflamatoria, pero no siempre indica infección bacteriana aguda, pues este
recuento también puede ser indicativo de alergias, neoplasias, etc.
Mediante la técnica de campo oscuro, aplicada en material patológico, podemos visualizar
Treponemas y Leptospiras
EXAMEN CITOLOGICO COLOREADO : (coloración o tinción del preparado a
observar en el MO)
Tipos de Tinciones :
A.- Tinción o Coloración Negativa = Sirve para visualizar algunas Bacterias y Hongos, por
Ej. Cápsula del Criptococcus Neoformans (presente en el LCR en una meningitis micótica)
B.-Tinción o Coloración Simple = (Giemsa) : Nos permiten la visualización de algunas
Bacterias, Hongos y Parásitos
C.- Tinción o Coloración Diferencial = (Gram, Ziehl – Neelsen, Kin Youn, Auramina
– Rodamina, Gueguen, etc). La coloración más utilizada para la detección de bacterias sin
duda es la de Gram y en casos de los acilos Ácido Alcohol Resistentes o BAAR la basiloscopía
(ziehl – Neelsen y Kin Ypun) y Gueguen para los hongos.
1.- Coloración de Gram(Exámen bacteriológico): Es sencilla de realizar, rápida y de gran
riqueza informativa, es por ello
que aún no se pudo reemplazar la utilidad de esta tinción. Gram permite clasificar las bacterias
en Gram+ y Gram- en función de su estructura de pared; a demás nos informa su morfología y
disposición en el espacio, lo cual nos orienta hacia un diagnóstico.
Fundamento de la Tinción de Gram :
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2.- Coloración de Ziehl – Neelsen (Basiloscopía) : Es útil para identificar BAAR, se basa
en la
propiedad que presentan estas bacterias para resistir la decoloración con un alcohol y un ácido
fuerte, tras haber sido previamente teñidas; ésta propiedad se debe a la presencia de ácidos
micólicos en su pared.
Fundamento de la Tinción de Ziehl – Neelsen :
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CULTIVOS : Son ambientes artificiales que contienen los elementos nutritivos y las
condiciones físico- químicas que permiten el desarrollo, crecimiento, conservación y estudio
de los microorganismos. Existen diferentes medios de cultivo (tipos) :
a.- Cultivos Comunes: Son los que contienen un medio base (Agar – Agar) para el desarrollo
de microorganismos.
b.- Cultivos Enriquecidos : Son aquellos medios destinados a lograr un crecimiento más
rápido o a lograr el desarrollo de ciertos gérmenes; por Ej. Agar – Sangre; Agar – Chocolate;
Agar – Cerebro – Corazón ; Caldo de Selenito; etc.
c.- Cultivos Selectivos : Son aquellos medios que permiten el desarrollo de un determinado
microorganismo, impidiendo el desarrollo de otros, por Ej. Lowestein – Jensen; TCBS; Medios
SS; Levine; Tayer – Martín (con bilis o con taurocolato); etc.
d.- Cultivos Diferenciales: Son aquellos medios, como la urea, el citrato, el indol, SIM, etc.,
que contienen una sustancia que al combinarse con algún producto del metabolismo bacteriano
producen una reacción característica (por Ej. Un cambio de color) que permitirá su
identificación.
e.- Cultivo virológico : (evidencia indirecta de crecimiento en cultivos celulares). Los virus no
tienen la capacidad de crecer en cultivos sólidos para bacterias u hongos; y como son
considerados como parásitos intracelulares obligados, se necesitan para su desarrollo de células
vivas. Para reralizar el aislamiento de virus podemos utilizar :
1. Cultivos Celulares
2. Hevos Embrionados
3. Animales de Experimentación
Debido al elevado costo, la necesidad de personal experimentado e infraestructura especial, no
son utilizados en el diagnóstico clínico de los laboratorio. Por ello en la actualida han cobrado
importancia los Métodos rápidos de Diagnóstico (microscopía Electrónica, Técnicas
Inmunológicas y Moleculares (ver más a delante).
Procedimiento para el cultivo :
1.- Realizar la siembra del microorganismo (contenido en la muestra) en un medio de cultivo
apropiado.
