Ultra-eficiencia con UHPLC.

Optimización de rendimiento
y productividad

Jaume C. Morales
Especialista de Producto

April 22, 2016

1
Cromatografía Liquida – Evolución…
La historia de la cromatografía líquida (CL) se inició a principios del siglo XX.
En 1906, el botánico ruso Mikhail Tswett invento CL para separar varios
pigmentos de plantas.

Tiempo de análisis ~ horas

Mikhail Tswett 1906 – Primera Cromatografía Líquida en Columna

1872 - 1919

April 22, 2016

2
Cromatografía Liquida – Evolución…
No fue hasta 50 años más tarde que, como en todas las técnicas analíticas, se buscara un
mayor rendimiento en términos de : rapidez, selectividad, sensibilidad y usabilidad.

En la década de los 70 se introduce el término HPLC

A pesar de que la gran diferencia respecto a los equipos anteriores era la presión del
disolvente (400bar), el término HPLC es el acrónimo de

HIGH PERFOMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

ALTO RENDIMIENTO

El sistema de detección fue también uno de los mayores avances pasando de los ojos a
técnicas espectroscópicas (UV-VIS, IR, FLD) y primeros MS.

En paralelo aparece también la FLASH LC (1978) basada en la cromatografía clásica de

columna pero presurizando el solvente (a baja presión, ~ 10-20bar ) y acoplándola también
a los nuevos detectores y recolectores de fracciones para técnicas preparativas.

April 22, 2016

3
Cromatografía Liquida – Evolución…
A partir de la aparición de la HPLC y viendo el enorme potencial de la técnica, la comunidad
científica no esperó otros 50 años para hacer evolucionar la tecnología.

Desde su inserción como técnica analítica en los años 1970, la CLAR ó HPLC ha
evolucionado constantemente para lograr cada vez mayor eficiencia, aumentando la
selectividad, sensibilidad y la velocidad de los análisis.

Principales desarrollos para el avance tecnológico:

• Partículas cada vez más pequeñas y con soportes de mejor calidad

• Introducción de otros tipos de columnas - monolíticas, núcleo sólido y superficie porosa

• Utilización de nuevos instrumentos de mayor robustez y resistencia

• Introducción de los sistemas de bajo flujo NanoLC, CapliaryLC, (CEC)

• Uso de altas temperaturas

• 2D LC

April 22, 2016

4
Cromatografía Liquida – Evolución…

La UHPLC es uno de los modernos desarrollos que mayor eco ha tenido entre los usuarios
de HPLC ………………….

………………………………….Sin embargo es el que más confusión crea en cuanto a

• Concepto • Ventajas

• Uso • Inconvenientes

• Requerimientos • Aplicabilidad día a día

April 22, 2016

5
La UHPLC es una paso más en la búsqueda de un mayor rendimiento
basado en un relleno que otorga una salto importante en la eficiencia
cromatográfica

UHPLC es :

• Ultra High Perfomance Liquid Chromatography.

• Cromatografía de ultra alto rendimiento en columnas con relleno de alta

eficiencia :

o partículas sub-2-micron (STM)

o de núcleo sólido / superficie porosa

• Cromatografía de alta velocidad y/o mayor separación cromatográfica

Page 6
La UHPLC es un paso más en la búsqueda de un mayor rendimiento
basado en un relleno que otorga una salto importante en la eficiencia
cromatográfica

UHPLC NO es :
• No es un equipo determinado (al menos en Agilent)

• No es necesariamente Ultra Alta presión.

La presión no es ninguna ventaja, sino un efecto colateral indeseado.

¡¡La Alta Presión no separa nada !!

• No es tan sólo usar columnas de 2.1mm.

Cualquier diámetro de columna puede empaquetarse con partículas de

alta eficiencia (4.6 , 4.3, 3.0…)

Page 7
Características de UHPLC con STM
Resolución y Flujo

1. Las partículas más pequeñas permiten una menor altura de

plato teórico mostrando pues una mayor resolución
cromatográfica.

2. La resolución cromatográfica sufre menos al incrementar el

flujo cuanto más pequeña es la partícula

Page 8
Tipos de partículas

~ 0.5µm

SOLID
CORE < 3 µm
< 2 µm

Superficialmente porosas Totalmente porosas

< 2 µm , sub-two-micron (STM)

• Distancia de difusión es menor.

• Luego también la resistencia a la transferencia de

masa. C

• Eficacia similar (80%) a las totalmente porosas STM.

• Aproximadamente 40-50% presión de las STM.

 Columnas Poroshell 120 para HPLC y UHPLC:
Poroshell 120 es una opción de columna de alta eficacia y resolución
para mejorar la productividad en LC y LC/MS
Características de las Poroshell 120 :

• 80-90% eficacia de las sub 2um

• A ~40-50% menor presión

• 2X eficacia de 3.5um (totalmente porosa)

Sin el doble de presión de las 3.5um 0.5um

• Frita de 2um para reducir obturaciones

• Límite de presión de 600 bar para el uso en HPLC o 1.7um

UHPLC.

