La tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada
para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR) , como M. tuberculosis o el
Phylum Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue descrita por primera vez por dos
médicos alemanes: Franz Ziehl, un bacteriólogo, y Friedrich Neelsen, un patólogo.
Índice
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1Fundamento
2Técnica
o 2.1Variante histológica
2.1.1Resultados
o 2.2Variante clásica "en caliente"
o 2.3Variante clásica en "frío" (Tinción de Kinyoun)
o 2.4Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes
3Otros tipos de tinción
4Referencias
5Bibliografía
6Enlaces externos
Fundamento[editar]
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de
cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se
denominan ácido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia.
La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese
la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificación de lo ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede
salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las
moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que
resisten la decoloración son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se
utiliza azul de metileno como tinción de contraste.
Técnica[editar]
Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas (variante histológica) como
citológicas (variante clásica).
Variante histológica[editar]
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los reactivos
necesarios para su realización son los siguientes:
1. ácido peryódico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden
dado:
1. 0,5 g fucsina básica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol ácido 1%:
1. alcohol de 35º
2. ácido clorhídrico
El procedimiento es el siguiente:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. ácido periódico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol ácido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados[editar]
BAAR: rojo/amarillo
Núcleos: azul semiamarillo.
Variante clásica "en caliente"[editar]
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse
del portaobjetos durante la tinción.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción
con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos. Mantenga el calor durante este período,
4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre
y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el
colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del
portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-ácido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal como
alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos.
Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son
bacilos TBC puede permanecer teñido. Enjuague con agua una vez
más los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos
aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución
decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque
cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la
observación al microscopio con 100 x 100
Variante clásica en "frío" (Tinción de Kinyoun)[editar]
1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de
fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol ácido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno
Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes[editar]
Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes.1
Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes.2
Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.3
Otros tipos de tinción[editar]
Tinción de Gram
Tinción de Esporas
Tinción negativa
Referencias[editar]
1. Volver arriba↑ SEBHATU, Mineab, KIFLOM, Bahlbi, SEYOUM, Melles et al.
Determining the burden of tuberculosis in Eritrea: a new approach. Bull World Health
Organ [online]. 2007, vol. 85, no. 8 [citado 8 de noviembre 2007], pp. 593-599.
Disponible: [1]. ISSN 0042-9686.
2. Volver arriba↑ LANIADO-LABORIN, Rafael and CABRALES-VARGAS, Noemí. A
positive sputum smear test is not always indicative of pulmonary TB: Another reason
to order routine cultures. Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. [online]. 2005, vol. 18, no. 4
[citado 8 de noviembre 2007], pp. 286-289. Disponible: [2]. ISSN 0187-7585.
3. Volver arriba↑ ROSILÉIA M. DE QUADROS. Detection of Cryptosporidium oocysts by
auramine and Ziehl Neelsen staining methods. Parasitol Latinoam 61: 117 - 120,
2006. [3]
Baciloscopía directa de BAAR Association of Public Health Laboratories / Centers
for Disease Control and Prevention.
Bibliografía[editar]
Sheehan, Dezna; Hrapchak, Barbara (1980). Theory and practice of
Histotechnology (2 Ed. edición). The C.V. Mosby Company.
ARP, ed. (1992). Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas
Armadas de los EEUU (AFIP).
Bibliografía http://diresaapurimac.gob.pe/laboratorio/TB_MANUAL_BACT ERIOLOGICO.pdf
http://www.tbrieder.org/publications/books_spanish/orange_guide_s p.pdf