2.- Incubar para generar un crecimiento visible. Es necesario que el médico solicitante conozca
cuales son los períodos razonables para realizar las diversas clases de cultivos y que el
laboratorio establezca un sistema para informar resultados preliminares.
En Bacteriología Clínica = se requiere de un período de incubación mínimo de entre 48 – 72 HS
a una temperatura de entre 35º C y 37º C
En Virología Clínica = se requiere aproximadamente entre 30 – 45 días de incubación
En Micología clínica = se requiere aproximadamente de entre 7 – 15 días de incubación;
empleándose universalmente como medio de cultivo el Agar – Saboureaud; al que se le puede
adicionar ATB (para inhibir el desarrollo de bacterias contaminantes) o Cicloheximida (para
inhibir el desarrollo de hongos contaminantes).
3.- Si se observa el crecimiento de colonias se realiza una nuevamente una coloración de Gram
(ésta se diferencia de la primera tinción de Gram por que no visualizaremos ni hematíes ni
Leucocitos, sólo observaremos lo que se desarrolló tras la incubación del cultivo).
4.- Realizar el Recuento de Colonias (expresando en UFC / ml) y observar las características de
la colonia. El recuento de colonias generalmente es un recurso que se utiliza mayormente en
muestras de orina (2da. Porción) en infecciones urinarias; lavado bronquial en infecciones del
TRI y en muestras de catéteres.
IDENTIFICACIÓN DE GERMEN : Bacterias y hongos pueden ser identificados, tras
su aislamiento en cultivos sólidos son identificados por :
A.- Las características Macroscópicas de la Colonia.
B.- Pruebas Bioquímicas Específicas para cada género microbiano; por Ej. Para los Hongos se
pueden realizar : 1- Auxograma = Estudia el poder de Asimilación
2- Zimograma = Estudia el poder Fermentativo
ANTIBIOGRAMA : Sirve para registrar la susceptibilidad de un determinado germen
a los ATB. Se define como el conjunto de procedimientos que permiten determinar la
sensibilidad in vitro de un microorganismo frente a un determinado ATB.
METODOS DIRECTOS RAPIDOS :
A.- TÉCNICAS DE INMUNOMARCADO : Conjunto de técnicas utilizadas para la detección
de antígenos del germen. Puede realizarse a partir de las muestras donde se eliminan los
antígenos como por Ej. las tomadas del foco de infección (es la muestra que ofrece mayor
rendimiento), del suero, del LCR o de la orina (esta última es una muestra alternativa dada la
facilidad de obtención y la posibilidad de su concentración). Las técnicas más utilizadas son :
Inmunofluorescencia Directa (IFD) = Consiste en la unión de un Anticuerpo
marcado con Isotiocinato de fluoresceína a su Antígeno correspondiente, y la posterior
detección mediante microscopía de fluorescencia. Las principales ventajas de esta técnica
son su sencillez, rapidez y la posibilidad de efectuar un diagnóstico etiológico en pacientes
previamente tratados con ATB. En el Diagnóstico. En líneas generales esta técnica se aplica
en detección de : Streptococo Pyogenes, Haemophilus Influenzae, Chlamydia Trachomatis,
Pneumocystis Carinii, Cryptosporidium, etc.
Enzimoinmunoanálisis (EIA) = Es ampliamente utilizadaen el Diagnóstico
virológico(Ej. Antígeno p24 del HIV; Ag del VSR, Ag del Rotavirus,etc). También resulta útil
en el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas causadas por Chlamydia Trachomatis,
Streptococo Pyogenes, Neisseria Gonorhoeae, Cryptococcus Neoformans, Cryptosporidium,
etc.