• La partícula porosa está formada por un núcleo sólido de

0.5um
1.7um diam. y una capa porosa exterior con un grosor de
difusión de 0.5um.
Análisis Rápido de Analgésicos con Columna Poroshell 120
Optimizando el tiempo
de análisis Regla genérica
Longitud / [Link]

Lc1 Lc 2
N~ 
d p1 d p 2

Al final obtenemos un método más rápido con la misma resolución cambiando :

• Columna más corta (Lc)

• Diámetro de partícula más pequeño (dP)

• Gradiente más rápido (tG)

Page 12
Ejemplo de Mejora de Velocidad HPLC vs UHPLC Agilent 1200-RRLC

Hasta 20x más rápido que un HPLC. Manteniendo la resolución

4.6 x 150mm, 5µm HPLC, 40°C
1.20ml/min, 40°C PW = 3.4sec
Grad.: 35-95% en 10.8 min
Analysis Time = 11min
0 2 4 6 8 10 min
2.1mm x 50mm 1.8µm UHPLC/RRLC, 40°C
1.00ml/min, 40°C 10x faster
Grad.: 35-95% en 0.9 min PW = 0.5 sec
Analysis Time= 1.1min
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 min

2.1mm x 50mm 1.8µm UHPLC/RRLC, 95°C

2.40ml/min, 95°C 27x faster
Grad.: 35-95% en 0.38 min
PW = 197msec
Analysis Time: 0.4min
0 0.2 0.4 min 0.6

150mm > 50mm: 3x

3 x 10 = 30x
1.2ml/min on 4.6 > 2.4ml/min on 2.1: 10x

Página 13
13
Ejemplo de Mejora de Resolución HPLC vs UHPLC con
Columnas de 150mm x 1.8µm
Ejemplo con muestra compleja: hasta un 60% de Mejora en la Resolución

HPLC UHPLC

Ejemplo de un cliente 4 Impurezas 7 Impurezas 7 Impurezas

Método Impurezas Isocr.
2 No Separadas 6 No Separadas Las 7 Separadas
Zoom zona critica a línea de base a línea de base a línea de base
rango tiempo @ 7min

4.6 x 150, 5um 4.6 x 150, 3.5um 4.6 x 150, 1.8um

93 bar 165 bar 490 bar
N = 7259 N = 14862 N = 28669
RS = 1.15 RS = 1.37 RS = 1.80 (+ 57%)
S/N = 42 S/N = 50 S/N = 44

Página 14
Columnas Rapid Resolution High Throughput
Zorbax RRHT columns – Partículas 1.8 µm para HPLC rápida con límites de presión
de 600 bar
• Ideal para equipos de pres Max de 600 bar.
• Disponibles en longitudees de 20 mm a 150 mm.
• Para columnas de 150 mm se requiere trabajar a temperatura superior.
• Las columnas de 20, 30, 50 y 75 mm son ideales para separaciones rápidas y
de alta resolución.
• Las columnas de 4.6 mm d.i. son ideales para su uso a la más baja presión.
• También hay columnas de 3.0 y 2.1 mm d.i.
• 140 combinaciones en 15 diferentes fases estacionarias.
RRHT 600 Bar Columns

2 recommended for
Beginning method
development:
• 959941-902.
• 959741-902.
Rapid Resolution High Definition Columns
Zorbax RRHD Columns – 1.8 µm columns for UHPLC with a 1200 bar pressure limit.

• Ideal for fast or high resolution HPLC working at > 1000 bar.

• Available in lengths from 50 mm to 150 mm.

• Available in 2.1 and 3.0 mm i.d.

• Same particles and bonded phases as RRHT columns.

Gains over RRHT Columns

• Use a wider range of solvents in mobile phase (i.e. more methanol
instead of acetonitrile, use solvents with more viscosity).

• Gain resolution with complex samples because you can use longer
column lengths and accompanying increased pressure.

• Gain speed – use higher flow rates (more pressure) for faster analyses.

•
Agilent 1290 with RRHD Eclipse Plus C18
3 minute analysis, Zorbax Eclipse + C18 2.1x100mm, 1.8um
100pg on-column, 10 Hz Acquisition.
162/220 Pesticides Identified using TOF,
Beneficios de la UHPLC
Las nuevas partículas
permiten una menor altura de ¡Mayor resolución!
plato teórico mostrando pues ¡Sin incremento de tiempo de
una mayor resolución analisis!
cromatográfica.

¡Menor tiempo de
La resolución cromatográfica analisis!
sufre menos al incrementar el ¡Menor consumo de
flujo disolventes sin perdida de
resolución!

Las nuevas partículas

¡Mayor sensibilidad!
consiguen picos más estrechos
y más altos. Si no se aumenta el flujo

22 de abril de 2016
19 19
Serie Agilent 1200 Infinity
Elevando el Estandard en UHPLC para el Laboratorio

1220 1260 1290

Infinity LC Infinity LC Infinity LC
Integrado Modular Modular
600 bar 600 bar 1300 bar
80 Hz 80 Hz 240 Hz
2x ó 10x Sensivilidad UV
El más económico 100% HPLC Compatible Máximo rendimiento UHPLC
HPLC y UHPLC Precio HPLC Máxima Flexibilidad
Tecnologia 1260/1290 Capacidades UHPLC Coste Servicio HPLC

Page 20
 Aportaciones de la
UHPLC en el
Análisis Alimentario

21 April 22, 2016

PAHs en suelos (Hidrocarburos Poli-Aromáticos)
Análisis de suelos

Agilent Application
Solution
Analysis of PAHs in
soil according
to EPA 8310 method
with UV and
fluorescence
detection

