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Protocolo de Folin

Este documento describe un protocolo para realizar un ensayo de Folin-Ciocalteu para medir el contenido de ácido gálico en muestras. Incluye instrucciones para preparar la curva de calibrado con soluciones de ácido gálico de 0 a 180 mg/L, así como el procedimiento para mezclar las muestras o patrones con los reactivos, incubar, y medir la absorbancia para cuantificar los niveles de ácido gálico.

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Protocolo de Folin

Este documento describe un protocolo para realizar un ensayo de Folin-Ciocalteu para medir el contenido de ácido gálico en muestras. Incluye instrucciones para preparar la curva de calibrado con soluciones de ácido gálico de 0 a 180 mg/L, así como el procedimiento para mezclar las muestras o patrones con los reactivos, incubar, y medir la absorbancia para cuantificar los niveles de ácido gálico.

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Protocolo de Folin -Ciocalteu y curva de calibrado de acido gálico.

Reactivo de Folin D10: 2,5 mL de reactivo de folin, aforar hasta 25 mL en


matraz de aforo. (protegido de la luz)
Carbonato de Sodio 7,5%: 1,875 g de carbonato de sodio, se afora a 25 mL.
Curva de calibrado con ácido gálico: Se prepara solución madre pesando 14
mg de ácido gálico y aforar con agua a 50 mL en matraz, disolver con agitación
magnética y protegido de la luz. Esta solución madre es 280 mg/L. Realizar en
tubos eppendorf las siguientes soluciones patrón de trabajo.

mg/L (ppm) µL sol. Madre (280 µL agua pura


mg/L)
0 0 1000
10 35,7 964
40 143 857
60 215 786
100 357 643
120 429 571
140 500 500
180 643 357
Tabla 1: Concentraciones de curva de calibrado de ácido gálico. (curva 0,07 –
0,089)

Cálculo de concentración de ácido gálico:


𝑔 𝑝𝑒𝑠𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑔á𝑙𝑖𝑐𝑜
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑔á𝑙𝑖𝑐𝑜:
170 𝑔/𝑚𝑜𝑙
Procedimiento:

Utilizar placa de 96 pocillos, para un volumen final de 250 µL por pocillo, el


orden de llenado es el siguiente:
- 125 µL de reactivo de Folin D10 + 25 µL de muestra o solución patrón.
- Dejar incubar 5 a 8 minutos y adicionar 100 µL de carbonato de Na
7,5%
- Incubar 1 hora en oscuridad.
- Leer placa con método Folin.
Graficar los resultados de absorbancia vs concentración de soluciones patrón
descritas en tabla 1.

Valor referencial CC: y (abs)= 0,0084 x (ppm de ácido gálico) + 0,0695

Normalmente los extractos se deben probar en diluciones de 100 a 1000


veces.
Distribuir en la microplaca al menos tres CC con respecto al blanco ( o
concentración 0 ) y luego las muestras en dilución 100 y 1000.

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