Aglutinación en Látex (AL) = Algunas de estas Pruebas resultan útiles en el
diagnóstico de Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la
respuesta inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar
claramente entre una Meningitis Bacteriana y una Viral. Sin embargo su uso cuantitativo es
limitado en la identificación de Agentes Etiológicos. Actualmente la AL tiene un empleo
importante en muestras como LCR y Suero, donde se la utiliza para la detección de
antígenos fúngicos del Cryptococcus Neoformans (hongo responsable de meningitis). Dicha
Prueba tiene una sensibilidad mayor a la dela Tinta China en LCR; mientras que su
especificidad se ve disminuida ante la presencia de factor reumatoideo u otras proteínas de
interferencia que inducen resultados de falsos positivos, los cuales pueden eliminarse
tratando las muestras con una proteasa. También hay pruebas de AL diseñadas para los
Streptococos del Grupo A, las cuales, si bien son muy específicas son relativamente
Sensibles, de manera que las pruebas que resultaren negativas deben ser respaldadas por un
cultivo. Actualmente, en los inmunodeprimidos, tiene mucha importancia en la búsqueda
de Antígenos Fúngicos la prueba de Aglutinación de Partículas de Látex (APL)
Coaglutinación = También estas Pruebas resultan útiles en el diagnóstico de
Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la respuesta
inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar claramente
entre una Meningitis Bacteriana y una Viral.
Contrainmunoelectroforésis (CIE) =
Inmunoperoxidasa =
B.- TÉCNICAS MOLECULARES : Son un conjunto de técnicas que hoy en día posibilitan la
Detección del Genoma de un determinado microorganismo, aunque la cantidad de inóculo en la
muestra sea muy bajo.
Estas Técnicas Comprenden :
Hibridación con Sondas de Ac. Nucléico = Estas sondas genéticas consisten en
una molécula de Ac Nucleico monocatenario y marcado con un isótopo radiactivo (Ej. 32 P)
que, tras hibiridarse (unirse) a una secuencia complementaria de ADN, permite su
detección . Empleando sondas específicas podemos detectar el agente etiológico presente en
una muestra, sin necesidad de realizar un cultivo de la misma. También la construcción de
sondas genéticas para ciertos factores de virulencia (toxinas), posibilita detectar a los
microorganismos que transporten los genes que los codifican; por Ej. tanto la Hibridación
con Sondas para la Enterotoxina de la Escherichia Coli como la Hibridación con Sondas
para la Toxina Colérica del Vibrio Cholerae pueden ser aplicadas directamente en las heces
para luego detectar el agente patógeno respectivo. Esta Técnica también se emplea para
detectar el genoma de: Chlamydia Trachomatis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo
Pyogenes, Histoplasma Capsulatum, etc.
Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR) = Cuando conocemos la secuencia
de nucleótidos, o parte de ella, de un determinado gen; podemos añadir secuencias de
nucleótidos conocidos (cebadores) apropiados para la muestra lo que permitirá que una
ADNpolimerasa genere gran cantidad de copias del gen estudiado, las cuales serán
fácilmente identificables con una electroforésis.
La PCR tiene una gran sensibilidad por lo cual los laboratorios clínicos están accediendo cada
vez más a su uso, tan es así que la PCR está reemplazando al cultivo para la detección rápida del
HIV; y ya se anticipan muchas otras aplicaciones como la detección de microorganismos no
cultivables, de crecimiento lento o de difícil cultivo. Sin embargo se trata de una técnica
compleja que requiere de cuidados extremos para evitar contaminaciones que lleven a
resultados de falsos positivos.
Dot Blot =
Slot Blot =
Southern Blot =
Northern Blot =
POR METODOS INDIRECTOS : Son métodos que permiten detectar las huellas que el
germen dejó tras su contacto con el sistema inmunológico del huésped (anticuerpos circulantes
y/o células sensibilizadas contra determinado microorganismo). Comprende Pruebas
Serológicas y Pruebas de Hipersensibilidad Retardada o Celular.
SEROLOGIA : Son método que permite determinar niveles de Anticuerpos en el suero
del paciente. En el desarrollo de estas técnicas es conveniente extraer 2 muestras de suero
(una en el período agudo de la enfermedad y otra en el período de convalecencia) para
comparar los niveles de anticuerpos dosados en cada período; estos sueros obtenidos
(muestras) en cada período y luego comparados se denominan como muestras pareadas.