Agilent Application
Note 5990-8414EN

April 22, 2016

22 22
Análisis de la mezcla de Patrones
Column ZORBAX Eclipse PAH 4.6 x 150 mm, 5 μm
Mobile phase A Water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 40%B, at 20 min 95%B
Flow rate 1.5 mL/min
[Link].: 25 °C
Inj. volume 3 µL
Data acq. 230 nm (ref. 400 nm) (DAD), 260 nm (Ex.) 350 nm, 420 nm, 440 nm, 500 nm (Em.) (FLD)

No: Name:
1 Napthalene
2 Acenaphtylene
3 Acenaphtene
4 Fluorene
5 Phenantrene
6 Anthracene
7 Fluoranthene
8 Pyrene
9 Benzo(a)anthracene
10 Chrysene
11 Benzo(b)fl uoranthene
12 Benzo(k)fl uoranthene
13 Benzo(a)pyrene
14 Dibenzo(a,h)anthracene
15 Benzo(g,h,i)perylene
16 Indeno(1,2,3-cd)pyrene

April 22, 2016

23 23
Cambio a método UHPLC
Ahorro de Tiempo y Disolvente Ahorro de tiempo: 80 %
Column ZORBAX Eclipse PAH RRHT 2.1 x 50 mm, 1.8 μm Ahorro en disolventes: 88 %
Mobile phase A Water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 40%B, at 4 min 95%B From :
Flow rate 0.85 mL/min ZORBAX Eclipse PAH 4.6 x 150 mm, 5 μm
[Link].: 25 °C
Inj. volume 0.3 µL
Data acq. 230 nm (ref. 400 nm) (DAD), 260 nm (Ex.) 350 nm, 420 nm, 440 nm, 500 nm (Em.) (FLD)

No: Name:
1 Napthalene
2 Acenaphtylene
3 Acenaphtene
4 Fluorene
5 Phenantrene
6 Anthracene
7 Fluoranthene
8 Pyrene
9 Benzo(a)anthracene
10 Chrysene
11 Benzo(b)fl uoranthene
12 Benzo(k)fl uoranthene
13 Benzo(a)pyrene
14 Dibenzo(a,h)anthracene
15 Benzo(g,h,i)perylene
16 Indeno(1,2,3-cd)pyrene

April 22, 2016

24 24
Antioxidantes en Zumo de Naranja
Suplementos Dietéticos, Compuestos Naturales y Aditivos

Agilent Application
Solution
Analysis of
ascorbic acid,
citric acid and
benzoic acid in
orange juice

Agilent Application
Note 5990-8720EN

April 22, 2016

25 25
Análisis de Patrones
Column Poroshell 120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 20 mM HK2PO4 in water, pH 2.5
Mobile phase B Acetonitrile/methanol 40 : 60
Gradient at 0 min 5%B, at 2 min 5%B, at 2.1 min 25%B, at 13 min 25%B, at 13.1 min 90%B, at 18 min 90%B, at 18.1 min 5 % B
Stop time: 25 min
Flow rate 1 mL/min
[Link].: 20 °C
Inj. volume 5 µL
Sample therm.: 4 °C
Data acq. 210 nm, 230 nm, 243.5 nm, 10 Hz (DAD)

mAU
2 No: Name:
800 1 Ascorbic acid
2 Citric acid
3 Benzoic acid
600

1
400

200
3
0
2.5 5 7.5 10 12.5 min

April 22, 2016

26 26
Método UHPLC Ahorro de tiempo: 80 %
Ahorro de Tiempo y Disolvente Ahorro en disolventes: 68 %
Column Poroshell 120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 20 mM HK2PO4 in water, pH 2.5
Mobile phase B Acetonitrile/methanol 40 : 60
Gradient at 0 min 5%B, at 0.5 min 5%B, at 0.6 min 25%B, at 3 min 25%B, at 3.1 min 70%B, at 3.9 min 70%B, at 4 min 5 % B
Stop time: 5 min
Flow rate 1.5 mL/min
[Link].: 20 °C
Inj. volume 4 µL
Sample therm.: 4 °C
Data acq. 210 nm, 230 nm, 243.5 nm, 40 Hz (DAD)

mAU
2 No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Citric acid
400 3 Benzoic acid

300

200
1

100
3
0
1 2 3 min

April 22, 2016

27 27
Vitaminas Hidrosolubles
Suplementos Dietéticos, Compuestos Naturales y Aditivos

Agilent Application
Solution
Analysis of water-
soluble vitamins
from multivitamin
tablets for
nutrition labeling

Agilent Application
Note 5990-7950EN

April 22, 2016

28 28
Analysis of Standard Mixture
Column Poroshell 120 EC-C18 3 x 150 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 25 mM HK2PO4 in water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 1%B, at 5 min 1%B, at 15 min 30%B, at 20 min 30%B, at 20.1 min 1%B
Stop time: 20.1 min
Post time: 5 min
Flow rate 0.45 mL/min
[Link].: 35 °C
Inj. volume 5 µL
Sample therm.: 5 °C
Data acq. 205 nm, 214 nm, 220 nm, 232 nm, 266 nm, 280 nm, 20 Hz (DAD)
No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Nicotinic acid
3 Calcium pantothenate
4 Pyridoxine
5 Niacinamide
6 Thiamin
7 Folic acid
8 Biotin
9 Cyanocobalamine
10 Riboflavin