Los resultados se expresan cuantitativamente, denominándose Titulo a la mayor dilución
del suero del paciente en la cual aún se puede detectar los anticuerpos contra un germen
determinado.
Se considera que hay infección reciente cuando se registra un aumento del Título de
Anticuerpos en 2 o más diluciones de suero (Ej. de 1/16 a 1/64); entonces consideramos que hay
una infección resiente
Decimos que se produjo una seroconversióncuando los niveles de Anticuerpos superen 4
veces los valores del Título. Excepto en el caso de dosaje de IgM, en donde se recomienda
extraer una sola muestra de suero en casos particulares de infección reciente (por Ej. Influenza
tipo b, etc) . Si el agente infeccioso es poco frecuente (viris de la Rabia, HIV o Toxina
Botulínica), la presencia de Anticuerpos específicos en una sola muestra permite establecer el
diagnóstico.
Dentro de las técnicas más utilizadas en la detección de Anticuerpos citamos :
1.- Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) =
2.- Fijación del Complemento (FC) =
3.- ELISA =
4.- EIA =
5.- Contrainmunoelectroforesis (CIE) =
6.- Inmunodifusión en Gel de Agar (IDGA) =
7.- Inmunomicroscopía Electrónica Empleadas para virus
8.- Inhibición de la Hemaglutinación
REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA : Son reacciones
intradérmicas como la (PPD, tricofitina, candidina, histoplasmina, coccidioidina,
paracoccidioidina, Aspergilina, etc.) donde se efectúa una inoculación intradérmica
no letal con antígenos de cierto microorganismo para tras 24 – 48 Hs poner en evidencia la
sensibilidad del huésped frente a ese microorganismo. Una prueba cutánea positiva en un
individuo sano indica contacto previo con el microorganismo, y adquiere gran utilidad en
los estudios epidemiológicos.
ENF. INFECCIOSAS (ANEXO 4)
ENFERMEDADES INFECCIOSAS = Son aquellas enfermedades causadas por múltiples
agentes patógenos(bacterias, virus, hongos y parásitos). Dichos agentes interactúan con el
organismo humano de diferentes maneras, resultando así una relación que está dada por :
Presencia del Agente, Toxinas o Enzimas
Enfermedad Infecciosa
Respuesta Inmune del Huésped
Por otro lado debemos tener presente que la relación : Infección / Enfermedad .... también se
halla condicionada por la evolución biológica y la adaptación al medio ambiente por parte del
huésped y los microorganismos; lo cual explica la presencia de portadores sanos, Infectados y
Enfermos.
Para Rich Las enfermedades infecciosas son el resultado de la siguiente relación :
Inóculo + Virulencia + Hipersensibilidad
Enfermedad Infecciosa
Inmunidad Natural + Inmunidad Adquirida
A lo que dice Rich debemos agregar la presencia de Receptores de Superficie presentes en las
células, que pueden ser utilizados por diferentes microorganismos; por Ej. El receptor CR2,
presente en los Linfocitos B, permite la infección por VEB y HIV; algo similar ocurre con los
Linfocitos T, Macrófagos alveolares y del tracto digestivo, quienes expresan el receptor ICAM
que los vuelve susceptibles a infecciones por Rinovirus Micoplasmas y Poliovirus. Por esto
decimos que no basta con estar expuesto al microorganismo para contraer una determinada
enfermedad.
La fisiopatogenia de toda enfermedad infecciosa está ligada a 3 factores : el Medio
Ambiente, el Microorganismo y el Huésped.
a. Medio Ambiente: es quien condiciona o favorece la aparición de determinada
enfermedad infecciosa.
b. Microorganismo : se vale de sus factores de virulencia (Capacidad de : Colonizar,
Penetrar, Multiplicarse, Invadir y Lesionar) para causar , en mayor o menor medida, la
enfermedad.
Inmunidad Natural = Es aquella insensibilidad relativa que posee un sujeto frente a
determinada enfermedad, permitiendo al mismo sobrevivir la primera etapa de la
infección. Se halla condicionada por factores : genéticos, neurohumorales, edad, sexo,
raza.