April 22, 2016

29 29
Fast UHPLC Method Ahorro de tiempo: 90 %
Column Poroshell 120 EC-C18 2.1 x 75 mm, 2.7 μm
Ahorro en disolventes: 70 %
Mobile phase A 25 mM HK2PO4 in water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 1%B, at 0.56 min 1%B, at 1.66 min 30%B, at 2.2 min 30%B, at 2.22 min 1%B
Stop time: 2.22 min
Post time: 1 min
Flow rate 1 mL/min From :
[Link].: 35 °C Poroshell 120 EC-C18 3 x 150 mm, 2.7 μm
Inj. volume 1 µL
Sample therm.: 5 °C
0.45 mL/min
Data acq. 205 nm, 214 nm, 220 nm, 232 nm, 266 nm, 280 nm, 80 Hz (DAD)

No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Nicotinic acid
3 Calcium pantothenate
4 Pyridoxine
5 Niacinamide
6 Thiamin
7 Folic acid
8 Biotin
9 Cyanocobalamine
10 Riboflavin

April 22, 2016

30 30
Serie Agilent 1200 Infinity
Elevando el Estandard en UHPLC para el Laboratorio

1220 1260 1290

Infinity LC Infinity LC Infinity LC
Integrado Modular Modular
600 bar 600 bar 1300 bar
80 Hz 80 Hz 240 Hz
2x ó 10x Sensivilidad UV
El más económico 100% HPLC Compatible Máximo rendimiento UHPLC
HPLC y UHPLC Precio HPLC Máxima Flexibilidad
Tecnologia 1260/1290 Capacidades UHPLC Coste Servicio HPLC

Page 31
Infinity II - Foco en la Eficiencia:

Eficiencia
Analítica
Un Nuevo Punto de
Referencia
Eficiencia en Eficiencia
Instrumental
Agilent 1290 Infinity II LC, la nueva
generación en “Ultra High
Performance Liquid Chromatography”
Aumenta la eficacia de su empresa
Eficiencia en tres dimensiones:
Laboratorio

April 22, 2016

32
Efficiency
Infinity II –Messaging
La clave de la Eficiencia
:
Eficiencia Analítica.
Incomparable rendimiento de Separación y Detección entregar los
datos de análisis de la más alta calidad para la máxima confianza en
sus resultados :
• Máxima eficacia en la separación mediante UHPLC:
• Ultra low Dispersion kits (ULD)
Eficiencia
• LC-1DLC-2D comprehensive multidimensional
Analítica
• 1300 bars a 2mL/min, hasta 5mL/min a 800 bars

Eficiencia
Instrumental

Eficiencia
Laboratorio
• Mínimo “carryover” (contaminación cruzada): <9 ppm con la opción
de multi-lavado con 3 solventes y limpieza del asiento de la aguja.
• Máxima sensibilidad y rango dinámico: DAD: 60mm max Ligth cell
y HDR. // nuevo ELSD 1290 Series II.
• Máxima precisión de tiempos de retención (flujo y composición).
April 22, 2016
33
Efficiency
Infinity II –Messaging
La clave de la Eficiencia
Eficiencia Instrumental
• Ciclos de inyección más rápidos: hasta 5 seg. con opción de doble
aguja y sin comprometer “carryover” o discriminación de muestras por el
solapamiento inyección & análisis.

• Mayor capacidad de muestras refrigeradas: hasta 6144 muestras en

microplacas, 432 viales 2ml, combinaciones entre múltiples tipos de placas,
viales, eppendforfs,…..
Eficiencia
• Mayor Flexibilidad: para todo tipo de cromatografías UHPLC/ HPLC
/Semi-preparativo/ Muldimensional/….
Analítica
• Trabajar con todo tipo de diámetros de columnas desde 1 hasta 8 mm. d.i.:
• Inyectar desde menos de 1µL hasta 900µL sin intervención del usuario y sin
comprometer prestaciones, gracias a la opción de doble aguja.
• Nuevos conectores para intercambiar muy fácilmente columnas hasta 1300
bars y SIN necesidad de herramientas Eficiencia
• Hasta 8 columnas de 20º por debajo de temperatura ambiente hasta 110ºC
Instrumental
• Mayor capacidad de Automatización:
• Múltiples tipos de válvulas muy fácilmente intercambiables, para selección
de disolventes, intercambio y regeneración de columnas, limpieza o
enriquecimiento de muestra.
• Inyectores programables para preparación de muestra: dilución, mezclado, Eficiencia
derivatización,…… Laboratorio

April 22, 2016

34
Efficiency
Infinity II –Messaging
La clave de la Eficiencia
Eficacia del Laboratorio
• Emulación de otros U/HPLC’s (opción ISET): facilitar la transferencia de
métodos.

• Poder disponer de todas las prestaciones de los Agilent 1290 II Infinity

incluso controlándolos desde softwares de otras firmas, gracias a los nuevos
Drivers [Link].

• Reducir el coste operativo

• Compatible con los módulos 1100/1200/1260/1290.
• “Early Maintenance Feedback” (EMF) y “Lab Advisor”: para que el propio usuario
pueda monitorizar, prever, mejorar el mantenimiento (guiado) del equipo.
Eficiencia
Analítica
• Compromiso Agilent de un mínimo de 10 años de valor de la inversión.

Eficiencia
Instrumental

Eficiencia
Laboratorio

April 22, 2016

35
El Nuevo Agilent 1290 Infinity II LC

Page 36
1290 Infinity II
Sistemas de
Bombeo

Evolución

April 22, 2016

37
Bombas1290 Infinity II
¿Que es nuevo?

• Nuevo diseño con 2 puertas del

1290 Infinity II

• Nuevos modelos:
• 1290 Infinity II High Speed Pump (HPM)
• 1290 Infinity II Flexible Pump (LPM)
• Rango de Potencia mejorado con 1300bar

Mezcla en baja presión Mezcla en alta presión

Page 38
1290 Infinity II LC Binary Pump
La siguiente generación en Tecnología de Bombas LC
 Alta velocidad y resolución
Desgasificador
 1300 bar @ 2.0 mL/min
Válvula de
Selección de disolvente  800 bar @ 5.0 mL/min
Mezclador  Volumen muerto: 10 µl / 45 µl
“Jet Weaver“
 Amortiguador electrónico de pulsos
 Procesador de doble nucleo
dedicado al control de pulsos
 Motores de 300 picolitros por
paso
 Largos intervalos de mantenimiento
 “Automatic Leak-Correction“
Canal  150 Litros de disolvente
B
Pistones de  Automatismo
“Silicon –Carbide“ Canal Válvula de  Purga automática
A purga

Page 39
1290 Infinity Binary Pump
Amortiguación electrónica de pulsos

HPLC 1200

OFF
Motor del Pistón
ON

• Motores independientes
para cada pistón
• Pasos de 300 picolitros

1290 Inifinity II
Chanel A UHPLC 1290-II

1290 Inifinity II
Chanel B

Page 40
1290 Infinity Binary Pump
El mas bajo volumen muerto y el mas bajo ruido de mezcla

1200 Series
Channel A

1200 Series
Passive Damper Passive Mixer Very Low Noise
Channel B
0 - 300 µl 400 µl ~ 800 µl

1290 Inifinity II
Chanel A

1290 Inifinity II
Chanel B
Lowest Noise
• min. 50% lower
Aktive Damping Jet Weaver Mixer Delay Volume
+ = • 10µl / 45µl
10µl 35µl
• 80x / 20x lower

Page 41
Agilent Jet Weaver
Siguiente generación: Mezclador de alta eficacia

La mas alta eficiencia de mezcla con el mínimo

volumen
• 35 µl para aplicaciones UV estándar
• 100 µl para Aplicaciones TFA

Tecnología:
• Tecnología Propietaria de Microfluidos Multi-capa.
• Bandas de difusión de acero con estructuras de
(100x120µm)

Page 42
Mayor precisión del tiempo de retención para una
Identificación de picos mas segura

El 1290 Infinity II “Flexible Pump” es la única Bomba con

mezcla en baja presión que combina el rendimiento de la
mezcla en alta presión de las bombas UHPLC, con la
flexibilidad de la Bomba Cuaternaria. Esta Bomba alcanza
la máxima calidad de gradiente en el rango de composición
del 1 to 99 %.

Page 43
Agilent Inlet Weaver
Premezclador en baja presión de alta eficacia

Nuevo mezclador InletWeaver

basado en la super-eficiente
tecnología Jet Weaver

Mezclador opcional en alta presión (sólo para

condiciones muy críticas- p.e. TFA)

Premezcla el eluyente
antes de entrar en el
cabezal de bombeo

44
Influencia Rango Composición:
Prestaciones con Pequeñas Proporciones de % Orgánico

mAU

Salto inicial
Gradiente Escalonado 10%

Saltos 1 % del 0 a 10 %
250

7%
200

150
1%

100 3%

50 1290 Infinity II Quaternary system

Quaternary UHPLC from other vendor
0

0 10 20 30 40 50

45
Válvula Multifunción
Mayor Comodidad y Flexibilidad
Purga Automática
(controlada por software)

Page 46
Válvula Multifunción
Mayor Comodidad y Flexibilidad
Filtrado de eluyentes en línea
para proteger la columna

Page 47
Válvula Multifunción
Mayor Comodidad y Flexibilidad
Lavado Automático del filtro
en contracorriente (backflush)

Page 48
Válvula Multifunción
Mayor Comodidad y Flexibilidad
Mezclado Extra para las aplicaciones más exigentes
Para el mínimo rizado/ruido de la línea de base
([Link] como modificador)

Page 49
1290 Infinity II
Inyectores Automáticos

Evolución y Revolución

April 22, 2016

51
Nuevo Multisampler Revolución

1260 Infinity II 1290

1260 Multisampler Infinity II Multisampler

600 bar 1300 bar

Refrigeración por compresor interno (opcional)

Doble puerto de Inyección (opcional)
Multi-lavado (opcional)

April 22, 2016

52
 Nuevo Agilent 1290 Infinity “Multisampler”
Capacidades principales
Alta capacidad de muestras
• Hasta 16 Well Plates (8 Deep), 8 Vial Plates / 6144 muestras).
• 432 viales 2ml refrigerados
• Combinaciones de multiples tipos de placas, viales, eppendfor’s,….