En un individuo sano los microorganismos son destruidos permanentemente por
mecanismos defensivos de tipo general entre los que se destacan :
c. Huésped : pone en marcha sus mecanismos de defensas (inmunidad natural e
inmunidad adquirida) frente al agente y/o sustancia extraña.
1. La Integridad de Piel y Mucosas: La integridad de las diferentes capas de la piel y
de las mucosas actúan como una barrera o solución de continuidad (llamada barrera
cutáneo – mucosa), que evita el ingreso de microorganismos; además las glándulas
anexas a la piel liberan secreciones de tipo ácidas que actúan como bactericidas evitando
la colonización de gérmenes patógenos. Cuando la piel sufre agresiones (quemaduras,
abrasiones, cortes, pinchazos, etc) su función de barrera se altera y la lesión sirve como
una puerta de entrada a microorganismo y permiten que los mismos colonicen y
penetren a tejidos subyacentes. A nivel de las mucosas el primer elemento defensivo está
dado por la secreción como lisozimas, espermina, arginina y leucina (factores
antimicrobianos) que tienen actividad bactericida, lo que provoca la lisis de
microorganismos. Otro elemento de defensa de las mucosas es el transporte mucociliar
que permite eliminar constantemente a aquellos microorganismos que entran en
contacto con la mucosas. Sin embargo hay factores como el aire frío y seco, la aplicación
de fármacos tópicos, el uso de vasocontrictores, la cocaína, etc. que producen
desequilibrios en la composición de las secreciones mucosas y cilioestásis de los epitelios
ciliados. En el estómago la secreción de iones, por parte de su mucosa, permite que en la
luz se forme ácido clorhídrico, que es el responsable de un pH altamente ácido que actúa
como una barrera muy eficaz contra el ingreso de microorganismos.
2. Los Movimientos Peristálticos : Dichos movimientos adquieren gran importancia a
nivel del intestino y vías urinarias en donde impiden la colonización de agentes
patógenos ya que tienden a expulsar a los mismos.
3. El Lavado de Los Fluidos Orgánicos : La excreción de ciertos fluidos permite la
expulsión de microorganismos, lo que contribuye a evitar su colonización e inclusive
impiden que su proliferación alcance número críticos como para provocar una infección.
4. La Flora Normal : Son microorganismos que residen en piel y mucosas de personas
sanas. La composición de la Flora varía de una localización a otra y depende de factores
como edad, sexo, tipo de alimentación, grado de higiene personal, condiciones de
saneamiento ambiental, condiciones socioeconómicas, clima, etc. La flora microbiana
normal resulta importante porque actúa como barrera defensiva frente a
microorganismo total o potencialmente patógenos; ya sea creando pH ácidos en el medio
para destruir a los agentes patógenos (Bacilo de Doderlein en Vagina) o bien
compitiendo por nutrientes o receptores celulares, produciendo bacteriocinas y también
estimulando constantemente al sistema inmulógico para que reaccione rápidamente
frente a posibles gérmenes patógenos, a demás resulta beneficiosa para la digestión de
productos no atacables por los fermentos digestivos y para la síntesis de algunas
vitaminas como la vit. K (Lactobacillus del intestino).
5. Células Fijas: (Ej. Histiocitos, Macrófagos alveolares, Células de Kupffer, Microglias,
etc). Estos tipos de células se hallan distribuidas estratégicamente en diversos sitios del
organismo (Piel, Pulmón, Hígado, SNC, etc) donde actúan como filtro para algunos
gérmenes patógenos.
a.
b. Eosinófilos = Participan en la eliminación de inmunocomplejos y algunos
parásitos, evitando el daño de vasos y tejidos. Además son los responsables de la
magnitud de la Respuesta Inflamatoria.
c. Basófilos = Poseen gránulos de Histamina y Heparina, lo que les confiere
efectos vasoactivos y anticoagulantes, esto explica su presencia en cuadros
terminales de Shock.
d. Macrófagos = Estos engloban al microorganismo y activan la inmunidad
específica
e. Linfocitos y Monocitos : estos si bien son células relacionadas con la inmunidad
adquirida, durante la primoinfección codifican la información e inician una
respuesta inmunológica celular y humoral.