Opción Doble Jeringa de Inyección

• La Inyección con doble jeringa permite realizar inyecciones cada “5 sec”
• La Inyección con doble jeringa permite configurar los dos puertos con loops
preparativos / analíticos sin contaminaciones ni cambios en el Hardware

Opción Multi-lavado
• Sofisticada opción de lavado integrada: para el asiento y el exterior de la la aguja en
“contra corriente”, con 3 disolventes.

Opción de refrigeración
• Refrigeración basada en compresor, de: 4°C – en adelante!
• Integrada en el Inyector y auto instalable por el usuario

Programa Manual de Inyección

• Permite realizar mezclas, derivatizaciones, diluciones …..

pág.: 53
1290 Infinity LC
Hidraulica del Multisampler
Doble-aguja setup
Bomba de lavado de aguja
• Bomba peristaltica
• Lavado de aguja (1 solvente)

Dispositivos de medida de muestra

Opciones de cabezales:
• 40 µL (1300 bars)
Doble Aguja setup Válvula de 6 puertos • 100 µL (1300 bars)
• Idénticos o Diferentes • Rápido intercambio • 500 µL (600 bars) / 900µL (400bars)
volúmenes de Inyección • 1300 bar • Opción Multi-draw
pág.: 54
1290 Infinity LC
 1290 Infinity II Multisampler
Único sistema de Doble Aguja

1 ÚNICO • Incremente la velocidad de Inyección

Meetering device Eliminando el tiempo extra necesario para la
con 2 loops aspiración de la muestra y de lavado de la
aguja, al usar 2 bucles de tamaño similar
(e.g. 20µL/20µL)

• Flexibilidad única
Permite montar Loop´s analíticos y
Preparativos en cada puerto de Inyección, sin
compromisos de contaminación ni cambios en
el Hardware (e.g. 20µL/500µL)

• Sin Contaminación Cruzada

Se puede utilizar un puerto para los Standard y
otro para las muestras

Injection de Doble Aguja

La Inyección separada para calibrantes & muestras previene la
contaminación

pág.: 55
1290 Infinity LC
 Hidraulica del Multisampler
Multi lavado setup

Valvula de selección de disolventes

• 3 diferentes disolventes de lavado
• Bomba inerte para el lavado de la aguja

Bomba de lavado
• Bomba de alta presión
• Lavado del asiento en contra
corriente
Dispositivos de medida de muestra
Opciones de cabezales:
• 40 µL
• 100 µL
• 500 µL / 900µL
• Opción Multi-draw

Válvula de 6 puertos
• Rápido intercambio
• 1200 bar

pág.: 56
1290 Infinity LC
 Baja contaminación cruzada
Para una alta calidad de sus datos

Utilizando la nueva Opción de Multi-lavado se podrán

lavar interna y externamente todos los conductos y aguja
con tres distintos disolventes, así como el asiento de la
aguja, en contracorriente

Lavado del interior de la aguja

Se hace pasar flujo por el interior de la
aguja.

Lavado del exterior de la aguja

Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado exterior de la aguja.

Lavado del asiento de la aguja en

contracorriente
Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado del asiento
pág.: 57
1290 Infinity LC
 Baja contaminación cruzada
Para una alta calidad de sus datos

El 1290 Infinity II Multisampler con Multi-Lavado

reduce la contaminación cruzada a menos de 9 ppm!

pág.: 58
1290 Infinity LC
 Alta capacidad de muestras con diferentes
formatos en el tamaño de un módulo normal

El 1290 Infinity II Multisampler permite la carga de hasta 16

shallow well MTPs. Con una capacidad máxima de hasta
6144 muestras en un módulo igual de ancho que el resto
del equipo LC.
Además de la alta capacidad, admite un variado elenco de
formatos de contenedor de muestra : vial 2mL, vial 6mL,
wellplate96, wellpalte384, wellp fondo/medio, eppendorf,
etc…sin necesidad de reconfiguración del sistema.

Shallow-well MTPs (96/384)

Medium-well MTPs (96/384),

std. 2ml vials

Deep-well MTPs, large vials

pág.: 59
1290 Infinity LC
1290 Infinity II - Máxima Eficiencia
Intuitivo y fácil de usar
Entrada de Muestras Grafica
• Simple y efectiva herramienta
grafica para la entrada de
muestras en OpenLAB-CDS
Muestras?

• Para todos los Agilent LC

Autosamplers

• Configurable para cualquier

tipo de bandeja de viales o Blancos
pocillos Patrones?

April 22, 2016

60
Horno de Columnas

1290 Infinity II
Multicolumn

April 22, 2016

61
Máxima Eficiencia de la Industria
- Significativas mejoras – MCT
Horno de Columnas Multicolumn con acceso a las
columnas mucho mas fácil
• Capacidad para 4 columnas de (30 cm)
• 4°C hasta110°C

Tapa vasculante:
• Apertura 90°utilizable como soporte para facilitar la instalación de las columnas
• Apertura 180 ° para facilitar el acceso a las columnas
• Retirada de la Tapa para un acceso total
Flexible para todas las aplicaciones

El 1290 Infinity II Horno Multicolumn con espacio para

alojar hasta ocho columnas cortas, o cuatro columnas
de 30 cm o cualquier combinación de columnas conectadas
a la válvula de selección interna, permite un rápido y simple
cambio de método.

Page 63
Un nuevo nivel de automatización

Page 64
Nuevos Conectores: Pequeños detalles que facilitan el
trabajo 
El muelle empuja al capilar constantemente hacia el puerto receptor
Volumen muerto
cero garantizado

Nuevo conector Nuevo conector

Quick-Connect Quick-Turn
Conector sin Herramientas Apretado manual hasta 600 Bar
hasta1300 bar Utilizando una llave hasta 1300 Bar

• Capilar intercambiable.
• Reutilizable (+200 veces)
para todos tipo de columnas.

65
Maxima Eficiencia Instrumental: Sin Herramientas
Conectores “Quick-Connect“ - Mejora significativa
1. 2.

3. 4.

Revolucionario Conector sin Herramientas Quick-Connect

con cero volumen muerto para conexiones en UHPLC
 Preparado para soportar presiones hasta 1300 bar
 Diseño con muelle de presión que garantiza un “cero“ volumen muerto
 Reutilizable (+200 veces) para todos los tipos de columnas

April 22, 2016
Capilar intercambiable 66
Baja dispersión para una alta resolución

El Conector Rápido Agilent, A-Line para columnas UHPLC

para conexiones con cero volumen muerto
• Sin necesidad de Herramientas hasta 1300 bar
• Diseño con muelle de presión que garantiza un volumen
muerto cero
• Reutilizable para todos los tipos de columna

Muelle

Page 67
1290 Infinity II
Detectores
Evolución

April 22, 2016

68
1290 Infinity II Detectores UV

1290 Infinity II VWD (G7114B)

 Doble Longitud de Onda (hasta 5 Hz) con mejores especificaciones
de ruido
 Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
 3 Celdas Preparativas compatibles con 1290 Infinity I VWDs

1290 Infinity II DAD (G7117B)

 Rendija programable 1,2,4 8 nm
 Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
 Mejores especificaciones de precisión en la Longitud de Onda
 Segunda generación de Control Electrónico de Temperatura ETC
proporciona la máxima estabilidad de línea de base haciendo el
Detector, insensible a las condiciones de temperatura y humedad del
laboratorio.

1290 Infinity II DAD FS (G7117A)

 Precio mas bajo que el 1290 Infinity DAD G7117B
 Rendija fija de 4 nm
 Velocidad de adquisición 120 Hz para separaciones rápidas
 Resto de especificaciones similares al modelo1290 Infinity DAD G7117B

Page 69
1290 Infinity UHPLC Diode Array Detector
- La necesidad de una nueva tecnología

4.6 mm idcorta
Columna
d.i. 2.1 mm
column
+

10 mm camino óptico
13 µL volumen
=
?
Dispersión pico
• Pérdida de resolución
• Menor señal (S/N)

¿Cómo lograr celdas de menor volumen?

Corto camino óptico (3 mm, 2 µL) Largo camino óptico (10 mm, 0.5 µL)

Alta transmisión de luz => bajo ruido Baja S/N Baja transm. de luz => elevado ruido Low S/N
Solución:

Guía de ondas Optofluídica

• Largo camino óptico
• Pequeño d.i./ volumen de celda
• Alta transmisión de luz La mayor S/N
Cartucho de Celda “Max-Light“
Tipos de Celda
Non-coated fiber (fused
silica)

DISEÑO OPTICO PARA OFRECER UNA MINIMA DISPERSIÓN

CELDA Estandard:
 De 10 mm de camino óptico y tan solo 1 µl de volumen

CELDA de Alta Sensibilidad:

 De 60 mm de camino óptico y tan solo 4,8 µl de volumen

Page 71
1290 Infinity II Detector Diode Array
Como trabaja la óptica

Mirror 240 Hz Grating

Programmable
slit

Deuterium lamp

1024 element
diode-array
Max-Light cartridge cell
Guía de ondas optofluídica

72
Baja dispersión para una alta resolución

La nueva Celda de Flujo ULD optimizada y la velocidad de

adquisición hasta 240 Hz incrementan dramáticamente la
resolución Cromatográfica en sus separaciones ultra rápidas

mAU Data rate = 240 Hz

100

80

60

40

20 Data rate = 20 Hz
0 mAU
0 0.1 0.2 0.3 60 0.4 min
50
40
30
20
10
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 min

Page 73
Capacidades de detección únicas

La celda con camino óptico de 60 mm del 1290 Infinity II

DAD permite alcanzar niveles de ruido típicos de menos de
± 0.6 μAU/cm para alcanzar los mas bajos niveles de
detección.

1290 Infinity II DAD con

celda de Alta Sensibilidad

Detector convencional

Page 74
Nuevo 1290 Infinity II ELSD
Máxima eficiencia Analítica

G7102A
1290 Infinity II 1290 Infinity II
Nombre ELSD ELSD
(No-Refrigerado) (Refrigerado)
Modelo anterior G4261B
Fuente de Luz Laser azul
• 90 x Rango Dinámico (HDR)
• Hasta 9x mas sensible que modelos anteriores
• Puede trabajar a temperatura Sub-ambiente
(mejor respuesta para componentes volátiles)
• Flujo de nebulización variable para una
Capacidades
uniformidad en la respuesta
• Velocidad de adquisición (80Hz)
• Comunicación LAN

Page 77
1290 Infinity II ELSD Consiguiendo Alto Rango Dinámico
Detector Signal
[mV]
Upper HDR limit
70,000

Upper limit
1000

Respuesta típica  90 x Rango Dinámico Lineal (HDR)

Un Rango Dinámico Lineal mas alto,
otros modelos ELSD proporciona mayor precisión.