6. Fagocitos : Constituyen la segunda barrera defensiva que deben franquear los
microorganismos cuando logran traspasar las barreras anteriores por lo que ya han
ingresado al torrente sanguíneo. Estas células mediante procesos oxidantes, leuquinas,
monoquinas, linfoquinas y también mediante enzimas, que degradan fosfolípidos de
membranas, destruyen a los gérmenes y/o a las células infectadas (esto no es aplicable a
los BAAR ya que ellos deben ser eliminados por un mecanismo más complejo que va
asociado a la Inmunidad Específica y al Sistema de Complemento).
7. Opsonización : Es el fenómeno de activación de la fagocitosis mediante opsoninas
(son proteínas del suero o anticuerpos que cuando se combinan con un antígeno lo
vuelve más fácil de fagocitar). Esta función es muy importante sobre todo en los
sinusoides del bazo. En los pacientes esplenectomizados las alteraciones de la
Opsonización determina infecciones por gérmenes capsulados y Gram – .
Inmunidad Adquirida = Insensibilidad específica que obtiene un individuo después del
nacimiento frente a determinada enfermedad; ésta puede ser activa o pasiva.
Su modulación está relacionada con interleuquinas (tipo I = activa a los linfocitos
T; tipo II = induce el crecimiento. Maduración de Linfocitos T; tipo III activan a los
mastocitos y las restantes tipos inducen el crecimiento, maduración y diferenciación de
los Linfocitos B) e interferones (proteínas que se producen en las células animales
como respuesta a inductores virales como el genoma viral; su función principal es inhibir
la replicación viral. También ciertas bacterias inducen su producción).
a. Inmunidad Activa : Se produce tras padecer una enfermedad infecciosa o tras
ser expuesto a un agente patógeno mediante vacunación (inoculación de
microorganismos atenuados o muertos y/o con sus productos). En este caso, las
células inmunitarias reconocen al microorganismo y mantienen una memoria
inmunológica del mismo, por lo que ante una nueva exposición se pone en
marcha una respuesta inmediata contra él mediante la liberación de anticuerpos
específicos. Por lo tanto, la duración de este tipo de inmunidad es muy
prolongada (incluso en algunos casos de por vida).
b. Inmunidad Pasiva : Se produce tras inyectar a un individuo inmunoglobulinas
(anticuerpos) provenientes de un animal o de otra persona inmunizada
activamente contra determinada enfermedad. Mediante la inoculación de estos
anticuerpos se consigue una protección inmediata del sujeto, pero como dichas Ig
inoculadas son destruidas progresivamente, este tipo de inmunidad es de corta
duración , es decir tienen una utilidad transitoria frente a determinada
enfermedad.
Inmunidad Humoral
Queda determinada por la capacidad de sintetizar anticuerpos y liberarlos hacia el torrente
sanguíneo, es decir que los factores activos de la inmunidad humoral son los anticuerpos
presentes en los humores orgánicos. La denominada Célula Plasmática (último estadio de
diferenciación de los Linfocitos B) es capaz de sintetizar anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig)
con capacidad para combinarse con antígenos inactivándolos y/o destruyéndolos
Si la respuesta específica frente al agresor es favorable, al cabo de 1 – 2 semanas, se producen
los distintos tipos de anticuerpos (Ig) los que interactúan para eliminar al patógeno y
autolimitar la enfermedad. Pero si el microorganismo estaba registrado en la memoria
inmunológica (ligada a la Ig G) la respuesta defensiva es mucho más rápida. Los anticuerpos
(AC o Ig) frente al germen actúan de la siguiente forma : se fijan a receptores y sitios
estratégicos, lo recubren y aglomeran, e interactúan con otros componentes del sistema inmune
como las proteínas del sistema de complemento para provocar la lisis del microorganismo.
Podemos decir que las funciones comunes de las Inmunoglobulinas son :
Control de la Respuesta Inflamatoria.
Neutralización de toxinas.
Fijación a sitios estratégicos de microorganismos y partículas extrañas
Interactuar con el Sistema de Complemento.