Detector HDR range

noise
1*10-2

LOD Conc [µg/mL]

(3x S/N)

Page 78
Infinity II

Aplicaciones
especiales

April 22, 2016

81
Sistema de emulación iSET

La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite

utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,
consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II
que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos
LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.
Todos los 1290 Infinity II pumps viene con iSET incluido.

Page 82
Tecnología de Emulación Inteligente ISET
¿Como funciona?

83
Tecnología de Emulación Inteligente ISET
¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?

mAU
400

350

300 Injección
Mismas condiciones de gradiente pero
250 desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
200

150

100 Programa de gradiente

1290 gradiente
50
1200 gradiente

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 min

84
Tecnología de Emulación Inteligente ISET
¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?

mAU
400

350

300 Inyecctión
Mismas condiciones de gradiente pero
250 desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
200

150

100 Programa de gradiente

1290 gradiente
50
1200 gradiente

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 min

85
Sistema de emulación iSET

La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite

utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,
consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II
que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos
LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.
Todos los 1290 Infinity II pumps vienen con iSET incluido.

Page 86
EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO
4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water

Alliance
2695
345 bar

1290 Infinity
1200 bar

1290 Infinity
1200 bar
with ISET

87
EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO
4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water

1200

1260

1290
ISET

1290

Used Method: % B: 25-95 %; Time : 8 min; Flowrate: 2 ml/min

Page 88
Flexible para todas las aplicaciones

Seleccione el tipo de separación deseada con un simple giro de conmutador

para seleccionar Cromatografía convencional o 2D, dependiendo de la
complejidad de la muestra.

Page 89
Alta capacidad de pico
para separaciones complejas
La solución 1290 Infinity II 2D-LC lleva la tecnología 2D-LC a una nueva
dimensión de facilidad de uso para un acceso rápido a datos ortogonales
2D-LC bien sea por heart-cutting, multiple heart-cutting o comprehensive.
Conmutable Cromatografía 1D/2D
Cambie entre UHPLC y 2D-LC sin modificaciones manuales

1D-Setup

2D-Setup

Technical Note 5991-4843EN

Page 91
Flexible para todas las aplicaciones

1D-LC 2D-LC

Page 92
OpenLAB CDS, el mejor software cromatográfico del
mer

OpenLAB Chromatography Data

OpenLAB Data Store
Nueva referencia
System  Store methods centrally
 Gain new insights into your data with
advanced visualization tools  Find & retrieve results quickly
 Get the most out of your instruments by
controlling all parameters en  Streamline data backup in
smaller labs
 Provide tailored reports to your clients

OpenLAB Electronic Lab Notebook

 Search all lab notebooks in seconds –make OpenLAB Enterprise Content Management
smarter, faster decisions.  Share standard methods and data worldwide
 Send/receive analysis requests & view status  Secure results for compliance
at-a-glance  Combine data into reports from multiple
 Share results with clients in real time vendors

Page 93
Ahorre costes realizando el mantenimiento de su
UHPLC

El nuevo Wizard de Mantenimiento Agilent le muestra en

videos las tareas mas usuales de mantenimiento de su
equipo asi como las referencias de las piezas a sustituir.

Available for 1290 Infinity II LC ca. March 2015

Page 94
Nueva e-Familiarización para el 1290 infinity II y
OpenLAB-CDS

La nueva eFamiliarization for the 1290 Infinity II UHPLC y

OpenLAB CDS nos permitira realizar una familiarización
mas efectiva asi como entrenar a los nuevos técnicos que
se incorporen al laboratorio.

Page 95
 Herramienta transformación métodos
HPLC => UHPLC
“Method Translator and Cost Saving Calculator”

Esta avanzada calculadora le permite

calcular el ahorro en coste del análisis
basado no solo en los costes de
disolventes sino también de los gastos
regulares de un laboratorio.

Utilícela on-line aquí

ó
descárguela para instalarla en su PC.

22 de abril de 2016
96 96
Transición de bajo coste con la actualización
progresiva
Renovar todos los sistemas de un laboratorio es un gran reto.
Gracias a la inter-compatibilidad de todas las series LC de
Agilent, la actualización puede afrontarse gradualmente y
facilita el reto tecnológico.
Actualice sus antiguos HPLC 1100 paso a paso

Proporcione a su HPLC 1100/1200 ó 1260

Infinity LC, un aumento de rendimiento
• Agilent ofrece una compatibilidad casi ilimitada entre los
módulos 1260 y 1290 Infinity con los modelos anteriores
series 1100 o 1200.
• Esta capacidad única de los HPLC Agilent, facilita la
mejora paso a paso para cualquier sistema LC Agilent -
¡ahora o en el futuro!
• Actualice su Detector para incrementar 10x la
sensibilidad
• Actualice su compartimento de columnas para
incrementar su capacidad y rango de temperaturas
• Actualice su Autosampler para ganar en velocidad y
capacidad

Agilent Confidential
April 22, 2016
98 98
Confidentiality Label
April 22, 2016
99
Confidentiality Label
April 22, 2016
100
Ultra-eficiencia con UHPLC

¿Preguntas?
April 22, 2016